Caveolin-1与组织再生

Caveolae (little cave)是1953年Palade在电子显微镜下发现的细颈瓶状的细胞膜内陷结构,当时命名为plasmalemmal vesicles.1955年,Yamada将其命名为Caveolae[1].该结构含有胆固醇、鞘磷脂(sphingomylin)、鞘糖脂(glycosphingolipids),是一个不溶于去垢剂的膜区域,约50～100 nm,可单个或葡萄串状成簇出现,或由多个Caveolae融合而成长管状结构,并以Caveolin蛋白为标志分子[2].

离体灌注新型去垢剂用于组织工程人工肺构建实验

目的 评价一种新型去垢剂十二烷基醚硫酸钠(SLES)经主支气管途径用于制备脱细胞肺支架的效果,并自制简易生物反应器来评价种植细胞的效果,探索构建组织工程人工肺的可行性.方法 取SD大鼠肺,利用Langendorff系统经主支气管灌注0.1％SLES等溶剂制备脱细胞肺支架,在支架内种植A549细胞,生物反应器内培养3d,评价指标包括HE染色、DAPI染色、DNA含量测定.结果 经主支气管途径灌注SLES可以有效的去除肺内细胞,无残留的细胞及细胞核,DNA含量去除率达到96.27％,种植A549细胞培养3d,细胞在支架内均匀生长,DNA含量达到正常肺的64.67％.结论 新型去垢剂SLES可以制备出较为理想的脱细胞肺支架,自制的生物反应器可以有效地促进种植细胞的生长.

去垢剂对单向免疫扩散法测定流感病毒疫苗血凝素含量的影响

目的 研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找佳裂解条件.方法 以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩散实验测定样本的血凝素含量,并对测定结果进行比较和分析.结果 亚单位疫苗的单向免疫扩散沉淀圈在去垢剂Zwittergent浓度小于0.125%时随去垢剂浓度的增加而增大,当去垢剂浓度达到0.125%后不再继续增大;而完整病毒的沉淀圈在去垢剂浓度达到1%后才不再增大.以终浓度1%的去垢剂对完整病毒和亚单位疫苗分别处理30、60、120 min后进行单向免疫扩散,测定结果比较差异无统计学意义.结论 以终浓度1%的去垢剂Zwittergent对完整病毒或亚单位疫苗样本裂解30 min后进行单向免疫扩散测定血凝素含量,均可得到稳定准确的结果,有利于提高工作效率、缩小实验间误差、节约实验成本.

Caveolin-1与中枢神经系统疾病

Caveolae是细胞膜上特定的50～100 nm的微区域，呈烧瓶状，主要由caveolin、胆固醇、鞘磷脂、鞘糖脂、酰基鞘氨醇和糖基磷脂酰肌醇（ glycosyl phosphatidyl inositol ， GPI）锚着蛋白组成，可单独或成串出现，形成一个不被去垢剂溶解的区域。 Palada于1953年首先在电镜下发现了caveolae结构，并将之命名为质膜小泡（ plasmalemmal vesicle ）。2年后， Yamada 报道了相似的结果，并将之命名为小窝蛋白（caveolae）［1］。 caveolae的主要作用是介导细胞的内化和胞吞转化。

构建组织工程瓣膜支架中3种去垢剂的比较

背景:目前,组织工程瓣膜去细胞支架的制备方法和效果各不相同,但总的来说,酶结合去垢剂法显示出一定的优势作用.目的:探讨脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通3种去垢剂结合酶消化法对于猪主动脉瓣膜脱细胞的效果以及去细胞后对支架的影响.方法:将新鲜猪主动脉瓣膜用抗生素溶液浸泡12 h后,置于胰蛋白酶和EDTA溶液中12 h,再分别用脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通进行处理,后转入核酸酶溶液中浸泡12 h,以达到去除内皮细胞和间质细胞的目的,常规苏木精一伊红染色观察内皮细胞是否除完全,Masson染色观察胶原纤维和弹力纤维损害程度,电子扫描显微镜观察纤维结构以评价效果.结果与结论:3种去垢剂结合酶消化法均能彻底去细胞,但脱氧胆酸钠对支架胶原纤维和弹力纤维的损害较轻微,十二烷基硫酸钠次之,曲拉通对支架的损害作用大.提示脱氧胆酸钠结合酶消化法是一种较合理的组织工程瓣膜支架构建方法.

去垢剂法提取脂筏的量化

目的:将去垢剂法提取脂筏的操作方法量化.方法:依据脂质筏在4℃时不溶于去垢剂的特性提取脂筏,再用蔗糖密度梯度离心法将去垢剂不溶组分分离出来.用胆固醇吸光度及浮舰蛋白1(flotillin-1)作为脂质筏的特异性标记,验证提取物的特性.结果:在离心管5％蔗糖与30％蔗糖分界处看到一层连成片状乳黄色脂质物质,光散射法显示该提取物在620 nm处有大吸光值,Western blot结果显示在相对分子质量48 kDa处可见条带.结论:提取物符合脂筏的多种特性,操作方法量化的去垢剂法是一种简单、稳定提取脂质筏的方法.

MDR3型P-糖蛋白在胆汁脂类转运中的作用

肝脏是脂类代谢的中心,肝细胞通过其细胞膜的毛细胆管面,每天分泌约1g胆固醇和4g卵磷脂(磷脂酰胆碱)进入胆汁.脂类分泌入胆汁具有多种生理意义:①人体内胆固醇除了代谢形成胆盐外,绝大部份通过胆汁排泄;②胆汁中的卵磷脂有助于胆固醇的溶解,可防止疏水的胆固醇分子在胆道内形成胆固醇性结石;③胆盐是一种天然的离子型去垢剂,卵磷脂可灭活其去垢活性,防止对肝脏和胆道上皮细胞的损伤[1].但在很长时间内,人们对胆汁内脂类分泌的机制知之甚少.近年来,随着对肿瘤多药耐药(multidrug resistance MDR)基因家族的深入研究,MDR3基因及其在胆汁脂类转运中的重要作用引起了广泛的关注.

丙型肝炎病毒NS3蛋白酶结构域在昆虫细胞中的表达及鉴定

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统制备丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白酶结构域(protease domain)的重组蛋白.方法构建含有HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因的杆状病毒转移载体pFBCNS3N,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid用Lipofectamine法转染昆虫细胞Sf9包装成重组杆状病毒.用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达,用SDS-PAGE电泳和免疫印迹实验分析表达情况;利用去垢剂十二烷基肌酸钠溶解重组蛋白后以Ni-NTAagrose柱亲和纯化重组蛋白;以重组蛋白NS5ab(包含NS5A羟基端部分和NS5B氨基端部分的重组蛋白)为底物检测丝氨酸蛋白酶的酶切活性;以间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性.结果 HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因在昆虫细胞中获得高水平表达;重组蛋白能够部分溶解于含有去垢剂十二烷基肌酸钠的缓冲液;从5×107细胞中总共获得0.2mg重组蛋白,纯度大于90%;重组丝氨酸蛋白酶能够将NS5ab切割成两个片段;血清学实验证实该蛋白抗原性很好.结论昆虫细胞表达的HCV丝氨酸蛋白酶结构域为膜结合型蛋白,具有良好的酶学活性以及抗原性.

去垢剂法提取脂质筏及鉴定

目的:建立一种用去垢剂提取脂质筏的方法. 方法:依据脂质筏在4℃时不溶于去垢剂的特性,用去垢剂处理去除细胞器和细胞核碎片的细胞膜成分,溶解非脂质筏成分,再用蔗糖密度梯度离心法将去垢剂不溶组分分离出来.用窖蛋白-1(caveolin-1)作为脂质筏的特异性标记,Western-blot分析检测caveolin-1的表达. 结果:在离心管15%～20%蔗糖溶液界面处可见一条白色的闪亮环带,Western blot结果显示DAB染色后在相对分子质量24000处可见棕色条带. 结论:去垢剂法是一种简单﹑有效提取脂质筏的方法,成功分离脂质筏是研究它参与信号转导过程的首要条件和基础.

常见动物咬(蜇)伤的紧急救治方法

犬咬伤首先要对伤口局部迅速彻底清洗,用20%肥皂水、去垢剂、含胺化合物等,如用0.1%新洁尔灭或清水清洗伤口,要注意肥皂水与新洁尔灭不能同时使用,必要时用狂犬病病毒免疫血清做局部浸润注射,冲洗后可用3%～5%碘酊擦拭消毒伤口.但用于普通伤口处理时应尽量避免使用碘酊,因其对伤口的刺激性大.如伤口较深,还需要3%过氧化氢溶液冲洗消毒,处理后的伤口不宜缝合和包扎,以利排毒处理.在及时处理伤口的基础上,还要及时注射狂犬病疫苗.

牙医不选贵牙膏

超市里的牙膏,价格一个比一个高,几十块一支的比比皆是.老百姓有句俗语:一分价钱一分货.牙膏也是这样吗?越贵的越好?答案是,未必.主要成分大同小异目前市面上的牙膏大致分为普通牙膏和特殊功效牙膏.牙膏的主要成分为摩擦剂、去垢剂、泡沫剂、综合剂、保湿剂、调味剂、防腐剂、香精等,这些成分在所有的牙膏中都有,它们能起到机械性摩擦、去污、清除部分口臭的作用.

不同反应条件对免疫沉淀分离膜蛋白的影响

目的:探讨不同条件对免疫沉淀方法分离纯化膜蛋白时的影响.方法:分别应用磷酸盐缓冲液(PBS)和溶膜缓冲液(合去垢剂)作为反应系统,单克隆抗体PD4与胃癌细胞系MGC803细胞膜溶液进行免疫沉淀反应以获得PD4相关抗原,用Western blot检测膜蛋白的得量.结果:分离纯化PD4相关抗原时,用CNBr-Sepharose 4B-PD4进行免疫沉淀效果优于Protein A Sepharose 4B;溶膜缓冲液作为反应系统效果优于磷酸盐缓冲液.结论:免疫沉淀纯化膜蛋白时,应用抗体直接交联于Sepharose 4B和溶膜缓冲液作为反应系统效果更佳.

乙型肝炎病毒标志物检测及临床意义

乙型肝炎病毒(HBV)的病原学诊断目前主要依靠免疫血清学方法检测HBV的血清学标志物和分子生物学方法检测HBV的核酸.前者包括HBsAg和抗HBs、HBeAg和抗HBe以及抗HBc(俗称两对半),HBcAg是HBV的核心部分,是HBV存在和复制活跃的直接指标之一,但通常HBcAg包囊在病毒外膜中.不能在血清中直接检出,需用去垢剂去掉病毒外膜后才能检出.临床上通常不检测HBcAg,而是检测其相应的抗体一抗HBc.后者可用杂交法或聚合酶链反应(PCR)检测血清中存在的HBV-DNA,但需要特殊仪器设备,一般实验室不能广泛开展.现将本院近两年来采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测的乙肝两对半结果报道如下.

解冻后溶剂/去垢剂处理血浆4℃保存6天凝血因子的稳定性

ABCB4基因与胆汁脂类转运

肝脏是脂类代谢的中心,肝细胞通过其细胞膜的毛细胆管面,每天分泌约1g胆固醇和4g卵磷脂(磷脂酰胆碱phos-phatidyl-choline,PC)进人胆汁.胆汁中的卵磷脂有助于胆固醇的溶解,防止疏水的胆固醇分子在胆道内形成胆固醇性结石.胆盐是一种天然的离子型去垢剂,卵磷脂可灭活其去垢活性,防止对肝脏和胆道上皮细胞的损伤[1].