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牛关节软骨细胞外基质材料的制备
目的 探讨将关节软骨粉碎颗粒后再溶解脱细胞的复合方式制备关节软骨细胞外基质(articular cartilage extracellular matrix,ACECM)的可行性,以提供理想的软骨组织工程支架材料.方法 无菌条件下,切取分离出牛关节软骨,液氮冷冻后立即粉碎,400目筛网过滤后得到直径＜150μm的软骨颗粒;应用胰酶-EDTA溶液对其进行消化,去除细胞成分后冲洗,梯度冻存后对脱细胞软骨颗粒冷冻干燥,制备为ACECM.对制备的ACECM行大体观察和组织学检测,并利用扫描电镜(SEM)观察基质材料微观结构;将分离培养的兔软骨细胞接种于ACECM,SEM观察细胞生长粘附状态,MTT法检测细胞的增殖活性.结果 制备的ACECM材料主要含有胶原及氨基葡聚糖等细胞外基质成分,无细胞成分残留,基质材料微观孔隙结构有利于接种的软骨细胞粘附和生长.结论 通过颗粒脱细胞方式获取的软骨基质含有天然ACECM成分,是一种体外培养软骨细胞的良好支架.
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离体灌注新型去垢剂用于组织工程人工肺构建实验
目的 评价一种新型去垢剂十二烷基醚硫酸钠(SLES)经主支气管途径用于制备脱细胞肺支架的效果,并自制简易生物反应器来评价种植细胞的效果,探索构建组织工程人工肺的可行性.方法 取SD大鼠肺,利用Langendorff系统经主支气管灌注0.1％SLES等溶剂制备脱细胞肺支架,在支架内种植A549细胞,生物反应器内培养3d,评价指标包括HE染色、DAPI染色、DNA含量测定.结果 经主支气管途径灌注SLES可以有效的去除肺内细胞,无残留的细胞及细胞核,DNA含量去除率达到96.27％,种植A549细胞培养3d,细胞在支架内均匀生长,DNA含量达到正常肺的64.67％.结论 新型去垢剂SLES可以制备出较为理想的脱细胞肺支架,自制的生物反应器可以有效地促进种植细胞的生长.
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肾脱细胞支架与再细胞化技术的研究进展
肾脱细胞支架是生物人工肾重要的材料支撑,理想的肾脱细胞支架应具备血管网络和独特的组织特异性结构,既有与天然组织相同的机械强度,又能提供微观和宏观的组织框架结构,利于细胞增殖分化,终完成工程化的器官构建.本文就肾脱细胞支架的制作方法及质量评价、脱细胞支架再细胞化、肾生物打印技术、未来发展潜力及面临的挑战等做一综述,为未来实践提供参考.
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脱细胞支架复合犬骨髓源内皮祖细胞构建组织工程血管
背景:目前临床使用的小口径(＜6 cm)人工血管因生物相容性差、远期通畅率低,效果并不理想.目的:将犬骨髓源内皮祖细胞与脱细胞血管支架动态复合培养,尝试构建一种全新的组织工程血管代用品.设计、时间及地点:随机对照实验,细胞学、组织病理学体外观察,于2005-12/2007-12在南京大学医学院附属鼓楼医院实验室完成.材料:通过去污剂一酶消化法制备犬颈动脉脱细胞支架;采用密度梯度离心法和内皮系条件培养法,分离扩增犬骨髓源内皮祖细胞,将扩增后的内皮祖细胞种植于脱细胞支架并置于牛物反应器中动态构建组织上程血管.方法:20只犬均暴露两侧颈总动脉及一侧股动脉,每只犬在3段血管随机移植组织上程血管、脱细胞血管支架及自体静脉,分别为组织工程血管组、脱细胞血管支架组及自体静脉组,每组的移植血管数譬均为20例.主要观察指标:对培养的内皮祖细胞进行免疫组化鉴定;血管移植术后6个月行数字减影血管造影、病理切片、扫描电镜等观察移植效果.结果:犬骨髓单个核细胞在体外培养10 d后形成"铺路石样"细胞,免疫组化结果符合内皮祖细胞表型特征:将内皮祖细胞与脱细胞支架置于生物反应器培养10 d后,种子细胞在血管腔内黏附生长;犬动脉移植术6个月后,组织工程血管及自体静脉通畅率分别为85%.90%,均优于脱细胞支架移植组25%.结论:犬骨髓源内皮祖细胞复合脱细胞血管支架,可获得一种具有良好生物相容性和通畅率的生物人工血管.
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以肝素固化脱细胞支架构建的小口径抗凝人工血管
背景:目前临床上直径<6 mm的小口径人工血管因生物相容性差、远期通畅率低,使用效果并不理想.目的:通过对脱细胞血管支架表面固化肝素,制备一种具有抗凝St功能的口径生物人工血管. 设计、时间及地点:细胞学、组织病理学体外观察,于2005-12/2007-12在鼓楼医院实验室完成.材料:普通成年杂种犬8只,雌雄不限,体质量约20kg.方法:采用去污剂酶消化法制备犬颈动脉脱细胞支架,并将肝素分子交联至支架表面.将制各的肝素固化血管和脱细胞血管基质植入犬颈动脉进行异体血管移植实验.主要观察指标:通过血小板黏附实验和细胞接触实验评价其血液、生物相容性能；经异体血管移植实验观察其早期血栓形成情况.结果:脱细胞支架细胞成分去除完全,而胞外基质保留完整:经肝素固化后具有良好的抗凝St性能,细胞接触实验未显示细胞毒性；植入异体犬颈动脉1个月后,发现肝索固化组移植血管均维持通畅,而植入单纯脱细胞血管基质者因血栓形成而闭塞.结论:对同种异体脱细胞血管支架进行表面肝素固化,可获得一种具有良好生物相容性和血液相容性的x小口径人工血管.
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不同方法制备脱细胞猪主动脉瓣膜支架的组织结构
背景:理想的脱细胞方法要求既能完全去除供体细胞,降低免疫原性,又能保留天然瓣膜的胶原纤维、弹力纤维等细胞外基质成分,以保持足够的机械强度.目的:采用不同洗剂制备脱细胞猪主动脉瓣膜支架,对比其组织结构,探讨为有效的脱细胞瓣膜支架制备方法.方法:20 个新鲜猪主动脉瓣膜随机分为新鲜对照组、去污剂组、酶消化组和去污剂-酶消化组,后3 组分别使用TritonX-100、胰蛋白酶以及二者联合的方法制备脱细胞瓣膜支架,对比支架大体形态、苏木精-伊红染色、Mallory-Heidenhain 染色和电镜下超微结构的不同.结果与结论:经脱细胞处理后,去污剂组瓣叶柔软、光滑,苏木精-伊红染色少量核物质存留、纤维排列规整,Mallory-Heidenhain 染色胶原纤维和弹性纤维相交错,电镜下呈波浪状排列、原纤维横纹清楚;酶消化组瓣叶局部塌陷,苏木精伊红染色细胞完全去除、纤维排列较紊乱,Mallory-Heidenhain 染色胶原纤维和弹性纤维呈网状排列,电镜下纤维部分断裂、原纤维横纹存在;去污剂-酶消化组瓣叶柔软、光滑,苏木精伊红染色细胞完全去除、纤维完整,Mallory-Heidenhain 染色胶原纤维和弹性纤维平行排列,电镜下纤维完好,但排列稀疏,原纤维横纹清晰.说明3 种方法均可有效去除供体细胞,保持纤维结构相对完整,在完全清除供体细胞并保持纤维支架完整性方面,TritonX-100 联合胰蛋白酶的方法更为有效.
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工程组织及器官的血管化：研究现状与应用进程
背景：构建有效的血管系统对于三维结构组织内细胞的存活和功能表达均具有决定性作用。因此，寻找一种合适的血管化策略已成为组织工程领域研究的热点和亟待解决的问题。
目的：总结并讨论组织工程血管化的理论基础及研究进展。
方法：检索 PubMed 数据库相关文章，检索时间为2003至2013年，检索词为“tissue engineering, vascularization, endothelial cel , scaffold”，并限定文章语言种类为英语，再从中筛选出与主题相关的部分文献，进行总结讨论。
结果与结论：初检得到124篇文章，按主题相关性对文献进一步筛选，终纳入41篇文章。血管化一直是组织工程领域关注的焦点和难点，国内外研究过多种血管化的策略，如复合生长因子、细胞共培养、生物反应器动态培养、人工支架或脱细胞支架等，但尚未公认一种有效的血管化策略实现与受体血管的功能性连接和体内细胞的长期存活。应用诱导多能干细胞与其他干细胞共培养，并通过添加生长因子、优化培养条件等方法在体内定向诱导分化，有望成为实现组织工程器官血管化的突破点。 -
牛肌腱冻干脱细胞支架的生物力学特性
背景:目前的脱细胞方法在去除细胞的同时对细胞外基质存在一定的损伤,降低了脱细胞支架的生物力学性能.目的:分析冻干牛肌腱脱细胞支架的生物力学特性.方法:取新鲜小牛趾伸屈肌腱,去除小牛肌腱表面的滑膜、腱膜及软组织,双蒸水冲洗干净后低压冻干,通过物理方法制备肌腱纤维束60个,随机均分为两组,实验组于无菌操作下置入丝氨酸蛋白酶抑制剂,室温下持续24 h,无菌PBS冲洗后,再移入低浓度胰酶+乙醇混合溶液中,在不破坏细胞外基质的情况下去除细胞壁,室温下持续5 h,再将纤维束移入脱氧核糖核酸酶溶液中持续5 h,后将已完成脱细胞步骤的支架使用PBS冲洗48 h,无菌室内室温下干燥;对照组不做处置.检测两组材料的弹性模量、耐久性及大应力.结果与结论:两组耐久性相似,但实验组在相同位移处的应力小于对照组;两组弹性模量比较差异无显著性意义,但实验组大应力低于对照组(P < 0.01).说明冻干脱细胞支架能够在一定程度上模仿牛肌腱的生物力学功能.
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脱细胞支架复合兔骨髓间充质干细胞构建组织工程血管
背景:目前临床使用的小口径(<6 mm)人工血管因生物相容性差、远期通畅率低,效果并不理想.因此,学术界一直致力于寻找具有正常血管生物学功能的血管代用品,组织工程血管的构建与功能研究已成为目前热门研究课题.目的:将兔骨髓间充质干细胞与脱细-胞血管支架动态复合培养体外构建组织工程血管,通过体内移植实验,探讨该组织工程血管的组织相容性及通畅率.设计、时间及地点:随机对照实验,细胞学、组织病理学观察,于2006-01/2008-06在南京大学医学院附属鼓楼医院实验室完成.材料:通过去污剂-酶消化法制备兔腹主动脉脱细胞支架;采用密度梯度离心法结合贴壁分离培养法,分离扩增兔骨髓间充质干细胞,将扩增后的干细胞静态种植于脱细胞支架后置于生物反应器中动态培养构建组织工程血管.方法:60只兔随机均分为3组,剪取一段腹主动脉长约1.0 cm,再将移植血管以8/0聚丙烯线间断外翻吻合到腹主动脉上.组织工程血管组:受体为对应抽取骨髓干细胞的实验兔,以组织工程血管为移植血管;脱细胞血管支架组:以脱细胞处理的同种异体腹主动脉为移植血管;同种异体血管组:以同种异体新鲜腹主动脉作为移植血管.主要观察指标:对培养的骨髓间充质干细胞进行免疫组化鉴定;血管移植后3个月行数字减影血管造影、病理切片、扫描电镜等观察移植效果.结果:兔骨髓间充质干细胞在体外培养8 d后形成漩涡状排列,免疫组化结果符合间充质干细胞表型特征:将间充质干细胞与脱细胞支架置于生物反应器培养12 d后,种子细胞在血管腔内黏附生长;血管移植3个月后,组织工程血管组、脱细胞血管支架组通畅率分别为90%,80%,均优于同种异体血管组(25%).移植3个月后苏木精一伊红染色及扫描电镜结果显示,组织工程血管组形成清晰的内、中、外膜3层结构,形态接近正常动脉,内皮细胞覆盖完整;脱细胞血管支架组血管内表面内皮细胞覆盖不完整,伴有附擘血栓形成,内膜轻度增生,伴炎性细胞浸润:同种异体血管组内膜极度增厚、坏死,管腔明显狭窄,伴不同程度的血栓机化.结论:将兔骨髓间充质干细胞复合脱细胞血管支架上,可获得一种具有良好生物相容性和通畅率的生物人工血管.
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VEGF在小剂量超短波促进种植骨髓间充质干细胞脱细胞支架修复大鼠坐骨神经损伤中的表达
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在小剂量超短波对种植骨髓间充质干细胞(BMSC)脱细胞支架修复大鼠坐骨神经损伤中的表达.方法 将培养至第3代的大鼠BMSC注入已制备的脱细胞支架内,然后置于培养箱内联合培养3 d,无茵条件下缝合到神经缺损处.实验鼠分为3组,即达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)组、支架内注射BMSC组和注射BMSC后应用超短波(USW)治疗组;超短波治疗组在术后2 d用小剂量超短波对移植动物的神经缺损处治疗;移植后第2,4,8和12周检测再生的神经中VEGF、S-100蛋白表达.结果 各组VEGF在损伤后再生即有表达,并随时间延长呈上升趋势,在第4周达到顶峰,超短波治疗组表达高于其他组(P<0.05).结论 VEGF在超短波治疗早期的高水平表达可加速种植的BMSC分化或迁移的速度,并能促使再生神经周围的血供增加.
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脱细胞支架联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用
目的:探讨脱细胞支架(AS)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用.方法:首先制备AS,用于桥接损伤的神经.其次切除大鼠右侧坐骨神经10 mm,建立大鼠SNI模型.将SNI模型大鼠随机分为模型组(M)、AS桥接组(AS)和AS联合电针治疗组(AST).模型组不予任何干预,AS组将支架桥接于两断端处,AST组在支架桥接术后2d给予电针进行治疗,采用20 Hz、1 mA疏密波相间的电流,针刺穴位为环跳和阳陵泉,每次电针15 min,7d1个疗程.电针4周后,用电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,用尼氏染色观察各组大鼠脊髓前角运动神经元的形态结构,用免疫印迹检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)蛋白的表达.结果:AST组大鼠坐骨神经传导速度和波幅明显高于AS组;尼氏染色显示AST组脊髓前角运动神经元胞体形态较完整,尼氏体呈蓝紫色、斑块状,偶见部分核移位现象,尼氏体的数量明显多于AS组和模型组;免疫印迹结果显示AST组脊髓内BDNF和NGF蛋白表达量均高于AS组和模型组.结论:脱细胞支架联合电针不仅可增加大鼠坐骨神经传导速度及波幅,还可阻止脊髓前角运动神经元中尼氏体肿胀与溶解,并可上调脊髓内BDNF和NGF蛋白的表达,对SNI所致的脊髓前角运动神经元损伤有保护作用.
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比较两种方法制备脱细胞小血管支架
目的:比较0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH和酶法制备脱细胞小血管支架的效果.方法:分别用含0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH处理3 d或1.0H Triton X-100+0.125%胰蛋白酶+Dnase+Rnase孵育48 h,脱去犬股静脉中的细胞成分,50Co辐照消毒,血清浸泡24 h,将平滑肌细胞和内皮细胞接种到脱细胞支架中;进行H-E染色、胶原纤维和弹力纤维染色,扫描电镜观察及力学检测.结果:0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH法完全地脱去了血管细胞;细胞外基质较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变;见种植细胞在支架内生长良好,连成片,支架具有良好的生物相容性;力学结果显示其弹性回复率和大断裂强度好于酶组.结论:两种方法比较,0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH法简便易行,成本低,脱细胞效果好,组织相容性佳,对力学性状影响小,是比较理想的制备脱细胞小血管支架的方法.
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脱细胞猪主动脉瓣叶的生物力学特性和免疫反应性
目的:探讨脱细胞猪主动脉瓣叶构建组织工程心脏瓣膜支架的可行性.方法:经胰酶-EDTA、表面活性剂、核酸酶处理,去除瓣叶的细胞成分,测定脱细胞瓣叶的生物力学特性,同时行大鼠皮下包埋实验,观察其免疫反应性.结果:瓣叶中的细胞成分能完全去除,获得无细胞的纤维网状支架.脱细胞瓣叶与新鲜瓣叶有基本相同的应力-应变曲线及应力-松弛曲线,而弹性模量、面积比、松弛强度、断裂强度和断裂伸长率两者无显著差异.脱细胞瓣叶的免疫反应性明显降低.结论:猪主动脉瓣叶经脱细胞处理后可以作为组织工程心脏瓣膜的支架材料.
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组织工程重建胰腺脱细胞支架血管系统的研究
目的：使用内皮祖细胞再内皮化胰腺脱细胞支架，并初步评价其在宿主体内生成血管的能力。方法：采用灌注法制备结构完整的全胰腺脱细胞支架；并提取大鼠骨髓单个核细胞，诱导分化为内皮祖细胞，进行原代培养；将培养完成的内皮种植于支架内，并行体内移植。结果：在移植后第10天，实验组中包含红细胞的血管管腔数为（43±6）cm2，而对照组为（8±3）cm2；在移植后第20天，实验组中包含红细胞的血管管腔数为（62±9）cm2，而对照组为（16±5） cm2，此结果具有统计学意义（P<0.05，n=6）。种植内皮祖细胞后，支架在体内能更快更多的生成新生血管，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：再血管化的支架在体内移植后，与对照组相比，可以更快的与宿主循环系统形成吻合。
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脱除人主动脉瓣膜细胞的研究
目的 探讨人主动脉瓣叶去细胞后作为组织工程心脏瓣膜支架的可行性.方法 经胰酶-EDTA、表面活性剂和核酸酶处理,去除人主动脉瓣叶的细胞成分,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性.结果 人主动脉瓣去细胞后,经光镜和电镜观察,脱细胞后血管壁无细胞残留,胶原纤维和弹性纤维保留完整,形态学无明显变化;生物学性能也没有明显改变.结论 去细胞效果良好,初步制造了同种主动脉血管壁脱细胞基质材料,为构建同种带瓣管道提供了较合适的材料.
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内皮祖细胞血管化大鼠肝脏脱细胞支架的研究
目的 制备大鼠肝脏脱细胞支架及原代培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,用内皮祖细胞血管化大鼠肝脏脱细胞支架.方法 采用灌注法制备大鼠肝脏脱细胞支架,苏木素-伊红(HE)染色法、免疫组织化学检测脱细胞支架结构及成分;原代培养并鉴定大鼠骨髓源性内皮祖细胞,并通过CD31、CD133、血管内皮生长因子(VEGF)免疫荧光鉴定;构建循环灌注培养体系;采用经门静脉途径将内皮祖细胞种植于脱细胞支架内,行体外循环灌注培养,通过HE和CD31检测内皮祖细胞在支架内生长情况.结果 采用灌注法获得大鼠肝脏脱细胞支架,HE未见细胞核成分,同时可见细胞外基质成分保留,免疫组织化学显示I型胶原蛋白、层粘连蛋白保留;原代培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞CD31、CD133、VEGF免疫荧光阳性;构建出由蠕动泵、氧合器、培养瓶、输送管道组成的循环灌注培养体系;成功将内皮祖细胞通过门静脉途径种植到脱细胞支架内,HE、CD31显示内皮祖细胞定植于脱细胞支架管腔内壁.结论 通过循环灌注培养能够成功将原代大鼠内皮祖细胞种植于大鼠肝脏脱细胞管腔内壁.
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胰腺脱细胞支架内胰岛素分泌细胞循环灌注培养
目的 观测小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)诱导的胰岛素分泌细胞(IPCs)在大鼠胰腺脱细胞支架上的生长及功能发挥.方法 经脾动脉持续灌注洗脱剂制备胰腺脱细胞支架,对其进行组织染色,DNA、糖胺多糖(GAG)含量,生物相容性检测.含小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)、胰腺十二指肠同源异型盒-1(PDX-1)和神经源性分化因子-1(NeuroD1)的腺病毒联合导入mBMSCs,免疫荧光、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测胰岛素(Insulin)表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同浓度葡萄糖刺激后胰岛素分泌情况.IPCs再种植于脱细胞支架内,培养后行苏木素-伊红(HE)染色、免疫荧光、FQ-PCR检测细胞生长及功能发挥.结果 经灌注后未见细胞残留,可见细胞外基质(ECM)保留,DNA定量提示细胞含量为(44.92±3.89) ng/mg(t=15.160,P=0.001),GAG含量为(30.27±2.70) ng/mg,(t=2.862,P=0.046),免疫组织化学显示胶原Ⅰ、纤连蛋白保留.三基因修饰的mBMSCs Insulin表达阳性,葡萄糖刺激试验显示其对不同浓度葡萄糖有反应.将IPCs在胰腺脱细胞支架内循环灌注培养,HE染色显示细胞在支架内生长良好,免疫荧光和FQ-PCR显示Insulin表达阳性,与二维培养比较,Insulin表达提高(t=15.030,P=0.004).结论 制备的大鼠胰腺脱细胞支架保存了基本的脉管结构及ECM,生物相容性良好.PDX-1、NeuroD1和MafA协同促进mBMSCs分化并获得Insulin合成和分泌能力.经三维循环灌注培养,IPCs能够在支架内生长及发挥功能,且细胞功能得到促进.
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比较牛颈静脉去细胞处理实验方法
目的 比较两种牛颈静脉脱细胞方法.方法 改良组对牛颈静脉使用0.25%聚乙二醇辛基苯基醚、2.5 g/L脱氧胆酸钠、0.2 g/L乙二胺四乙酸、0.1 g/L RNA酶和0.2 g/L DNA酶作48 h脱细胞处理;常规组使用0.5异/L胰蛋白酶和0.2 g/L乙二胺四乙酸处理24 h,再按以上处理组程序处理24 h.血管壁和瓣膜自身细胞脱除和细胞外基质改变在染色后用扫描电镜观察;血管组织强度用生物力学检测.结果 改良处理组管壁和瓣膜自身细胞完全脱除而细胞外基质无明显改变,常规组仍有大量固有细胞残留,弹力纤维出现断裂:两组脱细胞血管的生物力学性能无明显变化.结论 改良脱细胞处理用聚乙二醇辛基苯基醚、脱氧胆酸钠、乙二胺四乙酸、RNA酶和DNA酶组合,是一种较理想的牛颈静脉脱细胞方法.
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改良萃取法制备脱细胞神经支架的去髓鞘效果评价
[目的]评价改良化学方法制备脱细胞神经支架的去髓鞘与脱细胞效果.[方法]12只成年SD大鼠(230～280g),取双侧坐骨神经,随机分为3组,每组8例,分别采用不同的处理方法.正常对照组:不作任何处理；Hudson组:采用Triton X-200、磺基三甲铵乙内酯-10(SB-10)、磺基三甲铵乙内酯-16(SB-16)处理；改良组:采用Triton X-200、SB-10、SB-16联合脱氧胆酸钠(SDC)及过氧乙酸(PAA)处理.处理后行HE染色、甲苯胺蓝染色及透射电镜检查,观察脱细胞、去髓鞘程度及基底膜保存情况.[结果]形态学检查显示,与对照组相比,Hudson组中的细胞核结构完全消失,甲苯胺蓝染色为散在同心圆状的髓鞘结构,透射电镜下显示髓鞘板层成分保留,但有崩解断裂,轴突依然存在；改良组细胞核完全去除,与Hudson组不同的是,甲苯胺蓝染色显示为不规则多孔 状结构,髓鞘成分消失,透射电镜下显示髓鞘及轴突成分彻底去除,基底膜管壁结构清晰并完整保留.[结论]改良萃取法制备脱细胞神经支架能够有效地去除细胞和髓鞘成分,同时基底膜管结构保留完整.
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Triton X-100法制备牛颈静脉脱细胞血管支架
[目的]研究经Triton X-100脱细胞处理的牛颈静脉的组织结构和生物力学特性以及作为组织工程血管支架的可能性.[方法]获取10条新鲜带瓣牛颈静脉,随机分为两组,新鲜对照组(n=5)和脱细胞实验组(n=5),脱细胞组血管使用2.5 mL/L Triton X-100等进行脱细胞处理48 h,病理切片染色和扫描电镜观察血管壁和瓣膜自身细胞的脱除情况和细胞外基质变化情况;生物力学性能检测血管组织强度变化;体外人内皮种子细胞种植以了解脱细胞支架的生物相容性.[结果]脱细胞处理后,管壁和瓣膜的自身细胞完全脱除而弹力纤维和胶原纤维无明显改变;与新鲜牛颈静脉相比,脱细胞血管的拉伸强度[(16.5±2.61)MPa vs(15.5±3.1)MPa;P>0.05]和大持线力[(7.9±0.9)N vs (7.0±1.1)N;P>0.05]无明显改变,在100 mm Hg液压下脱细胞血管无异常扩张;内皮种子细胞在脱细胞血管支架上生长黏附良好.[结论]Triton X-100法对新鲜牛颈静脉进行脱细胞处理效果良好,脱细胞牛颈静脉可作为细胞种植的血管支架使用.
