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HCV准种的结构蛋白在真核表达系统中的表达
本实验从1份HCV持续性感染者血标本中随机筛选的8个C/E1/E2克隆序列亚克隆入真核表达载体pCI-neo,并转染大肠杆菌DH5α,经氨苄青霉筛选、酶切鉴定及DNA测序,构建为插入C/E1/E2的重组质粒.将1μg重组质粒、0.36 mCi/ml H3-亮氨酸加入TNT/T7 Couple Reticulocyte Lysate Systems (含有25μl TNT Lysate、4U T7 RNA聚合酶、20μmol/L不含亮氨酸的氨基酸混合物、40U RNA酶抑制剂),总反应体积50μl.取5μl反应液进行12% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,抽干凝胶,-70℃放射自显影3 d.
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噬菌体展示技术筛选HBV前-前-S抗原基因启动子结合蛋白基因
目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白.方法:应用噬菌体表面展示技术,以HBV前-前-S抗原基因启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,并对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析.结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的43个克隆中得到20个与HBV前-前-S抗原基因启动子特异结合的阳性克隆,包括人类SMG-1的磷脂酰肌醇3相关激酶激酶、28S核糖体、单倍型As2A线粒体、组氨酰-tRNA合成酶、脂肪醛脱氢酶、桥粒相关蛋白、MAX相互作用蛋白1等17个已知功能基因及3个未知功能基因.结论:用噬菌体人肝细胞cDNA文库筛选得到HBV前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白基因,为进一步研究HBV发病机制创造了新的途径.
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应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白
目的:通过筛选HBsAg基因启动子I(SPI,surface promoter I)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径.方法:应用噬菌体展示技术,以HBsAg基因启动子I的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索.结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的14个克隆中得到8个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV表面抗原基因启动子I特异结合的肝细胞蛋白,共编码7种蛋白.其中3个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白.结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子I的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因.
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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒NS5A抗原模拟表位
目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A(HCVNS5-A)特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,以抗-HCV NS5A的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选过程,随机挑取30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验,后对所选克隆进行DNA序列分析,以确定HCV NS5A抗原的模拟表位.结果:经噬菌体富集后,从随机筛选的30个克隆中得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列XXXPXXXLLRXX为HCV NS5A的模拟表位.结论:用噬菌体12肽库成功筛选得到HCV NS5A的模拟表位,为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件.
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急性心肌梗死患者早期静脉溶栓行护理干预的效果评价
急性心肌梗死(AMI)是心内科的常见病与多发病,目前早期静脉溶栓治疗是公认的治疗AMI的常规方法[1-3].然而,临床发现早期静脉溶栓容易发生多种并发症,针对早期静脉溶栓的AMI患者采取积极的护理干预措施可以有效降低并发症的发生率和患者的病死率.2009年5月至2010年9月,我科随机筛选80例急性心肌梗死早期静脉溶栓患者,探讨早期静脉溶栓护理干预措施对AMI患者的影响,现报道如下.
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医学生就业焦虑与其人格特征及注意网络关系的研究
目的:本研究分析医学生就业焦虑状况;讨论就业焦虑与人格特征及注意网络的相关性.方法:在徐州医学院随机筛选213名本科毕业生,采用状态-焦虑问卷(S-AI)测查就业焦虑、艾森克人格问卷(EPQ)测查人格特征、注意网络测验(Attention Net-work Test,ANT)测查注意网络效率.结果:医学院校大学生明显存在就业焦虑(P<0.01);医学生的焦虑总分与EPQ的N量表得分呈显著正相关,与E分量表分数呈负相关;焦虑分数与警觉网络的效率成显著正相关,与定向网络和执行控制网络的无相关性;焦虑水平较高组警觉网络效率显著高于焦虑水平较低组(P<0.001),而定向网络效率两组差异不显著(P>0.05),两组的执行与控制网络的效率差异不显著(P>0.05).结论:医学院校大学生就业焦虑水平显著,与人格特征相关,越是情绪不稳定、性格内向,就越容易产生就业焦虑.就业焦虑分值较高的个体警觉效率高.
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甲状旁腺激素基因多态性对广东地区老年人骨密度的影响
目的:探讨甲状旁腺素(PTH)基因多态性与中国广东地区部分老年人群骨密度的相关性.方法:随机筛选广东老年人549例,年龄65~87岁,平均(71.03±7.37)岁,采用双能X线吸收测定其腰椎侧位、股骨颈、粗隆间、大转子、ward's三角等部位的骨密度值.用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性技术检测外周血白细胞基因组PTH基因型.结果:549例受试对象中,PTH基因BB型382例,69.6%;Bb型148例,27.0%;和bb型19例,3.4%.无论是整个受试群体,还是根据性别将其分为男性及女性群体,其等位基因及基因型分布均符合Hardy-Wenbeng平衡定律.分析基因型与骨密度的关系显示,不同的基因型之间的骨密度均无统计学意义变化(P>0.05).结论:PTH基因多态性与广东地区汉族老年人群骨密度关系不密切,不能作为筛查和预示骨质疏松症的遗传易感位点.
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纳洛酮治疗急性酒精中毒60例疗效观察
本院内科自1998年2月至2002年10月收治急性酒精中毒148例,其中应用纳洛酮治疗且资料较完整的60例.将60例纳洛酮治疗的病例作为治疗组,随机筛选出60例相近病例作为对照组,现将两组治疗效果对比观察报告如下.