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DcR3基因和VEGF水平与结直肠癌临床病理的相关性
目的 探讨DcR3基因和血管内皮生长因子(VEGF)在结直肠癌组织中的表达及意义.方法 对61例结直肠癌组织和10例正常结直肠组织(对照组)采用免疫组化方法进行DcR3和VEGF的检测.结果 61例结直肠癌中37例DcR3(+);48例VEGF(+).正常肠组织(-),两者的阳性表达与淋巴结转移、DUCK分期有关.结论 DcR3和VEGF二者联合检测可以为临床诊治结直肠癌提供理论依据.
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HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响
目的 探讨HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响.方法 构建pGL3-DcR3-luc( -1010 bp- +114 bp)荧光素酶报告基因；利用脂质体介导的方法将pGL3 -DcR3 -luc转染到MT-2、TaxP、Jurkat细胞中,48h后检测DcR3荧光素酶报告基因的活性；利用脂质体介导的方法将梯度剂量的pCMV -Tax转染入Jurkat细胞,48 h后提RNA逆转录,real-time PCR检测DcR3 mRNA 的表达的变化；选用流式细胞技术检测MT-2、TaxP、Jurkat细胞表面DcR3蛋白的表达.结果 成功构建DcR3基因调控序列荧光素酶报告基因pGL3-DcR3-luc;荧光素酶活性的检测显示,与对照组相比,MT2细胞荧光素酶活性升高了32.07± 12.43倍,TaxP细胞荧光素酶活性升高了13.27±4.04倍,Jurkat细胞荧光素酶活性升高了1.26±0.49倍.与Jurkat细胞相比,MT2细胞和TaxP细胞的相对荧光素酶活性明显升高(P＜0.01)；Real-time PCR结果显示,4组Ct内参/Ct目的基因的值依次是0.40±0.02、0.44±0.01、0.47±0.02、0.53±0.02; DcR3 mRNA的表达与转染pCMV-Tax存在着剂量依赖性(P＜0.05).流式细胞技术检测,MT2和TaxP细胞实验组DcR3蛋白的表达较对照组Jurkat细胞表达的高(P＜0.05).MT2细胞的结果是33.1 ±9.9,TaxP细胞的结果是35.1 ±4.8,Jurkat细胞的结果是16.9±2.3.结论 Tax蛋白能够促进DcR3基因在T细胞中的表达.
关键词： 人T细胞白血病病毒1型 tax基因 DcR3 -
探讨宫颈癌患者血清 DcR3表达水平与 T细胞亚群变化的关系及意义
目的：：观察宫颈癌患者血清中诱捕受体3( DcR3)水平与T细胞亚群的变化关系，并探讨其在宫颈癌患者发病中的作用。方法：随机选取84例宫颈癌患者设为宫颈癌组；60例宫颈上皮内瘤变( CIN)患者设为CIN组，分为CIN Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级；60例健康女性设为健康组。采用酶联免疫法( ELISA)检测3组研究对象均外周血血清中DcR3的水平，采用流式细胞仪检测T细胞亚群( CD3+、CD4+、CD8+)的水平变化。结果：CIN Ⅲ级亚组与宫颈癌组患者血清DcR3水平显著高于健康组(P<0.05)，宫颈癌组患者血清DcR3水平显著高于CIN Ⅲ级亚组(P<0.05)；宫颈癌患者外周血CD3+、CD4+计数和CD4+/CD8+比值显著低于健康组(P<0.05)；CIN Ⅲ级亚组患者血清DcR3水平与外周血CD3+细胞、CD4+/CD8+呈负相关，宫颈癌组患者血清DcR3水平与外周血CD3+细胞、CD4+/CD8+呈负相关。结论：外周血DcR3水平可以作为监测患者宫颈上皮内瘤变病变程度的指标。 DcR3通过抑制人体免疫功能，降低T细胞亚群数量来促进宫颈癌细胞的免疫逃逸，促进宫颈癌的发生、发展和转移。
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诱骗受体3在疾病检测中的进展
DcR3又名TNFRSF6B/TR6/M68,其编码基因位于人类染色体20q13.3,是一种缺乏穿膜结构域的可溶性受体,DcR3编码长度为300个氨基酸(NCBI accession #NM_032945),产物相对分子质量为30 000的糖基化蛋白,有2个变异体DcR3v1( NCBI accession#AAM94173)和DcR3v2(NCBIaccession #AAM94172),分别编码74和139个氨基酸[1].DcR3能够中和3种肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员[死亡因子(Fas)、LIGHT和TL1A]的生物学效应.现将其在疾病检测中的进展阐述如下.
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小干扰RNA靶向抑制DcR3基因对肝癌细胞凋亡和迁移的影响
目的:应用RNA干扰技术抑制人肝细胞癌细胞系HepG2细胞DcR3表达,并研究DcR3基因沉默后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响.方法:设计并合成特异性DcR3-siRNA 4条和阴性对照siRNA 1条,转染HepG2细胞,通过半定量反转录-PCR(RT-PCR)及免疫细胞化学方法检测其对DcR3表达的抑制作用并筛选出干扰效果强的siRNA,应用流式细胞仪、DNAladder方法检测细胞的凋亡情况,应用划痕实验检测细胞体外迁移能力的变化.结果:各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3mRNA表达(P＜0.05),其中以DcR3-siRNA4的抑制作用明显,抑制作用达62.9％；将DcR3-siRNA4转染HepG2细胞能明显抑制HepG2细胞DcR3蛋白的表达(P＜0.01).流式细胞仪检测结果显示,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的凋亡率(22.97％±2.10％)明显高于空白对照组(1.17％±0.32％)、脂质体转染组(1.44％±0.43％)和非特异性siRNA转染组(1.22％±0.40％)(均P＜0.001); DNA ladder实验发现特异性DcR3-siRNA转染组出现DNA ladder,而空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组均未出现DNA ladder.划痕实验结果显示,转染后24、48和72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组.结论:DcR3在肝癌细胞的凋亡及迁移中发挥重要作用,抑制DcR3的表达能诱导肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力.
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RNAi抑制结肠癌细胞系DcR3的表达及对癌细胞生长的影响
目的:观察抑制DcR3基因表达的人SW480结肠癌细胞其恶性表型的改变.方法:应用RNA干扰(RNAi)技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染进入SW480结肠癌细胞系(DeR3高表达细胞),在细胞内形成小干扰双链RNA;识别并降解DcR3 mRNA.筛选DcR3低表达转染癌细胞,观测其体外DcR3.SW480-RNAi转染细胞的增长率及凋亡表达.结果:与对照组相比,转染DcR3-RNAi(F1R1)的WS480细胞,DcR3 mRNA的表达明显降低,各组相比,加入DcR3-RNAi(F1R1)组的SW480细胞数量明显减少,而仅加入DcR3及对照组细胞数量明显增加.统计学处理差异显著(P<0.001).与对照组相比,经DcR3-RNAi处理组凋亡抗体Caspase3及PARP产物表达增加.结论:经转染的DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞其DcR3 mRNA表达降低.肿瘤细胞的生长数量减少,凋亡增加,有一定可探索性抗癌前景.
关键词： DcR3 RNA干扰技术 SW480结肠癌细胞系 -
DcR3-siRNA对SW480结肠癌细胞系放射治疗敏感性的增强作用
目的:观察DcR3对SWF480结肠癌细胞系放疗前疗效评估的价值,以及应用siRNA沉默DcR3基因对增强放疗敏感性的作用.方法:ELISA方法检测经不同剂量放射性137Cs照射的SW480结肠癌细胞中DcR3的含量.应用siRNA技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染入经放射性照射的SW480细胞及对照组细胞.应用图像分析系统进行记录细胞集落数量,流式细胞仪检测细胞凋亡状况.结果:与对照组相比,不同时间和不同剂量放射线照射后,SW480细胞DcR3含量均有增加(P<0.05),当照射10 G、48h后,其含量明显增加,经5 G137Cs照射后的DcR3-siRNA-SW480转染的细胞集落数量减少.DcR3-siRNA照射的SW480细胞M1期峰值明显增高,凋亡小体明显增加.结论:DcR3高表达可能对放射线抵抗性有一定预示作用,DcR3-siRNA可增强SW480结肠癌细胞对放射性照射的敏感性.
关键词： DcR3 小干扰RNA SW480结肠癌细胞 放疔 -
肝细胞癌患者血清DcR3水平与临床意义
目的:探讨血清DcR3水平对HCC的诊断价值及临床意义.方法:采用ELISA检测67例HCC、8例肝硬化、17例胆囊炎患者和28例正常人血清DcR3水平; 化学发光法测定血清AFP水平; 免疫组织化学二步法检测HCC癌组织中DcR3蛋白的表达.结果:HCC组和肝硬化组血清DcR3水平均明显高于正常对照组( P<0.01), HCC血清DcR3水平与伴有肝硬化、包膜浸润和复发转移有关( P<0.05). DcR3蛋白在HCC癌组织中的表达与血清水平呈正相关( r = 0.395, P<0.01), 但DcR3血清阳性率明显高于癌组织IHC( P<0.05). AFP与DcR3联合检测对HCC的诊断灵敏度可由单项检测的82%和76%提高到93%.结论:血清DcR3升高在HCC的发生发展及浸润转移中起重要作用, 通过监测高危人群以及肝癌患者血清中的DcR3水平, 同时联合检测AFP, 可能对HCC的筛查、诊断和判断预后有一定意义.
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诱骗受体3在子宫颈上皮内瘤变及子宫颈癌中的表达及临床意义
宫颈癌的发生、发展和常规治疗的预后与机体的免疫状态相关.宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌的发病与肿瘤细胞的免疫应答紊乱有关,宫颈局部免疫活性细胞质和量的异常被认为在CIN和宫颈癌的发生中起着重要的作用[1].宫颈癌患者的细胞免疫抑制使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视,导致宫颈癌的恶化[1-2].诱骗受体3 (decoy receptor 3,DcR3)能调控免疫细胞的活性与分化,而且具有抗凋亡的作用,推测其可能参与了肿瘤细胞的侵袭、转移[3].本研究通过观察CIN及宫颈癌患者外周血和宫颈局部组织DcR3的表达,探讨DcR3在系统和宫颈局部抗肿瘤免疫中的作用,为开拓宫颈疾病治疗新途径提供实验和理论依据.
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DcR3-RNAi对人SW-480结肠癌细胞系恶性表型的影响
目的:观察研究抑制DcR3基因表达的人SW480结肠癌细胞其恶性表型的改变.方法:应用RNA干扰(RNAi)技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染进入SW480结肠癌细胞系(DcR3高表达细胞),在细胞内形成小干扰双链RNA;识别并降解DcR3 mRNA.筛选DcR3低表达转染癌细胞,3H观测其体外DcR3-SW480-RNAi转染细胞的增长率及凋亡表达.结果:转染的DcR3-SW480-RNAi-F1R1细胞可降低DcR3 mRNA的转录,凝胶电泳反应产物显示与对照组相比,DcR3-SW480-RN-Ai-F1R1细胞组条带明显减弱;3H掺入细胞的定量分析显示DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞的数量明显减少,P<0.001;Western 印记检测显示凋亡抗体Caspase-3及PARP表达增加.结论:经转染的DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞其DcR3 mRNA表达降低.肿瘤细胞的生长数量减少,凋亡表达增加, 有一定可探索性抗癌前景.
关键词： DcR3 RNA干扰技术 SW480结肠癌细胞系 -
子宫肌瘤患者外周血单核细胞中DcR3基因表达的意义
目的 探讨外周血单核细胞(PBMC)中DcR3 基因表达水平与子宫肌瘤的关系.方法 65 名子宫肌瘤患者和62 名健康对照者各取5ml 静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离PBMC,TRIZOL 法提取PBMC 总RNA,用半定量RT-PCR 法检测PBMC中DcR3 基因的相对表达水平,并用t 检验进行比较.结果 子宫肌瘤患者组PBMC中DcR3 基因的相对表达水平为(0.845±0.029),与正常对照组(0.140±0.003)相比有明显差异(P<0.01).结论 子宫肌瘤患者PBMC 中DcR3 基因的表达水平增高.
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DCR3的研究在肿瘤诊断与治疗中的价值
DCR3是一种新近发现的TNFR超家族成员,在部分正常组织及血清中少量表达,在一些恶性肿瘤中表达明显增加,DCR3的高表达并通过阻断外源性死亡受体途径介导细胞凋亡,与肿瘤的发生、发展密切相关,DCR3有可能成为一种全新的肿瘤特异性标志物,在肿瘤形成、基因诊断、靶向治疗、疗效观察及预后判断等提供一种新的思路,具有临床的应用前景.
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曲妥珠单抗联合多西紫杉醇治疗Her-2阳性乳腺癌的临床研究
目的：探析注射用曲妥珠单抗联合多西紫杉醇注射液治疗人类表皮生长因子受体2（Her-2）阳性乳腺癌的临床疗效。方法选取黄石市中心医院（普爱院区）2011年2月—2015年2月收治的乳腺癌患者86例作为研究对象，所有患者按照就诊顺序编号分为对照组和治疗组，每组各43例。对照组静脉滴注多西紫杉醇注射液75 mg/m2，1 h内滴完，间隔21 d重复给药，共给药4次。治疗组在对照组的基础上静脉滴注注射用曲妥珠单抗，将曲妥珠单抗溶于250 mL生理盐水中，首次剂量4 mg/kg，90 min内滴完，之后维持2 mg/kg，1次/周。观察两组的客观有效率、疾病控制率，同时比较治疗前后Her-2表达、细胞凋亡相关因子水平和不良反应发生情况。结果治疗后，对照组、治疗组的客观有效率、疾病控制率分别为60.5%、81.4%，70.0%、88.4%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后，两组患者 Her-2（＋＋）、（＋＋＋）比例显著降低，同组治疗前后差异有统计学意义（P＜0.05）；且治疗组指标的降低程度优于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后两组Caspase-3、DcR3、COX-2水平均显著降低，同组治疗前后差异有统计学意义（P＜0.05）；且治疗组这些观察指标的降低程度优于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。两组不良反应均以胃肠道反应、皮疹、白细胞减少、疲倦、心脏毒性等为主，但各种不良反应发生率的差异无统计学意义。结论注射用曲妥珠单抗联合多西紫杉醇注射液治疗Her-2阳性乳腺癌具有较好的临床疗效，可有效弱化Her-2表达，降低细胞凋亡相关因子水平，安全性佳，值得推广应用。
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诱骗受体3的二级结构及B细胞表位预测
①目的预测诱骗受体3（Dcr3）蛋白的二级结构及 B 细胞表位。②方法通过 NCBI 蛋白数据库检索到 Dcr3蛋白的氨基酸序列，以此为基础，通过 SOPMA 在线服务器预测其二级结构，利用 Lasergene 软件预测其亲水性、表面可及性、柔韧性区域及抗原性指数，综合分析，预测其可能的 B 细胞表位。③结果 Dcr3的二级结构由无规则卷曲（43．00％）、β折叠（10．33％）、α螺旋（36．33％）和β转角（10．33％）构成，其可能的 B 细胞表位位于56－67（TFVQRPCRRDSP），93－101（VLCGEREEE），56－167（GTFSASSSSSEQ），255－261（LKLRRRL），286－293（PGLERSVR）。④结论此结果为制备 Dcr3表位特异性抗体肽段选择提供了依据。
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DcR3与肿瘤
诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族的新成员,DcR3(又称为TR6或M68)是一种表面受体,是一种特殊的细胞凋亡抑制剂,能和肿瘤坏死因子超家族成员Fas配体、LIGHT以及TL1A相结合,对它们介导的细胞凋亡起负调控的作用,它在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫和抗病毒免疫中发挥着重要的作用,在某些瘤肿、自身免疫病中高度表达,故逐渐受到人们的重视.本文就DcR3的生物学特性及其在肿瘤方面的研究进展作一综述.
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陷阱因子3在类风湿关节炎患者血清及外周血单核细胞中的表达研究
目的 研究类风湿关节炎(RA)患者血清及外周血单核细胞中DcR3的表达情况.方法 选取已确诊的60例类风湿因子(RF)(+)的RA患者并按照DAS28评分将其分为RAa组和RAb组,以30名体检健康者作为对照,酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测各组血清可溶性陷阱因子3(DcR3)的表达情况.同时荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测各组外周血单核细胞中DcR3的表达情况.采用t检验和X2检验进行统计学分析.结果 DcR3血清表达水平在DAS28＞2.6的RAb组为(264+72) ng/ml较健康对照组为(48±39) ng/ml明显升高(r=0.251,P＜0.05).而在DAS28＜2.6的RAa组则没有差异.DcR3基因的扩增倍数在RAb组为23.5±5.4,健康对照组为8.3±3.6,差异具有统计学意义(r=0.336,P＜0.05).结论 DcR3在RA患者血清及外周血单核细胞中表达增高,而其血清表达水平在风湿活动较高的患者则更加明显.
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DcR3对肝纤维化动物模型的影响
目的：研究DcR3基因对肝纤维化大鼠的预防性治疗的作用。方法：SPF级健康雄性Wistar大鼠30只，体重范围180～220 g，随机分为3组，每组10只，分别为正常对照组、DcR3基因预防性治疗组（1％DMN＋DcR3组）、造模组（1％DMN组）。采用1％DMN诱导大鼠肝纤维化模型，腹腔注射DcR3质粒进行预防性干预。分别采用HE染色和Masson染色观察肝组织病理情况；qRT-PCR和Western blot 法检测DcR3、Fas、FasL、α-SMA和TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果：与模型组相比，DcR3预防治疗组大鼠肝组织炎性细胞浸润及胶原类物质沉积有所改善； DcR3基因可显著降低肝纤维化大鼠Fas、FasL、α-SMA和TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平，DcR3基因预防性治疗组与对照组和造模组有显著性差异（ P＜0.05）；同时DcR3基因预防性治疗组DcR3 mRNA和蛋白表达水平显著升高（ P＜0.05）。结论：DcR3基因可有效防治大鼠肝纤维化，其作用机制可能是DcR3通过降低肝脏炎症反应，减少胶原类物质沉积，抑制α-SMA和TGF-β1表达，从而抑制HSC活化；下调Fas和FasL表达，抑制Fas／FasL途径诱导的肝细胞凋亡。
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DcR3在预防博莱霉素大鼠模型发生肺纤维化中的作用
目的：探讨DcR3在预防博莱霉素大鼠模型发生肺纤维化中的作用。方法采用博莱霉素复制肺纤维化动物模型。分为正常对照组、博莱霉素组、博莱霉素＋DcR3组，给药时间2 w，各组分别于2、4、6、8 w处死大鼠6只，收集肺泡灌洗液的细胞和上清检测细胞因子含量。左肺组织冻存留作羟脯氨酸检测；右肺组织固定用作组织染色。结果博莱霉素＋DcR3组肺泡炎的程度表现为逐渐减轻的过程，炎症程度均低于 BL组（P＜0.05）；BL＋DcR3组肺纤维化程度无明显加重趋势，与对照组比较差异显著（P＜0.05），与BL组比较有显著性差异（P＜0.01）。结论 DcR3的早期应用，可减轻博莱霉素大鼠模型肺的的局部炎症，可能在一定程度上达到预防肺纤维化形成的目的。
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血清DcR3水平与胃癌的关系
诱捕受体3(decoyreceptor3,DcR3)是近研究发现的一类肿瘤坏死因子受体(TNFR),某些蛋白配体与DcR3特异性结合后,导致配体不能够与死亡受体结合,促使肿瘤细胞不能诱导凋亡[1].研究发现,人类多种恶性肿瘤与DcR3蛋白的表达有关.关于DcR3在胃癌的表达,国内外研究比较少,且多采用免疫组化法[2].本研究采用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测患者血清DcR3的水平,探讨DcR3与胃癌增殖、发生和转移关系.
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DcR3基因与特发性肺纤维化肺功能的相关性研究
目的探讨外周血单核细胞中DcR3基因表达水平与特发性肺纤维化(IPF)患者的肺限制性通气功能、弥散功能的关系,以及IPF的发病机理、DcR3基因在IPF疾病发生、发展过程中的作用机制.方法应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测IPF患者外周血单核细胞中DcR3基因表达水平.结果 DcR3基因在IPF患者PBMC中表达(0.357±0.088)明显高于健康对照组(0.259±0.084)(P<0.05).IPF患者PBMC中DcR3基因表达增高者其肺限制性通气功能障碍和弥散功能障碍均加重.结论 DcR3基因在IPF患者PBMC中表达明显高于健康人, DcR3基因表达水平与IPF患者肺限制性通气功能障碍、弥散功能障碍呈正相关.
