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HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响
目的 探讨HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响.方法 构建pGL3-DcR3-luc( -1010 bp- +114 bp)荧光素酶报告基因；利用脂质体介导的方法将pGL3 -DcR3 -luc转染到MT-2、TaxP、Jurkat细胞中,48h后检测DcR3荧光素酶报告基因的活性；利用脂质体介导的方法将梯度剂量的pCMV -Tax转染入Jurkat细胞,48 h后提RNA逆转录,real-time PCR检测DcR3 mRNA 的表达的变化；选用流式细胞技术检测MT-2、TaxP、Jurkat细胞表面DcR3蛋白的表达.结果 成功构建DcR3基因调控序列荧光素酶报告基因pGL3-DcR3-luc;荧光素酶活性的检测显示,与对照组相比,MT2细胞荧光素酶活性升高了32.07± 12.43倍,TaxP细胞荧光素酶活性升高了13.27±4.04倍,Jurkat细胞荧光素酶活性升高了1.26±0.49倍.与Jurkat细胞相比,MT2细胞和TaxP细胞的相对荧光素酶活性明显升高(P＜0.01)；Real-time PCR结果显示,4组Ct内参/Ct目的基因的值依次是0.40±0.02、0.44±0.01、0.47±0.02、0.53±0.02; DcR3 mRNA的表达与转染pCMV-Tax存在着剂量依赖性(P＜0.05).流式细胞技术检测,MT2和TaxP细胞实验组DcR3蛋白的表达较对照组Jurkat细胞表达的高(P＜0.05).MT2细胞的结果是33.1 ±9.9,TaxP细胞的结果是35.1 ±4.8,Jurkat细胞的结果是16.9±2.3.结论 Tax蛋白能够促进DcR3基因在T细胞中的表达.
关键词： 人T细胞白血病病毒1型 tax基因 DcR3 -
人T细胞白血病病毒Tax基因与宿主细胞的相互作用
人T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ(HTLV-Ⅰ)可导致成人T淋巴细胞白血病(ATL).临床多以外周血T淋巴细胞的恶性增殖为特征,并伴有T淋巴细胞的形态异常.HTLV-Ⅰ Tax基因编码的蛋白在T淋巴细胞癌变过程中起重要作用.通过病毒基因的构成,着重介绍Tax基因与宿主细胞多种因素的相互作用对肿瘤形成的影响.
关键词： 人T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型 tax基因 肿瘤 -
上海地区HTLV-I相关高危人群病毒感染的检测
目的 建立人类T淋巴细胞白血病病毒I(HTLV-I)前病毒的核酸检测方法,对HTLV-I相关高危标本进行检测,初步了解上海地区HTLV-1在相关疾病和高危人群中的流行特点,探讨核酸检测法在HTLV-I高危人群中的检测意义.方法 实验收集了69例淋巴瘤/白血病患者,72例有多次输血史的其他血液病患者以及1例HTLV-I相关脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢瘫痪(TSP)疑诊患者血液标本.采用荧光定量PCR筛查HTLV-1前病毒tax基因,酶联免疫法检测血清HTLV-I/II抗体,对上述2种检测中出现任一阳性结果的标本进一步采用nest-PCR检测HTLV-1前病毒env基因以确定HTLV-I的感染.结果 仅HAM/TSP疑诊患者tax基因扩增出现阳性曲线;ELISA检测标本血清HTLV-I/II抗体均为阴性;nest-PCR扩增env基因未见特异性条带.结论 上海地区小样本HTLV-I相关高危人群中未检出HTLV-I感染;建立的核酸检测方法能对HTLV-I病毒感染进行有效的筛查和确认.
关键词： T淋巴细胞白血病病毒I tax基因 荧光定量PCR env基因 Nest-PCR -
SYBRGreen荧光定量PCR检测HTLV-I前病毒tax基因方法的建立
目的 建立HTLV-I前病毒tax基因的荧光定量PCR检测方法.方法 根据HTLV-I tax基因序列设计引物,将PCR克隆的tax片段链接入质粒载体.经筛选鉴定后,以含有目的片断的质粒为阳性模板建立实时荧光定量检测方法.结果 扩增体系的敏感度可达10拷贝/反应.模板浓度在105～101拷贝/反应时,模板浓度与循环阚值(Ct)之问相关性良好,相关系数r=-0.998 7,且模板浓度相同的反应管之间具有良好的重复性和稳定性.结论 SYBRGreen荧光定量PCR检测HTLV-I前病毒tax基因方法具有简便、快速和灵敏度高等优点,可能在疾病诊断、监测以及血液筛查中具有一定的应用前景.
