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RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响
目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞Nucleostemin mRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-time PCR和Western blot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降；NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P＜0.05; 1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P＜0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P＞0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.
关键词： nucleostemin RNA干扰 SW480结肠癌细胞系 增殖 -
RNAi抑制结肠癌细胞系DcR3的表达及对癌细胞生长的影响
目的:观察抑制DcR3基因表达的人SW480结肠癌细胞其恶性表型的改变.方法:应用RNA干扰(RNAi)技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染进入SW480结肠癌细胞系(DeR3高表达细胞),在细胞内形成小干扰双链RNA;识别并降解DcR3 mRNA.筛选DcR3低表达转染癌细胞,观测其体外DcR3.SW480-RNAi转染细胞的增长率及凋亡表达.结果:与对照组相比,转染DcR3-RNAi(F1R1)的WS480细胞,DcR3 mRNA的表达明显降低,各组相比,加入DcR3-RNAi(F1R1)组的SW480细胞数量明显减少,而仅加入DcR3及对照组细胞数量明显增加.统计学处理差异显著(P<0.001).与对照组相比,经DcR3-RNAi处理组凋亡抗体Caspase3及PARP产物表达增加.结论:经转染的DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞其DcR3 mRNA表达降低.肿瘤细胞的生长数量减少,凋亡增加,有一定可探索性抗癌前景.
关键词： DcR3 RNA干扰技术 SW480结肠癌细胞系 -
DcR3-RNAi对人SW-480结肠癌细胞系恶性表型的影响
目的:观察研究抑制DcR3基因表达的人SW480结肠癌细胞其恶性表型的改变.方法:应用RNA干扰(RNAi)技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染进入SW480结肠癌细胞系(DcR3高表达细胞),在细胞内形成小干扰双链RNA;识别并降解DcR3 mRNA.筛选DcR3低表达转染癌细胞,3H观测其体外DcR3-SW480-RNAi转染细胞的增长率及凋亡表达.结果:转染的DcR3-SW480-RNAi-F1R1细胞可降低DcR3 mRNA的转录,凝胶电泳反应产物显示与对照组相比,DcR3-SW480-RN-Ai-F1R1细胞组条带明显减弱;3H掺入细胞的定量分析显示DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞的数量明显减少,P<0.001;Western 印记检测显示凋亡抗体Caspase-3及PARP表达增加.结论:经转染的DcR3-RNAi-SW480结肠癌细胞其DcR3 mRNA表达降低.肿瘤细胞的生长数量减少,凋亡表达增加, 有一定可探索性抗癌前景.
关键词： DcR3 RNA干扰技术 SW480结肠癌细胞系
