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HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的影响
本研究旨在探讨白血病细胞中nucleostemin (NS)基因下调对其非依赖p53通路的候选途径PI3 K/A KT/mTOR的相关分子表达的影响.通过重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至p53缺失型HL-60细胞以干扰NS基因的表达.用Real-time PCR技术评价转染后HL-60细胞NS基因的表达情况并检测干扰前后PI3 K/AKT/mTOR信号通路中相关分子水平表达的变化.结果表明:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见GFP荧光水平较高,大于80％.Real-time PCR结果显示,NS基因mRNA的抑制率在HL-60细胞中为56.5％;干扰NS的表达后PI3K、AKT和GβL基因mRNA表达量分别为0.491±0.084、0.398±0.164、0.472±0.097,下调明显,与空白对照组(分别为1.002±0.171、1.000±0.411、1.001 ±0.206)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在HL-60细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的变化与NS基因的下调呈正相关,两者的关联性为证明PI3 K/AKT/mTOR信号通路可能是NS的一种非依赖p53作用途径提供了依据.
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Nucleostemin表达下调对p53缺失型HL-60细胞自噬活性的影响
目的:结合前期基因芯片和生物信息学分析结果,探讨下调Nucleostemin (NS)表达对p53缺失型白血病HL-60细胞自噬活性的影响,为更深入研究NS非p53依赖性信号通路的关键节点提供依据.方法:在NS-RNAi-GV248重组慢病毒载体下调NS表达的基础上,采用吖啶橙染色、Western blot和透射电镜技术,检测HL-60细胞自噬活性的变化.结果:重组慢病毒载体成功抑制了HL60细胞中NS蛋白的表达;与空白对照组(3.1±0.28)％和阴性对照组(6.2±0.64)％相比,实验组HL-60细胞内酸性小体数量(22.4±0.76)％明显增高(P＜0.05);与阴性对照组(1.010±0.039)和空白对照组(0.608±0.008)相比,实验组HL-60细胞LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的比值(1.537±0.072)明显增高(P＜0.05);与阴性对照组(4.2±1.2)和空白对照组(2.3±0.5)相比,实验组中HL60细胞内自噬性结构的数量(8.7±3.1)明显增高(P＜0.05).结论:下调NS蛋白的表达可以增强p53缺失型HL-60细胞的自噬活性.
关键词： nucleostemin HL-60细胞 非P53依赖性通路 自噬活性 -
RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响
目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞Nucleostemin mRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-time PCR和Western blot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降；NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P＜0.05; 1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P＜0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P＞0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.
关键词： nucleostemin RNA干扰 SW480结肠癌细胞系 增殖 -
Nucleostemin基因荧光真核表达载体构建及表达特性
目的:构建Nucleostemin(NS)基因真核表达载体,并在COS-7细胞中表达.方法: 设计引物在肺癌细胞株(LTEP-a-2)中扩增NS全长cDNA片段,插入pMD-18T 质粒中得pMD-18T-NS载体,并测序;再将pMD-18T-NS质粒经酶切后导入真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP质粒中,构建pcDNA3.1(+)-GFP-NS载体,并检测其真核表达情况.结果: 经RT-PCR扩增得到1 650 bp的全长NS cDNA片段,酶切及测序后鉴定证明pMD-18T-NS构建成功.pcDNA3.1(+)-G-FP-NS载体转染COS-7细胞经蛋白印迹及激光共聚焦显微镜检测显示,该GFP-N-S融合基因在COS-7细胞中获得较好表达.转染后见该基因定位于核仁,细胞逐渐失去黏附贴壁的特性,细胞的增殖受阻;稳定表达(4～20周)后,细胞形态发生改变,体积增大,核增多,细胞成瘤细胞样改变.结论: 成功构建pcDNA3.1(+)-GF-P-NS真核表达载体,并在COS-7细胞中有效表达;NS基因在COS-7发生瘤样改变过程中发挥着重要作用,可能与肿瘤发生密切相关.
关键词： nucleostemin 肿瘤 真核表达 -
Nucleostemin基因在骨髓间充质干细胞诱导致瘤过程中的表达
目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)诱导肿瘤发生的机制.方法 用荧光差异显示技术(FDD)寻找差异基因;PCR、免疫组织化学、Western blotting加以验证;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(Real time RT-PCR)检测诱导致瘤细胞在裸鼠体内致瘤后致瘤组织的基因表达水平.结果 FDD结果显示Nucleostemin(NS)基因高表达,与PCR、Western blotting显示结果一致.Real time RT-PCR表明,NS基因在MSC、F6及3组F6致瘤组织细胞之间的表达水平差异有统计学意义(F=160,P<0.05).F6组NS基因表达水平为(0.0372±0.0019),MSC基因表达水平为(0.0021±0.0002),增高18倍(P<0.05);裸鼠皮下注射F6细胞后,第4、6、7周分离致瘤组织细胞内NS基因表达水平分别为(0.0504±0.0083)、(0.0995±0.0026)和(0.0614±0.0036),呈上升趋势(与MSC对比,P值均<0.05).Western blotting及免疫组织化学染色证明F6细胞NS蛋白表达明显增高.结论 NS基因与肿瘤细胞形成有关.
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Nucleostemin通过p53与非p53途径调控细胞增殖的研究进展
Nucleostemin (NS)是一种可在细胞核仁和核浆内穿梭的GTP结合蛋白,主要定位于核仁内,其在维持干细胞未分化状态、细胞周期进程、肿瘤细胞及干细胞的增殖与凋亡中发挥着重要作用.就NS调控细胞增殖的机制而言,目前仍存在争议.一部分研究认为,NS通过结合p53,发挥维持细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用;另一部分研究则认为,NS通过细胞内其他通路及参与核糖体的生物合成,进而影响细胞的生物学功能.
关键词： nucleostemin p53途径 增殖 -
Nucleostemin研究进展
Nucleostemin是一种新的p53结合蛋白,定位于干细胞和肿瘤细胞的细胞核,能维持干细胞的扩增并抑制其向成熟细胞分化,并参与干细胞和肿瘤细胞的增殖调控.随着研究的深入,Nucleostemin在调节干细胞和肿瘤细胞的增殖和分化中的作用引起了愈来愈多的关注.
关键词： nucleostemin P53 GTP 核蛋白 -
胃癌组织和SGC-7901细胞中nucleostemin基因表达的实验研究
目的 检测nucleostemin(NS)基因在胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞中的表达情况.方法 21例胃癌手术标本,提取胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞株总RNA,用半定量RT-PCR方法检测胃癌组织和SGC-7901中NS基因的表达情况.用脂质体法将PCDNA4/C-NS-silencer质粒及空载体PCDNA4/C-vector质粒分别转染SGC-7901细胞,分别命名为silencer组和vector组,未转染的SGC-7901细胞记为normal组,RT-PCR方法检测NS基因表达量.用MTT法检测3组细胞的生长增殖情况.结果 胃癌组织和SGC-7901细胞中皆有NS基因表达.定性分析显示,与vector组和normal组比较,silencer组细胞趋于分化,NS基因表达量下降.细胞培养24 h、48 h、72 h后,silencer组和vector组细胞增殖抑制率间差别均有统计学意义(P＜0.01).结论 胃癌组织和SGC-7901细胞中有NS基因表达;NS基因特异性RNA干扰使NS基因表达量下降,抑制SGC-7901细胞株体外增殖.
关键词： nucleostemin 胃癌 RNA干扰 细胞增殖 -
Nucleostemin基因在卵巢上皮性肿瘤的表达及与病理分型的关系
目的:研究核干细胞因子Nucleostemin (NS)基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨其与肿瘤病理分型的关系.方法:采用RT-PCR及Western blot检测36例卵巢癌组织手术标本,32例卵巢良性上皮肿瘤组织手术标本,12例正常卵巢组织标本中Nucleostemin基因及相应蛋白的表达,采用分组对照的方法对比3组样本中NS基因及蛋白的表达情况,并进行相对定量研究.采用统计学方法检测NS基因的表达是否与临床病理分级及血清CA125存在关联.结果:①卵巢癌组织中NS的阳性表达率显著高于良性肿瘤组织及正常卵巢组织；②卵巢癌组织中,淋巴结转移组NS的表达水平高于未转移组；③临床分期Ⅲ期组的表达水平高于ⅠB期组；④中、低分化组的表达水平高于高分化组.结论:卵巢癌组织中存在NS基因的高表达,其表达量与组织类型无关,而与临床TNM分期及组织分级正相关.
关键词： 卵巢癌 核干因子 nucleostemin CA125 -
Nucleostemin基因特异性RNA干扰对HeLa细胞体外增殖能力的影响
目的:研究nucleostemin (简称NS)基因特异性RNA干扰对HeLa细胞的增殖和细胞周期的影响.方法:①将NS特异性siRNA真核表达质粒经脂质体转染导入HeLa细胞,筛选NS阳性转染HeLa细胞克隆,作为silencer组用于实验,对照组为HeLa细胞组,②检测silencer组和对照组细胞生长曲线、细胞增殖率和细胞周期.结果:与对照组相比,Silencer组HeLa细胞增殖速率明显降低,细胞处于G0/G1期明显增多,S期则明显减少,DNA异倍体数量明显降低.结论:NS特异性siRNA真核表达质粒转染的HeLa细胞,其细胞增殖速率受到明显抑制.
关键词： RNAi nucleostemin Hela细胞 肿瘤 基因治疗 -
Nucleostemin 特异性RNA干扰对肿瘤细胞增殖能力的影响
目的:检测肿瘤细胞Nucleostemin(NS)的表达,研究NS特异性RNA干扰对Hela细胞体内外增殖的影响.方法:提取6种肿瘤细胞总RNA,用RT-PCR和Northern blot方法检测NS的表达.用NS特异性siRNA表达载体转染Hela细胞,观察转染的Hela细胞(简称NS-SiRNA-Hela细胞)体内外增殖的变化.结果:6种肿瘤细胞中NS显高表达.体外培养的NS-siRNA-Hela细胞中NS表达显著降低,G0/G1期细胞百分率显著升高.体内致瘤实验显示,NS-siRNA-Hela细胞在裸鼠体内增殖显著降低.结论:NS在肿瘤细胞中高表达具有普遍性.NS特异性RNA干扰使Hela细胞进入S期受阻,并可明显降低Hela细胞体内外的增殖能力.
关键词： nucleostemin 干细胞 肿瘤细胞 RNA干扰 细胞周期 -
多种肿瘤组织中 Nucleostemin 基因表达的检测及意义
目的:检测 Nucleostemin (NS)基因在多种肿瘤组织中的表达情况.方法:收集包括乳腺癌、卵巢癌、食管癌、胃癌等十几种肿瘤标本,试剂盒法提取组织总RNA,以GAPDH作为内参基因,用半定量RT-PCR方法检测NS基因在肿瘤组织中的表达情况.结果:所有肿瘤组织中皆有NS基因表达.结论:NS基因表达在肿瘤组织中普遍表达,NS基因可能参与了肿瘤细胞的增殖调控.
关键词： nucleostemin 肿瘤 基因表达 肿瘤增殖 -
Nucleostemin特异性RNA干扰联合化疗药物对肿瘤细胞增殖抑制作用的体外实验研究
目的:研究Nucleostemin特异性RNA干扰(RNAi)联合4种化疗药物对人食管癌细胞株Eca-109体外增殖的影响.方法:1.用NS特异性RNAi表达载体转染Eca-109细胞.2.实验分组:分为silencer组(S组)、normal组(N组)、单纯用药组和联合用药组.S组为转染NS特异性siRNA表达载体的Eca-109细胞;N组为正常Eca-109细胞;单纯用药组为单纯应用4种化疗药物作用于Eca-109细胞;联合用药组为转染NS特异性RNAi表达载体分别联合4种化疗药物作用于Eca-109细胞.3.利用细胞计数法、镜下细胞形态学观察和MTT法检测各组细胞的增殖情况.结果:联合用药各组增殖速率明显低于单纯用药各组,而增殖抑制率明显高于单纯用药各组,差异具有显著性(p＜0.05).结论:4种化疗药物与NS特异性RNAi联合对Eca-109细胞都具有一定的协同抑制作用.
关键词： nucleostemin 肿瘤细胞 细胞培养 化疗药物 -
Nuclestemin siRNA对人肺腺癌紫杉醇耐药株A549/Taxol的耐药性逆转的研究
目的:探讨Nuclestemin基因(NS)特异性RNA干扰对人肺腺癌紫杉醇耐药株A549/Taxol细胞耐药性的逆转作用.方法:NS特异性RNAi表达载体转染A549/Taxol细胞.提取肿瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法检测NS的表达;利用MTT法检测紫杉醇的半数抑制浓度( IC50).结果:NS特异性RNAi表达载体转染A549/Taxol细胞后,NS的表达量明显降低,并且对紫杉醇敏感性的相对逆转率达65.3%.结论:Nuclestemin基因 siRNA能有效逆转A549/Taxol细胞的耐药性,明显提高耐药细胞对紫杉醇的敏感性.
关键词： nucleostemin RNA干扰 A549/Taxol细胞 耐药性 -
Nucleostemin特异性RNA干扰联合化疗药物对人食管癌细胞株Eca-109的作用
目的:探讨Nucleostemin(NS)特异性RNA干扰(RNAi)联合4种化疗药物对人食管癌细胞株Eca-109生长的影响.方法:NS特异性RNAi表达载体转染Eca-109细胞;实验分为沉默组、正常组、单纯用药组和联合用药组,提取各组肿瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法检测NS的表达;利用镜下细胞形态观察和MTT法检测各组细胞的增殖情况.结果:联合用药各组NS基因表达量低于单纯用药各组,细胞增殖速率明显低于单纯用药各组,而细胞增殖抑制率明显高于单纯用药各组.结论:4种化疗药物与NS特异性RNAi联合对Eca-109细胞具有一定的协同抑制作用.
关键词： nucleostemin RNA干扰 肿瘤细胞 联合 细胞周期 -
Nucleostemin在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及其意义
背景:Nucleostemin(NS)是一个与细胞增殖相关的核蛋白,部分研究显示其仅高表达于干细胞和肿瘤细胞.成体组织分化细胞中未见NS表达.目的:探讨NS在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及其意义.方法:收集38例结直肠癌患者的癌组织及其相应癌旁正常组织标本,以实时RT-PCR和蛋白质印迹法检测NS mRNA和蛋白表达.结果:实时PCR扩增曲线显示结直肠癌组织和正常结直肠组织均有NS基因指数式扩增,癌组织NS mRNA表达量显著高于正常组织(1.8939±0.9529对1,P=0.011).蛋白质印迹法证实NS蛋白在正常组织中表达较微弱或几乎无表达,癌组织中其表达显著增高(1.5397±0.3625对0.6336±0.3443,P=0.001).结论:结直肠癌组织和正常结直肠组织中均存在NS基因,推测其微量表达可调节细胞正常增殖,而异常高表达则可通过某些机制促进细胞恶性增殖.
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RNA干扰靶向抑制食管癌细胞株Nucleostemin基因表达
[目的]探讨Nucleostemin(NS)基因特异性RNA干扰对食管癌Eca-109细胞株增殖和凋亡情况的影响.[方法]用NS特异性siRNA表达载体转染食管癌Eca-109细胞株,利用MTT法测试细胞增殖抑制率:RT-PCR法检测NS基因表达量的变化,流式细胞仪法检测细胞周期分布和细胞凋亡情况.[结果]与阴性对照组相比,PCDNA4/C-NS-silencer组细胞的增殖速率降低,24h、48h、72h细胞增殖抑制率分别为57.8%、74.9%、87.3%;NS基凶表达量下降,G0/G1期细胞百分率显著升高,S期细胞减少,细胞凋亡率增加.[结论]RNAi技术可显著抑制食管癌Eca-109细胞株NS基因表达,导致细胞增殖缓慢,细胞周期阻滞,凋亡增加.
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Nucleostemin在大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化中的研究
目的 探讨Nucleostemin(NS)在大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化中的机制及作用.方法 取4～6周龄雄性SD大鼠两侧股骨、胫骨骨髓基质细胞,原代及传代培养.取第3代骨髓间充质干细胞分别用普通和矿化培养基培养,通过相差倒置显微镜观察细胞生长、MTT法检测细胞增殖、碱性磷酸酶和茜素红钙染色了解成骨活性.免疫组化SABC法及免疫荧光法检测NS在细胞中的表达情况,比较NS分别在普通培养基和成骨细胞诱导培养基作用下的表达情况.结果 大鼠骨髓间充质干细胞在矿化培养基诱导下其NS的表达较普通培养基培养下的表达明显减弱,且呈时间依赖性衰减.成骨细胞的NS表达则为阴性.在矿化液作用下,骨髓间充质干细胞可诱导为成骨细胞.MTT显示矿化液培养细胞生长潜伏期长,对数生长期较对照组延长.结论 NS作为核干细胞因子,在干细胞中和某些肿瘤细胞中表达丰富.细胞分化后,其表达明显减少.因此,NS很可能作为大鼠基质干细胞是否具有潜在分化能力的标志性因子.
关键词： 骨髓基质干细胞 成骨细胞 诱导分化 nucleostemin -
nucleostemin基因在肾癌中的表达及其意义
目的 观察nucleostemin基因在肾癌组织和正常肾组织中的表达,探讨其在肾癌发生中的意义.方法 收集肾癌组织标本62例,透明细胞型50例,颗粒细胞型12例.同时取10例癌旁非癌肾组织和10例非瘤正常肾组织作对照组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,以GAPDH为内参照,检测上述组织nucleostemin基因mRNA的表达,统计学分析实验结果.结果 肾癌组织中,nucleostemin基因47例显示阳性表达,阳性率为75.81%.正常肾组织未见有nucleostemin基因阳性表达.nucleostemin基因在肾癌组织中的阳性表达显著高于正常肾组织(P<0.01).nucleostemin基因在透明细胞癌中阳性表达率为74.00%;颗粒细胞癌阳性表达率为83.33%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 nucleostemin基因在肾癌组织中呈高表达,而在正常肾组织中无表达;nucleostemin基因的表达可能与病理类型无关.提示nucleostemin基因的表达与肾癌的发生密切相关.
关键词： 肾癌 基因表达 nucleostemin -
姜黄素对胃癌SGC-7901细胞Nucleostemin基因表达的影响及意义
目的:研究姜黄素对胃癌SGC-7901细胞株NS基因表达的影响及凋亡诱导作用,探讨姜黄素抗肿瘤机制.方法:不同浓度姜黄素(0,10,20,40 μmol·L-1)和不同时间(12,24,48 h)点处理细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖抑制率.RT-PCR法检测姜黄素作用前后NS基因表达量的变化,TUNEL试剂盒法、流式细胞仪法检测细胞凋亡情况.结果:20 μmol·L-1以上浓度的姜黄素对体外培养的胃癌SGC-7901细胞株生长具有抑制作用并呈量效和时效关系;与对照组相比,姜黄素处理组Ns基因表达量明显下降,细胞凋亡明显增加(凋亡指数＞26.61%,P＜0.05).结论:姜黄素使胃癌SGC-7901细胞增殖减慢,凋亡增加,NS基因表达下降,可能是姜黄素抗肿瘤机制之一.
关键词： nucleostemin 姜黄素 胃癌 细胞凋亡
