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Transgenic, Knockin, Knockout, Knockdown
下面所列4个名词代表了遗传工程操作系统中的4种不同技术方法,在目前生物医学研究领域中出现频率很高.为了使读者不致混淆其概念,兹予以简要说明和解释.Transgeni(转基因,转基因的)是一种通过转移外源性基因或DNA片段而改变生物体内遗传物质的遗传工程技术和方法.
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实验性心衰大鼠中的心肌细胞凋亡及去甲肾上腺素含量的变化
目的 心肌在由代偿性肥厚到心衰的转变过程中，伴有明显的心肌细胞数目下降以及收缩力减低。我们假设心肌细胞数目的减少以及功能的丧失可能与心肌细胞凋亡数目增加有关，而血中去甲肾上腺素含量增高可能促进这一过程。方法 为了检验这个假说，我们在实验性高血压大鼠（EHR）模型的基础上，采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(terminal deoxynucleotiyltransferase -mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)观察了发生心衰的实验性高血压大鼠（EHR-F组）和同期未发生心衰的实验性高血压大鼠（EHR-NF组）的心肌细胞凋亡状况，同时用改良荧光法测定了EHR-F组、EHR-NF组以及对照组外周血及心腔内血中的去甲肾上腺素含量，以探讨血中儿茶酚胺含量与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用。结果 对照组心肌中未发现有心肌细胞凋亡，而EHR-F组和EHR-NF组均有心肌细胞凋亡发生，但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组。大鼠经腹主动脉结扎2周后，未发生心衰的EHR-NF组大鼠外周及心内血的去甲肾上腺素水平均显著性高于对照组（P＜0.05），其外周和心内去甲肾上腺素含量之间无显著性差异；而出现心衰的大鼠其外周和心内去甲肾上腺素水平明显高于EHR-NF组，差异有极显著性意义（P＜0.01），并且EHR-F组心内血的去甲肾上腺素水平均明显高于其外周血的去甲肾上腺素水平（P＜0.05）。结论 心肌细胞出现凋亡可能是心脏由代偿性心肌肥厚向心衰转变过程中的重要机制，去甲肾上腺素水平特别是心腔内去甲肾上腺素水平的升高可能与这一改变有关，并可能是其促进因素。
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用AFLP结合免疫纳米磁珠技术富集分离BPDE-DNA片段
目的 应用AFLP结合免疫纳米磁珠分离技术富集、分离与BPDE相互作用的DNA片段,从而为筛选BPDE致癌相关基因提供条件.方法 应用AFLP技术和免疫纳米磁珠分离相结合技术获得差异片段,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色观察.结果 不同的选择性扩增引物组合均可得到清晰的多态性电泳图谱,以P1T2、P1T4、P1T3、T2T1、P3T4、P4T1、P5T2等组合扩增出的条带多,均在60条左右,多态性丰富.对差异片段进行回收和PCR再扩增,再经琼脂糖凝胶电泳证实有回收产物出现,回收PCR再扩增片段与回收前的片段大小一致,成功富集、回收了差异片段.结论 AFLP结合免疫磁珠分离技术可以分离富集BPDE-DNA片段,可作为筛选BPDE致癌相关的特异或易感基因的一种方法.
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牛磺酸对幼鼠脑神经保护作用和机制研究
目的观察牛磺酸(Tau)对幼鼠脑神经的保护作用,并对其可能机制进行探讨.方法用0.1 μmol/L亚硒酸钠与不同浓度的Tau共同加入到原代培养2 d的新生小鼠大脑皮质神经元中,用MTT检测和DNA片段琼脂糖凝胶电泳法分析其保护性作用;并选用健康清洁级、断乳SD雌鼠32只,按体重随机分为4组,分别饲予补充不同水平Tau的实验饲料,观察对照组及补充Tau组幼鼠脑发育及代谢的影响.结果 1.Tau可明显提高神经元的存活率;2.一定浓度的Tau可阻断或部分阻断由亚硒酸钠诱导的典型DNA梯型;3.Tau可促进脑细胞的增殖活性,增加脑重;4.补充Tau能明显提高脑Tau积累、蛋白质和AChE水平,且有一定的剂量反应关系.结论补充Tau具有较强的神经保护作用,可能是通过改变某些蛋白质即某些基因的表达而实现的.
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胰岛素样生长因子Ⅰ的抗心肌细胞凋亡作用
研究了缺氧条件下引起培养的乳鼠心肌细胞凋亡及IG F－Ⅰ的抗凋亡作用。将原代培养的心肌细胞置于95% N2－5%CO2缺氧环境下，DNA凝胶 电泳及流式细胞计数检测显示细胞凋亡与缺氧呈时间依赖性。在缺氧前加入10-9～10 -7mol/L IGF－Ⅰ能有效地抵抗缺氧引起的心肌细胞凋亡。
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原发干燥综合征患者唾液腺上皮细胞Fas及CD40诱导凋亡的作用
目的:探讨Fas、CD40及凋亡相关分子在干燥综合征(Sjogren's syndrome,SS)唾液腺上皮细胞死亡分子机制中的作用.方法:Fas及CD40的表达应用反转录PCR及流式细胞术;唾液腺上皮细胞凋亡的评估应用形态学检测及DNA片段实验;XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)、FADD(Fas-associated death domain protein)、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和Bcl-xS的表达应用Western blot.结果:与对照组相比,IFN-γ可显著增强SS唾液腺上皮细胞Fas及CD40表达;Fas及CD40共司刺激呈现显著唾液腺上皮细胞凋亡;唾液腺上皮细胞高水平表达XIAP,CD40的促凋亡作用是通过下调XIAP而起作用,CD40对其它凋亡相关分子无影响.结论:唾液腺上皮细胞凋亡需要Fas及CD40共同活化,CD40促进Fas依赖的凋亡是通过下调XIAP.
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高效毛细管电泳DNA片段多态性分析
高效毛细管电泳(hig performance capillary electropyhoresis, HPCE)技术于80年代中未期兴起,兼有普通电沪和色谱的双重优点,是90年代重要的分析测试手段>.
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新疆中麻黄DNA片段的克隆与序列分析
对新疆3种中药麻黄(Ephedra)进行了RAPD分析,回收随机引物s13的PCR产物(750 bp左右),克隆到pMD18-T载体中,经电泳鉴定后进行序列分析.结果表明,已成功克隆并获得了新疆中麻黄771 bp的DNA片段,对中药材的鉴定和标准化提供依据.
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新疆甘草DNA片段的克隆、序列分析及其基因组DNA文库的构建
目的克隆新疆甘草DNA片段,构建新疆甘草基因组DNA文库.方法对新疆产4种甘草进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,回收甘草随机引物s121的PCR产物中500bp左右的带,克隆到pMD18-T载体中,经电泳鉴定后测定序列,进行序列分析.用Sau3AI对所提新疆甘草基因组DNA进行酶切,回收15～23kb之间的酶切产物片段,然后与Lambda vector BamH I Arms进行连接、包装形成文库,计算文库重组噬菌体滴度、包装效率.结果获得了甘草490bp的DNA片段,所建文库的重组噬菌体滴度为3×106pfu/ml、包装效率为6×106重组子/μg载体DNA.结论成功克隆了新疆甘草DNA片段,并构建了基因组DNA文库,为进一步研究奠定了基础.
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基因芯片技术在放射生物学领域的应用进展
基因芯片( gene chip)又称DNA芯片或DNA微阵列,是通过微电子技术和微加工技术将大量特定序列的DNA片段或寡核苷酸片段按矩阵高密度固定于玻璃、硅片等载体上制作而成.1994年,用于检测地中海贫血症病人血样基因突变的第一个基因芯片诞生[1].基因芯片技术是在基因芯片基础上发展起来的一门新技术,早是由俄罗斯科学院恩格尔哈得分子生物学研究所和美国阿贡国家实验室的科学家提出的,以20世纪70年代的Southern印迹法杂交技术为基础.其原理是利用杂交法测定核酸序列.
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磷酸盐/柠檬酸缓冲液提取凋亡细胞小片段DNA方法的应用和改良
凋亡或程序化细胞死亡是一种不同于坏死的细胞死亡方式,是细胞的主动性自杀过程[1].随着近年来人们认识的深入及检测方法的不断进步,越来越多的证据表明免疫细胞及其组织细胞发生的凋亡与许多临床疾病的发生发展密切相关.
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临床肝癌患者血清凋亡细胞核DNA片段化检测
目的:探讨血清凋亡细胞核DNA片段化在临床肝癌放疗化疗期间检测的可行性和应用价值.方法:应用酶联免疫吸附分析法测定中晚期肝癌住院患者血清凋亡的细胞核DNA片段化.共测定35例健康成人及163例肝癌患者,并对其中26例患者临床放化疗前后进行了动态检测.结果:健康成人组血清中凋亡细胞核DNA片段指数为(0.60±0.29);肝癌患者血清中凋亡细胞核DNA片段化指数为(0.96±0.70),阳性率33.12%.肝癌组较健康成人组有明显增高,差异有显著意义(t=3.001,P＜0.005).放化疗后凋亡细胞核DNA片段化指数较放化疗前增高(t=3.258,0.002＜P＜0.005).结论:血清凋亡细胞核DNA片段化检测可用于肝癌临床放化疗疗效监测.
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卵巢癌患者血清凋亡细胞核DNA片段化检测分析
目的探讨血清细胞核DNA片段化指标在临床卵巢癌患者以化疗为主的综合治疗期间检测的可能性和应用价值.方法应用酶联免疫吸附分析法测定卵巢癌患者血清凋亡细胞核DNA片段化指数.共测定35例健康成年妇女及1 63例卵巢癌患者,并对其中26例综合治疗前后进行了动态检测.结果健康对照组血清凋亡细胞核DNA片段化指数为0.60±0.29,卵巢癌组血清凋亡细胞核DNA片段化指数为0.96±0.70,阳性率为33.12%.卵巢癌组较健康组有明显增高,有显著性差异(t=3.001,P＜0.005).综合治疗后凋亡细胞核DNA片段化.指数较治疗前增高(t=3.258,0.002＜P＜0.005).结论血清凋亡细胞核DNA片段化检测可用于卵巢癌临床综合治疗效果监测.
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染色质免疫沉淀技术及其在结直肠癌研究中的应用
基因表达调控是当前功能基因组学的一个重要领域,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核基因表达机制的基本途径.染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)技术近年被广泛用于研究体内染色质结构、组蛋白修饰在基因表达中的作用、灵敏地检测目标蛋白与特异DNA片段的结合情况,并已成为研究染色质水平基因表达调控的有效的方法[1],活跃表达基因的启动子和增强子等调节区域呈现组蛋白的高乙酰化,而沉默基因的相应区域则呈现组蛋白的低乙酰化[2,3].
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肝素钠粗品及原料药中猪源性成分的聚合酶链式反应检测
目的：建立肝素钠粗品及原料药的聚合酶链式反应（PCR）检测方法，用于检测生产原料的动物来源是否为猪源性。方法分别对肝素钠粗品及原料药进行了DNA提取，并加入猪特异性引物进行扩增，对扩增产物进行酶切及测序验证。结果7批粗品及原料药中，只有粗品检测出猪源性成分，其DNA 50倍稀释液中均检测出猪源性成分，肝素钠PCR产物与Genbank中猪序列的同源性为99.2%。结论用常规PCR方法检测肝素钠粗品及样品中猪源性成分是可行的。
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细胞凋亡的研究进展
细胞凋亡是近年来生物学及医学研究的一个热点.凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,它还具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制.
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p300/CBP与肺癌
细胞核内DNA绝大多数时间缠绕并结合在组蛋白上,储藏在高度压缩的染色质中,处于非激活状态.细胞如需要激活一些基因,转录因子则协同将相关基因(DNA片段)从组蛋白上解离下来.
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肝水解肽样品中牛源及猪源性成分的PCR检测
目的:建立肝水解肽各工艺步骤段中样品的PCR检测方法,用于检测生产原料的动物来源是牛源性或猪源性.方法:分别对猪源性及牛源性肝水解肽各工艺步骤段中样品进行了DNA提取,并加入猪、牛特异性引物进行扩增.对扩增产物进行酶切及测序验证.结果:工艺段为超滤液四之前的样品均可提取并扩增出相应的DNA片段,牛源性PCR产物与Genbank中牛序列的同源性为100％,猪源性PCR产物与猪序列的同源性为99.4％,PCR扩增的检测限为0.5mg·mL-1的肝细胞酶解液.结论:可用本方法检测肝水解肽各工艺步骤段中超滤液四之前的样品.
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非变性PAGE银染后DNA片段的回收及再扩增条件探讨
DNA测序从电泳聚丙烯酰胺凝胶(Polyacrylamide Gel Electrophoresis,PAGE)中回收DNA是获得高纯度DNA模板的重要步骤.当前有关从银染凝胶中回收DNA的研究报道甚少,本文在对一种较简便的回收方法[1]加以改进的基础上,对所回收DNA的再扩增条件进一步研究,现报道如下.
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新疆管花肉苁蓉DNA片段的克隆、序列分析及其基因组DNA文库的构建
根据新疆肉苁蓉的RAPD分析结果,结合新疆肉苁蓉的有效成份及药用价值,筛选出新疆肉苁蓉的优良种质--管花肉苁蓉,对新疆管花肉苁蓉517bp的DNA片段进行了克隆、序列测定与分析,构建了新疆管花肉苁蓉的基因组DNA文库.
