首页 > 文献资料
-
高通量荧光PCR组合方法鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素的方法建立及评估
目的 建立一种高效、特异的荧光探针熔解曲线方法,用于鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素.方法 根据金黄色葡萄球菌肠毒素SEA ～ SEQ特异基因序列设计不同杂交连接探针,建立金黄色葡萄球菌肠毒素检测体系,评估其低检出限、特异度、可重复性等指标.与普通PCR方法比较,采用荧光探针熔解曲线方法对本实验室的158株食物中毒金黄色葡萄球菌进行检测,评估新方法的灵敏度和特异度.结果 荧光探针熔解曲线方法低检出限为0.80 ～ 2.15 ng/μl,特异度为100.0％,无交叉荧光信号产生,变异系数＜1％.与普通PCR方法比较,新方法的灵敏度为95.4％,特异度为100.0％,Kappa值为0.88.结论 荧光探针熔解曲线技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法可覆盖金黄色葡萄球菌16种肠毒素,具有快速、准确、特异性高的特点.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 荧光PCR 荧光探针熔解曲线方法 -
用测试片法快速检测金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,由于其形状为球型,在显微镜下排列成葡萄串状而得名,该菌广泛存在于空气、水、尘埃及人和动物的排泄物中.因而,食品及食品原料受其污染的机会很多.金黄色葡萄球菌能产生多种致病性物质,如肠毒素及凝固酶等.金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒是一个全球性公共卫生问题,据美国疾病预防控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌,居第2位,占细菌性食物中毒的33％,加拿大的发生率更高,占细菌性食物中毒的45％.我国每年发生的此类中毒事件也非常多,容易感染金黄色葡萄球菌的食物包括肉类、禽类、蛋类、水产类、奶及其制品等,因此大多数食品及食品原料,均须按国家规定要求进行金黄色葡萄球菌的检测.
-
PCR检测技术在金黄色葡萄球菌肠毒素检测中的应用分析
目的：分析金黄色葡萄球菌肠毒素特点，探讨PCR技术在金黄色葡萄球菌肠毒素检测中的应用。方法：根据gene-bank报道金黄色葡萄球菌肠毒素基因序列表，设计特异性引物来扩增靶基因片段，通过金黄色葡萄球菌肠毒素菌株来对非金黄色葡萄球菌产肠毒素进行检测，对其特异性进行分析。结果：SEAE引物扩增金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEE片段均为327bp，其结果与相关文献报道相符，SEA、SEE基因PCR产物与基因序列同源性达为100％，具有一定的特异性。结论：PCR检测方法，在检测金黄色葡萄球菌肠毒素上具有良好的临床诊断价值，对食品安全监测有着积极作用。
关键词： PCR检测技术 金黄色葡萄球菌肠毒素 检测 -
携带杀白细胞素基因金黄色葡萄球菌5种超抗原肠毒素基因型的相关性研究
目的 研究金黄色葡萄球菌中杀白细胞素(PVL)、MecA和五种超抗原肠毒素基因型(SEs)及其相关性.方法 收集2012年1月-2017年2月间医院临床分离的206株非重复金黄色葡萄球菌,共检测出17株PVL阳性的金黄色葡萄球菌.用PCR法检测17株PVL阳性的金葡菌与随机抽取的32株PVL阴性金葡菌中的五种超抗原肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE).结果 17株PVL阳性的金黄色葡萄球菌中共检出SEA、SEB、SEC、SED、SEE的阳性菌株分别为10、7、7、0、10.32株PVL阴性的金黄色葡萄球菌中共检出SEA、SEB、SEC、SED、SEE的阳性菌株分别为17、2、5、1、11.两组比较,SEB和SEC基因检出率差异有统计学意义(P<0.05);SEA、SED和SEE基因检出率无统计学差异.PVL(+)耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和PVL(+)甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)的超抗原肠毒素基因检出率差别无统计学意义.结论 PVL阳性的金葡菌其携带超抗原肠毒素基因的概率高于PVL阴性的金葡菌,尤其是SEB和SEC基因在PVL+的金黄色葡萄球菌中更多见.
-
金黄色葡萄球菌肠毒素E的克隆表达及其生物活性研究
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素E(SEE)基因,获得重组SEE蛋白(rSEE),并对rSEE进行生物活性分析.方法 通过PCR从金黄色葡萄球菌FRI326菌株基因中得到肠毒素SEE的成熟肽基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化,通过MTT法研究其生物活性.结果 成功构建了SEE的表达载体,并得到高纯度的重组蛋白.MTT法结果表明,rSEE具有良好的促淋巴细胞增殖的能力以及肿瘤细胞的杀伤活性.结论 具超抗原活性和高纯度的rSEE,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤机制,构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 超抗原 融合表达 生物活性 -
食盐热敷法预防静脉输注高聚金葡素所致静脉炎的疗效观察
高聚生又名高聚金葡素,是中国沈阳协合集团在1990年采用金黄色葡萄球菌肠毒素培养物新研制出来的一种抗癌、抗肿瘤免疫生物制剂,由于它对化疗造成的白细胞减少有明显升高作用,能保护、增强病人的免疫功能,因此临床上常被用于辅助化疗药物进行长期治疗[1].
-
金黄色葡萄球菌新型肠毒素基因构建与表达
目的 从金黄色葡萄球菌SD和104菌株中克隆肠毒素基因,以期获得新型肠毒素.方法 采用已知的金葡菌肠毒素基因保守序列设计引物,以SD和104菌株基因组为模板,PCR扩增产物插入表达载体pET28a并转化大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子金属螯合(Ni+ -NTA)亲和层析纯化重组蛋白,测定重组蛋白超抗原活性及体外抑瘤效果.结果 成功扩增到2个新型肠毒素P基因；带有质粒pET28 a-SEPSD和pET28a-SEP104的重组大肠埃希菌,在1 mmol/L IPTG诱导下高效表达,重组蛋白纯度＞95％；纯化蛋白刺激人淋巴细胞增殖率分别＞30％；抑瘤率明显高于金黄色葡萄球菌肠毒素C2 (SEC2),200 ng/mL时抑瘤效果佳,分别达到82％和86％.结论 成功克隆到金葡菌新型肠毒素P基因,SEPSD和SEP104重组蛋白具有与SEC2相近的活性并有较高的抑瘤效果.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 超抗原 PBMC增殖 体外抑瘤 -
一起金黄色葡萄球菌食物中毒调查
2004年9月1日8时,桐庐县富春江职工医院报告某某家6人在家中进食购买的卤味后,3人出现恶心、呕吐、腹泻,其中2人头晕、1人发热,全身无力和出汗.根据流行病学调查、临床表现及实验室检验,确定为一起由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,现报告如下.
-
荧光PCR技术在金黄色葡萄球菌肠毒素分型筛查中的应用
目的:建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的快速筛查检测.方法:按金黄色葡萄球菌肠毒素SEA～SEQ基因序列设计不同引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系.对本课题组2006年-2009年分离的191株金葡菌进行SEA～SEQ基因检测.结果:荧光PCR法检测出金黄色葡萄球菌肠毒素阳性97株,阳性率为50.8%.肠毒素类型分布由高到低依次为A、C、B、D、E和G型.以ELISA方法作对照,荧光PCR检测法的灵敏度为100%,特异度为97.9%.结论:建立的荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型,具有快速、敏感、特异性高的特点.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 荧光PCR -
一起食源性疾病的病原学分析
目的 对一起食源性疾病的样本进行相关微生物学检验,确定该起疾病的致病菌.方法 采集患者的呕吐物、粪便和剩余食物样本,依据GB 4789和WS/T 9-1996方法进行病原菌分离、鉴定后,应用酶联免疫吸附法(ELISA)对金黄色葡萄球菌分离株进行肠毒素检测,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对奇异变形杆菌分离株进行检测分析,确定是否为同源菌株.结果 在剩余食物和3位患者的粪便中检出金黄色葡萄球菌和奇异变形杆菌.ELlSA结果表明剩余食物与所有患者的粪便样本检出的金黄色葡萄球菌肠毒素类型相同,为A型、D型、E型肠毒素.剩余食物与3号患者的粪便样本检出的奇异变形杆菌PFGE图谱相似,具有同源性,与另两位患者有差异.结论 该起食源性疾病由金黄色葡球菌和奇异变形杆菌共同引起.PFGE方法可有效应用于食源性疾病的溯源分析及分子流行病学调查.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 脉冲场凝胶电泳 奇异变形杆菌 食源性疾病 -
超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素对荷瘤大鼠胃癌模型炎性介质影响的研究
目的研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA)对荷瘤大鼠胃癌模型炎性介质影响.方法采用人胃癌细胞(MGC80-3)皮下接种建立大鼠胃癌模型40只,实验组注射SEA,对照组注射生理盐水,检测大鼠体内炎性介质水平.结果荷瘤大鼠模型SEA处理以后,血清IL-1β,IL-6,IL-12,TNF-α和内毒素水平均明显上升,与对照组相比差异有显著性,尤其以血清IL-1β内毒素水平上升明显(P＜0.01).结论超抗原SEA可激活大量的T细胞,分泌多种细胞因子,直接或间接地杀伤肿瘤细胞.
关键词： 超抗原 金黄色葡萄球菌肠毒素 胃癌 炎性介质 -
超抗原SEA对人胃癌细胞株小鼠荷瘤模型作用及其机制的研究
目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA)对体内肿瘤的抑瘤效果及作用机制.方法采用人胃癌细胞(MGC80-3)皮下接种建立小鼠胃癌模型(n=40),实验组(n=20)注射SEA,对照组(n=20)注射生理盐水,观察肿瘤的发生率及肿瘤的重量.并对瘤体组织应用免疫组织化学方法初步探讨其发生机制.结果超抗原SEA处理的小鼠肿瘤的发生率低于对照组,两者差异无显著性;超抗原SEA处理的小鼠肿瘤的重量明显低于对照组,两者差异有显著性(P＜0.01);SEA处理的小鼠肿瘤组织有CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润,而对照组很少或没有T细胞浸润.结论超抗原SEA对小鼠胃癌细胞有明显抑瘤效果,其作用机制可能为SEA诱导了超抗原依赖细胞介导的细胞毒效应所致.
关键词： 超抗原 金黄色葡萄球菌肠毒素 胃癌 -
重组超抗原SEB-scFv融合蛋白的体内抑瘤作用
以单克隆抗体(mAb)作为载体的宫颈癌靶向治疗目前取得了一定的进展,但是多次使用会产生人抗鼠抗体反应(HAMA),限制其临床应用,同时完整抗体分子量大、穿透能力差、血液清除率慢致使肿瘤/血比值低,为克服mAb的上述缺点,我们在克隆出抗宫颈癌单克隆抗体轻、重链可变区基因的基础上,利用重组聚合酶链反应反应(PCR)方法制备抗宫颈癌单链抗体(ScFv),并将其与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因融合,构建表达出融合蛋白SEB-scFv,注射到宫颈癌动物模型体内,进行抑瘤作用的初步研究.
-
超抗原与鼻息肉
鼻息肉是一种累及鼻和鼻窦的、严重的慢性呼吸道嗜酸粒细胞性炎症,经常并发哮喘和对阿司匹林敏感.近,通过对多种嗜酸粒细胞性气道炎症的动物模型进行研究,人们逐渐了解细胞因子、趋化因子和黏附受体的作用.尽管人们对嗜酸粒细胞性炎症的调节机制的了解有了很大进步,但目前鼻息肉病的病因仍不十分清楚.近来有研究发现,细菌及其产物与本病的发病或演变有关[1,2],更确切地说,来源于细菌(如金黄色葡萄球菌)的超抗原可能会增加炎症的严重程度和长期性.
关键词： 超抗原 金黄色葡萄球菌肠毒素 鼻息肉 -
不同浓度SEB对兔上颌窦GATA-3及Th1/Th2细胞因子表达的影响
目的:探讨向兔上颌窦腔注入不同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对上颌窦黏膜组织中Th2特异性转录因子GATA-3及Th1与Th2细胞因子表达的影响.方法:48只兔随机分成low-dose SEB组和highdose SEB组,每组24只.造模后每天向low-dose SEB组和high-dose SEB组兔左上颌窦腔分别注入0.3 μg/LSEB(0.6 ng)及30μg/L SEB(60 ng)各2 ml.2组兔右上颌窦腔每天注入2 ml生理盐水作为对照组.造模后3、7、14及28 d每组随机选6只兔处死并获取双侧上颌窦黏膜标本进行检测.用ABC-ELISA法检测IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的含量;采用Real-time PCR和免疫组织化学法检测GATA-3的表达.结果:在造模后7、14及28 d,high-dose SEB组左上颌窦黏膜组织中IFN-γ和IL-2的水平均高于low-dose SEB组及对照组(均P＜0.05).造模后14、28 d low-dose SEB组左上颌窦黏膜组织中IL-4和IL-5的水平均高于high-dose SEB组和对照组(均P＜0.05).Real-time PCR结果显示,low-dose SEB组转录因子GATA-3 mRNA的相对表达水平较high-dose SEB组和对照组均明显升高(均P＜0.05).免疫组织化学结果显示,low-dose SEB组GATA-3表达的阳性细胞数高于high-dose SEB组和对照组(均P＜0.05).结论:高浓度SEB促进Th1细胞因子分泌,而低浓度SEB增强Th2细胞因子表达及Th2型免疫反应.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 上颌窦 GATA结合蛋白3 -
金黄色葡萄球菌耐药性调查分析
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染,是医院感染的重要病原菌之一.近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌.金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多.尤其是自20世纪耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)出现以来,由于其多重耐药性和易造成医院内感染的暴发流行,已成为临床抗感染治疗的难点.为了解我院MRSA的耐药特点,为临床医师提供可靠的治疗依据非常必要,我们对临床标本中分离的金黄色葡萄球菌进行了耐药性分析,报道如下.
-
超抗原SEB或SEC对T细胞分泌IL-2和杀伤 HcaF 细胞的影响
目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)在体外刺激T细胞分泌IL-2和杀伤肿瘤细胞的作用.方法不同浓度SEB或SEC在体外刺激T细胞,采用流式细胞术检测T细胞受刺激后不同时间分泌IL-2的水平,用MTT法检测活化的T细胞及其上清对肝细胞癌HcaF细胞的杀伤效应.结果 SEB或SEC能刺激T细胞大量分泌IL-2,刺激剂量以100μg/L时活化T细胞的能力强,佳刺激时间为3～4 d.SEB或SEC活化的T细胞对肝细胞癌HcaF细胞具有很强的杀伤效应,两者对T细胞分泌IL-2和杀伤HcaF细胞的作用无明显差异.结论 SEB或SEC具有很强的刺激T细胞分泌和增强T细胞杀伤肿瘤细胞的能力,为其应用于肿瘤免疫治疗奠定了一定基础.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 白介素-2 T细胞 细胞毒活性 HcaF -
一起乳制品污染引起幼儿食物中毒的调查
[目的]查明该起食物中毒的病因和来源,预防此类事件的再次发生. [方法]按照食物中毒调查规范进行现场流行病学调查分析及实验室相关检测. [结果]该起食物中毒集中发病在3月26日,涉及本市3所幼儿园,共119名儿童发病,罹患率为19.6%(119/608);症状以呕吐为主,病情轻;患儿均暴露于某品牌同批次杯装高钙牛奶饮品;检测剩余乳制品中金黄色葡萄球菌肠毒素鉴定阳性,型别为SEA;患儿呕吐物、车间员工手部皮肤破损涂抹样和生鲜乳分离出血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌,其中菌株检出金黄色葡萄球菌肠毒索. [结论]本次事件是一起细菌性食物中毒.原因是饮用受金黄色葡萄球菌肠毒素污染的乳制品,来源是生鲜乳受污染.建议企业加强原料管理,尤其是奶牛场及生鲜乳的消毒、冷藏和使用环节的监管,及员工健康监护.
关键词： 乳制品 金黄色葡萄球菌肠毒素 食物中毒 -
2005-2006南京市食品致病菌污染分析
目的 了解南京市食源性致病菌在生熟食品中污染状况,提高对食源性疾病预警和控制能力.方法 2005、2006年采集6大类食品,共计290份样品,按照GB/T4789-2003食品微生物检验标准[1]进行沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希菌O157∶ H7和空肠弯曲菌6种致病菌检测.菌株鉴定应用ATB细菌鉴定仪,肠毒素检测采用mini VIDAS测试系统.结果 2005年150份食品中沙门菌检出率为31%,单核细胞增生性李斯特菌检出率0.7%,O157∶ H7大肠埃希菌检出率0.7%;2006年140份食品中沙门菌检出率为4.3%,单核细胞增生性李斯特菌检出率为18%,副溶血性弧菌检出率为25%,金黄色葡萄球菌检出率为20%,O157∶ H7大肠埃希菌和空肠弯曲菌未检出.结论 2005年食品中沙门菌污染较为严重,2006年单核细胞增生性李斯特菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌污染较为严重,这4种致病菌可能是近年食物中毒发生的潜在危险因素,须引起足够重视.
关键词： 食品污染 食源性致病菌 金黄色葡萄球菌肠毒素 -
一起金黄色葡萄球菌食物中毒调查
目的 探讨金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒的诊断、防控手段.方法针对德阳市发生的1起群体性食物中毒事件,通过流行病学调查、实验室诊断等手段,叙述整个事件的调查处置过程,探讨该类食物中毒的诊断和和相关防控工作.结果该起事件为金黄色葡萄球菌肠毒素A引起的群体食物中毒事件,中毒人数70人,涉及德阳市8所中小学及幼儿园.结论金黄色葡萄球菌肠毒素在一般情况下不易被破坏,且其相关检验手段受一些因素影响,因此加强食品卫生监管,避免金黄色葡萄球菌污染,是预防金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒有效的方法.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素 学校 食物中毒
