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弗氏枸橼酸杆菌TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法的建立
目的 建立针对弗氏枸橼酸杆菌的TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应(real time-PCR)检测方法.方法 针对弗氏枸橼酸杆菌的特有序列设计引物和TaqMan探针,扩增目的基因建立标准曲线,确定检测方法的灵敏度；对20种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌进行检测,评价该检测方法的特异性；使用牛奶模拟标本评价方法在实际检测工作中应用性.结果 TaqMan real time-PCR检测方法对弗氏枸橼酸杆菌重组质粒的检测灵敏度为1.0×101拷贝/反应体系；该检测方法在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增.该检测方法对牛奶模拟样本中弗氏枸橼酸杆菌检测下限为1.0×102cfu/ml的菌量；通过对1.0×107、1.0×105和1.0×103三个浓度质粒标准品的重复检测,确定本方法的组内变异系数为1.90％～3.91％；组间变异系数为1.52％ ～ 1.69％.结论 本研究建立的TaqMan real time-PCR检测方法可作为检测弗氏枸橼酸杆菌灵敏、特异、快速的方法.
