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中西医结合治疗乙型慢性重型肝炎1例
病例介绍患者,女,36岁,因乏力、纳差,黄疸进行性加深70余天,伴腹水30天,尿少20天,于2001年1月31日就诊.既往无肝炎病史,无血吸虫病、嗜酒史.2000年n月15日因乏力、尿黄,查总胆红素(TBIL)173μmol/L,直接胆红素(DBIL)60μmol/L,丙氨酸转氨酸(ALT)466U/L,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、抗HBc均阳性.
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荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性T淋巴细胞方法的探讨
用绿色荧光前体化合物Calcein AM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应.通过对一系列标记条件的研究:不同浓度Calcein AM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定CalceinAM荧光素标记法的佳条件.用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb/c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E/T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65%.通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性.
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简要分析标本溶血对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测是诊断乙型肝炎的主要指标.ELISA一步法检测HBsAg,因其操作简便、灵敏度高、特异性强、实验条件要求不高,各级医院检验科普遍采用.在临床检测中,常常遇到溶血的标本.溶血对ELISA检测HBsAg的影响,各文献报道很不一致,本文就溶血标本对HBsAg结果的影响进行简要的分析.
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河北清苑地区12665名高考学生乙型肝炎表面抗原阳性率调查
在病毒性肝炎中,乙型肝炎对人类健康的危害为严重,我国属HBV感染高流行区,一般人群的HBsAg阳性率为9.09%,接种与未接种乙型肝炎疫苗人群的HBsAg阳性率分别为4.51%和9.51%,在青少年和成人期感染HBV者中,仅5%～10%发展成慢性乙型肝炎[1],一般无免疫耐受期.大多数慢性无症状HBV感染存在不同程度的肝脏病理改变,其中一部分在成年人的某个时期可发生亚临床肝炎或临床显性肝炎,而且与肝硬化、肝癌有关[2].
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影响乙肝表面抗原检测结果的因素及对策
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是由乙肝病毒(HBV)S区S基因编码的包膜蛋白中的小分子蛋白,含226个氨基酸.HBsAg的检测是临床诊断乙肝病毒感染的重要手段,也是献血员筛选的项目之一,结果的准确性对于临床诊断及输血安全有举足轻重的影响.近年来随着HBsAg各种检测方法的使用,同一份标本在不同实验室或采用不同的试剂盒有时会得出不一致的结果,出现假阴性或假阳性.导致同一患者检查结果的混乱,给临床带来困扰,也给医患纠纷和输血安全带来一定的隐患.因此,有必要深入分析影响HBsAg检测准确性的原因.本文从主、客观方面探讨影响HBsAg检测结果假阴性或假阳性的因素,尤其是假阴性结果.
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学前教育与乙型肝炎表面抗原阳性儿童心理行为关系的研究
目的 探讨学前教育与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性儿童心理行为的关系,为制定干预措施提供依据.方法 采用中国8～12岁儿童气质量表(Chinese school children temperament scale,CSTS)和Achenbach儿童行为量表(Child BehaviorChecklist,CBCL)以及自制的儿童基本情况调查表,对57例未接受过学前教育和45例接受过学前教育的HBsAg阳性儿童进行测试和比较,并收集患儿的健康状况等信息.结果 ①未接受过学前教育的HBsAg阳性儿童在节律性、趋避性、心境和持久性等4个气质维度得分明显高于接受过学前教育的HBsAg阳性儿童,差异存在非常显著性或显著性(P＜0.01或P＜0.05);②在退缩、焦虑/抑郁、注意问题、攻击性行为、内向性行为和行为问题总分等行为因子得分明显高于接受过学前教育的HBsAg阳性儿童,差异存在非常显著性(P＜0.01).结论 未接受过学前教育的HBsAg阳性儿童存在更多的心理行为问题.建议开设幼儿园,专门接受这些HBsAg阳性儿童,促进其身心健康成长.
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父母HBsAg携带状态对HBsAg阳性儿童心理行为的影响
目的 探讨父母乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带状态对HBsAg阳性儿童心理行为的影响,为制定干预措施提供依据.方法 采用中国3～7岁儿童气质量表(Chinese preschool children temperament scale,CPTS)、中国8～12岁儿童气质量表(Chinese school children temperament scale,CSTS)和Achenhach儿童行为量表(Child Behavior Checklist,CBCL)以及自制的儿童基本情况调查表,对123例父母一方或双方为HBsAg阳性,75例父母HBsAg均为阴性的HBsAg阳性儿童进行测试和比较,并收集患儿个人及父母的健康状况等信息.结果 ①在低年龄组中实验蛆与对照组儿童在趣避性和心境2个气质维度上得分差异存在显著性(P<0.01),高年龄组两组儿童在节律性、趋避性和心境3个气质维度上得分差异存在显著性(P<0.05或P<0.01),②实验组儿童在退缩、焦虑/抑郁、社交同题以及行为问题总分等因子上得分明显高于对照组,差异具显著性(P<0.01或P<0.05).结论 父母为HBsAg携带者对HBsAg阳性儿童的心理行为产生不良影响,在治疗躯体疾病的同时,对HBsAg阳性儿童及家庭进行社会心理干预非常必要.
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不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达
目的探讨3种不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达. 方法用3种不同类型的质粒载体分别构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)真核表达质粒(pCI-S、pMEP4-S、 pLXSN-S);然后用阳离子脂质体介导的转染法分别转染正常人EBV永生化的B淋巴母细胞,经G418或Hygromycin B筛选出抗性细胞克隆,用RT-PCR检测抗性细胞总RNA中目的基因在转录水平的表达;用ELISA检测抗性细胞培养上清和细胞裂解液中HBsAg的含量. 结果 3种不同类型HBsAg重组表达质粒转染的EBV永生化B淋巴母细胞,在转录水平上,可检出HBsAg mRNA的表达;在蛋白水平上,细胞培养上清和细胞裂解液均可检出HBsAg;而以EB病毒表达质粒pMEP4-S表达高,真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S表达HBsAg的量无明显差异. 结论 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒均可在EBV永生化B淋巴母细胞中稳定表达,EB病毒表达质粒pMEP4-S表达的HBsAg明显高于真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S.
关键词： EB病毒永生化B淋巴母细胞 乙型肝炎表面抗原 真核表达 质粒 -
三种免疫组化方法标记肝组织HBsAg、HBcAg效果的比较
为了探讨更适合肝组织HBsAg、HBcAg免疫组化标记方法,我们分别用SP、ABC、EliVision二步法对肝穿组织进行HBsAg、HBcAg标记,以进一步提高肝细胞内HBsAg、HBcAg表达的阳性率及准确率.
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江苏省丹阳市乙型肝炎表面抗原阳性人群就诊行为及其影响因素
目的 了解江苏省丹阳市乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)阳性人群的就诊行为及其影响因素.方法 选择丹阳市2009年调查发现并参加随访的HBsAg阳性人群开展问卷调查、临床检查和实验室检测,对数据进行描述性分析,采用Logistic回归分析就诊行为的影响因素.结果 在1 677例HBsAg阳性随访人群中,曾去医院进行疾病诊断和治疗256例(15.27％);每年至少参加1次体检215例(87.04％);采取治疗措施173例(67.58％),其中慢性乙肝、肝硬化/疑似肝癌采取抗病毒治疗分别占77.08％ (111/144)、62.50％ (5/8);在未就诊的1 421例HBsAg阳性人群中,78.82％认为不必去医院,24.00％因为医生未建议,5.98％因为经济负担重,0.28％担心无治疗效果.Logistic回归分析显示,家庭年收入、临床分型是影响HBsAg阳性人群就诊行为的因素.结论 丹阳市HBsAg阳性人群就诊率偏低,应加强健康教育以提高其乙肝防治意识和就诊积极性.
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甘肃省兰州市城区孕妇乙型肝炎表面抗原筛查和新生儿乙型肝炎疫苗及时接种现状分析
目的 分析兰州市城区孕妇乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)筛查和新生儿乙肝疫苗(HepB)及时接种现状,提出改进预防保健服务的建议.方法 对2010 ～ 2014年在医院分娩的孕妇进行HBsAg筛查,对HBsAg阳性母亲的新生儿及时实施HepB和/或乙肝免疫球蛋白(HBIG)接种,对结果进行描述性分析.结果 在2010～2014年10 225名母亲生产的10 633名活产新生儿中,359名HBsAg阳性孕妇的371名(100％)新生儿均在出生后24h内接种了HepB和HBIG;9 866名HBsAg阴性母亲的10262名新生儿中,9 560名(93.16％)新生儿在出生24h内接种了HepB.2010～2014年5年间仅有346例新生儿未能及时接种HepB,未及时接种的主要原因为新生儿出生时低体重或早产.结论 兰州市城区常规孕妇HBsAg筛查和有效的新生儿HepB及时接种工作已形成了系统、完善的管理机制和操作流程.
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胶体金免疫层析法复检HBsAg阳性标本的可行性分析
目的 评价利用胶体金免疫层析法(GICA)复检酶联免疫吸附试验(ELISA)所检测出的乙型肝炎表面抗原(H BsAg)阳性标本的效果.方法 分离用ELISA法筛选出的无黄疸、无溶血HBsAg阳性标本血清,按初检A值/cutoff值的大小分为A-E 5组,每组随机选取40例患者标本,另取40例健康者血清纳入对照组F组.每组标本分别用GICA法、ELISA法和化学发光免疫分析法(CLIA)进行复检.以CLIA法检测结果为金标准,计算并比较GICA法和ELISA法复检的假阳性率及假阴性率.结果 GICA法复检全部标本的假阳性率为0.当1≤A值/cutoff值＜5时,GICA法的假阴性率为95.24％,同时,检测出1例因HBsAg滴度过高导致ELISA漏检的标本;当5≤A值/cutoff值＜10时,GICA法的假阴性率降为23.68％;当A值/cutoff值≥10时,GICA法的假阴性率为0.结论 ELISA法HB-sAg初检A值/cutoff值≥10时,用GICA法复检为阳性,可及时发出报告;当A值/cutoff值＜10时,为保证检验结果的准确性,除胶体金法外,还应使用ELISA等方法进行复检.
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新型基于吖啶酯平台的乙型肝炎病毒表面抗原全自动管式化学发光定量检测试剂的建立和评价
目的 拟建立一种新型基于吖啶酯平台的乙型肝炎病毒表面抗原全自动管式化学发光定量检测试剂.方法 基于自主研发的全自动化学发光免疫检测系统,通过抗体配对筛选,体系调整等方法建立HBsAg全自动化学发光定量检测试剂,并与罗氏试剂进行定量相关性比较,使用不同亚型标本进行评价.结果 研发的HBsAg定量检测试剂定量范围为0～250 IU/ml,与罗氏试剂检测临床标本具有良好的一致性(r2=0.9794),对国家参考品中的灵敏度参考品检测结果均符合国家标准,试剂对不同亚型的检测性能良好,在0.05～250 IU/ml范围内具有很好的线性(r=0.9990),试剂对国家参考品中的准确度参考品检测结果符合国家标准,稀释400倍检测的可报告上限为100 000 IU/ml,批内精密度均小于10％,批间精密度小于15％.结论 该研发的试剂具有良好的检测性能,具有广阔的应用前景.
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二氢叶酸还原酶基因缺陷细胞株在HBsAg表达中的应用
目的利用二氢叶酸还原酶缺陷的中国仓鼠卵巢细胞（CHO-dhfr-）和携带二氢叶酸还原酶基因的质粒载体，建立高效表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的细胞系，以提高HBsAg在哺乳动物细胞中的表达产量。方法 将HBsAg基因插入pCI质粒，以脂质体方法转染CHO\|dhfr-细胞，在氨甲喋呤选择压力下，筛选HBsAg表达阳性细胞克隆。结果 所获28株单克隆化细胞系，18株表达HBsAg，产量高者为4株。结论 通过HBsAg的高效表达证明，二氢叶酸还原酶缺陷细胞株和相应载体是哺乳类动物细胞表达外源基因的有效体系之一。
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HBeAg阴性慢性乙型肝炎核苷(酸)类似物序贯干扰素治疗疗效的相关因素研究
目的 研究HBeAg阴性慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者核苷(酸)类似物(nucleos (t) ide analogs,NA)序贯干扰素治疗疗效的影响因素.方法 核苷(酸)类似物治疗的HBeAg阴性慢性乙型肝炎向PEG-IFNα-2α转换(序贯治疗),二者联合应用3个月后单独应用PEG-IFNα-2a治疗,PEG-IFNα-2a180μg每周1次皮下注射.监测患者序贯治疗前(基线)及序贯治疗的第12、24、36、48、72及96周的HBsAg含量和HBV DNA载量.结果 共有26例HBeAg阴性CHB患者人组,有6例(23.1％)获得HBsAg消失/HBsAg血清学转换.获得HBsAg消失/HBsAg血清学转换组和未获得HBsAg消失/HBsAg血清学转换组这两组比较显示,获得HBsAg消失/HBsAg血清学转换组基线HBsAg含量为2.210log10IU/ml,显著低于(t=-4.252,P=0.000)非HBsAg消失患者的基线HBsAg含量(3.385log10IU/ml);序贯治疗72、96周以后两组HBsAg下降幅度均有显著性差异(3.511vs0.723log10IU/ml,4.291vs0.737log10 IU/ml)(t=6.712,P=0.000,t=13.391,P=0.000、0.000).两组之间的年龄、性别、NA治疗时间均无统计学差异.12例(46.2％)获得SVR.获得SVR和未获得SVR组这两组比较显示,获得SVR组基线HBsAg含量为2.575log10 IU/ml,显著低于(t=-4.319,P=0.000)非SVR患者(3.576log10IU/ml);序贯治疗的各时间点两组HBsAg下降幅度差异均有统计学意义(0.612vs0.088,1.192vs0.107,1.566vs0.167,1.817vs0.176,2.424vs0.193,2.188vs-0.014,log10 IU/ml)(t=3.109、4.717、4.500、4.544、5.560、4.265,P=0.008、0.010、0.001、0.001、0.000、0.003).两组之间的性别、NA治疗时间均无统计学差异,年龄差异有统计学意义(30.8vs39.9岁)(t=-2.747,P=0.011).9例患者基线HBV DNA为阳性,序贯治疗后5例(55.6％) HBV DNA被抑制,HBV DNA被抑制的患者均在第12周时伴随HBsAg下降,但对随后HBsAg是否继续下降及转阴无影响.HBV DNA被抑制与未被抑制患者的年龄、性别、NA治疗时间、HBsAg基线含量,治疗过程中HBsAg下降幅度均无统计学差异.结论 对于HBeAg阴性的CHB患者来说,基线HBsAg较低(2log10 IU/ml水平)及其早期滴度大幅下降的核苷(酸)类似物序贯干扰素治疗患者较容易获得SVR;其中延长干扰素疗程更容易达到HBsAg消失/HBsAg血清学转换.
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无血清免疫学标志的乙肝病毒株分子生物学特性
随着聚合酶链反应法(PCR)技术广泛用于扩增血清和肝脏组织中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA，现已发现一些乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性的HBV变异株[1]，人感染这些HBV变异株后，无血清HBV标记，从而给诊断、治疗和预防带来困难，目前对这些变异株在HBV携带者中所占比例及其致病性尚未充分了解。因此，研究其分子生物学特性具有重要意义。本文报道一例无血清免疫学标志的原发性肝癌患者HBv变异株的分子生物学特性。
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G145R变异乙型肝炎表面抗原诱导的抗体性质研究
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)变异可导致抗原性改变.HBsAg a决定簇常见的变异位点是G145R.G145R变异可能改变原来的抗原表位,并形成新的抗原表位.本研究探讨G145R HBsAg能否刺激机体产生抗体及免疫应答的情况.
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14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用
目的 制备抗乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体,检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式.用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法,并做初步评价.方法 用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体.检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性.筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3,建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法.结果 制备了14株抗-HBs单抗.经过初筛,有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg.优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件,检测HBsAg的灵敏度较好,检测变异HBsAg的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒.结论 用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg.
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血清乙型肝炎表面抗原和表面抗体共阳性慢性HBV感染者病毒S基因变异分析
目的 探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb)共阳性患者乙肝病毒S基因区氨基酸变化特点,了解分子病毒学特征.方法 对26例HBsAg和HBsAb共阳性且DNA阳性的慢性HBV感染者(实验组)和随机选取的39例HBsAg阳性HBsAb阴性且DNA阳性慢性HBV感染者(对照组)的HBV DNA S区基因序列进行PCR扩增和测序,并对S区氨基酸序列进行比对分析.结果 HBsAg和HBsAb共阳性组S基因区氨基酸突变高于对照组,两者差异具有统计学意义(P＜0.05)；在a决定簇(aa124 ～147)尤其是第1个茎环结构内(aa124 ～ 137)氨基酸突变频率明显高于对照组(5.49％vs 1.09％,P＜0.05).结论 HBsAg和HBsAb共阳性患者S基因a决定簇第1个茎环结构氨基酸变异明显增加,推测与HBsAg和HBsAb共阳性现象的发生可能有相关性.
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CpG-ODN联合HBsAg体外对慢性乙肝患者外周血树突状细胞STAT、SOCS通路的影响
目的研究含非甲基化CpG基序的免疫刺激寡核苷酸(CpG-ODN)联合重组HBsAg对慢性乙肝(CHB)患者外周血树突状细胞(dendritic cell, DC)表面标志、功能及胞浆信号传导与转录激活因子(STAT)、细胞信号转导抑制因子(SOCS)表达的影响.方法由CHB患者和健康者外周血单核细胞诱导扩增DC,以CpG-ODN或联合HBsAg刺激DC,并与TNF-α比较,评价其对DC表面标志、分泌IL-12 p70及刺激同种T细胞增殖能力的影响;应用Western blot法检测DC胞浆STAT1、3、4、5、6以及SOCS1、3蛋白的表达.结果与PBS组比,TNF-α、CpG-ODN或联合HBsAg能明显提高CHB患者DC表面分子HLA-DR表达,IL-12 p70分泌增加,刺激同种T细胞增殖能力增强,CpG-ODN联合HBsAg还能明显提高CD1a的表达;CpG-ODN或联合HBsAg、TNF-α对DC胞浆STAT1、4、6和SOCS1、3的表达呈不同程度增强作用,对STAT3、5的表达无明显影响.结论 CpG-ODN与TNF-α一样能促进CHB外周血DC分化、成熟;CpG-ODN或联合HBsAg能增强DC的特异性抗原提呈作用;其作用机制可能是通过调节DC细胞内STAT1、4、6以及SOCS1、3等信号蛋白的表达.
关键词： 慢性乙型肝炎 树突状细胞 非甲基化CpG寡核苷酸 乙型肝炎表面抗原 信号转导
