氧化应激与慢性阻塞性肺疾病研究进展

氧化应激是指机体内高活性分子如活性氧簇(ROS)和活性氮簇(RNS)产生过多或消除减少,从而导致组织损伤.ROS包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(-OH)、过氧化氢(H2O2)等,RNS包括一氧化氮(NO)、二氧化氮(NO2)、过氧亚硝酸基阴离子(ONOO)等.在正常状态下机体可产生少量ROS参与正常代谢,同时体内存在清除自由基、抑制自由基反应的体系,使过多的自由基被清除或使自由基减少,保持自由基的产生和清除平衡.但在某些病理状态下,这一机制遭到破坏,体内自由基显著增加,可直接致机体损伤.

过氧亚硝酸阴离子加重急性心肌梗死患者缺血-再灌注心肌损伤

目的 研究急性心肌梗死患者缺血-再灌注过程中血浆过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)与心肌损伤的关系.方法 30名急性心肌梗死(均为前降支近中段单支病变)并急诊成功行支架干预术的患者为观察组,分别取不同时间点(24 h、72 h)的外周静脉血,据cTnI浓度分为轻度心肌损伤组(cTnI＜30μg/L,16例)和重度心肌损伤组(cTnI≥30μg/L,14例);选择同期门诊体检的健康志愿者24名为对照组.用酶联免疫分析法检测血浆中硝基化酪氨酸(NT,ONOO-标志物)含量.结果 急性心肌梗死患者轻度心肌损伤组和重度心肌损伤组PCI术后24 h、72 h血浆NT水平皆高于对照组(24 h:1.08±0.35 nmol/g蛋白、1.23±0.32 nmol/g蛋白比0.51±0.12 nmol/g蛋白,P＜0.001;72 h:1.05±0.21 nmoL/g蛋白、2.35±0.47 nmol/g蛋白比0.51±0.12 nmol/g蛋白,P＜0.001);重度心肌损伤组术后72 h血浆NT水平显著高于轻度心肌损伤组(P＜0.001),而在术后24 h两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 急性心肌梗死患者缺血一再灌注后血浆ONOO水平随心肌损伤程度的增加而增高,提示过氧亚硝基阴离子可能参与了急性心肌梗死患者缺血-再灌注心肌损伤.

衰老大鼠心肌对缺血再灌注损伤的敏感性研究

目的 观察衰老大鼠心肌对缺血再灌注损伤的敏感性,并探讨其可能的机制.方法 成年和老年雄性Wistar大鼠各12只,分为4组:成年假手术组、成年缺血再灌注组、老年假手术组和老年缺血再灌注组,每组6只,进行缺血30 min再灌注3 h.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,比色法检测心肌组织半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(caspase-3)活性,化学发光法测定心肌组织总一氧化氮(NOx)含量,ELISA法检测心肌过氧亚硝基(ONOO-)含量.结果 老年组缺血再灌注引起心肌细胞凋亡的程度明显高于成年组,凋亡指数分别为(14.6±1.7)%、(19.0±2.1)%,差异有统计学意义(P＜0.05);caspase-3活性:成年组为(340±32)μmol/mg,老年组为(436±35)μmol/mg,差异有统计学意义(P＜0.05);心肌组织中NOx含量:成年缺血再灌注组、老年缺血再灌注组分别为成年假手术组的(2.1±0.2)、(4.4±0.5)倍,差异有统计学意义(P＜0.05);ONOO-含量:成年缺血再灌注组和老年缺血再灌注组分别为(4.68±0.15)nmol/g、(7.25±0.18)nmo1/g,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 老年大鼠对心肌缺血再灌注损伤的敏感性增加,可能的原因是老年鼠心脏中NO的毒性衍生物ONOO-含量增加,从而导致功能蛋白的硝基化.

硝酸酯类药物耐受加重心肌缺血-再灌注损伤——过氧亚硝酸阴离子机制

硝酸酯类药物是治疗冠心病、高血压及心力衰竭的主要药物.连续使用硝酸酯类药物后(一般为24～48 h),出现机体对其敏感性降低的现象称为耐受.临床表现为抗心绞痛效果、血流动力学效应及抗血小板聚集效应明显降低,或加大硝酸酯类药物剂量才可维持其疗效.

过氧亚硝基阴离子在大鼠糖尿病性白内障形成中的作用及葛根素的对抗作用

目的探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在糖尿病大鼠白内障形成中的作用,以及葛根素的对抗作用.方法将72只健康无热原Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠均分为对照组、链脲佐菌素(STZ)组及治疗组,使用STZ制作STZ组和治疗组大鼠糖尿病模型,治疗组大鼠腹腔注射葛根素.分别于实验20、40及60 d检查大鼠的全身情况和晶状体形态;光镜下观察晶状体上皮细胞(LEC)的形态;同时使用流式细胞仪检测LEC中凋亡细胞的数量和百分率,以及ONOO-标志物--硝基酪氨酸(NT)阳性细胞的荧光强度和数量;采用免疫印迹法检测NT蛋白质在晶状体中的表达.结果实验20、40及60 d,对照组大鼠晶状体均透明,治疗组大鼠晶状体仅轻度混浊,STZ组晶状体混浊明显且逐渐加重;光镜下LEC形态对照组无改变,治疗组仅轻度改变,STZ组明显改变.实验20、40及60 d,凋亡细胞数量和百分率治疗组和STZ组与对照组比较,治疗组与STZ组比较,差异均有显著意义(P＜0.05);NT阳性细胞的荧光强度和数量治疗组和STZ组与对照组比较,治疗组与STZ组比较,差异均有显著意义(P＜0.05);治疗组和STZ组LEC凋亡情况的变化趋势与NT阳性细胞的荧光强度和数量的改变情况基本相同.各组均可见NT蛋白质表达;实验20、40及60d,NT蛋白质表达水平治疗组和STZ组与对照组、治疗组与STZ组比较,差异均有非常显著意义(P＜0.001).结论ONOO-参与介导大鼠糖尿病性白内障的形成,是白内障氧化应激损伤机制中不可忽视的因素之一.葛根素具有抗氧化作用,对于治疗大鼠早期糖尿病性白内障有一定效果.(中华眼科杂志,2004,40:311-316)

097 地榆对过氧亚硝酸盐诱导的肾损伤的保护作用

脊髓过氧亚硝酸根阴离子在瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用

目的 评价脊髓过氧亚硝酸根阴离子(PN)在瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用.方法 成年雄性SD大鼠32只,体重240 ～ 260 g,2～3月龄,采用随机数字表法分为4组(n=8),对照组(C组)静脉输注生理盐水0.1 ml·kg-1·min-160 min;瑞芬太尼组(R组)静脉输注瑞芬太尼1.0 μg· kg-1·min-1 60 min;富氢液组(C+H组)静脉输注生理盐水0.1 m1·kg-1·min-160 min,静脉输注前10 min腹腔注射富氢液10 ml/kg;瑞芬太尼+富氢液组(R+H组)静脉输注瑞芬太尼1.0μg·kg-1·min-160 min,静脉输注前10 min腹腔注射富氢液10 ml/kg.分别于静脉输注前24 h、输注结束后6、24和48 h(T0-3)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).后一次测定痛阈后处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫共沉淀联合Western blot法测定硝化锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的表达,采用Western blot法测定3-硝基酪氨酸(3-NT)的表达.采用黄嘌呤氧化酶法测定脊髓MnSOD活性.结果 与C组比较,R组和R+H组T1-T3时MWT降低,TWL缩短,脊髓3-NT和硝化MnSOD表达上调,MnSOD活性降低(P＜0.05),C+H组各时点上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与R组比较,R+H组T1-T3时MWT升高,TWL延长,脊髓3-NT和硝化MnSOD表达下调,MnSOD活性升高(P＜0.05).结论 脊髓PN通过抑制MnSOD活性参与了瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏形成的机制.

急性心肌梗死介入治疗无复流过氧亚硝酸阴离子变化及危险因素分析

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)患者行冠状动脉介入术(PCI)后发生无复流的患者血浆中过氧亚硝酸阴离子变化及相关危险因素分析.方法 选取沈阳医学院沈洲医院2006年6月至2008年12月因AMI行急诊PCI治疗的患者,根据PCI术后造影结果 分为无复流组和正常血流组,均为22例.所有入选者术前及术后24 h、72 h采集外周静脉血,进行心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB),肌钙蛋白T(cTnT)测定,并行酶联免疫分析法检测血浆中硝基化酪氨酸(NT)变化.记录一般临床特征和冠状动脉造影指标.结果无复流组在发病到再灌注时间上明显长于正常血流组(P<0.05),在Q波型梗死,多支血管病变,弥漫性病变,PCI前TIMI血流≤1级等方面明显多于正常血流组(P<0.05);正常血流组患者梗死前心绞痛发病率明显高于无复流组(P<0.05).无复流组NT在术后24 h高于正常血流组(P<0.05).发病到再灌注时间,Q波型梗死,PCI前TIMI血流≤1级,弥漫性病变是无复流发生的独立危险因子,而梗死前心绞痛为保护性因子.结论 与无复流发生密切相关的临床因素有发病到再灌注时间,Q波型梗死,弥漫性病变和PCI前TIMI血流≤1级;而梗死前心绞痛为保护性因素.

PD98059抑制Peroxynitrite诱导人脑血管平滑肌细胞DDR2的表达

目的 探讨过氧亚硝酸盐(ONOO-)诱导人脑血管平滑肌细胞(HBVSMCs)盘状结构域受体2(DDR2)表达的机制.方法 体外培养HBVSMCs,用倒置相差显微镜、吖啶橙染色法和MTT比色法对PD98059预处理的细胞进行细胞形态学及细胞生存率检测,采用Western blot及Real-time PCR技术,检测ONOO-作用下HBVSMCs中DDR2表达及施加ERK1/2抑制剂PD98059后DDR2/MMP-9表达的变化.结果 10 μmol/L ONOO-诱导DDR2在蛋白及mRNA水平上呈现高表达(P＜0.05),随着ONOO-浓度的增加,DDR2逐渐呈现低表达(P＜0.05).PD98059预处理后的HBVSMCs,无明显形态学变化,对其进行生存率检测亦无显著影响(P＞0.05).PD98059显著抑制ONOO-诱导的DDR2/MMP-9表达(P＜0.05).结论 ERK1/2信号转导途径抑制剂PD98059可以抑制ONOO-诱导的DDR2/MMP-9表达,ONOO-诱导HBVSMCsDDR2的表达机制与ERK1/2信号转导途径有关.

一氧化氮和过氧亚硝酸阴离子的心肌损害作用

一氧化氮生成过多对心血管系统有显著的不良作用，尤其是一氧化氮与超氧阴离子反应形成的过氧亚硝酸阴离子是一种强效细胞毒性物质，在心肌损害的发生中起着重要作用。

蛋白质酪氨酸硝基化与肺癌关系的研究进展

肺癌的发病率和死亡率均居人类恶性肿瘤的首位[1],严重危害人类健康.肺癌一般分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,前者常以转移癌的形式出现,后者约占全部肺癌病例的75％且多为原发性癌.非小细胞肺癌分为鳞癌、腺癌、腺鳞癌及大细胞癌.肺癌一般起病隐匿,因早期症状不明显,多数患者首次就诊时就已发生癌细胞的侵袭或转移,这极大地延误了治疗时机,如能早期诊断,其早期肺癌的术后5年生存率将极大地提高.

过氧亚硝基阴离子调控谷氨酸脱氢酶的催化功能

目的:观察过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对谷氨酸脱氢酶(GDH)的硝基化修饰及功能调控.方法: GDH与ONOO-体外反应,测定酶活性及别构调节效应.Western Blot检测GDH硝基化修饰;制备含"去硝基化酶"的脾脏蛋白,观察能否逆转ONOO-作用.结果: 4～12 μmol/L ONOO-不影响GDH活性和二磷酸腺苷(ADP)别构激活作用,但使三磷酸鸟苷(GTP,10 μmol/L)别构抑制作用由(49±4)%降低至(69±7)%和(75±3)%;36～108 μmol/L ONOO-使GDH活性由(0.81±0.05)kat/kg降低至(0.55±0.06)和(0.29±0.07)kat/kg,使GTP(10 μmol/L)别构抑制作用降低至(83±4)%和(95±7)%;324 μmol/L ONOO-使GDH完全失活. Western Blot检测到ONOO-使GDH发生硝基化修饰.脾脏蛋白可部分逆转上述作用.结论: ONOO-可通过硝基化修饰调控GDH催化功能.

内源性过氧亚硝基阴离子在博莱霉素A5诱发大鼠肺损伤和肺纤维化中的作用

目的:观察内源性过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在博莱霉素A5诱发大鼠肺损伤和肺纤维化中的作用.方法:通过测定出肺血脂质过氧化物水平和观察肺组织学变化(包括用偏振光显微镜观察天狼猩红染色的Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化)来判断肺损伤和肺纤维化；用硝基酪氨酸的免疫组化判断过氧亚硝基阴离子的表达.结果:气管内给予博莱霉素A5第14天观察到(1)出肺血脂质过氧化物含量升高；肺泡壁增厚，肺间质巨噬细胞浸润，且其邻近有成纤维细胞及增多的Ⅰ、Ⅲ型胶原.(2)肺泡上皮细胞和肺间质细胞内ONOO-高表达.(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍减轻上述变化.结论:内源性ONOO-介导BLM-A5的肺毒性作用；氨基胍对肺损伤和肺纤维化的治疗部分是通过减少内源性ONOO-的形成实现的.