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甲基化特异性聚合酶链反应技术用于肝细胞肝癌的诊断
甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测DNA异常甲基化是一种极好的新方法.
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PTEN在HepG2细胞中诱导凋亡发生及上调p53表达
目的研究肿瘤抑制基因PTEN对HepG 2细胞凋亡及p53蛋白表达的影响,并探讨相关机制.方法将携带有野生型PTEN基因及突变型G129E-PTEN,C124A-PTEN基因的真核表达载体转染HepG2细胞,利用western印迹杂交检测PTEN表达、蛋白激酶B(PKR/Akt)和焦点粘附激酶(FAK)的磷酸化状态,以及野生型p53蛋白表达水平的变化;并应用流式细胞仪、激光共聚焦技术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果与对照细胞相比,转染野生型PTEN和G129E-PTEN的HepG2细胞中磷酸化FAK(-65%,-65%)与磷酸化Akt(-93%,-35%)表达均存在不同程度的下调,而细胞凋亡率分别增加至19.8%± 1.2%和9.2%± 0.6%,并且p5 3蛋白表达上调(+120%,+50%);然而转染C124A-PTEN的细胞中各项检测指标均无明显变化.结论 PTEN依赖其蛋白磷酸酶活性抑制FAK的磷酸化:并主要通过脂质磷酸酶活性抑制Akt的磷酸化,并诱导HepG2细胞凋亡和p53蛋白表达上调.
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抑癌基因PTEN与头颈部肿瘤关系的研究
PTEN(也称MMACl或TEP1)是1997年克隆到的一种新的肿瘤抑制基因,它定位于10q23.3,是迄今发现的第一个具有特异性磷酸酶活性的抑癌基因[1].研究表明,在原发性乳腺癌、子宫内膜癌、恶性胶质瘤等大量的肿瘤成分中有该基因的突变和失活,近年来在头颈部肿瘤中也发现其有异常表达.它在细胞的生长发育、信号转导和细胞凋亡中起重要作用,自发现以来,引起学者们的广泛关注.现就PTEN与头颈部肿瘤的关系研究作一综述.
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细胞黏附分子:TSLC1的研究进展
TSLC1(tumor suppressor of non-small cell lung cancer 1)是一种新的肿瘤抑制基因(tumor-suppressor gene,TSG),早是Gomyo等[1]于1999年分析人类染色体11q23.2区域所发现的.
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FHIT基因与肿瘤
随着分子生物学的快速发展,发现了多种癌基因和肿瘤抑制基因.在肿瘤的发生发展和转移的过程中,癌基因的激活和肿瘤抑制基因的失活都有十分重要的作用,从而加深对肿瘤发生分子机制的认识.现已公认肿瘤是一种基因性疾病,多种癌基因和肿瘤抑制基因协同作用而导致肿瘤的发生发展.FHIT基因是1996年才被分离出来的一种新的候选肿瘤抑制基因,已在多种肿瘤中发现它有异常改变.
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MSP扩增失败的原因分析及解决方法
DNA甲基化是一种影响基因外表达的机制,并与肿瘤发生有着密切的联系.DNA甲基化状态改变是致癌作用的一个关键因素,是肿瘤抑制基因的失活方式之一,它通过基因机制和基因外机制导致细胞增殖和分化的相关基因表达异常,造成细胞失去正常的基因调控而发生恶变形成肿瘤[1].
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外源性野生型p53基因在两个肺腺癌细胞系中表达及对p16和p21基因的调控
目的探讨p53基因在肺癌细胞周期中的作用机制,以及裸鼠体内基因治疗的作用.方法用以腺病毒为载体的野生型p53基因pAdCMV-p53(Ad-p53)感染高转移肺腺癌95D细胞系和高浸润肺腺癌L-18系,对感染前后各细胞系的细胞生长曲线、p53、p16和p21基因的表达以及调亡进行分析.此外,用Ad-p53对两细胞系进行了裸鼠体内感染实验.结果体外实验中,导入p53基因细胞系的生长均得到抑制,并且终都出现凋亡,感染后的细胞中p53和p21基因的mRNA表达量明显增高,p16基因的mRNA表达量则无明显变化.p53基因治疗后的裸鼠,其中95D细胞系的肿瘤全部消失;L-18细胞系的腹腔注射组肿瘤全部消失,而皮下注射组无明显变化.结论 p53基因是一个有效的肿瘤抑制基因,其诱导细胞凋亡的途径与p16基因不同.腺病毒介导的野生型p53基因可以有效地控制肺癌细胞的发展和转移.
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人胶质母细胞瘤等位基因谱分析的研究
目的探讨胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)发病的分子遗传学机理,确定GBM的发生发展主要和哪些染色体或染色体区域有关,哪些染色体区域上可能存在与GBM相关的肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene, TSG).方法应用聚合酶链反应技术,采用荧光标记的引物和377型DNA序列自动分析仪,对21例GBM的所有22对常染色体上共计382个微卫星位点进行了杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)分析,相邻2个微卫星位点之间的平均遗传学距离为10 cM.结果在所有被检测的染色体臂上都观察到LOH,其中以染色体10q、10p、9p、17p和13q的LOH率高(>50%),这些染色体臂上已知的肿瘤抑制基因PTEN、DMBT1、p16、p15、p53和Rb所在区域LOH率都较高;14q、3q、22q、11p、9q、19q上也存在较高的LOH率(＞40.5%);首次发现多个共同微小丢失区域:9p22-23、10p12.2-14、10q21.3、13q12.1-14.1、13q14.3-31、17p11.2-12、17p13、3q24-27、11p12-13、14q31-32.3、14q21-24.1、22q13.2-13.3、4q35、4q31.1-31.2、6qtel、6q16.3.结论 GBM存在复杂的遗传学异常,涉及多条染色体臂.以10q、10p、9p、17p和13q 的异常与GBM发生发展的关系为密切.除了已知的肿瘤抑制基因PTEN、DMBT1、p16、p15、p53和Rb外,首次所发现的多个微小共同丢失区域上可能存在与GBM相关的多个未知TSG.
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非小细胞肺癌6号染色体长臂的基因扫描分析
目的探讨6号染色体长臂上与非小细胞肺癌发生相关的微卫星位点.方法应用多重PCR对41例非小细胞肺癌中6号染色体长臂上的18个微卫星位点进行扩增.PCR产物应用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,电泳结果用Gene ScanTM,GenotyperTM软件进行分析.结果各个位点有明显不同的杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)频率,从3.85%到38.45%不等,总LOH频率为58.5%(24/41).LOH频率超过20%的位点共有8个,主要分布在6q24及6q27.具体范围为6q24-6q25.3[D6S1699(35%)、D6S409(23.33%)、D6S441(33.33%)]及6q26-27[D6S1550(38.45%)、D6S264(20%)、D6S1585(25%)、D6S446(33.33%)、D6S281(30.77%)].结论 6q24及6q27附近可能存在与非小细胞肺癌发生相关的肿瘤抑制基因.
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前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤10号染色体等位基因杂合性缺失分析
目的检测原发性前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤(prostatic intraepithelial neoplasia, PIN) 10号染色体等位基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)及其意义.方法用显微切割技术获取16个前列腺癌及14个高级别PIN样本DNA,采用PCR及微卫星多态性技术,对10号染色体上的20个微卫星位点LOH进行检测.结果 16个原发性前列腺癌样本在10号染色体位点有不同的LOH频率,从0～46.2%不等,主要分布在10q23及10q24-q25.14个高级别PIN,有7个样本在6个位点检测到LOH.结论前列腺癌存在10号染色体的高频LOH区,主要位于10q23及10q24-q25区,而高级别PIN的LOH率明显低于前列腺癌,PTEN及 MXI1为10q23及10q24-q25区候选的肿瘤抑制基因,可能与前列腺癌的发生发展有关.
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复发前后多形性胶质母细胞瘤的等位基因谱分析
目的研究多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme, GBM)复发前后的分子遗传学变化,了解基因组范围内哪些染色体区域可能与GBM复发有关. 方法应用聚合酶链反应技术为基础的杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)分析法,采用荧光标记的引物和377型DNA序列自动分析仪,检测了1例复发前后GBM所有22对常染色体上多达382个微卫星位点.相邻2个微卫星位点之间的平均距离为10 cM. 结果对原发肿瘤标本的等位基因谱分析显示,染色体9p21上D9S157位点和10q21.3-26.3上D10S537、D10S185、D10S192、D10S597、D10S587、D10S217位点存在LOH.对复发肿瘤标本的研究显示,不但9p21和10q21.3-26.3上LOH的范围扩大,而且在其它多条染色体上也出现了LOH(包括1q、7p、7q、21q、20p、20q、10p、19p、19q).结论染色体9p和10q可能在该例GBM的发生中起着重要作用.尽管该病例复发前后的病理诊断相同,复发后GBM存在着更广泛的分子遗传学异常改变,可能伴随着更多肿瘤抑制基因的失活.
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基因扫描分析非小细胞肺癌中6号染色体长臂八个肿瘤候选基因
目的探讨6号染色体长臂上8个肿瘤候选基因与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法应用多重PCR对41例非小细胞肺癌中6号染色体长臂上的8个肿瘤候选基因的20个微卫星位点进行扩增.PCR产物应用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,电泳结果用Gene ScanTM,GenotyperTM软件进行分析.结果有7个基因的14个微卫星位点杂合性缺失频率超过20%.分别是CCNC(M74091,34.5%;stSG41342,100%),FYN(stSG29818,22.2%;GDB:187104,38.5%),IGF2R (stSG1519,21.1%;stSG6298,80%),MLLT4 (N26539,25.7%;sts-AA010818, 38.7%),NMBR(stSG6334,50%), PDCD2 (SGC31353, 27.60%;sts-N37094,50%),THBS2(stSG6890,25%;AA131691,29.60%;stSG35838,44.40%).结论这7个肿瘤候选基因可能与非小细胞肺癌发生、发展有关.
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鼻咽癌患者p16基因表达分析
p16是位于9p21的多重肿瘤抑制基因,编码一个由148个氨基酸组成、分子量为16 kb的蛋白质,其对细胞的生长起负性调控作用[1].p16的缺失或突变与恶性肿瘤的发生、发展关系是目前肿瘤的研究热点.据报道,人类75%的癌细胞株有p16基因的缺失或突变,超过了p53基因50%的突变率.其翻译产物P16蛋白与P53蛋白也不同,它是直接作用于细胞周期的抑癌细胞,将细胞周期控制和癌基因这两个曾经独立研究领域连接在一起,可能成为癌症基因治疗的新的目的基因[2].近年来,在基因水平上对p16基因的研究和对p16基因产物P16蛋白在细胞内定位、及在肿瘤细胞上的表达分析陆续有所报道,但有关p16的表达与鼻咽癌的关系目前研究甚少.我们应用S-P免疫组化结合微波抗原修复法检测鼻咽癌(低分化鳞状细胞癌)组织中P16蛋白表达情况,并与慢性炎症病变组织进行对照,结合临床资料,探讨P16蛋白对鼻咽癌的诊断及其生物行为的关系.
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p16INK4a、p19ARF、p15INK4b基因及其在急性T淋巴细胞白血病中的研究进展
p16INK4a、p19ARF、p15INK4b基因是位于染色体9p21的相邻基因.它们均为肿瘤抑制基因,但是它们的肿瘤抑制机理各不相同.已发现在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中其失活率很高.且它们的失活与T细胞的TCR重排有关.本文对近年来p16INK4a、p19ARF、p15INK4b结构与功能及其在T-ALL中的改变的研究进展作一综述,以阐明它们对T-AlL的发生与发展有极其重要的作用.
关键词： 肿瘤抑制基因 急性T淋巴细胞白血病 p16基因 -
肿瘤抑制基因甲基化与胃癌
关系的文献进行综述分析.结果胃癌中,细胞周期调控基因、有丝分裂检测点基因、凋亡相关基因、错配修复基因、转移相关基因等多种肿瘤抑制基因发生甲基化而失活.结论肿瘤抑制基因甲基化在胃癌的发生、发展过程中起重要作用,肿瘤抑制基因的甲基化有可能成为胃癌诊断、判断转移和评价预后的分子标记物,去甲基化干预有望成为胃癌治疗的新方法.
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RAS相关区域家族与肺癌关系研究进展
RAS相关区域家族1A(Ras-assosiation family 1A,RASSF1A)是新近发现的新型候选肿瘤抑制基因,位于染色体3p21.3,其在多种上皮肿瘤中表达缺失,包括小细胞肺癌、乳癌、前列腺癌、胃癌及肾细胞癌等,在血清、尿液、唾液中也可以早期检测到缺失[1].
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FHIT基因与肺癌
癌基因的激活在肺癌发生中起重要作用,但现有的激活方式并不能完全解释肺癌的发生.近年来,发现了另一类基因,由这类基因突变或缺失所引起的失活可终导致肿瘤的发生,表明这类基因在正常情况下具有抑制肿瘤形成或生长的作用,被称为肿瘤抑制基因,如p53、Rb、p16等.
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TSG101与MDM2在肺鳞癌、腺癌组织中的表达及意义
TSG101基因是新近发现的一个候选肿瘤抑制基因,定位于11p15.1-15.2.近年来的研究表明,在人体的多种肿瘤组织中发现该基因发生了异常的剪接而产生了多种变异体.MDM2(murine double minute-2,MDM2)基因是一种癌基因,在人类多种肿瘤组织中都有过表达.本研究采用免疫组化和Western blot方法检测了TSG101与MDM2在肺鳞癌、腺癌中的表达及其相关性,为研究肺癌发生提供新的依据.
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Runx3与胃癌关系的研究进展
胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，也是致命的恶性肿瘤之一，是全球癌症相关死亡的第二大原因［1］。胃癌的发生发展是一个多因素、多阶段、多基因变异的综合病变过程，而抑癌基因的失活和癌基因的活化在其中发挥了重要的作用。Runx3基因为一种新近发现的肿瘤抑制基因，能调控细胞的生长发育和凋亡，对细胞的信号转导和其他生物学效应有着重要而复杂的转录调控作用，是胃癌发生发展中的关键基因。现就Runx3基因在胃癌发生发展过程中的重要作用进行综述。
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ARLTS1基因重组质粒对卵巢癌细胞株SKOV3生长和凋亡的影响
目的 探讨Ras超家族成员ARLTS1基因对卵巢癌细胞株SKOV3生长及凋亡的影响.方法 构建真核表达质粒pCMV-Tag 3B-ARLTSI,并转染卵巢癌SKOV3细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测ARLTS1基因转染组、空载体pCMV-Tag 3B转染组和未转染组中ARLTS1 mRNA及蛋白表达水平,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等生物学行为的变化,Western blot检测细胞easpase-3和bcl-2蛋白表达水平的变化.结果 真核表达质粒pCMV-Tag 3B-ARLTSI转染SKOV3细胞后,经PCR和Western blot证实转染成功.ARLTSI转染SKOV3细胞后,细胞生长明显受抑(P<0.05).流式细胞术检测发现ARLTS1基因转染组与空载体转染组及未转染组细胞相比,S期细胞比例明显增多(P=0.035和0.011,细胞凋亡率(36.7%)显著高于另两组细胞(P均<0.001).ARLTS1基因转染组细胞中caspase-3和bel-2蛋白表达水平分别下降34.9%和47.7%,与未转染组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 ARLTS1基因转染后能抑制人卵巢癌细胞SKOV3的生长,调控SKOV3细胞周期,可能通过caspase途径促进肿瘤细胞凋亡·
