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中药杜仲抗HIV作用的实验研究
目的观察中药杜仲及其单体化合物抗HIV作用,为寻找新的有效治疗艾滋病药物提供实验依据.方法用植物化学的方法从中药杜仲中提取单体化合物;以HIV病毒感染的MT4细胞为实验模型,以病毒引起合胞体的产生为评价指标,观察药物的作用.结果从中药杜仲中获得6个单体化合物,其中氯原酸、咖啡酸、表儿茶素、儿茶素等4个单体化合物可有效保护病毒感染的细胞,使其不产生病变.咖啡酸和儿茶素的效果尤为显著,IC50值均为50 μg.mL-1.结论杜仲提取物及其单体化合物具有抗HIV作用,儿茶素作用为新的发现.
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冬天进补有讲究
每年一到冬天,在大都市的餐饮酒店中,竞相推出的"进补药膳"的招牌菜,五花八门,争奇斗艳,什么羊肉当归火锅,枸杞人参炖乌鸡,附子狗肉煲,杜仲烩子公鸡,黄芪虫草煨老鸡,板栗爆牛鞭,桂元甲鱼汤等,应有尽有,形成了一道独特的"都市进补"风景线.
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杜仲不同提取部位对离体血管舒张作用的研究
[目的]寻找杜仲中具有血管舒张作用的提取部位.[方法]分离得到杜仲11个提取部位,采用大鼠胸主动脉环实验观察各提取部位的血管舒张作用.[结果]在11个组分中只有组分6和11(终浓度0.4,0.8,1.2,1.6,2.0 mg/mL)可浓度依赖性舒张去甲肾上腺素收缩的离体血管.[结论]杜仲提取部位6和11富含杜仲中舒张血管的有效成分.
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杜仲的血清药物化学研究
目的 对杜仲Eucommia ulmoides进行血清药物化学研究.方法 采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,通过比较杜仲提取物、给药组及空白组大鼠血清的指纹图谱,确定口服杜仲提取物后大鼠血中移行成分.结果 给药组大鼠血清指纹图谱与空白组血清指纹图谱对比有明显不同.含药血清中出现7个移行成分,与杜仲提取物指纹图谱在相同保留时间出峰,为原型成分.采用对照品对照,确定5个色谱峰所表征的化学成分为原型吸收入血成分,依次为京尼平苷酸、原儿茶酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷.通过查阅文献,推断了2个色谱峰所表征的化学成分可能为1-羟基松脂醇二葡萄糖苷、杜仲醇.结论 血中移行成分可能为杜仲的体内直接作用物质,为明确杜仲药效物质基础提供了科学依据.
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杜仲胚轴、子叶直接诱导不定芽及再生体系的建立
目的 探索杜仲胚轴、子叶不定芽诱导条件,建立杜仲再生体系.方法 分别以杜仲种胚、胚轴切段、子叶切段、芽为外植体,将它们接种到一系列含有不同激素质量浓度的培养基中.结果 在外植体的选择上,胚轴优于子叶.对于杜仲胚轴的伸长生长,以MS培养基附加2.0 mg/L GA效果好.在含有0.1 mg/L NAA及0.8 mg/L 6-BA的MS培养基中,杜仲胚轴可直接诱导产生不定芽,诱导率达到47%.在壮芽及生根培养中,分别采用附加1.0 mg/L6-BA、0.1 mg/LNAA的MS培养基及附加1.5 mg/L IBA、20 mg/L蔗糖的1/2 MS培养基效果好,经28、14 d,芽苗生长系数及生根率分别达到2.48和91.7%.结论 建立了稳定高效的杜仲再生体系,为外源基因导入杜仲奠定了基础.
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杜仲板皮和枝皮中4种有效成分差异性比较
目的 采用RP-HPLC法测定杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷的量.方法 采用Cosmosil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液进行梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,检测波长208 nm,柱温25℃.结果 杜仲板皮中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷量大于枝皮,枝皮绿原酸、京尼平苷量大于板皮;在不同产地来源上,杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷平均质量分数有一定差异性.结论 该方法简便、快速、准确可靠,为更全面合理科学地对杜仲药材质量的评价提供了技术支撑.
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超高效液相色谱法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷
目的 建立超高效液相色谱法(UPLC)测定杜仲中主要活性成分松脂醉二葡萄糖苷(pinoresinol diglu-coside,PDG)的方法.方法 采用Acquity C,gBEH(1.0 mm×100 mm,1.7 pm)UPLCTM色谱柱,以乙腈-水为流动相,使用Waters Acquity UPLC system进行测定.结果 PDG的线性范围为4.655～465.5μg,R2=0.999 9,平均回收率为99.4写,RSD=1.7%.结论 本方法准确、简便、高效、重现性好,可用于杜仲中PDG的定量测定.同时UPLC在分析强保留、高分离度要求、成分复杂、大批量的样品时具有非常明显的优势,尤其适合对中药复杂体系的分析.
关键词： 超高效液相色谱法(UPLC) 杜仲 松脂醉二葡萄糖苷 -
杜仲叶和果实中内生真菌的分离及抑菌活性
目的 从杜仲Eucommia ulmoides叶和果实中分离具有抑菌作用的内生真菌.方法 采用平板培养法从杜仲叶片和果实中分离内生真菌,通过对峙法和生长速率法考察这些内生真菌的抑菌活性,并通过HPLC法考察其具有代谢产生杜仲有效活性成分的能力.对具有良好抑菌效果和能够代谢杜仲活性成分的内生真菌进行ITS序列测定,鉴定其归属.结果 从健康叶片和果实中分离到52株内生真菌,其中2个菌株的提取液中含有绿原酸,11个菌株至少对4种病原菌具有抑制作用,其中29号菌株(链格孢属Alternaria sp.)对芽孢杆菌Fusarium graminearum的抑制效果好,其抑制率高达82.6％.通过与GenBank数据比对,这些内生真菌分别属于链格孢属Alternaria、黑孢属Niqrospora和座囊菌纲(Dothideomycetes).结论 从杜仲叶和果实中分离到11株具有抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业.
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基于ITS2序列的杜仲及其主要混伪品的鉴定
目的 分析杜仲及其混伪品的ITS2条形码序列,探讨杜仲及其混伪品鉴定的新方法,为杜绝市售商品药材混乱现象提供技术支撑.方法 提取样品DNA,利用PCR方法对样品进行核基因ITS2片段扩增,采用DNA克隆测序技术对ITS2基因进行双向测序,所得序列经Seqman程序拼接后,用软件MEGA 4.1进行相关数据分析,并构建邻接(Nighbor-joining,NJ)树.利用网站已建立的ITS2数据库预测ITS2二级结构.结果 杜仲种内大K2P遗传距离远远小于其与混伪品的种间小K2P遗传距离；由构建的系统聚类树图可以看出,不同来源的杜仲样品聚成一支,表现为单性系,并与其他混伪品明显分开；比较ITS2二级结构发现,杜仲与其混伪品在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异.结论 ITS2序列作为DNA条形码可以有效地鉴别杜仲及其混伪品,为其种质资源鉴定及临床安全用药提供了重要分子依据.
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高产绿原酸杜仲细胞悬浮培养体系优化研究
目的 优化杜仲细胞悬浮培养及其产绿原酸的条件.方法 研究基本培养基种类、激素质量浓度、碳源种类及质量浓度、pH值、接种量和摇床转速等因素对杜仲细胞生长和绿原酸产量的影响,建立了高产绿原酸的悬浮细胞培养体系.结果 B5培养基+0.5 mg/L,NAA+0.6 mg/L 6-BA、蔗糖30 g/L、初始pH 5.0～5.5、接种量20g·FW/L以及摇床转速110 r/min为杜仲细胞悬浮培养的适合条件.结论 优化后的培养条件为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础.
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HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷
目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据.方法 采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～7 min,7％ A; 7～35 min,14％A; 35～45 min,15％A.体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃.结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1025～0.5125 (r=0.9999)、0.0925～0.4625(r=0.9999)、0.1200～0.6000(r=0.9996)、0.0900～0.4500 μg/mL (r=0.9998)内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97％、98.71％、98.20％、100.44％,RSD分别为1.54％、1.30％、0.76％、1.13％.结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据.
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杜仲超微粉体理化特性及体外溶出性能研究
目的 研究杜仲Eucommia ulmoides不同粒径粉体理化特性及体外溶出行为的差异,为杜仲超微粉体的粒径控制与应用提供实验依据.方法 采用超微粉碎机制备杜仲不同粒径的超微粉体,激光粒度仪测定粉体的粒径,显微镜观察显微结构,通过破壁率来衡量超微粉碎的破壁效果;利用HPLC法测定不同粒径粉体有效成分提取效率及在不同溶出介质的溶出度.结果 杜仲超微粉体在显微结构、破壁率、休止角及堆密度等方面与普通粉体差异显著;超微粉体的提取率以及在水、人工胃液、人工肠液中有效成分的溶出度均高于普通粉体.结论 适度的微粉化能提高杜仲细胞破壁率,促进杜仲有效成分的溶出,其溶出度还受到溶出介质的影响,超微粉碎技术应用于杜仲具有可行性.
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不同提取工艺对金银花中绿原酸提取率的影响
绿原酸为众多中药材(如:金银花、茵陈、杜仲等)中抗菌、消炎利胆的主要有效成份[1].绿原酸的提取方法较多,目前主要有水提醇沉法、水提石灰乳沉淀法、醇提铅盐沉淀法、聚酰胺柱层析法、超滤法等[2].本实验比较水提醇沉法及超滤法对金银花中绿原酸提取率的影响,以确定佳提取方法.
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导数光谱法测定疏风定痛丸中士的宁的含量
疏风定痛丸是由马钱子、麻黄、乳香、没药、千年健、自然铜、杜仲等15味中药制成的复方蜜丸制剂[1].
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双水相气浮溶剂浮选法分离富集杜仲叶中京尼平苷酸
目的 采用乙醇/NaH2PO4双水相气浮溶剂浮选技术,结合响应曲面法对杜仲叶中京尼平苷酸进行分离富集研究.方法 考察了无机盐种类和用量、有机溶剂的种类和用量、粗提液加入量、空气体积流量和浮选时间对京尼平苷酸浮选效果的影响,在单因素试验基础上,选择NaH2PO4质量分数、乙醇体积分数和空气体积流量为实验因素,采用Box-Behnken中心组合设计进行优化实验,确定京尼平苷酸的优浮选工艺,并进行100倍放大研究.结果 在28％ NaH2PO4、23％乙醇双水相体系中,加入5 g粗提液,当空气体积流量为40 mL/min,浮选时间为20 min时,京尼平苷酸浮选效率佳,达到97.88％,富集倍数达到27.34.100倍放大后,京尼平苷酸的浮选效率达到95.60％,RSD为0.77％.结论 乙醇/NaH2PO4双水相气浮溶剂浮选体系对京尼平苷酸的浮选效率高,富集倍数大,为杜仲叶中环烯醚萜类活性成分分离富集提供了一种有效的新方法.
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RP-HPLC法测定知母黄柏药对中新芒果苷、芒果苷和盐酸小檗碱
知母与黄柏是临床常用药材,等量伍用,相互促进.滋阴、清热退烧、泻火解毒、除湿益彰,出自李东垣《兰室秘藏》,在经典方剂滋肾通关丸、知柏地黄丸、大补阴丸、杜仲丸、太极丸、参归益元汤、虎潜丸、保真汤、神龟滋阴丸、正气汤等中多有体现.
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固相萃取分离纯化杜仲中环烯醚萜类化合物
杜仲是我国传统的名贵药材,有补肝降压、增强免疫功能及抗癌、抗疲劳等多种药理作用[1,2].药理研究表明,杜仲中的京尼平苷、京尼平苷酸等环烯醚萜类化合物是主要的降血压活性成分,而其中的桃叶珊瑚苷却具有升高血压的作用[3,4].
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女宝胶囊的显微特征与薄层色谱鉴别
女宝胶囊质量标准收载于<中华人民共和国卫生部药品标准>中药成方制剂第五册.处方由人参、川芎、鹿胎粉、银柴胡、牡丹皮、阿胶、龟甲、鳖甲、白芍、肉桂、白术、泽泻、杜仲、荆芥穗、鹿茸等45味中药组成,标准中只有工艺制法及检查项.本实验采用显微观察,对荆芥穗、白芍、人参、杜仲、泽泻、白术、肉桂、鹿茸8味药进行显微鉴别,采用薄层色谱法对处方中的人参、白芍、白术贵重药进行定性鉴定.
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杜仲中活性成分的分布及其累积动态变化规律的研究
目的研究产地、生长季节及采后处理方式对杜仲皮、叶中5种主要生物活性成分含量的影响.方法利用HPLC法测定杜仲皮、叶中5种主要生物活性成分的含量.结果不同产地的杜仲皮、叶其生物活性成分含量相差悬殊,且同一产地的杜仲皮、叶中各种主要生物活性成分的含量没有一定相关性,并不随其他成分含量的增加而增加.杜仲中生物活性成分含量随季节变化而变化,杜仲皮、叶的佳采收季节分别为4,5和7月,且采收后的杜仲皮、叶应及时处理使酶失活,避免自然干燥过程中胞内酶分解活性成分.此外,杜仲皮和叶中生物活性的含量差异很大,但有一定的互补性.结论产地、生长季节及采后处理方式对杜仲皮、叶中5种主要生物活性成分含量的影响很大,且不能简单的以叶代皮.
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杜仲露天新法土插研究
杜仲露天新法枝插技术[1],解决了杜仲枝插难以成活或不能成活的难题,杜仲露天新法土插初试成功,既改进了插穗切口封闭技术,又改砂床为土床,降低了成本,减少了投资,使杜仲露天新法枝插技术更具有实用性及可推广性.
