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外周血DNA提取方法的比较
快速、经济地从外周血或组织中提取高产量、高纯度的DNA,对于疾病的分子水平研究非常重要.目前基因组DNA的提取方法较多,如酚/氯仿、尿素提取法、氯化锌法[1]、三乙醇月桂基硫酸盐(TLS)法、碘化物法[2]、直接煮沸法等等,但也都有其不足之处.通过长期试验,我们建立了一种采用氯化钠高盐沉淀法提取外周血基因组DNA的方法,并与其他几种方法做了比较研究.
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西宁地区自来水中90Sr、1377Cs放射性水平
为促进西宁地区水系的综合开发和利用,保证生活饮用水质量,于1992~1996年按卫生部卫生监督司的监测方案[1]对西宁地区自来水中90Sr和137Cs的放射性水平进行了连续监测.一年采样两次(枯水期、丰水期),在定点管网末梢采集.采样方法:先放水数分钟,分别用两个(取平行样)10 L的样本瓶取10 L水,静置24 h以上,锶、铯分离后制成试样.检测方法均为国标法,90Sr为发烟硝酸法,137Cs为碘铋酸盐沉淀法.测量仪器为BH1216低本低α、β测量仪,仪器β探测下限为2.66×10-3Bq.
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不同提取工艺对金银花中绿原酸提取率的影响
绿原酸为众多中药材(如:金银花、茵陈、杜仲等)中抗菌、消炎利胆的主要有效成份[1].绿原酸的提取方法较多,目前主要有水提醇沉法、水提石灰乳沉淀法、醇提铅盐沉淀法、聚酰胺柱层析法、超滤法等[2].本实验比较水提醇沉法及超滤法对金银花中绿原酸提取率的影响,以确定佳提取方法.
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凝块分离双缩脲比色测定纤维蛋白原的改进方法
当前纤维蛋白原(Fib)的测定方法甚多,按其测定的原理大体上可分为三大类:热/盐沉淀法、可凝固蛋白法(功能法)和免疫学方法[1].凝块分离双缩脲比色法是卫生部医政司编印的<全国临床检验操作规程>(下称<规程>)推荐的方法[2],属于可凝固蛋白法.我们将其与参考方法--Jocobsson法和冯·克劳斯(von Clauss)法作了比较,探讨其实用性和可靠性,同时对方法本身进行了部分改进.
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几种线粒体DNA提取方法的比较
目的:将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到方便快速提取线粒体DNA的方法.方法:采用健康成年雄性Wistar大鼠,取回肠上皮细胞样本18 份,每份含3×10?6细胞,每6份分别用碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法提取线粒体DNA ,紫外分光光度法定量.再用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase 6亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA.结果:3种方法提取线粒体DNA量差别明显:改进高盐沉淀法量多,为(1.26±0.23) μg;碱变性法次之,为(0.52±0.18) μg;Triton法为 (0.31±0.16) μg.A260/A280均大于1.7.说明改进高盐沉淀法提取线粒体D NA具有操作简单,产量多的优点.将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNA ATPase 8亚基基因序列,说明该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序.讨论和结论: 线粒体在细胞凋亡,衰老及程序化死亡中发挥重要作用.已在多种疾病中发现mtDNA突变.对线粒体疾病的分子遗传机理的研究可以进一步阐明这些疾病的病因,并为治疗提供理论指导.胡义德、Tamura和Palva等用碱变性法提取了人血白细胞、心肌等组织中mtDNA;戴纪刚等建立的Triton法先除去细胞核,再分离提取胞浆中mtDNA.而高盐沉淀法通过SDS(十二烷基硫酸钠)破坏细胞膜、核膜,使蛋白质变性,从而游离出核酸,EDTA抑制细胞中DNA酶的活性, 蛋白酶K进一步将蛋白质降解成小肽,加入饱和乙酸钠后,绝大部分线性大分子量DNA和蛋白质在SDS作用下变性形成沉淀,环状mtDNA仍为自然状态,通过高速离心,即可得到mtDNA.3种方法各有优缺点:碱变性法操作时间较短,要求条件比较严格,不易重复; Triton法通过核质分离提取mtDNA操作时间短,但产量低,易降解.而高盐沉淀法操作简单,易重复 ,产量多,可依需用量扩大反应体系,使mtDNA质量得以容易控制.