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头孢米诺等抗菌药物对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及拟杆菌属的体外抗菌活性
目的 比较头孢米诺等抗菌药物对临床分离大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、拟杆菌属的体外抗菌活性.方法 琼脂稀释法测定16种抗菌药物对来自全国15家教学医院的945株大肠埃希菌和588株肺炎克雷伯菌的MIC值以及4种抗菌药物对50株拟杆菌属的MIC值.WHONET 5.4软件进行药敏数据统计分析.结果 1 533株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,不产超广谱β内酰胺酶(extended spectrum beta lactamases,ESBLs)和AmpC 628株,837株仅产ESBLs,68株产AmpC.头孢米诺对不产ESBLs或单产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌敏感率均高于90%,其MIC_(50)较头孢美唑低2～4倍,较头孢西丁低8～16倍;MIC90较头孢美唑低2～8倍,较头孢西丁低8～16倍.对单产ESBLs的菌株,头孢米诺体外抗菌活性优于第三、四代头孢菌素、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南、左氧氟沙星和阿米卡星,劣于碳青霉烯类药物,活性与哌拉丙林/三唑巴坦相仿.但对产AmpC的菌株,头孢米诺的敏感率低于20%.头孢米诺对拟杆菌属的敏感率为90%,高于头孢美唑(50%～70%)和青霉素(0%),活性与甲硝唑相仿.结论 头孢米诺对产ESBLs及非产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌以及拟杆菌属有良好的体外抗菌活性,提示头孢米诺可为临床治疗此类菌株感染提供一种选择.
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Bacteroides coprocola菌 β-葡萄糖苷酶基因的表达纯化及活性测定
目的 构建一种拟杆菌Bacteroides coprocola(BC)β-葡萄糖苷酶基因的原核表达载体,并纯化该 β-葡萄糖苷酶,检测其水解不同底物的能力.方法 以NCBI数据库中提供的BC菌 β-葡萄糖苷酶基因序列为参考,合成出该基因的全长序列,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-4T-1中;以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;SDS-PAGE和Western印迹检测 β-葡萄糖苷酶基因的表达,并通过不同底物检测其活性及比较各法的优劣.结果 PCR扩增结果与双酶切实验表明,原核表达载体构建成功;Western印迹结果显示,β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中特异表达;酶活性实验表明,该菌 β-葡萄糖苷酶在对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(4′-nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside,pNPG)和京尼平苷(geniposide)中均有活性,且用pNPG作为底物测定的活性结果更可靠.结论 用两种底物成功检测出纯化的BC菌 β-葡萄糖苷酶的活性,为进一步研究其功能奠定了基础.
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乙肝肝硬化患者肠道微生物元基因组学的研究
目的 比较分析乙肝肝硬化患者与正常人远端肠道微生物群的差异,探讨乙肝肝硬化与肠道微生物群变化的关系.方法 选取11例乙肝肝硬化患者及20例正常人,提取其肠道微生物元基因组,采用高通量Solexa测序方法,通过基因比对、主成分分析、属种定量及功能代谢组成等生物信息学分析方法,找出疾病相关的属种和基因信息.结果 与结论属种定量及组成分析发现,乙肝肝硬化患者存在不同程度的肠道菌群失调,表现为肠杆菌科(尤其是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和志贺菌属)以及韦荣球菌属富集(P<0.05),拟杆菌属缺失(P<0.05);功能及代谢分析发现,乙肝肝硬化患者富集较多的执行氨基酸和碳水化合物膜转运及代谢功能的基因.
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实时荧光定量PCR法研究结直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化
目的 通过研究结、直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化,揭示肠道相关菌群改变在大肠癌发病中的作用及意义.方法 收集术前结、直肠癌患者粪便标本40例及正常对照标本40例,根据细菌的靶基因序列设计特异性引物.提取待测粪便标本细菌DNA,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR测定不同细菌的数量.结果 正常对照组与实验组粪便中细菌数量分别为拟杆菌属(8.76±0.77; 9.85±0.88)、梭杆菌属(7.94±1.25; 10.0±1.65)、梭菌属(3.54±0.70; 6.56±0.68),拟杆菌属中的脆弱拟杆菌为(2.12±0.48; 4.07±1.77)、梭杆菌属中的坏死梭杆菌为(2.31±0.26; 7.62±2.68)及梭菌属中的肉毒梭菌为(2.76±1.16; 5.43±1.21),实验组数量均明显增多(P<0.05).结论 结、直肠癌患者粪便中拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属的数量较正常对照明显增多,提示结、直肠癌的发生发展与肠道菌群有明显关系.
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结肠癌手术对肠道菌群微生态的影响
目的 观察结肠癌手术处理对肠道菌群微生态的影响.方法 收集手术前后结肠癌患者的粪便标本60份,采用实时荧光定量PCR法检测肠道拟杆菌属、梭杆菌属及梭菌属量的变化.结果 手术前后粪便中细菌数量分别为:拟杆菌属(9.64±0.58 vs.6.21±0.37),梭杆菌属(9.87±0.72 vs.6.36±0.68),梭菌属(7.01±0.37 vs.5.30±0.29);拟杆菌属中的脆弱拟杆菌为(5.92±0.24 vs.3.24±0.78),梭杆菌属中的坏死梭杆菌为(7.12±0.97 vs.3.70±1.21),梭菌属中的肉毒梭菌为(5.68±0.36 vs.1.52±1.06),艰难梭菌为(3.45±0.38 vs.1.42±0.25).术后患者粪便中细菌数量明显低于术前,P均<0.05.结论 结肠癌患者粪便中拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属术后数量较术前明显降低,提示手术对肠道菌群有一定抑制.
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氧化苦参碱对牙龈卟啉菌内毒素作用下人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响
目的 研究氧化苦参碱对牙龈卟啉菌内毒素(Pg-LPS)作用下人牙周膜细胞(PDLC)碱性磷酸酶(ALP)的活性及其表达的影响. 方法 采用细胞培养技术分离PDLC,对照组为仅含1％胎牛血清的细胞培养液,实验组分别加入不同浓度的氧化苦参碱溶液和Pg-LPS.采用细胞培养技术和酶联免疫、实时荧光定量RT-PCR技术,观察Pg-LPS对PDLC的ALP活性及其表达的影响. 结果 在25 μg/mL的Pg-LPS作用下,PDLC的ALP活性及其表达明显减低,加入一定浓度的氧化苦参碱溶液后,PDLC的ALP活性及其表达有一定程度恢复. 结论 氧化苦参碱可以减轻Pg-LPS对PDLC的破坏,对Pg-LPS抑制PDLC的ALP活性及其表达的现象具有拮抗作用.
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大黄牡丹汤对肠道菌群的体外作用
[目的]观察大黄牡丹汤对肠道菌群结构及功能的影响.[方法]分别采用16S rDNA测序法、平板计数法和气相色谱法考察大黄牡丹汤对肠道菌群及其分泌短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)功能的影响.[结果]16S rDNA测序结果表明拟杆菌属、埃希菌属细菌明显减少,乳杆菌属、乳球菌属、变形菌属细菌增多.平板计数结果表明大黄牡丹汤能显著抑制脆弱拟杆菌体外增殖(P＜0.001).气相色谱法检测结果表明大黄牡丹汤可显著抑制SCFAs的分泌(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001).[结论]肠道菌群及其代谢产物可能是大黄牡丹汤发挥药效的靶点.
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艾滋病患者与正常人群肠道拟杆菌属变化的研究
目的：应用实时荧光定量 PCR 技术研究艾滋病患者及正常人肠道拟杆菌属的变化，揭示艾滋病对肠道微生态的影响及其在发病中的作用。方法：收集艾滋病患者（艾滋病组）及正常人（正常对照组）各30例的粪便。根据细菌的靶基因序列设计特异性引物，提取粪便细菌 DNA，应用实时荧光定量 PCR 测定拟杆菌属中6种细菌的数量。结果：正常对照组与艾滋病组粪便中脆弱拟杆菌为[3．23±1．59；4．05±1．65（单位：logN /0．5 g 湿便，下同）]，单形拟杆菌为（5．69±0．95；6．70±2．18），多形拟杆菌为（5．01±1．61；6．41±2．34），卵形拟杆菌为（5．78±1．03；7．07±1．75），吉氏拟杆菌为（4．21±1．21；5．53±2．46），普通拟杆菌为（2．92±1．30；4．48±1．32），艾滋病组较正常对照组数量均明显增多，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论：艾滋病患者肠道拟杆菌较正常对照组增多，提示了艾滋病患者肠道微生态紊乱，为下一步研究及临床诊断治疗提供了理论依据。
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 拟杆菌属 实时荧光定量 PCR
