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松酯醇二葡萄糖苷对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究
目的：探讨松酯醇二葡萄糖苷对Wistar大鼠脑缺血再灌注损伤模型的保护作用及机制。方法：将48只Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤模型组、PD大剂量组、PD小剂量组。假手术组过程相同但不进行夹闭，模型组、PD大、小剂量组在脑缺血45 min后分为两小组，分别再灌注2 h、24 h 后处死大鼠。结果：与假手术组比较，模型组脑组织MDA含量明显升高，SOD活性明显降低(P＜0.05)；PD大、小剂量组与模型组比较，大鼠脑组织中的MDA含量降低明显，SOD活性升高明显(P＜0.05)。结论：松脂醇二葡萄糖苷可通过提高自由基清除率及抗脂质过氧化作用来减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。
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松脂醇二葡萄糖苷对人皮肤成纤维细胞胶原蛋白分泌机制的研究
目的：观察松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucoside, PDG)对人皮肤成纤维细胞ESF-1细胞胶原蛋白分泌的基因调控作用，探讨PDG对烧伤皮肤的修复机制。方法体外培养细胞按随机数字表法分为空白组，雌二醇组，PDG高、中、低剂量组。PDG高、中、低剂量组分别加入100、10、1μmol/L的PDG溶液，雌二醇组加入10-3μmol/L的雌二醇。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用RT-PCR技术测定细胞中Ⅰ型胶原蛋白(collagen I, Col I)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase, TIMP)-1、TIMP-2、MMP-1mRNA表达水平。结果与空白组比较，雌二醇组、PDG 中剂量组ESF-1细胞增殖率[(0.559±0.027)、(0.552±0.034)比(0.489±0.027)]升高(P＜0.05)；雌二醇组与PDG中、低剂量组细胞ColⅠ[(0.958±0.021)、(0.929±0.031)、(0.916±0.015)比(0.844±0.022)]、Col Ⅲ[(0.783±0.038)、(0.918±0.021)、(0.855±0.017)比(0.678±0.024)]、TIMP-1[(0.939±0.025)、(0.889±0.036)、(0.853±0.015)比(0.780±0.023)]、TIMP-2[(0.507±0.024)、(0.655±0.037)、(0.572±0.025)比(0.405±0.062)]mRNA 表达水平升高(P＜0.05或 P＜0.01)， MMP-1[(0.343±0.038)、(0.407±0.046)、(0.435±0.037)比(0.519±0.041)]mRNA表达水平下降(P＜0.05或P＜0.01)。结论 PDG可提高ESF-1细胞的增殖活性，促进相关胶原蛋白和TIMP的表达，抑制MMP的表达，减少胶原的降解，从而发挥修复烧伤皮肤的作用。
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杜仲及盐杜仲饮片的均匀化分析
目的:通过筛选粉碎工艺得到均匀性佳的杜仲及盐杜仲粉末,以期将其分别作为杜仲、盐杜仲饮片质量评价的标准对照品.方法:依据不同粉碎方式下杜仲、盐杜仲饮片粉末的显微观察和粒径分布,并参考已上市的杜仲对照药材粉末粒径分布,确定超微粉碎为杜仲、盐杜仲饮片的粉碎方式;近红外技术结合色彩色差计、有效成分的HPLC含量测定对杜仲、盐杜仲饮片的光谱差异、外观颜色、内在有效成分含量3个方面进行考察,以比较饮片的均匀性.结果:超微粉碎30 min所得杜仲、盐杜仲饮片粉末较细,流动性较好,其光谱整体偏差分别为0.002和0.001,总色值的RSD分别为0.5％和0.4％,松月旨醇二葡萄糖苷含量的RSD均为2.3％.结论:超微粉碎30 min为杜仲、盐杜仲饮片的佳粉碎工艺,为杜仲、盐杜仲饮片的均匀化技术规范制定提供参考依据.
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基于大鼠离体外翻肠囊模型考察杜仲提取物在正常和自发性高血压状态下的肠吸收特性差异
目的:研究杜仲提取物在正常大鼠和自发性高血压大鼠的肠吸收特性差异.方法:采用大鼠外翻肠囊模型,收集10.0 g·L-1杜仲提取物给药后不同时间点的肠囊液,通过UPLC-MS/MS检测肠吸收液样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷7个成分的含量,计算累积吸收量和吸收速率常数,比较正常大鼠和自发性高血压大鼠肠吸收液中杜仲提取物各指标成分的吸收情况.结果:杜仲提取物中7种成分的肠吸收均为线性吸收(R2均＞0.99),主要吸收部位在小肠,正常状态下以十二指肠的吸收好.原儿茶酸和松脂醇二葡萄糖苷在高血压状态下的空肠有更好吸收,提示病理状态可能会改变药物吸收的特定部位.7个指标成分在SHR模型的肠吸收与正常大鼠相比均表现出了不同程度的差异.京尼平苷酸在自发性高血压大鼠各肠段的吸收弱于正常大鼠,但以松脂醇二葡萄糖苷为代表的其他成分都没有表现出一致的吸收趋势.结论:自发性高血压会影响杜仲提取物的肠吸收,从肠黏膜通透性降低和吸收部位后移的角度无法完全解释这些差异,可能还与肠道中存在的酶和转运蛋白等相关,具体作用机制有待进一步的深入研究.
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杜仲不同加工方法对其质量的影响
目的 研究杜仲的不同加工方法对其质量的影响.方法 通过杜仲粗皮占杜仲干燥树皮的质量分数及去粗皮前后浸出率的比较,粗皮与杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量、农药残留量及重金属含量的比较,新鲜树皮发汗前后松脂醇二葡萄糖苷含量的比较等进行研究.结果 粗皮占杜仲干燥树皮质量分数为12.7%(n=3);去粗皮前后的醇溶性浸出率没有显著性差异,水溶性浸出率比未去粗皮高11.26%(P＜0.05,n=5);粗皮残留有害物质较高而含松脂醇二葡萄糖苷较少(0.0504%,n=3);发汗前后松脂醇二葡萄糖苷含量:未发汗生品＞未沸水浸发汗样品＞沸水浸发汗样品,三者之间均有显著性差异(P＜0.05,n=5).结论 杜仲在原产地加工中"去粗皮"是必要的.值得注意的是:"发汗"后松脂醇二葡萄糖苷的含量却下降.
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RP-HPLC同时测定三圣汤及其固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量
目的建立同时测定三圣汤固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的高效液相色谱方法。方法采用 Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.4%冰醋酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长277 nm,柱温40℃。结果样品中松脂醇二葡萄糖苷的线性范围为5.0～50.0μg,r＝0.9999(n＝6)；绿原酸的线性范围为5.4～54.0μg,r＝0.9996(n＝6)。二者的平均加样回收率分别为98.75%、101.11%,RSD分别为1.39%、2.69%。结论所建立的方法准确、可靠。三圣汤固体汤剂中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量高于三圣汤汤剂。
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杜仲药材含量测定方法的研究分析
目的:对中国药典中杜仲药材的含量多种测定方法进行研究与分析.方法:利用HPLC法测定松脂醇二葡萄糖苷的含量为指标,采用多因素筛选药物的渐变提取方法,并进行了方法学验证.结果:用体积分数50%的甲醇为提取溶剂,提取时间为40min,超声直接提取药材即可达到准确快速便捷的测定目的.结论:杜仲药材可用甲醇作为提取溶剂,超声处理40min,以乙腈-0.5%甲酸的水溶液(12:88)作流动相测定含量,方法简便实用.
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近红外漫反射法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量
目的:用近红外光谱技术快速测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量.方法:选取了3个不同产地的41个杜仲样品,用高效液相色谱法测定其松脂醇二葡萄糖苷含量,用近红外光谱仪漫反射方式在12000-4000 cm-1采集相应样品的光谱,利用仪器自带的OPUS软件优选了光谱的预处理方法,并用偏小二乘法(PIS)建立松脂醇二葡萄糖苷含量和光谱数据之间的相关性模型.结果:对光谱进行一阶导数和减去一条直线相结合处理后,在7502～4597.6 cm-1能有效地提取光谱中的信息,经交叉验证后校正集相关系数(R2)为0.9264,校正集标准偏差(SEC)为0.029,预测集标准偏差(SEP)为0.026.结论:杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量和近红外光谱之间存在良好的相关性,适合于此中药指标性成分的快速分析.
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基于入血成分的杜仲药材的含量测定
建立杜仲药材中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷3种原型入血成分的含量测定方法.采用LC-MS/MS检测技术确定大鼠灌胃杜仲提取物后吸收入血的药物成分,结合高效液相色谱技术检测23批杜仲样品中入血成分的含量.结果表明,大鼠口服杜仲提取液后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷均以原型入血;以杜仲药材中的京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖为对照品建立的含量测定方法线性范围良好,平均回收率分别为98.69％,100.8％,98.39％.该方法简便可行、回收率和重复性良好.
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HPLC同时测定天钩胶囊中4种有效成分的含量
目的:建立同时测定天钩胶囊中天麻素、黄芩苷、丹皮酚、松脂醇二葡萄糖苷的HPLC方法.方法:采用Sino-Chmm ODS-BP柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长230nm,流速1.0mL·min-1,柱温30℃.结果:天麻素、黄芩苷、丹皮酚、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1168～1.1680(r=0.9997),0.1142～1.1420(r=0.9994),0.0512～0.5120(r=0.9998),0.0556～0.5560μg(r=0.9995)线性关系良好,平均加样回收率分别为100.3%(RSD0.53%),99.96%(RSD1.2%),99.90%(RSD1.2%),99.97%(RSD1.6%).结论:所建立的方法简单、准确、可靠,重复性好,可用于天钩胶囊的质量控制.
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松脂醇二葡萄糖苷对光老化HDF细胞ER/TGF-β1/Smads信号通路的调控机制
目的 从分子生物学水平探讨杜仲中松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对光老化人真皮成纤维细胞(HDF)ER/TGF-β1/Smads信号通路的调控机制.方法 建立以长波紫外线模型损伤HDF细胞.给予不同浓度PDG和通路阻断剂进行干预,用MTT检测细胞增殖率,Real time-PCR和Western blot法检测各组细胞内含有的信号转化生长因子(TGF-β1)、转导分子(Smad3)、I型胶原(COL1A1)对应mRNA和蛋白的表达.结果 与空白组比较,模型组增殖率及TGF-β1、Smad3、COL1A1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组增殖率和TGF-β1、Smad3、COL1A1 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01);与PDG高浓度组比较,TGF-β1、Smad3、ER三个阻断剂组相对应的TGF-β1、Smad3和COL1A1相应mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01).结论 PDG能增加HDF细胞TGF-β1、Smad3、COL1A1对应mRNA和蛋白表达,对光老化HDF细胞胶原合成有促进作用;但这种作用能被TGF-β1、Smad3和ER阻断剂所抑制,PDG促进胶原合成的作用机制可能与ER/TGF-β1/Smads信号通路有关.
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HPLC法测定补肾强筋胶囊中3种成分的含量
目的 建立测定补肾强筋胶囊中淫羊藿苷、柚皮苷及松脂醇二葡萄糖苷含量的HPLC法.方法 色谱柱为SHIADZU VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速:1.0 ml ·min-1,柱温:30℃,检测波长:277 nm.结果 淫羊藿苷、柚皮苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在4.2～104.4、1.7～42.5、5.5～137.5 μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好(r =0.9999);平均回收率分别为98.65％(RSD为1.4％)、98.47％(RSD为1.8％)、97.96％(RSD为1.6％).结论 所建方法可用于补肾强筋胶囊3种成分的含量测定.
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RP-HPLC法测定青娥丸提取物中松脂醇二葡萄糖苷含量
目的建立测定青娥丸提取物中松脂醇二葡萄糖苷含量的RP-HPLC法.方法青娥丸提取物用75%乙醇提取,经AB-8大孔吸附树脂纯化后,注入高效液相色谱仪.本法采用0DS分析柱为固定相,以甲醇-乙腈-水(24:3:78,V/V/V)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,紫外检测波长为227nm.结果松脂醇二葡萄糖苷的线性范围为5.5-170μg·mL-1(r＞0.9998),平均回收率99.3%.日内和日间精密度分别为1.3%和2.8%(n=5).青娥丸中松脂醇二葡萄糖苷的含量为0.446±0.012mg·g-1(n=10).结论本方法灵敏、准确,专属性强,适用于青娥丸及其他复方中药中松脂醇二葡萄糖苷的含量测定.
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高效毛细管电泳测定杜仲中桃叶珊瑚苷等5种指标成分的含量
目的 建立高效毛细管电泳法(HPCE)同时测定杜仲中桃叶珊瑚苷、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、哈巴苷和绿原酸含量的方法.方法 以60 mmol·L-1硼砂-20 mmol·L-1磷酸二氢钠-10％甲醇(pH 10.0)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为210 nm,毛细管温度为25℃,压力进样为5 kPa×6 s.结果 5种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.9973)；加样回收率为96.63％ ～ 103.73％,结果满意.结论 该方法简单、准确,重复性较好,可用于杜仲药材或饮片的质量评价和控制.
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松脂醇二葡萄糖苷大鼠胆汁内排泄研究
[目的]建立液质联用方法,同时测定胆汁中松脂醇二葡萄糖苷和其代谢产物松脂醇单葡萄糖苷的含量,研究两者在胆汁内排泄特征.[方法]大鼠灌胃给药松脂醇二葡萄糖苷的生理盐水溶液,并按照设定的时间点收集胆汁.以华法林单体为内标,建立液质联用分析方法,测定灌胃给药后大鼠胆汁中松脂醇二葡萄糖苷和其代谢产物松脂醇单葡萄糖苷的含量变化情况.[结果]松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷在8~5000 ng/mL范围内线性关系良好,日内精密度和日间精密度及其他方法学考察项RSD均符合生物样本定量要求.给药后松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的累积排泄量在给药之后不断增长,到6h后保持一个平稳状态;排泄速率在4h时到达顶峰,之后迅速降低,6h后保持一个较低的状态,实验后期大鼠排泄率有上升趋势.[结论]该方法符合生物样品检测要求,可用于松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的同时定量测量.
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杜仲板皮和枝皮中4种有效成分差异性比较
目的 采用RP-HPLC法测定杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷的量.方法 采用Cosmosil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液进行梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,检测波长208 nm,柱温25℃.结果 杜仲板皮中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷量大于枝皮,枝皮绿原酸、京尼平苷量大于板皮;在不同产地来源上,杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷平均质量分数有一定差异性.结论 该方法简便、快速、准确可靠,为更全面合理科学地对杜仲药材质量的评价提供了技术支撑.
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HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷
目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据.方法 采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～7 min,7％ A; 7～35 min,14％A; 35～45 min,15％A.体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃.结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1025～0.5125 (r=0.9999)、0.0925～0.4625(r=0.9999)、0.1200～0.6000(r=0.9996)、0.0900～0.4500 μg/mL (r=0.9998)内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97％、98.71％、98.20％、100.44％,RSD分别为1.54％、1.30％、0.76％、1.13％.结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据.
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右归饮HPLC指纹图谱研究及9种成分定量分析
目的 建立右归饮的HPLC指纹图谱,并同时测定9种成分(京尼平苷酸、莫诺苷、绿原酸、栀子苷、马钱苷、松脂醇二葡萄糖苷、甘草苷、芦丁和甘草酸)的量,为控制右归饮的质量提供依据.方法 采用Pursuit XRs 5 C18色谱柱(250min×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长230nm,柱温30℃.建立10批右归饮样品的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价;通过与各组方药味及对照品的保留时间和紫外光谱图比对,对共有峰进行归属和指认,并测定指认出的9个成分的量.结果 10批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.904;共标定30个共有峰,其中8个来自杜仲,8个来自甘草,6个来自山茱萸,2个来自附子,2个来自熟地黄,1个来自肉桂,山药及枸杞对共有峰贡献不明显,其中3个共有峰不能明确其来源;通过对共有峰进行指认,发现7号峰为京尼平苷酸、9号峰为莫诺苷、11号峰为绿原酸、12号峰为栀子苷、13号峰为马钱苷、14号峰为松脂醇二葡萄糖苷、18号峰为甘草苷、21号峰为芦丁及30号峰为甘草酸,并对这9种成分进行了定量测定,其定量测定结果分别为87.6～119.1 μg/g、323.6～365.6 μg/g、108.3～124.1 μg/g、79.5～85.0 μg/g、171.7～188.0 μg/g、163.0～238.3 μg/g、64.5～53.3 μg/g、159.8～168.5μg/g、72.8～83.6 μg/g.结论 所建立的右归饮HPLC指纹图谱及定量测定方法稳定性、重复性好,可为右归饮质量控制和评价提供参考.
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不同炮制方式对杜仲品质的影响
目的 对盐炙、酒炙、蜜炙、清炒、土炒等多种杜仲炮制方法进行比较,考察不同辅料炮制对杜仲品质的影响.方法 以松脂醇二葡萄糖苷等6种有效成分、醇溶性浸出物量和损耗率作为评价指标,采用权重系数综合评分比较不同辅料炮制对杜仲品质的影响.结果 辅料对杜仲炮制品的质量有显著影响,盐炙、清炒、酒炙和糯米炙法所得杜仲成品综合评分高于杜仲原药材,指标成分含量高、损耗少、浸出物得率高.结论 杜仲炮炙采用多的盐炙法、清炒法和制炭炮制方法所得炮制品质量较优,现今使用的炮制方法合理.
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Box-Behnken响应面法优化杜仲炮制工艺
目的:应用Box-Behnken响应面法优化杜仲炮制工艺参数.方法:以食盐浓度、炮制温度和炮制时间作为考察因素,以松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸含量作为评价指标,采用Box-Behnken响应面法考察了3个炮制工艺参数对松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸含量的影响.结果:炮制杜仲的佳工艺为:食盐浓度2.1％,炮制温度295℃,炮制时间15.0 min.采用佳炮制工艺参数炮制3批杜仲,松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸含量平均值分别为0.229％和0.069％.结论:应用Box-Behnken响应面法优化杜仲炮制工艺参数,预测结果良好.
关键词： 杜仲 炮制工艺 Box-Behnken响应面法 松脂醇二葡萄糖苷 绿原酸
