体外培养HSC作为筛选抗纤药物细胞模型的初步研究

目的:对比观察胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型和肝星状细胞Ⅰ型胶原(Co1-I)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPl)mRNA表达的改变以及复方861的作用,探讨建立体外培养HSC作为筛选抗纤药物细胞模型的可能性.方法:给雌性Wistar在鼠胆管内逆行性注入硬化剂加胆管结扎,制备胆管阻塞性肝纤维化模型.于术后7天给予复方861灌胃(3g/kg),共49天.以含0.25mg/ml复方861的培养液,培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞48h.以RT-PCR法观察大鼠肝组织和HSC-T6细胞Col-I和TIMP1 mRNA表达水平及复方861的影响.结果:胆管阻塞性肝纤维化模型组大鼠肝组织Col-I和TIMPl分别为0.616±0.100、1.691±0.646,明显高于假手术组(分别为0.144±0.071和0.720±0.301,P＜0.05);复方861组Col-I和TIMPI mRNA较模型对照组分别下降61%和49%(P＜0.05).HSC-T6细胞Col-I和TIMP mRNA分别为0.579±0.056、2.0292±0.671,以复方861培养48h后Col-I和TIMPl mRNA分别下降78%和50%(P＜0.05).结论:复方861可抑制胆管阻塞肝纤维化模型和肝星状细胞Col-I和TIMPl mRNA表达,体内外结果具有良好的一致性,提示体外培养HSC可作为筛选抗纤药物的细胞模型.

复方鳖甲软肝方对LPS刺激肾小管上皮细胞MMP9/TIMP1表达的影响

目的:研究复方鳖甲软肝方对肾小管上皮细胞LPS刺激不同时段表达MMP9、TIMP1的影响.方法:制备含药血清,将5%含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激24 h及48 h采用免疫组化及Western blot方法检测各组MMP9、TIMP1的表达.结果:LPS刺激肾小管上皮细胞12 h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24 h逐渐增强,48 h达到高峰上.复方鳖甲软肝方降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达.结论:复方鳖甲软肝方含药血清能抑制细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解,其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一.

Aim: To study the expression of MMP1 and TIMP1 in normal and radiation- combined wound healing and their effects on the healing process. Materials and Methods: A rat model of radiation - combined wound healing was used, and routine light microscopy, electron microscopy, immunohistochemistry, and in situ hybridization were used to detect the expression of MMP1 and TIMP1 during the healing process. Results:The wound healing process was impaired and delayed. In rats receiving 25Gy Gamma ray locally, the irradiated wounds healed 6 days later than non - irradiated controls. The following changes were found in the expression of MMP1 and TIMP1: ( 1 ) In the early inflammatory phase and in the period of granulation tissue formation, MMP1 expression was only slightly if at all affected in the newly - formed epidermis of irradiated wounds when compared with that in controls. Later, the epidermal expression of MMP1 in irradiated wounds was comparatively increased following the delayed healing process. 3 to 14 days after wounding, TIMP1 was weakly positive in proliferating keratinocytes of control group and became negative after epidermal covering, whereas no or only slight epidermal expression was detected in the irradiated group before epidermal covering. (2) The expression of MMP1 and TIMP1 in irradiated group was markedly decreased in fibroblasts, endotheliocytes and macrophages when compared to that in controls. The expression phase was prolonged due to the delayed healing process. Conclusions: It is concluded that the reduced expression of MMP1 and TIMP1 in granulation tissue retards such impertant processes as cell migration and angiogenesis, thus slowing the healing process. The expression of MMP1 in the newly - formed epidermis may help the process of reepithelialization, but in the late healing period, overexpression of MMP1 and decreased expression of TIMP1 in the epidermis may hinder the establishment of basal membrane and scar formation.

MMP9、TIMP1基因在原发性肝癌中的表达

目的 探讨MMP9、TIMP1基因在原发性肝癌中的表达状况及其对肝癌侵袭转移的影响.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测34例肝癌和相应癌旁组织及12例正常肝组织中MMP9、TIMP1 mRNA表达水平.结果 正常肝组织中MMP9仅有少量表达,与癌旁组织相比无显著差异;肝癌组织中MMP9表达明显升高,而TIMP1表达显著下降,两者表达状况呈负相关(P＜0.01),且两者在转移肝癌较未转移肝癌中表达水平亦有显著性差异(P＜0.05).结论 MMP9、TIMP1表达改变可能与肝癌侵袭转移的发生发展有一定关系.

侵袭性牙周炎的表观遗传学研究

目的 探讨侵袭性牙周炎的表观遗传学特征及相关基因表达特征.方法 收集重度侵袭性牙周炎女性患者36例及35名无牙周炎女性对照者的牙龈组织,采用标准酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取DNA.用甲基化敏感的限制性内切酶PCR法测定TIMP1基因的甲基化修饰情况,分析对照组与患者组基因表达的差异.结果 重度女性侵袭性牙周炎患组中两条X染色体上TIMP1基因都处于去甲基化状态的比例高于对照组,差异有统计学意义.结论 TIMP1基因表观遗传学特征改变可能与侵袭性牙周炎的易感性有关.

大面积急性脑梗死患者超敏C反应蛋白、MMP1、TIMP1含量动态观察

目的：观察不同面积急性脑梗死患者血浆超敏C反应蛋白、MMP 1、TIMP 1含量的动态变化，并探讨其临床意义。方法将入选的急性脑梗死患者按面积分组，将随机选取的30例大面积梗死组患者选择入组（大面积梗死组）。30例正常对照组选自本院健康体检者。2组患者在发病48 h内测定初次的血浆超敏C反应蛋白、MMP 1、TIMP 1含量，治疗到7、14 d时复查1次，进行统计学分析。结果大面积急性脑梗死患者初次血浆超敏C反应蛋白、MMP 1、TIMP 1含量均高于正常对照组（P<0.05）；治疗7、14 d时复查，大面积梗死组患者血浆超敏C反应蛋白、MMP 1、TIMP 1含量均有下降（P<0.05）。结论大面积脑梗死患者发病48 h内血浆超敏C反应蛋白、MMP 1、TIMP 1的含量升高，治疗14 d后均有下降，这种变化有助于综合评价脑梗死进展及预后，也有望为对急性脑梗死的治疗提供全新靶点。

加味茵陈四逆汤对实验性肝纤维化小鼠MMP1和TIMPs表达的影响

目的:观察预防性使用加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠肝组织中基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)基因表达的影响.方法:将48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组.30％ CCl4(1.5 mg/kg,溶解于橄榄油)腹腔注射建立肝纤维化模型,同时给予药物灌胃处理用药14 d后,各组行HE染色,观察肝脏病理组织学改变.RT-qPCR法检测MMP1、TIMP1和TIMP2 mRNA表达.结果:(1)病理结果显示模型组肝纤维化明显,中药高、中、低剂量组较模型组纤维化减轻;(2) MMP1 mRNA模型组表达量与正常组比较明显减少(P＜0.05),与阳性药物组、中药中剂量和低剂量组相较表达量同样明显减少(P＜0.05);(3) TIMP1 mRNA、TIMP2 mRNA模型组表达量比正常组明显增多(P＜0.05),与阳性药物组和中药中、低剂量组相较均表达量减少(P＜0.05).结论:加味茵陈四逆汤可上调肝纤维化小鼠MMP1表达,抑制TIMP1、TIMP2表达,发挥对肝纤维化的抑制作用.

保肝复功水煎剂对大鼠肝纤维化TGFβ1、TIMP1、MMP1表达的影响

目的:为了探讨保肝复功水煎剂抗肝纤维化的作用机理.方法:通过四氯化碳致小鼠肝损伤模型,利用基因芯片技术研究TGFβ1、MMP1及TIMP1在肝组织中的表达情况.结果:保肝复功水煎剂干预性治疗使实验组大鼠肝组织MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调.结论:保肝复功水煎剂在肝组织中具有明显使MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调的作用,从而促进了胞外基质的降解,抑制发挥肝纤维化的作用.

MMP-9及TIMP1与子痫前期相关性的研究进展

妊娠期高血压疾病是一种妊娠期特有疾病,其发生率目前已达10％,在发展中国家尤其高,是造成发展中国家孕产妇死亡的主要原因之一.其引起的死亡占到妊娠期和产褥期孕产妇死亡率的12％[1].其中子痫前期是目前引起孕产妇和围生儿发病及死亡率升高的主要原因,尤其是重度子痫前期,其病因和发病机制目前尚未完全明确,但有证据表明滋养细胞侵润功能受损,对子宫内膜及螺旋小动脉侵蚀过浅,导致胎盘缺血缺氧是子痫前期发生发展的重要因素[2].基质金属蛋白酶(MMPs)是人体内细胞外基质降解的有关酶,MMPs及其抑制物TIMPs是胎盘植入、胎盘形成及子宫螺旋动脉重铸等过程中的重要酶类,参与了子痫前期的发生发展.

MMP1和TIMP1表达与胃癌生物学行为的相关性研究

目的 探讨MMP1、TIMP1基因与胃癌临床生物学行为的关系.方法 采用半定量的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测60例人胃癌组织及其相应癌旁正常胃粘膜组织中MMP1和TIMP1 mRNA的表达.结果 60例胃癌组织中MMP1表达水平明显高于癌旁正常组织.胃癌组织中TIMP1表达水平明显低于癌旁正常组织(P均＜0.05).胃癌组织中,低、未分化癌MMP1 mRNA的相对表达强度明显高于高、中分化癌,Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅰ～Ⅱ期,伴淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者;低、未分化癌TIMP1 mRNA的相对表达强度则明显低于高、中分化癌,Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期,伴淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P均＜0.05).但MMP1、TIMP1表达与患者年龄、性别、肿瘤病理类型及肿瘤大小和部位等临床参数无关(P＞0.05).MMP1与TIMP1表达呈负相关(r=-0.513).结论 胃癌中MMP1、TtMP1表达与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关.MMP1、TIMP1基因可能成为判断胃癌侵袭、转移能力的候选标志物.

Gardiquimod对HepG2细胞中VEGF和TIMP1表达的影响

目的研究Toll样受体7(TLR7)的配体Gardiquimod对HepG2细胞中血管内皮生长因子( VEGF)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1) mRNA表达的影响,并分析其激活的信号通路。方法HepG2细胞经不同时间的Gardiquimod(2μg/ml)处理后,提取细胞总 RNA 和总蛋白, RT-PCR 分析VEGF和TIMP1转录水平的变化；Western blot分析丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶( MAPKs-ERK1/2)信号通路,并通过MAPKs-ERK1/2特异性阻断剂PD98059阻断相应的信号途径,进而分析两者的相关性。结果HepG2细胞中表达 TLR7,但较外周血单个核细胞( PBMC )较少。Gardiquimod刺激HepG210 min后下调细胞中VEGF mRNA的表达,而刺激细胞30 min后TIMP1 mRNA的表达有明显的上调；Western blot结果显示,细胞中的ERK1/2的磷酸化水平明显降低；并且ERK1/2的特异性抑制剂( PD98059)能有效抑制HepG2细胞中ERK1/2磷酸化作用。结论TLR7激活能够下调HepG2细胞中VEGF的表达,并与ERK1/2信号通路相关；同时 TLR7激活上调 TIMP1的表达,但与ERK1/2信号通路无相关性。

双环醇对小鼠日本血吸虫病心肌组织中TGF-β1、金属蛋白酶1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究小鼠日本血吸虫病肝纤维化致心肌损伤作用及双环醇对心肌损伤及纤维化的保护效应及机制.方法 80只小鼠随机均分为4组.其中3组小鼠感染日本血吸虫8周后,分别以双环醇60 mg/(kg·d)、120 mg/(kg·d)治疗56 d(8周)以及不作任何治疗(实验对照组),第4组小鼠作为健康对照组.应用苏木素伊红(HE)染色及免疫组化染色法,观察并分析不同剂量双环醇治疗前后各组小鼠心肌组织病理改变、转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化同步观察肝组织病理改变.结果 用高剂量双环醇治疗后,小鼠心肌组织、肝组织病理损伤减轻,心肌组织中TGF-β1、TIMP1和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显低于实验对照组而高于健康对照组,而低剂量双环醇对日本血吸虫病致肝纤维化及心肌损伤无明显治疗效果.结论 日本血吸虫病可致心肌损伤.双环醇抗日本血吸虫病肝纤维化、保护心肌作用呈剂量依赖性,通过抑制心肌组织中TGF-β1、TIMP1和Ⅰ、Ⅲ型胶原过度表达减轻心肌纤维化程度,从而保护心肌作用.

侵袭性牙周炎牙龈组织中TIMP1基因表达多态性研究

目的:探讨TIMP1基因表达多态性与汉族人群侵袭性牙周炎(AP)易感性的关系.方法:收集汉族重度AP女性患者36例及35名无牙周炎女性对照者的牙龈组织,采用标准酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取DNA.用甲基化敏感的限制性内切酶PCR法测定TIMP1基因的甲基化修饰情况,分析对照组与患者组基因表达的差异.结果:重度女性AP患者组中两条X染色体上TIMP1基因都处于去甲基化状态的比例高于对照组,差异有统计学意义.结论:TIMP1基因表达多态性可能与汉族人群AP的易感性有关.

八味护肝胶囊对大鼠酒精性肝纤维化血清TGF-β1、TIMP1的影响

目的 探讨八味护肝胶囊对酒精性肝纤维化(ALF)大鼠的保护作用及其作用机制.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、八味护肝胶囊组、益肝灵胶囊组.用烈性酒灌胃的方法制备ALF大鼠模型,造模时间为12周.造模成功后,给予相应的组八味护肝胶囊、益肝灵胶囊治疗4周.于16周末检测各组大鼠血清肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP),肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CIV),肝纤维化血清转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)等细胞因子的含量.肝组织采用HE染色、Mas-son染色,光镜观察各组肝细胞变性、坏死和纤维增生的情况.结果 与模型组比较,八味护肝胶囊组大鼠血清ALT,AST,TP,HA,LN,CIV明显降低(P<0.01),血清和肝组织中TCF-β1,TIMP1等致纤维化因子表达减少,肝组织细胞变性、坏死亦明显减轻,有统计学意义(P<0.05).结论 采用烈性酒灌胃法能成功制备大鼠ALF模型;八味护肝胶囊能降低血清ALT、AST水平,提示其具有减轻肝细胞损伤、保护肝细胞的作用;治疗后血清中HA、LN和CⅣ型胶原以及TGF-β1、TIMP1的含量明显低于模型组,说明八味护肝胶囊具有抗纤维化作用,对TGF-β1、TIMP1的抑制作用可能是其治疗酒精性肝纤维化的机制之一.

小鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点基因表达谱的变化研究

目的:通过生物信息学方法研究小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)所致的损伤模型的基因表达谱变化,寻找疾病相关的关键基因.方法:从Gene Expression Omnibus(GEO)中下载关于小鼠脑损伤GSE23160时间序列基因表达谱芯片的原始数据,分析皮质脑组织样本和纹状体脑组织样本在缺血再灌注不同时间点基因表达谱的差异,并对差异表达基因进行GO和KEGG功能富集分析.再通过聚类分析挑取表达趋势明显的差异基因进行免疫细胞浸润分析和关键基因分析.并在大鼠CIRI模型上对显著差异基因进行验证.结果:免疫细胞浸润分析发现CIRI过程中出现肥大细胞和巨噬细胞浸润.CIRI过程中的差异基因主要参与愈伤反应、炎性反应和信号转导通路等.在2个组织样本的不同再灌注时间点Timp1和Gpr84基因表达都发生了显著上调.大鼠CIRI模型进一步验证了Timp1和Gpr84基因的上调表达.结论:Timp1和Gpr84基因可能是脑缺血再灌注过程中的关键基因.

应用cDNA微阵列技术研究MMP1,TIMP1基因在肺癌中的表达

研究基质金属蛋白酶-1(MMP1)和基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP1)基因在肺鳞癌、肺腺癌中的表达.方法:利用含4 096个基因的cDNA微阵列检测肺鳞癌、肺腺癌组织与正常肺组织的差异表达基因,重点分析MMP1,TIMP1在肺鳞癌与肺腺癌中的表达.结果:MMP1,TIMP1基因在肺鳞癌与肺腺癌中均表达上调.结论:MMP1,TIMP1在肺鳞癌、肺腺癌中均出现表达上调,可作为肺鳞癌、肺腺癌的重要分子标记.

MMP1,TIMP1在肺癌组织中的表达及临床生物学意义

目的: 研究基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在肺癌组织中表达及其临床生物学意义.方法:常规石蜡包埋切片行SABC免疫组织化学检测46例肺癌组织中MMP-1和TIMP-1的表达.结果:46例肺癌和15例正常肺组织中MMP1表达阳性的例数分别为24例(52.2%)和3例 (20%),两者无相关性;TIMP1在正常肺组织和肺癌中的表达分别为12例 (80%)和19例(41.3%),肺癌明显低于正常肺组织; MMP1和TIMP1在肺癌中表达与其分化程度、分期、淋巴结转移有明显相关性,且MMP1与TIMP1的表达呈明显负相关.结论: MMP1和TIMP1蛋白的表达与肺癌的发生发展、生物学行为、侵袭和转移有关,可作为重要的生物学标记物.

参麦对"失血加内毒素"大鼠肝脏IκB和TIMP1mRNA的影响

目的观察参麦的抗休克效果,探讨其作用机制.方法大鼠随机分为实验对照组(control),双击组(HS+LPS),参麦注射液组(HS+LPS+SM).测定血清中NO含量,NOS活性以及肝脏IκB及TIMP 1 mRNA的表达.结果HS+LPS+SM组NOS活性,NO2/NO3含量显著低于LPS组(P＜0.05),HS+LPS+SM组IκB及TIMP1 mRNA表达明显增加.结论参麦可能是通过影响NOS活性降低NO的含量,并上调肝脏组织中IκB和TIMP 1 mRNA的表达,减轻内毒素引起的机体损伤.

胃炎Ⅰ号对CAG大鼠胃黏膜MMP1与TIMP1 mRNA表达的影响

目的 研究胃炎I号对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜MMP1和TIMP1 mRNA表达的影响，探讨胃炎Ⅰ号对CAG大鼠胃黏膜损伤的疗效作用机制。方法 将SD大鼠随机分为正常对照组和造模组，参照文献制造CAG模型；造模成功后采用胃炎Ⅰ号煎剂高中低剂量（2.16，1.08，0.54 9·kg-1）及维酶素(0.86g·kg-1)治疗CAG模型大鼠，实时荧光定量PCR技术检测MMP1及TIMP1 mRNA表达。结果 与正常对照组比较,CAG组大鼠胃黏膜MMP1 mRNA表达降低(P＜0.05)，TIMP1 mRNA表达无明显变化(P＞0.05)；各治疗组与模型组比较，中剂量胃炎Ⅰ号组对CAG大鼠胃黏膜病变疗效佳，可提高MMP1 mRNA表达(P＜0.05)。结论 CAG大鼠胃黏膜MMP1 mRNA表达水平下降，TIMP1 mRNA的表达未见明显异常，可能是慢性萎缩性胃炎的病理机制之一：胃炎I号可提高胃黏膜组织的MMP1 mRNA表达，有助于胃黏膜组织的修复，则是其治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制之一。

Ad bFGF,Ad SOX9,Ad CTGF和Ad TIMP1基因在体内退变髓核细胞的影响

目的:探讨Ad bFGF、Ad SOX9、Ad CTGF和AdTIMP1基因对体内退变髓核细胞的影响或作用.方法:选择成年新西兰大白兔120只,使用纤维穿刺法进行动物模型手术,注入重组腺病毒转染bFGF、SOX-9、CTGF及TIMP-1,术后行X片、RT-PCR检测以及Ⅱ型胶原检测,结果进行统计学对比.结果:X片检测中椎间盘处理方式对椎间盘高度的改变经统计学分析有统计学意义(P＜0.05),对各节段之间的差异进行方差分析,结果显示对照组和生理盐水组之间的差异经统计学分析有统计学意义(P＜0.05),转染组和生理盐水组之间的差异经统计学分析有统计学意义(P＜0.05).在注射重组腺病毒转染bFGF、SOX-9、CTGF和TIMP-1载体后,bFGF、SOX-9、CTGF及TIMP-1和Ⅱ型胶原mRNA的表达水平均有明显提高(P＜0.05),对照组中bFGF和Ⅱ型胶原mRNA水平表现为不同程度的降低.在重组腺病毒转染bF-GF、SOX-9、CTGF以及TIMP-1中的Ⅱ型胶原的表达检测中,3组的均数方差齐性,差异经统计学分析有统计学意义(P＜0.05),再将3组数据行两两比较,转染组与对照组、对照组与生理盐水组,均数的差异经统计学分析有统计学意义(P＜0.05).结论:bFGF、SOX9、CTGF和TIMP-1基因可以在退变髓核细胞或组织中持续大量表达,这些基因可能均参与到椎间盘退变的发病机制中.