首页 > 文献资料
-
042 当归对高脂血清所致的内皮细胞中NO及ICAM-1表达改变的影响作用
目的: 检测高脂血清对培养的内皮细胞中一氧化氮(NO)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达改变的影响, 并观察当归的作用. 方法: 实验分三组, 即: 对照组; 高脂血清组; 当归+高脂血清组. 以培养人脐静脉内皮细胞为研究对象, 用高脂血清损伤, 扫描电镜观察内皮细胞形态结构的改变, 免疫细胞化学方法观测内皮细胞表面ICAM-1的表达, 用分光光度法对细胞培养液中NO的分泌量进行检测. 结果: 高脂血清明显损伤内皮细胞的超微结构, 细胞膜表面有孔隙, 微绒毛僵直断裂, 分布不规则. 高脂血清使细胞表面ICAM-1的表达明显增高, 细胞培养液中NO的分泌量明显降低; 而当归可以逆转高脂血清的这种作用, 使细胞表面ICAM-1的表达降低, 而细胞培养液中NO的含量明显增高. 结论: 当归对内皮细胞中NO及ICAM-1表达的影响可能与其抗动脉粥样硬化的机理有关.
-
037 TNF-α导致细胞骨架重排和当归的逆转作用
目的: 探讨TNF-α导致细胞骨架重排和当归的逆转作用. 方法: 常规培养人脐静脉内皮细胞, 分成下列各组: ①对照组: 常规培养; ②当归组: 培养液中加入当归注射液20 mg/ml; ③ TNF-α组: 培养液中加入TNF-α 100 U/ml; ④ TNF-α+当归组: 培养液中同时加入TNF-α 100 U/ml和当归20 mg/ml. 4 h后用Phalloidine rhodamine标记骨架蛋白F-actin, 用Olympus LX70荧光显微镜(CellScan, Scanalytics-Bionis)检测细胞骨架分布. 结果: 荧光显微镜下, 在内皮细胞的每一个横切面, 对照组细胞骨架均排列在细胞周围, Factin分布均匀, 粗细匀称; 当归注射液不影响正常内皮细胞的细胞骨架排列, 但可见部分actin肌丝增粗; TNF-α作用后整个细胞腔面细胞骨架排列紊乱, 在细胞中部横切面, 增粗的actin肌丝横跨整个细胞; 将当归注射液与TNF-α共同作用于内皮细胞, 可见细胞骨架排列在细胞周围, 但与正常细胞状态略有不同. 结论: TNF-α可以导致细胞骨架重排, 这种重排与剪切力导致的重排相似. 当归能逆转TNF-α导致的细胞骨架重排, 使F-actin排列在细胞周围. 这种作用的意义及信号转号途径目前还不完全清楚. 本室的其他实际显示, 当归注射液可以降低氧化低密度脂蛋白导致的ICAM-1表达增加, 逆转TNF-α导致的ICAM-1重排. 当归抗动脉粥样硬化可能与这些作用有关.
-
043 当归及阿魏酸钠对内皮细胞中TGFβ1及bFGF表达的影响
目的: 检测高脂血清对内皮细胞中转化生长因子β1(TGFβ1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响, 并观察当归、阿魏酸钠的作用. 方法: 实验分四组, 即: 正常对照组; 高脂血清损伤组; 当归+高脂血清组; 阿魏酸钠+高脂血清组. 用培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)为研究对象, 以高脂血清为损伤因子, 观察当归及阿魏酸钠的作用. 实验中用扫描电镜观察内皮细胞形态变化, 用免疫细胞化学方法观测培养细胞中TGFβ1及bFGF的表达改变. 结果: 高脂血清能明显使内皮细胞的超微结构受损. 细胞表面干裂, 有孔隙; 微绒毛分布不规则, 减少甚至消失. 细胞中TGFβ1的表达明显增高, 而bFGF的表达降低. 结论: 当归及阿魏酸钠对内皮细胞TGFβ1、 bFGF表达的影响可能为其抗动脉粥样硬化的机理之一; 阿魏酸钠可能为当归的有效成分之一.
-
普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用
为探讨普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,采用培养的人脐静脉血管内皮细胞,观察溶血磷脂酰胆碱对内皮细胞产生和分泌一氧化氮及其合酶、组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂及乳酸脱氢酶活性的影响,并观察普罗布考的保护作用.结果发现,溶血磷脂酰胆碱明显增加乳酸脱氢酶活性(48.0±4.1比28.0±7.5, P<0.05),增加细胞死亡率(9.9±1.2比6.3±0.9, P<0.05);同时抑制内皮型一氧化氮合酶(48.0±4.3比63.4±6.8)及组织型纤溶酶原激活剂活性(0.31±0.05比0.43±0.07,P<0.05),增强纤溶酶原激活物抑制剂的活性(1.39±0.21比0.97±0.11, P<0.05),具有剂量-依赖效应.预先应用不同剂量的普罗布考 (10~50 mmol/L)后,该效应明显减弱.以上提示,溶血磷脂酰胆碱能直接损伤内皮细胞,抑制组织型纤溶酶原激活剂及内皮型一氧化氮合酶活性,增强纤溶酶原激活物抑制剂活性,普罗布考对内皮细胞具有保护作用.
-
极低密度脂蛋白对培养HUVECs分泌t-PA及PAI-1抗原的影响
近年来,血栓形成在缺血性心脏病发生发展的病理机制研究中已广为重视,特别是纤溶系统在体内平衡的紊乱已成为研究热点.血脂增高是动脉粥样硬化(atheroscleosis,AS)的首要危险因子,血栓形成则伴随AS过程的始终.近年来,一些临床研究观察到血浆甘油三脂(triglyceride,TG)与Ⅰ型纤溶酶原灭活剂(plasminogen activatorinhibitor-1,PAI-1)含量正相关,提示血脂与纤溶系统有某种联系.本研究以培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为模型,观察极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)对内皮细胞(endothelial cell,EC)合成分泌纤溶酶原激活物(tissuetype plasminogen activator,t-PA)和PAI-1抗原的影响,以揭示血脂与纤溶系统的相互作用,以及两者在AS及其血栓并发症中的作用.
-
TNFα导致细胞骨架重排和当归的逆转作用
方法:常规培养人脐静脉内皮细胞,分成下列各组:①对照组:常规培养;②当归组:培养液中加入当归注射液20 mg/mL;③TNF-α组:培养液中加入TNF-α 100 U/mL;④TNF-α+当归组:培养液中同时加入TNF-α 100 U/mL和当归20 mg/mL. 4 h后用phalloidine rhodamine标记骨架蛋白F-actin,用Olympus IX70荧光显微镜(CellScan, Scanalytics-Bionis)检测细胞骨架分布.结果:荧光显微镜下,在内皮细胞的每一个横切面,对照组细胞骨架均排列在细胞周围,F-actin分布均匀,粗细匀称;当归注射液不影响正常内皮细胞的细胞骨架排列,但可见部分actin肌丝增粗;TNF-α作用后整个细胞腔面细胞骨架排列紊乱,在细胞中部横切面,增粗的actin肌丝横跨整个细胞;将当归注射液与TNF-α共同作用于内皮细胞,可见细胞骨架排列在细胞周围,但与正常细胞形态略有不同.结论:TNFα可以导致细胞骨架重排,这种重排与剪切力导致的重排相似.当归能逆转TNF-α导致的细胞骨架重排,使F-actin排列在细胞周围.这种作用的意义及信号转导途径目前还不完全清楚.本室的其他实验显示,当归注射液可以降低氧化低密度脂蛋白导致的ICAM-1表达增加,逆转TNF-α导致的ICAM-1重排.当归抗动脉粥样硬化可能与这些作用有关.
-
当归及阿魏酸钠对内皮细胞中细胞因子表达改变的影响
目的:检测高脂血清对内皮细胞中转化生长因子β1(TGF β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,并观察当归、阿魏酸钠的作用.方法:实验分四组,即:正常对照组;高脂血清损伤组;当归+高脂血清组;阿魏酸钠+高脂血清组.用培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)为研究对象,以高脂血清为损伤因子,观察当归及阿魏酸钠的作用.实验中用扫描电镜观察内皮细胞形态变化,用免疫细胞化学方法观测培养细胞中TGF β1及bFGF的表达改变.结果:高脂血清能明显使内皮细胞的超微结构受损,细胞表面干裂,有孔隙;微绒毛分布不规则,减少甚至消失.细胞中TGF β1的表达明显降低,而bFGF的表达明显增高;当归、阿魏酸钠可以有效地减轻高脂血清所致的内皮细胞超微结构的损伤;并使细胞中TGF β1的表达明显增高,而bFGF的表达降低.结论:当归及阿魏酸钠对内皮细胞TGF β1、bFGF表达的影响可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一;阿魏酸钠可能为当归的有效成分之一.
-
当归抗高脂血清致内皮细胞损伤的保护作用
目的:检测高脂血清对培养的内皮细胞中一氧化氮(NO)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达改变的影响,并观察当归的作用.方法:实验分三组,即:对照组;高脂血清组;当归+高脂血清组.以培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,用高脂血清损伤,扫描电镜观察内皮细胞形态结构的改变,免疫细胞化学方法观测内皮细胞表面ICAM-1的表达,用分光光度法对细胞培养液中NO的分泌量进行检测.结果:高脂血清明显损伤内皮细胞的超微结构,细胞膜表面有孔隙,微绒毛僵直断裂,分布不规则.高脂血清使细胞表面ICAM-1的表达明显增高,细胞培养液中NO的分泌量明显降低;而当归可以逆转高脂血清的这种作用,使细胞表面ICAM-1的表达降低,而细胞培养液中NO的含量明显增高.结论:当归对内皮细胞中NO及ICAM-1表达的影响可能与其抗动脉粥样硬化的机制有关.
-
心血管组织糖基化终产物的形成与其受体表达的关系
晚期糖基化终产物(advanced glycation end products, AGEs)的形成是糖尿病血管并发症病理变化的一个特征.AGEs与其受体(receptor for AGEs, RAGE)结合引起细胞内信号转导的变化,激活核转录因子引起靶基因的一系列反应,是导致糖尿病血管并发症的关键途径.目的:本实验探讨了AGEs在糖尿病大鼠心血管组织内的形成量与RAGE基因表达的关系.方法:雄性Wistar大鼠分为:1:对照组(8只);2:糖尿病4周组(6只);3:糖尿病12周组(8只);4:糖尿病4周氨基胍(AG)治疗组(6只)和5:糖尿病12周AG治疗组(8只).大鼠禁食12 h后腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型.参照Monnier的方法用荧光法检测主动脉及心肌组织的AGEs含量;取主动脉和心脏组织进行组织匀浆和冰冻切片分别用RT-PCR及原位杂交方法检测RAGE基因的表达.培养人脐静脉内皮细胞,用免疫组化方法检测在糖基化蛋白(参照Lander的方法在体外制备)刺激下内皮细胞NF-κB的激活变化.结果:糖尿病大鼠血糖明显高于对照组(P<0.01);糖尿病12周模型鼠主动脉和心肌组织AGEs含量明显高于其他4组大鼠(P<0.01),血管内皮细胞RAGE表达明显增强(P<0.01);用AG治疗可明显降低AGEs形成和RAGE基因的表达;AGEs含量与RAGE表达呈明显正相关,相关系数为0.97 (P<0.01).免疫组化结果表明,在糖基化蛋白的刺激下血管内皮细胞核呈棕褐色,表明有NF-κB激活后向核内转位的变化.结论:随着糖尿病病程的延长,AGEs在心血管组织内的含量明显增加,RAGE主要在糖尿病大鼠血管内皮细胞表达,其表达量与AGEs含量明显相关;用AG治疗可降低AGEs的形成.提示AGEs与RAGE相互作用,可能通过激活NF-κB诱导RAGE基因自身的表达,而RAGE的持续表达是引起糖尿病慢性血管内皮细胞功能紊乱和损伤的关键环节.
-
细胞骨架蛋白Testin通过调节内皮细胞功能发挥抗动脉粥样硬化作用
目的:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症过程,其发病机制复杂,目前公认的是内皮损伤反应学说。有研究称,细胞骨架蛋白与内皮细胞功能及内皮相关信号通路密切相关。 Testin是一种新发现的细胞骨架蛋白,主要分布于黏着斑和细胞间连接的区域,参与细胞间的黏附,调节细胞的运动。然而,Testin在AS中的作用尚不明确。方法:利用家兔高脂饮食喂养16周建立冠脉AS模型,分离冠脉,免疫荧光染色观察Testin的分布,检测AS兔与正常兔Testin的表达水平;分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别予以1 mg/L LPS、40 mg/L ox-LDL刺激6 h,检测Testin表达水平的变化;于HUVECs过表达或下调表达Testin,观察其对细胞增殖、凋亡、迁移、招募单核细胞能力及AS相关因子表达的影响。结果:染色示Testin主要表达于血管内皮层并与内皮标志物CD31存在共定位,AS兔Testin mRNA和蛋白表达水平较正常兔降低(P<0.05);给予HUVECs刺激后,Testin mRNA和蛋白表达水平降低( P<0.05);过表达或下调Testin,不影响细胞增殖和凋亡能力( P>0.05);过表达Testin可促进HUVECs迁移而抑制单核细胞与其黏附,下调Testin则呈现相反作用(P<0.05);过表达Testin可升高一氧化氮合酶水平而降低单核细胞趋化因子1、基质金属蛋白酶2水平,下调Testin则呈现相反趋势( P<0.05)。结论:Testin可通过影响内皮功能发挥抗AS作用。