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凝胶排阻色谱法研究阿胶中蛋白质及多肽相对分子质量分布规律
目的:建立阿胶中水溶性成分凝胶排阻色谱分析方法,研究阿胶中蛋白质及多肽的相对分子质量分布规律,为阿胶质量评价提供依据.方法:采用TSK-GEL G4000PWXL(7.8 mm×300 mm,平均孔径500 (A)),流动相为0.05 mol·L~(-1)磷酸盐缓冲液(pH=7.2),流速0.4 mL·min~(-1),检测波长280 nm,以β-淀粉酶、胰岛素为标记物,窒温下测定16个企业生产的40批阿胶样品,并应用TQ Analyst软件进行样品图谱主成分分析.结果:发现阿胶含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要集中在6×10~3～2×10~5,不同企业的产品中蛋白质及多肽的相对分子质量分布有一定规律.结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于阿胶中蛋白质及多肽的分析.测定结果反映出不同企业间,甚至同一企业不同批次产品有差异.提示阿胶原料与生产工艺值得注意,为保证阿胶质量稳定,应该进行生产过程控制.
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真伪阿胶的X射线荧光分析及X射线衍射鉴别研究
目的:建立和探索对阿胶及中药材既从整体上表征,又有定性又有量化指标的检定方法.方法:选择5个不同来源的阿胶样品与阿胶对照品进行对比分析.结果:XRF可对其宏量和微量元素的种类和含量进行测定,PXRD可对含有晶态物质的伪品阿胶进行鉴别.结论:2种方法的联合应用可以从整体上对阿胶的元素指标和化合态这两方面进行质量控制和鉴别.这2种方法在阿胶、中药材及其饮片的检定标准制定方面具有较好的应用前景.
关键词： 阿胶 X射线荧光(XRF) 粉末X射线衍射(PXRD) -
柱前衍生化HPLC法同时测定阿胶中4种主要氨基酸的含量
目的:建立阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸4种氨基酸的含量测定方法.方法:样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,采用Phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃;流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠-乙腈(93:7),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速:1.0 mL·min-1;检测波长为254 nm.结果:羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的线性范围分别为0.016～0.239μg(r=0.9999),0.032～0.483 μg(r=0.9998),0.013～0.188μg(r=0.9998),0.018～0.271μg(r=0.9999);加样回收率(n=6)分别为96.20%(RSD=1.3%),98.46%(RSD:1.2%),99.28%(RSD=0.9%),98.65%(RSD=1.7%).结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的检测.
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电感耦合等离子体质谱法检测阿胶中6种有害元素的含量
目的:建立阿胶中铬、铜、砷、镉、汞、铅6种有害元素含量的测定方法.方法:微波消解法处理药材样品,用电感耦合等离子体质谱法( ICP - MS)检测不同产地阿胶中6种有害元素的含量.结果:6种元素的检出限范围为0.001 -0.105 ng·g-1;线性关系良好(r ＞0.9993)；回收率为90％～ 115％,RSD小于15％.结论:本方法准确、灵敏、简便,可用于阿胶中有害元素的检测.
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超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测复方阿胶浆中阿胶
目的:建立复方阿胶浆中阿胶的专属性检测方法.方法:采用胰蛋白酶对复方阿胶浆中阿胶成分进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(RRLC-QQQ/MS)对阿胶的专属性特征分子离子峰进行检测.采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,1.8.μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱(0～ 25 min,95％ A→80％A,5％B→20％B;25 ～ 40 min,80％ A→50％A,20％B→50％B).流速0.3 mL· min-1,柱温40℃,进样量5 μL;选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对,离子化模式为ESI+,进行多反应监测.结果:3批市售样品中均可检出阿胶的特征分子离子峰,即同时检出m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8离子对.结论:所建立的方法经方法学验证,阴性样品及其他胶类如黄明胶、龟甲胶和鹿角胶等对复方阿胶浆样品测定无干扰,样品检出浓度为含5％阿胶的复方阿胶浆样品.方法专属性强,可用于复方阿胶浆中阿胶的检测.
关键词： 超高效液相色谱-三重四极杆质谱 复方阿胶浆 阿胶 特征分子离子峰 -
阿胶原料驴源性成分的DNA分子鉴别方法
目的:建立阿胶原料驴源性成分的鉴别方法.方法:通过聚合酶链式反应(PCR),扩增基因组上的线粒体细胞色素b(Cytb)基因,继而用限制性内切酶BamHⅠ对该聚合酶链式反应产物进行酶切,将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像.结果:驴源性成分Cytb的PCR产物能够被BamHⅠ酶切成76 bp和314 bp 2个片段,而马源性成分均不能够被酶切.结论:结合聚合酶链式反应与限制性内切酶片段长度多态性法(PCR-RFLP),可以鉴别阿胶原料驴源性成分.
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基于COⅠ序列的阿胶原材料及其混伪品的DNA条形码鉴定研究
目的:采用细胞色素C氧化酶亚基1(cytochrome C oxidase subunit 1,COⅠ)基因片段序列鉴定的方法鉴别中药阿胶的原料驴皮及其混伪品马皮、骡皮、牛皮.方法:优化DNA提取试剂盒的通用方法进行总DNA的提取,针对马科动物驴的基因序列变异位点优化COⅠ通用引物及PCR扩增条件,PCR扩增产物双向测序,测得的序列与GenBank下载的基因序列Blast比对分析样品的基原;采用Mega 6.0软件计算序列的碱基组成、种内和种间K2P(Kimura-2-parameter)的遗传距离,采用邻接法(neighbor-joining method)构建系统树,进一步对驴皮及其混伪品进行基原鉴别.结果:22份来自马科和牛科动物的驴、马、牛的皮样品的基因序列与GenBank序列Blast比对结果一致性均大于99％.采用邻接法构建的系统树结果显示驴、马、牛的皮样品具有较好的单系性,均分别独立聚为1个分支,可以显著区分;牛科和马科动物样品的K2P种间平均遗传距离均远大于种内平均遗传距离.结论:利用优化后的COⅠ片段扩增引物及PCR反应程序可作为鉴别阿胶原料DNA条形码物种鉴定的有效方法,为阿胶原料的真伪鉴别提供了科学的鉴定方法.
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论阿胶与老年长寿
阿胶是中药中重要的滋阴补血药物,能增强机体免疫功能,还能降低机体的耗氧量,有耐疲劳、抗衰老作用,因而有助于老年保健和延年益寿.
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炙甘草汤治疗心悸验案举隅
炙甘草汤出自《伤寒论》方中人参、炙甘草补益心气，麦冬、生地、麻仁滋养心阴，阿胶、大枣补养心血，桂枝、生姜温通心阳，调和营卫。诸药合用，共奏益气滋阴、温阳复脉之效。
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黄土汤配合锋勾针治疗痔疮1例
病案:陈某,男,20岁,于2011年7月13日诊.先血后便2年,肛门外有痔核1枚.近1周来大便时血量多、色鲜红,排便疼痛,便后疼痛缓解.舌淡苔白,脉稍细、双尺沉涩.方用黄土汤.赤石脂250g(先煎后用液再煎余药),附片6g,阿胶10g,甘草6g,生地15g,白术10g,黄芩10g.水煎,分2次温服,每日1剂,共4剂.
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逍遥散加减治疗崩漏体会
笔者以逍遥散加减治疗崩漏疗效颇佳,现介绍于下.1方药组成当归、白术、白芍、阿胶各12g,茯苓10g,益母草、茜根炭各15g,柴胡、炙甘草6g.肝郁化热加丹皮10g,栀子12g;血热去白术,加地骨皮、地榆各12g;血淤去阿胶,加蒲黄、五灵脂各10g;气虚加人参12g,茯苓10g,黄芪20g;血虚加熟地12g;肾虚加山茱萸、枸杞子各12g.
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胶艾四物汤加味治疗崩漏体会
笔者用胶艾四物汤加味治疗崩漏取得满意疗效,介绍如下.1治疗方法方药组成:生地炭20g,白芍(酒炒)、当归、地榆炭、艾叶炭、阿胶(冲服)各15g,川芎6g,柴胡、炙甘草各10g,黄芪、仙鹤草各30g.
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黄芪阿胶汤治疗产后乳汁过少30例
笔者用黄芪阿胶汤加减治疗产妇母乳分泌过少30例,效果满意,现报道如下.1 临床资料30例均为产后1～2周产妇,年龄23～40岁,初产妇22例、经产妇8例,产妇阴道恶露均无明显异常情况.哺乳次数均在8次/24h以下,且每次哺乳后新生儿哭闹,需添加其它食物后方能入睡.
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阿胶白及三七散治疗血证验案举隅
笔者自拟阿胶白及三七散治疗血证疗效满意,现介绍如下.1 崩漏刘某,女,51岁,1994年2月7日初诊.更年期月经每月数见,此次经来5天、量多色淡,面色不华,闭目呻吟,腰酸,四肢厥冷,舌淡无苔,脉微弱.诊为崩漏.乃肝肾亏损,封藏不固所致.
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阿胶对人工细颗粒物所致大鼠呼吸系统损伤的保护作用
目的:探讨阿胶对人工细颗粒物(aPM2.5)所致大鼠呼吸系统损伤的保护作用及其机制.方法:SD大鼠96只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组、阿胶低剂量组(0.3 g/kg)、阿胶高剂量组(1.2 g/kg).模型组和阿胶组大鼠口鼻吸入(3.68±0.41)mg/L的aPM2.5,每天1次,每次15 min,连续8周,对照组吸入清洁空气.阿胶组于吸入aPM2.5前1 h灌胃给予阿胶,模型组和对照组灌胃饮用水.试验期间每两周采用EMKA动物肺功能监测系统测定大鼠肺功能,分别于染毒后第2、4、8周各取8只大鼠,采血并收集血清、肺泡灌洗液和肺组织,检测血清和肺泡灌洗液氧化损伤相关指标的变化,进行肺泡灌洗液白细胞计数及肺脏组织病理学检查.结果:与对照组相比,模型组大鼠潮气流量(TV)、呼气量(EV)、分时输出量(MV)等容量指标均显著降低(P均<0.05),吸气时间(Ti)、呼气时间(Te)、弛豫时间(RT)等时间指标显著均升高(P均<0.05);与模型组相比,阿胶可显著抑制aPM2.5所致大鼠TV、EV、MV的降低及Ti、Te、RT的升高(P<0.05).染毒后第8周,模型组与对照组比较大鼠肺巨噬细胞增多,阿胶高剂量组肺巨噬细胞较模型组轻度降低.与对照组相比,模型组大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中丙二醛(MDA)含量升高,而阿胶可抑制MDA含量的增加.与对照组相比,模型组大鼠的血清和BALF中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性有所降低,阿胶可升高GSH-Px的活性.结论:阿胶可改善aPM2.5造成的大鼠呼吸功能降低,抑制肺巨噬细胞的增多,该作用可能与其抑制aPM2.5所致氧化损伤有关,确切机制需要进一步深入研究.
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阿胶蜜枣免疫调节作用研究
[目的]测定阿胶蜜枣的免疫调节作用.[方法] 以4.2、8.3、25g/kg 体重三个剂量组经口饲喂小鼠阿胶蜜枣30d,测小鼠的迟发型变态反应((DTH)、碳廓清试验及抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法).[结果] 阿胶蜜枣能提高小鼠足跖肿胀度、抗体生成细胞数和巨噬细胞吞噬指数.[结论]提示阿胶蜜枣具有增强细胞免疫功能、体液免疫功能和巨噬细胞吞噬功能的作用.
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猪苓汤临床新用
猪苓汤出自《伤寒论》,由猪苓,茯苓,阿胶,滑石,泽泻等分组成.具有清热利水养阴的作用.胡宝丰主任医师临床上对经方新用治疗水热互结水肿收到良好效果,现举例如下:患者女性,65岁,农民,主因双下肢浮肿伴心胸烦闷20天入院.症见:双下肢浮肿,小便不利,汗出不止,烦渴引饮,纳寐差,舌红,苔少,脉沉细.处方:猪苓9g,茯苓9g,阿胶30g,滑石9g,泽泻9g,栀子9g.日1剂,水煎服,服2剂后,患者烦渴、汗出消失,水肿消退,纳寐好转.
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阿胶的现代研究进展
阿胶为马科动物驴的干皮或鲜皮经煎煮、浓缩而制成,与人参、鹿茸并称为“滋补三宝”,始载于《神农本草经》,列为上品.陶弘景曰“出东阿,故名阿胶”.阿胶在我国有着很久远的历史,距今已有两千多年的生产历程.阿胶味甘,平;归肺、肝、肾经;具有补血,滋阴,润肺,止血,生肌敛疮的功效,被广泛应用于血虚、虚劳咳嗽、吐血、便血、妇女月经不调等证的治疗.阿胶的现代研究较多,现就其化学成分研究及药理研究等方面的研究现状综述如下:
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倍美力与倍美力、万艾可、阿胶联合用药对子宫内膜容受性的不同影响
目的:探讨单独应用倍美力与倍美力、万艾可、阿胶联合用药对子宫内膜容受性的不同影响.方法:将100例促排卵周期中子宫内膜生长不良的不明原因不孕患者在下一个促排卵周期中随机分为两组,倍美力组50例,周期第7d开始每天给予倍美力0.625 mg;联合用药组50例,周期第7d开始,联合给予倍美力每天0.625 mg口服,万艾可隔天100 mg口服,阿胶每天30g炖服.超声提示排卵的当天停服上述药物.结果:不同用药后患者子宫内膜厚度均有改善,但两组之间没有差异.用药方案对患者的排卵日期均没有影响.联合用药组卵泡发育数量及排卵教比倍美力组稍多.在生化妊娠率及临床妊娠率方面,联合用药组有明显的改善,效果差异明昱.结论:倍美力、万艾可、阿胶联合用药能促进子宫内膜生长,改善子宫内膜容受性,有助于胚胎着床.倍美力单独使用也能促进子宫内膜生长,但不能提高妊娠率.
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口服阿胶改善子宫内膜容受性的初探
目的:初步探讨阿胶改善子宫内膜容受性的作用.方法:选择50例促排卵周期中子宫内膜生长不良的不孕患者,在下一个促排卵周期中自月经干净后开始给予阿胶口服治疗,每天用生胶量15～120g,至证实排卵后停服.结果:排卵日子宫内膜厚度服药前为6.85±0.62 (5.2～7.8)mm,服药后为10.20±1.76 (6.4～15.0)mm,服药后子宫内膜厚度明显增加(95%可信区间为2.83～3.89mm,P=0.000).服药后子宫内膜C型明显增加(P=0.000).临床妊娠率显著提高 (0%:24%,P=0.000).结论:阿胶能促进子宫内膜生长,改善子宫内膜容受性,有助于胚胎着床.
