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胰岛素样生长因子1通过PI3K/Akt信号通路促进髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达
背景:采用生长因子等生物学方法修复退变椎间盘是目前椎间盘退变治疗的研究热点,胰岛素样生长因子1能促进髓核细胞增殖、促进功能性细胞外基质的合成,但其机制仍未阐明.目的:观察胰岛素样生长因子1对髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达的促进作用,并探讨其信号转导机制.方法:分离培养人髓核细胞,取第3代细胞给予不同质量浓度的胰岛素样生长因子1(0,20,50,100,200μg/L)进行刺激,采用RT-PCR、Western-blot检测聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达.100μg/L的胰岛素样生长因子1作用于髓核细胞,采用Western-blot检测胰岛素样生长因子1对PI3K/Akt信号通路的激活作用,并通过LY294002的应用检测PI3K/Akt通路的抑制对聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达的影响.结果与结论:①随胰岛素样生长因子1质量浓度增高,聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达水平逐渐升高,该作用呈剂量依赖性.胰岛素样生长因子1(100μg/L)能显著促进p-PI3K和p-Akt的表达(P<0.01),而LY294002能抑制胰岛素样生长因子1的促进作用(P<0.01);②胰岛素样生长因子1(100μg/L)能促进髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达(P<0.01),而LY294002能抑制胰岛素样生长因子1对聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达的促进作用(P<0.01);③因此认为胰岛素样生长因子1可通过PI3K/Akt通路促进髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达.
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间充质干细胞在构建组织工程软骨中的实验研究
目的 探索利用几丁质支架和间充质干细胞(MSC)构建组织工程软骨.方法 抽取兔股骨骨髓,密度梯度离心分离骨髓MSC,用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导第3代的骨髓MSC向软骨方向分化,2周后用免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况.将分化后的软骨样细胞传代,接种在几丁质支架上,用含TGF-β1的培养基继续培养2周,再用免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况,并在电镜下观察软骨细胞的生长情况.结果 骨髓MSC经TGF-β1诱导后,具有软骨细胞特点,接种在几丁质支架上继续培养2周,这些细胞在支架上生长良好,并仍能很好表达Ⅱ型胶原.结论 MSC经TGF-β1诱导,分化成的软骨样细胞在几丁质支架上表型稳定,生长良好.
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HA308-317变构肽对HLA-DR4特异性T细胞活化的抑制作用
目的:研究流感病毒血凝素(HA)308-317变构肽对人类白细胞抗原(HLA)-DR4限制性Ⅱ型胶原(CⅡ)特异性T细胞激活的抑制作用.方法:采用固相法合成3条HA308-317变构肽.流式细胞术分析HA308-317变构肽与细胞表面HLA-DR4分子的结合作用;3H掺入法检测HA308-317变构肽对CⅡ263-272介导T细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测上清液中IL-2的水平;流式细胞术分析细胞表面CD25和CD69的表达情况.结果:HA308-317变构肽能竞争性地抑制CⅡ263-272与细胞表面HLA-DR4分子的结合;HA308-317变构肽抑制了CⅡ263-272诱导的T细胞增殖和IL-2的分泌;与CⅡ263-272相比,HA308-317变构肽诱导T细胞表面CD25或CD69的表达减弱.结论:替换HA308-317多肽中与T细胞受体结合的氨基酸形成的HA变构肽不改变其与HLA-DR4的结合能力,但它们抑制T细胞的活化.在T细胞介导的自身免疫病中,变构肽的应用可能是一种新的治疗策略.
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HLA-DRB1结合性Ⅱ型胶原多肽抑制胶原性关节炎的实验研究
目的:研究替换CⅡ263-272序列中的268～270位氨基酸的变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)的抑制作用.方法:使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA.以CⅡ变构肽sub268-270 90 μg静脉注射,每周1次治疗CIA;设置无关肽对照和空白对照组.从关节炎症积分、放射学积分和病理学积分来评价变构肽疗效.结果:变构肽、无关肽及空白对照组关节炎症积分分别为5.60±1.24、11.20±1.21和11.80±1.22,变构肽可明显抑制CIA关节炎症(P＜0.01).变构肽组的放射学积分(1.32±0.49)明显低于无关肽组(2.63±0.51)和空白对照组(2.69±0.53)(P＜0.01).此外,变构肽组的病理学积分(1.37±0.53)也显著低于无关肽组(2.94±0.63)和空白对照组(3.06±0.65)(P＜0.01).结论:CⅡ变构肽sub268-270可以明显抑制胶原性关节炎的关节炎症、病理损伤及骨破坏程度.
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HLA-DRB1结合性变构肽对T细胞活化的竞争性抑制作用
目的:研究去除T细胞受体(TCR)识别表位的HLA-DRB1结合性Ⅱ型胶原(CⅡ)变构肽对T细胞活化的抑制作用.方法:将人CⅡ的抗原性片段(CⅡ263-272)中与T细胞识别有关的268～270位氨基酸分别用丙氨酸和甘氨酸替换,形成CⅡ变构肽S268-270,并将该多肽与表达HLA-DR1的抗原呈递细胞(APC)及抗原性原型CⅡ263-272多肽共同孵育,研究变构肽S268-270在竞争性抑制CⅡ263-272与HLA-DR1分子结合中的作用;利用HLA-DR1转基因APC及其特异性T细胞,研究S268-270对抗原性CⅡ263-272及流感病毒血凝素(HA)306-318诱导的T细胞活化的抑制作用.结果:CⅡ变构肽S268-270可结合APC表面的HLA-DR1分子,并可抑制CⅡ263-272及HA306-318两种不同抗原诱导的HLA-DR1限制性T细胞活化.结论:替换CⅡ263-272中与TCR识别有关的氨基酸所形成的CⅡ变构肽S268-270可与APC表面的HLA-DR1分子结合,并可抑制HLA-DR1结合性抗原肽CⅡ263-272及HA306-318诱导的T细胞活化.CⅡ变构肽S268-270可能对类风湿关节炎患者的HLA-DR1限制性T细胞异常活化具有抑制作用.
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抗Ⅱ型胶原短肽(260-272)抗体ELISA测定方法的建立与初步应用
目的 了解类风湿关节炎(RA),其他自身免疫病和健康对照组血清抗Ⅱ型胶原短肽,即CⅡ(260-272)抗体水平,探讨其在RA疾病诊断和病情监测中的价值.方法 将合成的CⅡ(260-272)短肽与牛血清白蛋白(BSA)耦联得CⅡ(260-272)-BSA复合物,用其作为抗原包被建立抗CⅡ(260-272)抗体的ELISA测定方法,经方法学考核后,对临床病例标本检测结果进行评价.结果 建立的抗CⅡ(260-272)抗体的ELISA法实验结果具有较好的稳定性和特异性,其批内和批间变异系数分别为8.4%和9.6%,特异阻断抑制率高达76.3%.临床检测结果发现抗CⅡ(260-272)抗体在RA中的阳性率为75.0%(30/40),显著高于其他自身免疫病和健康对照组(P＜0.01).以测定吸光度(A) 0.213为临界值时,抗CⅡ260-272抗体对RA诊断特异性91.0%,阳性预测值63.8%,阴性预测值94.5%,阳性似然比8.33,阴性似然比0.275,Youden指数0.66.ROC曲线分析结果显示该抗体对RA诊断准确度为中等偏上水平(AUCROC值=0.890).未发现抗CⅡ(260-272)抗体与类风湿因子(RF)水平相关(在13例RF阴性RA患者中,该抗体阳性10例,阳性率76.9%),但抗CⅡ(260-272)抗体与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体显著相关(P＜0.01),且该抗体水平随患者临床症状的改善有逐渐降低趋势.结论 成功建立抗CⅡ(260-272)抗体ELISA测定方法,用其检测抗CⅡ(260-272)抗体水平可作为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标.
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降钙素对兔膝骨性关节炎Ⅱ型胶原和基质蛋白酶-1的影响
目的 探讨降钙素(CT)对兔膝骨性关节炎(KOA)关节软骨、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶(MMP)-1的影响.方法 将36只健康大耳白兔随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、CT治疗组(C组),B、C两组采用改良Hulth法复制KOA模型,A组除切开皮肤和关节腔外,不做其他处理,从术后第6周开始C组每天皮下注射CT 5 U/kg,A、B组给予等量生理盐水皮下注射,连续注射20 d后处死动物.观察关节软骨病理形态、软骨基质Ⅱ型胶原及MMP-1的变化.结果 与A组相比较,B组JP和Mankin评分明显升高,关节软骨损伤明显加重,Ⅱ型胶原表达减少而MMP-1表达增高(P＜0.05);与B组比较,C组JP评分和Mankin评分明显降低,软骨损伤明显减轻,Ⅱ型胶原表达明显增多,而MMP-1表达则明显减少(P＜0.05).结论 CT可通过下调MMP-1表达,抑制Ⅱ型胶原降解,减少软骨基质破坏,从而减轻KOA软骨的损伤.
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白藜芦醇通过调节SIRT1活性促进退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质
目的 探讨白藜芦醉(Res)干预对退变椎间盘终板软骨细胞(DEC)合成细胞外基质的影响.方法 老年腰椎间盘突出症患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分为5组,即Res组、二甲基亚砜对照组、Res+尼克酰胺(Nam)组、Res+ siRNA转染组及空白对照组.各组进行对应处理后检测沉默信息调节因子2相关酶1( SIRT1)、Ⅱ型胶原(COLA2)、蛋白聚糖聚合物(agg recan)及SIRT1 mRNA表达水平.结果 Res干预上调DEC SIRT1 mRNA及蛋白的表达,促进细胞外基质(COLA2,aggrecan)的合成；Nam及siRNA干预分别有效抑制了SIRT1酶括性及SIRT1 mRNA的表达,并抑制了细胞外基质的合成.结论 Res可促进DEC合成细胞外基质,抑制椎间盘软骨终板退变,其机制与调节SIRT1活性有关.
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兔关节软骨细胞原代培养及生物学鉴定
目的：探讨兔膝关节软骨细胞体外分离培养及鉴定方法，分析软骨细胞在体外不同阶段的生物学特性。方法取4周龄健康新西兰兔膝关节软骨，以机械分离和酶消化相结合的方法获取膝关节软骨细胞，经体外培养、传代。观察不同培养阶段细胞形态和生长，CCK－8法测定细胞增殖并绘制生长曲线，甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞。结果兔软骨细胞经两步消化，可获取高纯度的软骨细胞，细胞活性率可达95％以上，甲苯胺蓝染色及免疫荧光呈阳性结果。原代细胞和第一代细胞呈多角形，传代4～5代后，细胞形态逐渐由多角形变为梭形，基质分泌氨基多糖和胶原染色变浅。结论成功建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法，通过传代可以获取大量实验细胞，但仅限于5代以内软骨细胞适用于组织工程研究。
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鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原分泌的影响
目的 观察鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞的增殖和软骨细胞分泌Ⅱ型胶原是否有协同作用.方法 分离培养原代兔软骨细胞,用第3代细胞为模型,实验分为未转染组、腺病毒-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)组、Ad-hBMP2-GFP组、鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组,培养48 h后.RT-PCR检测hBMP-2mRNA的表达,流式细胞仪检测软骨细胞的周期.培养48、72 h后.MTT法检测软骨细胞的增殖,Western印迹检测hBMP-2蛋白和Ⅱ型胶原的表达.结果 培养48 h后,Ad-hBMP2-GFP组和鹿瓜多肽+Ad-hBMP2-GFP组hBMP-2mRNA呈阳性,而未转染组、Ad-GFP组表达呈阴性;与未转染组、Ad-GFP组、Ad-hBMP2-GFP组比较,鹿瓜多肽+hBMP-2基因组能使软骨细胞S-G2/M期细胞比例增加,软骨细胞数量增加(P<0.05),软骨细胞hBMP-2蛋白表达和Ⅱ型胶原分泌增加(P<0.01);培养48与72 h比较,鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原分泌无显著性差异(P>0.05).结论 鹿瓜多肽能促进hBMP-2基因在软骨细胞中合成hBMP-2蛋白,鹿瓜多肽联合hBMP-2基因对软骨细胞增殖和分泌Ⅱ型胶原的功能有协同作用.
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白芍木瓜汤对碘乙酸所致大鼠骨性关节炎药效作用的实验研究
目的:观察白芍木瓜汤对碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎的药效作用,并初步探讨其可能机制.方法:取雄性SD大鼠50只,按体质量随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、白芍木瓜汤高、低剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组大鼠双侧膝关节腔注射碘乙酸建立骨性关节炎模型.术后第2d各组大鼠开始给予药物干预,连续6周,每周称量大鼠体质量,检测大鼠抓力.第6周末,各组大鼠麻醉,进行X-ray活体成像观察;心脏取血,分离血清,酶联免疫法检测各组大鼠血清中基质金属蛋白酶13(MMP-13)、软骨蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)的含量;截取膝关节,剔除皮肤与肌肉,EDTA脱钙后分别进行HE染色与SO染色,光镜下观察各组大鼠膝关节病理变化.结果:造模后6周,相比于正常对照组,模型组大鼠体质量、血清MMP-13、Col-Ⅱ、Aggrean含量均出现显著性差异(P＜0.01),膝关节影像学上表现出明显损伤,光镜下观察到明显的病理改变;给药6周后,高、低剂量的白芍木瓜汤对OA大鼠体质量、抓力的影响不明显,但相比于模型对照组,白芍木瓜高、低剂量组大鼠血清MMP-13含量均显著降低(P＜0.01),Col-Ⅱ、Aggrean含量均显著升高(P＜0.01),膝关节影像学损伤与光镜下病理改变均得到明显改善.结论:白芍木瓜汤对碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎有良好的药效作用,其作用机制可能与抑制MMP-13产生,促进Aggrecan、Col-Ⅱ合成有关,从而达到修复软骨有关.
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骨关节炎软骨细胞源外来体抑制软骨细胞中Ⅱ型胶原合成
目的：探讨正常软骨细胞和骨关节炎软骨细胞外来体分泌量和内含物的差别及不同来源外来体对正常软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响。方法：分离人正常软骨细胞和骨关节炎软骨细胞，检测细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达量和外来体标志物CD9、CD81及外来体内含物TNF-α、MHC I、MHC II的含量；用正常软骨细胞源外来体（200μg/mL）和骨关节炎软骨细胞源外来体（50,100和200μg/mL）处理正常软骨细胞24，48、72和96h，RT-PCR检测细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达量。结果：正常软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达量和细胞增殖速率均显著高于骨关节炎软骨细胞（P<0.05）；两种细胞均可分泌外来体，骨关节炎软骨细胞分泌外来体量和外来体内含物含量均显著高于正常软骨细胞（P<0.05）；正常软骨细胞源外来体对正常软骨细胞中Ⅱ型胶原合成无显著影响（P>0.05），骨关节炎软骨细胞源外来体可抑制正常软骨细胞中Ⅱ型胶原合成且抑制作用存在时间和剂量依赖性。结论：骨关节炎软骨细胞分泌外来体量和外来体内含物含量均高于正常软骨细胞，且以时间和剂量依赖性的方式抑制正常软骨细胞中Ⅱ型胶原合成。
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Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型的制作
Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型CIA模型是目前为理想的类风湿关节炎动物模型.受诸多因素影响,模型制作难度较大,成功率不高.结合参考国内外大量文献,本室多年研究经验,从动物品系的选择,胶原的配制和准备,注射的部位和方法,评价的指标等方面为CIA模型的制作提供了参考.
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大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定
目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性.方法:无菌务件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线.结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12d左右贴壁,达95％融合需要34d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10h,且其倍增时间约为2.5d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1p、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTr法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓.结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定.
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周期性张应力对大鼠髁突软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响
目的:在成功构建髁突软骨细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,探讨周期性张应力对髁突软骨细胞主要细胞外基质(Ⅱ型胶原)合成的影响.方法:本研究采用FX-5000T应力加载系统对体外培养的第3代大鼠髁突软骨细胞分别施加1h、6h、12h和24 h的周期性张应力,应力刺激强度为10％1 HZ.加力完成后即刻收集加力细胞,提取细胞总RNA反转录成cDNA,应用RT-PCR技术检测髁突软骨细胞主要细胞外基质Ⅱ型胶原(type-Ⅱ collagen,Col-Ⅱ)mRNA的表达变化情况.结果:与对照组(0h组)相比,加力1 h时Col-Ⅱ的表达增加,但无统计学意义；加力6h时Col-Ⅱ表达显著增加(P＜0.05)；加力12h时Col-Ⅱ表达开始下降；当加力至24h时表达量显著降低(P＜0.05).结论:周期性张应力可以影响髁突软骨细胞主要细胞外基质的合成,在一定范围内随加力时间的延长基质合成逐渐增强；进一步延长加力时间,基质的合成受到明显抑制.
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低强度周期性静水压力对人膝关节软骨细胞的影响
目的:探讨低强度周期性静水压力对体外培养的人膝关节软骨细胞增殖、凋亡,以及细胞Ⅱ型胶原分泌表达的影响.方法:体外酶消化法分离培养成人膝关节正常软骨细胞,将培养的第3代软骨细胞分为两组:正常对照组、3.0 MPa组压力实验组,应用多功能恒温体外细胞培养中高压静水压力加载装置加载低强度周期性压力,共5d,每天2h.Ⅱ型胶原免疫组织化学染色法和甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,qRT-PCR、Western-Blot检测Ⅱ型胶原的分泌和表达.结果:软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色均显示为阳性.与正常对照组相比,3.0MPa组表现出促进软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,且Ⅱ型胶原的合成分泌明显升高(P＜0.05).结论:通过体外模拟人生理情况下较低强度(3.0 MPa)的周期性静水压力对人软骨细胞增殖、凋亡水平及周围基质分泌合成功能的影响,初步证实了较低强度压力有助于软骨自我修复和自身保护作用的发挥.
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hBMP-7基因转染对原代培养兔髓核细胞生物学活性的影响
目的:探讨原代培养的兔髓核细胞转染腺病毒载体介导的人骨形态发生蛋白-7(hBMP-7)基因后对其生物学活性的影响.方法:根据兔髓核细胞转染方式的不同,分为hBMP7组、LacZ组、未转染组三组,hBMP7组采用腺病毒载体介导的hBMP7进行转染,LacZ组转染LacZ基因,未转染组不转染任何基因.比较三组细胞增殖、硫酸糖胺多糖(GAG)产量、Ⅱ型胶原产量有无差异.结果:处理方式和转染后时间对细胞增殖、GAG产量、Ⅱ型胶原产量有交互作用(P＜0.05),hBMP7组细胞增殖、GAG产量、Ⅱ型胶原产量高于LacZ组、未转染组,差异有统计学意义(P＜0.05),LacZ组和未转染组细胞增殖、GAG产量、Ⅱ型胶原产量差异无统计学意义(P＞0.05).结论:hBMP-7基因转染可提高髓核细胞增殖能力,促进其产生细胞外基质.
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口服CⅡ治疗大鼠佐剂性关节炎及对IL-2的影响
目的 探讨口服Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen,CⅡ)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)的治疗作用,研究口服诱导免疫耐受过程中淋巴器官IL-2水平的变化及大鼠骨关节的病理改变.方法 建立大鼠AA模型,观察口服CⅡ对大鼠AA的抑制作用,采用免疫组化PowerVisionTM(PV)二步法测定对口服和未口服CⅡ的AA 大鼠的淋巴器官中IL-2水平及其变化,HE染色方法观察大鼠骨关节的病理变化.结果 口服Ⅱ型胶原对大鼠佐剂性关节炎可以明显减轻病变关节的炎症反应,降低发病率,而且大鼠淋巴器官中IL-2水平也较模型组显著降低.结论 口服CⅡ可有效减轻佐剂型关节炎大鼠的关节病变.CⅡ能使AA大鼠淋巴器官中IL-2水平降低.
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口服Ⅱ型胶原对佐剂性关节炎大鼠干扰素-γ的影响
目的探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,CⅡ)诱导免疫耐受抑制佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)的过程中,外周淋巴器官中干扰素-γ(IFN-γ)水平的影响.方法采用免疫组化PowerVisionTM(PV)二步法测定对口服和未口服CⅡ的AA大鼠的外周淋巴器官中IFN-γ水平.结果口服CⅡ诱导免疫耐受的AA大鼠的IFN-γ表达低于未口服CⅡ的大鼠.结论 CⅡ能使AA大鼠外周淋巴器官中IFN-γ水平降低,CⅡ可通过纠正Th1和Th2细胞功能失衡治疗佐剂性关节炎.
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胎牛血清和大鼠血清对体外软骨组织构建的影响
目的 观察胎牛血清和大鼠血清对体外构建大鼠软骨组织的效应,为组织工程软骨筛选出合适的培养方法.方法 取大鼠原代软骨细胞,离心后,培养箱中放置48 h,细胞团块会自发形成软骨小结.分为胎牛血清组和大鼠血清组.每隔一天换一次液,连续培养2周.取出软骨组织,称量重量,固定于4％多聚甲醛,经过脱水、石蜡包埋、切片后,经HE(苏木素-伊红)染色,甲苯胺蓝和藏红-固绿染色及细胞免疫荧光检测Ⅱ型胶原(Col2a1)、Ⅰ型胶原(Col1a1)的表达.结果 胎牛血清组的软骨组织重量比大鼠血清组的软骨组织明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).HE染色结果表明:大鼠血清组的组织形态呈纤维样结构,而胎牛血清组组织形态呈典型的软骨结构.胎牛血清组的组织甲苯胺蓝和藏红染色明显,而大鼠血清组的组织甲苯胺蓝淡染,固绿深染,提示软骨组织退变或非软骨组织.进一步免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原,胎牛血清组Ⅱ型胶原高表达,而大鼠血清组低表达,Ⅰ型胶原在两组的表达和Ⅱ型的表达呈相反的结果,即在大鼠血清组高表达,在胎牛血清组低表达.结论 胎牛血清可促进体外软骨组织的形成,而大鼠血清抑制了软骨组织形成.胎牛血清适合体外构建大鼠软骨组织.
