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Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分离心肌细胞的效果比较及分析
目的 比较Ⅰ型和Ⅱ胶原酶对大鼠心肌细胞分离的分离效果,并对其成因进行分析.方法 利用Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,比较两种酶对心肌细胞的分离效果;采用免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting技术检测成年大鼠心肌组织中是否存在Ⅱ型胶原;用大鼠剑突软骨部组织的Ⅱ型胶原和心肌组织的Ⅲ型胶原作为阳性对照;用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测Ⅱ型胶原酶试剂的成分.结果 Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,所获心肌细胞数量分别为(5.66±0.83)×106和(5.61±1.01) ×106,心肌细胞存活率分别为(74.17±6.27)％及(75.50±9.07)％,两者差异无显著性.分离的心肌细胞大部分不搏动,极少数细胞保持自律性收缩;Ⅱ型胶原在成年大鼠心肌组织中呈阴性表达,在剑突的软骨组织中呈阳性表达,Ⅲ型胶原在心肌组织中呈阳性表达;Western blotting检测显示,心肌组织中并无Ⅱ型胶原表达;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,Ⅱ型胶原酶试剂是一种包括5种蛋白的混合物.结论 成年大鼠心肌组织中无Ⅱ型胶原,用Ⅱ型胶原酶分离大鼠心肌细胞不具有针对性.
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旋毛虫感染不同时期对小鼠胶原诱导性关节炎影响的差异性观察?
观察旋毛虫感染的不同阶段对小鼠胶原诱导性关节炎（ Collagen?Ⅱ induced arthritis， CIA）的影响并初步探讨其机制。建立雄性DBA／1小鼠胶原（CⅡ）诱导性关节炎（CIA）模型，以旋毛虫肌幼虫（400条／只）分别于造模前14 d、造模当天感染小鼠。关节评分评价足爪关节病变的发生及严重程度。于胶原首次诱导后第50 d处死小鼠，取足爪关节切片观察组织病理学变化； ELISA检测血清抗CⅡ特异性IgG、IgG1、 IgG2a水平；分离脾淋巴细胞以ConA刺激培养， ELISA检测培养上清中IFN?γ、 IL?4、 IL?10、 IL?17和TNF?α细胞因子水平。结果显示，与单纯CIA造模组相比，预先14 d感染旋毛虫的CIA小鼠关节炎发病率、关节评分及组织学评分均显著降低，血清IgG1水平则显著升高，脾细胞培养上清Th2型细胞因子IL?4和调节性细胞因子IL?10水平显著增加。而造模当天感染旋毛虫的CIA小鼠关节评分和组织学评分显著升高，血清IgG2a水平显著升高，细胞培养上清Th1型细胞因子IFN?γ和促炎细胞因子IL?17、 TNF?α水平显著升高，且差异具有统计学意义。该结果表明，旋毛虫感染早期可加重胶原诱导性小鼠关节炎，而感染后期则对关节炎有一定抑制作用，提示旋毛虫对小鼠胶原诱导性关节炎的影响作用因感染时限的不同而存在差异，且该差异可能与不同感染时期诱导的Th反应类型的变化有关。
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重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究
目的表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(recombinant human collagen type Ⅱ peptide 250-270,rhCⅡ250-270)并研究其对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和关节滑液单个核细胞(SFMC)中特异性T细胞的活化作用. 方法利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ250-270多聚基因的表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli BL21,融合表达目的蛋白,经Glutathione Sepharose○R 4B亲和层析柱分离纯化,12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量(Mr)和纯度.以不同浓度(0.1、1.0、10、100、1000μg/ml)的6聚rhCⅡ2 50-270和化学合成的CⅡ250-270刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照,流式细胞仪测定刺激前后2组培养细胞中T细胞CD69的表达率,以分析其对特异性T细胞的活化作用. 结果融合表达的目的产物经SDS-PAGE分析,相对分子质量(Mr)大小约为43×103,与预期相符.分离纯化的6聚rhCⅡ250-270经SDS-PAGE凝胶薄层扫描,纯度为89%,浓度为2.1mg/ml.FACS分析:经100μg/ml浓度的6×rhCⅡ250-270刺激3d后,RA(9例)患者PBMC和SFMC T细胞中CD69+细胞率分别为(18.05±4.34)%和(25.17±4.89)%,显著高于同型对照GST组水平[(1.02±0.48)%,(1.25±0.23)%,(P＜0.01)],而与化学合成的CⅡ250-270组无统计学差异.进一步分析表明,同组患者滑液中CD69的表达显著高于外周血(P＜0.01). 结论纯化的6聚rhCⅡ250-270多肽经初步验证具有活化RA患者特异性T细胞的特性.
关键词： 类风湿关节炎 Ⅱ型胶原 重组人Ⅱ型胶原250-270多肽 T细胞增殖 -
Ⅱ型胶原对关节炎大鼠免疫功能的影响
目的 体外实验研究Ⅱ型胶原(CⅡ)对关节炎大鼠和正常大鼠免疫功能的影响,探讨CⅡ的免疫调节作用.方法 建立大鼠胶原型关节炎模型,体外实验研究CⅡ对关节炎大鼠和正常大鼠淋巴细胞增殖反应、自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性以及淋巴细胞亚群的影响.结果 CⅡ在体外实验中表现为低浓度促进而高浓度抑制大鼠淋巴细胞增殖的作用,对NK细胞杀伤活性、淋巴细胞亚群无影响.结论 CⅡ对关节炎大鼠有一定的免疫调节作用.
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低强度脉冲超声波对软骨细胞中金属蛋白酶-13与Ⅱ型胶原的影响
目的:研究低强度脉冲超声波(LIPUS)对体外培养软骨细胞中金属蛋白酶-13(MMP-13)与Ⅱ型胶原的影响.方法:选用6只1月龄的新西兰大白兔膝关节软骨进行体外培养,传至第二代,分为对照组与4个LIPUS辐射组,LIPUS强度分别是20mW/cm2、30mW/cm2、40mW/cm2、50mW/cm2.每天辐射20min,连续10d,每天细胞计数;分别在第5天及第10天收集细胞,采用Western-blot技术、qRT-PCR技术检测软骨细胞中MMP-13、Ⅱ型胶原的含量,并分析两者之间的相关性.结果:①与对照组相比,各LIPUS辐射组软骨细胞数均明显增高(P<0.05),其中40mW/cm2组软骨细胞数高,与其他各辐射组比较有显著性差异(P<0.05);②细胞培养5d和10d后,MMP-13含量均较第0天明显升高(p<0.05).但各辐射组MMP-13含量均较其对照组显著降低(P<0.05);其中40mW/cm2组MMP-13含量低(P<0.05);③细胞培养5d和10d后,Ⅱ型胶原表达量均较第0大明显降低(P<0.05).但各辐射组Ⅱ型胶原表达量均较其对照组显著升高(P<0.05).其中40mW/cm2组Ⅱ型胶原表达量高(P<0.05);④MMP-13与Ⅱ型胶原含量呈负相关(r=-0.757,P<0.05).结论:不同强度的LIPUS体外辐射可促进软骨细胞增殖,抑制MMP-13的表达,延缓Ⅱ型胶原的降解.
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生长激素对大鼠胫骨生长板软骨细胞胶原Ⅱ表达的影响
目的 探讨生长激素(growth hormone,GH)对离体培养的大鼠胫骨生长板的软骨细胞Ⅱ型胶原(collagen Ⅱ,Col Ⅱ)表达的影响.方法 采用两步酶消化法分离培养5～8只三周龄大鼠生长板的软骨细胞,用RT-PCR和免疫组化的方法分别检测不同浓度GH对软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达.结果 GH能促进软骨细胞ColⅡ的表达并呈浓度依赖性,GH在10～500 ng/ml之间能促进ColⅡ的表达,与对照组比较差均有统计学意义(P＜0.05),并且以100 ng/ml时表达强,随着GH浓度的加大,其促ColⅡ表达的效应逐渐减弱,1000 ng/ml与对照组比较无差异(P＞0.05).结论 GH通过促进软骨细胞ColⅡ的表达能维持软骨细胞的表型,GH在使用过程中不会导致骨龄的增加.
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臭氧对兔骨性关节炎关节软骨胶原影响的实验研究
目的:观察臭氧关节腔注射治疗后,骨性关节炎模型兔关节软骨的病理改变及软骨中Ⅱ型胶原的变化.方法:成年新西兰兔18只,随机分为三组:正常组(normal control group),模型组(model group),臭氧治疗组(ozone treatment group).建立骨性关节炎模型后,模型组给予空气1 ml、臭氧治疗组予40 μg/ml臭氧1 ml关节腔注射,每周1次,共2周,治疗结束1周后处死动物,取标本进行病理观察、Mankin's评分、Ⅱ型胶原免疫组化及其平均光密度测定.结果:(1)Mankin's评分:与正常组比较,模型组Mankin's评分显著增高(P＜0.01);与模型组比较,臭氧治疗组Mankin's评分显著降低(P＜0.05). (2) Ⅱ型胶原平均光密度:与正常组比较,模型组Ⅱ型胶原平均光密度显著降低(P＜0.05);与模型组比较,臭氧组Ⅱ型胶原平均光密度显著增高(P＜0.05). (3)电镜观察:模型组软骨全层变薄,可见到较多的胶原原纤维纤丝;臭氧治疗组软骨移行层下部及深层网架结构尚完整.结论:关节腔臭氧注射可以促进关节软骨胶原网修复.
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核心结合因子和Ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达
目的 观察核心结合因子(Cbfα1)和Ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达,探讨慢性肾脏病5期血管钙化发生的可能机制.方法 40只SD雄性大鼠随即分为4组:残肾+高磷组(n=10),残肾+正常磷组(n=10),假手术+正常磷组(n=10),假手术+高磷组(n=10).分别行5/6肾切除或假手术,术后开始给予高磷饮食或正常磷饮食16周.收集尿量检测24 h尿蛋白,取血检测血清磷、肌酐、尿素氮,取胸主动组织,von kossa染色检测血管钙化,RT-PCR检测Cbfα1和Ⅱ型胶原mRNA表达,免疫组化或Western-Blot检测Cbfα1和Ⅱ型胶原蛋白表达.结果 与其他3组比较,残肾+高磷组大鼠尿蛋白、血磷、尿素氮和肌酐明显增高(P＜0.05).von kossa染色显示,残肾+高磷组大鼠主动脉呈现明显钙化,而残肾+正常磷组仅个别出现钙化,假手术+高磷组和假手术+正常磷组未见钙化.免疫组化显示,与其他3组比较,残肾+高磷组大鼠主动脉Cbfα1、Ⅱ型胶原的表达明显增多(P＜0.05).相关性分析表明,血磷水平与Cbfα1、Ⅱ型胶原阳性积分呈正相关(r=0.525,0.640,P＜0.05).RT-PCR和Western-Blot显示,与其他3组比较,残肾+高磷组主动脉Cbfα1 mRNA和蛋白的表达明显上调(P＜0.05).残肾+高磷组、残肾+正常磷组与另外2组相比,动脉Ⅱ型胶原mRNA表达明显上调(P＜0.05).结论 高血磷是残肾大鼠血管钙化的重要影响因素,血磷水平与Cbfα1和Ⅱ型胶原的表达呈正相关.Cbfα1、Ⅱ型胶原的表达增多可能是高磷诱导的残肾大鼠血管钙化的重要机制之一.
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二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型的抗炎及关节保护作用的研究
目的 研究二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型的抗炎及关节保护的作用.方法 4℃下,将Ⅱ型胶原溶于醋酸中,制成混合液;再与完全弗氏佐剂以1∶1相配比制成乳剂.于大鼠尾部、肛周皮肤多点皮内注射0.3 mL乳剂;实验第7天重复操作,加强诱导1次.造模成功后,于实验第7天将大鼠随机分为5组,为高剂量二甲双胍组、低剂量二甲双胍组、甲氨蝶呤组、诱导组、正常对照组,每组10只,分别给予高剂量二甲双胍(100 mg·kg-1·d-1),低剂量二甲双胍(50 mg· kg-1·d-1),甲氨蝶呤(2.7 mg·kg-1·w-1)灌胃干预治疗,诱导组和正常对照组不给予药物,每隔2d对各组大鼠进行关节炎评分及距骨宽度测量;于第28天处死取材,再进行大鼠踝关节X线片,大鼠血清中炎症因子水平及抗炎因子水平等检测.结果 连续观察大鼠后足关节炎评分及距骨宽度测量示:高剂量二甲双胍组关节炎评分及距骨宽度较诱导组显著降低(P＜0.05),其余两用药组较诱导组也有一定降低关节炎评分及距骨宽度的作用(P＜0.05);X线片示:高剂量二甲双胍组可显著保留关节结构并使其免受侵蚀,而剂量低二甲双胍组和甲氨蝶呤组效果比高剂量二甲双胍组较弱,关节结构破坏程度较轻;ELISA结果示:高剂量二甲双胍组可显著降低大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P＜0.05),升高抗炎因子IL-10水平(P＜0.05);低剂量二甲双胍组及甲氨蝶呤组大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平较诱导组有所降低(P＜0.05),抗炎因子IL-10水平也有升高(P＜0.05).结论二甲双胍对于Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型有显著的抗炎及关节保护的作用.
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兔骨髓间充质干细胞Ⅱ型胶原表达的实验研究
目的 探讨兔骨髓间充质干细胞表达Ⅱ型胶原的实验研究方法.方法 利用β1转化生长因子腺病毒表达载体(Ad-TGFβ1)转染兔骨髓间充质干细胞(MSCs),观察转染后的Ⅱ型胶原表达.结果 细胞转染后Ⅱ型胶原在免疫印记和免疫组化检测下均呈强阳性表达.结论 Ad-TGFβ1转染兔骨髓MSCs可使其细胞内Ⅱ型胶原表达阳性.
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水通道蛋白3在膝骨关节炎患者退变关节软骨细胞中的表达及意义
目的 测定水通道蛋白3 (aquaporin 3,AQP3)在膝骨关节炎患者退变关节软骨细胞中的表达,探讨AQP3在膝骨关节炎退变关节软骨细胞中的作用及意义.方法 选取自2009-01-2012-01芜湖市第一人民医院收治的36例因膝骨关节炎、外伤高位截肢、暴力骨折而进行全膝关节置换术、截肢术、切开复位内固定术并取出的关节软骨.实验组为20例膝骨关节炎,关节软骨为Outerbridge标准Ⅲ级;对照组为16例外伤高位截肢、暴力骨折,关节软骨为Outerbridge标准Ⅰ级.将术中取出的关节软骨采用酶消化法分离及培养出原代关节软骨细胞,倒置相差显微镜及HE染色观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色及Real time RT-PCR对终板软骨细胞标志性基因Ⅱ型胶原及蛋白多糖进行测定、鉴定.Real time RT-PCR、Western blot法检测AQP3基因及蛋白的表达变化.结果 对照组关节软骨细胞以多角形为主;实验组关节软骨细胞呈梭形.蛋白多糖、Ⅱ型胶原、AQP3基因在实验组中的表达较对照组低;AQP3蛋白在实验组中表达较对照组下调.结论 膝骨关节炎患者关节软骨退变后,AQP3基因表达明显下降,通过调控关节软骨细胞中AQP3表达可能会改善关节软骨的退变.
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CDMP-1诱导骨髓间充质干细胞分化成髓核细胞的实验研究
目的 探讨软骨衍生形态发生蛋白-1(CDMP-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核细胞分化,并检测其诱导的细胞是否具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能.方法 BMSCs采用0 ng/ml(对照组)以及10 ng/ml(观察组)的CDMP-1处理,将正常椎间盘髓核细胞作为阳性对照组.BMSCs诱导后采用PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型胶原基因水平表达,用Western Blot法检测Ⅱ型胶原蛋白水平的表达.采用阿尔辛蓝染色及定量比较蛋白多糖含量的变化.结果 PCR检测结果发现,观察组和对照组中Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原均有增加,而阳性对照组中Ⅱ型胶原明显比观察组更少.基因水平检测结果发现,CDMP-1诱导BMSCs分化后Ⅱ型胶原基因表达比正常髓核细胞还高.观察组中Ⅱ型胶原的蛋白水平表达明显比阳性对照组和对照组细胞更高,对照组中Ⅱ型胶原蛋白水平表达几乎很少.阿尔辛蓝染色结果发现,观察组蛋白多糖含量稍高于阳性对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);阳性对照组与观察组蛋白多糖含量均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CDMP-1能够诱导BMSCs向髓核细胞分化,具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能.
关键词： 软骨衍生形态发生蛋白-1 骨髓间充质干细胞 髓核细胞 Ⅱ型胶原 蛋白多糖 -
重组腺病毒介导外源性SOX9在正常关节软骨细胞中诱导软骨基质合成的体外表达
背景:关节软骨损害是临床一种常见的损伤,软骨形成转录因子SOX9是一种调控Ⅱ型胶原合成的关键因子.目的:观察以表达外源性SOX9的腺病毒体外成功感染关节软骨细胞后对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(Aggrecan)合成的影响,探讨软骨损伤后修复软骨缺损的基因治疗方法.方法:体外构建腺病毒载体AdSOX9和AdGFP,成功感染培养的人关节软骨细胞,分别以逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)技术检测了病毒感染前后SOX9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA的表达,同时以免疫组化技术检测了病毒感染前后关节软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达.结果:应用AdEasy腺病毒构建专利技术体外成功构建了能高效表达外源性SOX9的腺病毒AdSOX9和只表达绿色荧光蛋白GFP的腺病毒AdGFP；以腺病毒AdSOX9和AdGFP体外成功感染人关节软骨细胞后48 h,未感染对照组和AdGFP感染组,均检测到了Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达；而AdSOX9感染组的细胞中,检测到了SOX9基因mRNA的表达明显增高,与未感染对照组和AdGFP感染组相比有显著性差异(P＜0.05),同时,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达也较未感染对照组和AdGFP感染组明显增高,差异显著(P＜0.05).结论:以外源性SOX9为目的基因的腺病毒介导基因治疗方法,在促进关节软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白聚糖合成方而得出了初步满意的结果,SOX9可能是关节软骨缺损基因治疗研究领域一个新的理想靶点,值得继续深入研究.
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不同分离方法对骨髓基质干细胞成软骨分化的影响
目的 探讨分离骨髓基质干细胞(BMSCs)的两种基本方法-贴壁分离法和密度梯度离心法对BMSCs成软骨分化能力的影响.方法 抽取兔双侧股骨骨髓,等分,一份(A组)用贴壁分离法,另一份(B组)用密度梯度离心法分离BMSCs,倒置显微镜观察BMSCs的生长情况,选择两组同代的BMSCs,用TGF-β1诱导其向软骨方向分化.诱导后的细胞用免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况,用原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达情况,后计算两种检测方法的细胞阳性率.结果 A、B两组细胞经TGF-β1诱导后,Ⅱ型胶原免疫组化阳性率分别为76.1%和77.7%,Ⅱ型胶原mRNA原位杂交阳性率分别为70.3%和71.0%.结论 贴壁分离法和密度梯度离心两种分离方法对BMSCs的生长和成软骨分化无显著差别.
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p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对大鼠骨性关节炎的影响
目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对大鼠膝关节骨性关节炎关节软骨的影响.方法 40只SD大鼠随机分为A、B、C、D 4组.A、B、C组行单侧膝关节前交叉韧带切除术,A组于术后行关节腔内注射0.1 mL浓度为100 μm/L SB203580,B组注射等量生理盐水做为实验对照,C组不予任何处理为空白对照组,D组为正常对照组.术后8周处死动物.观察各组标本大体评分、Mankin评分、软骨细胞凋亡指数以及软骨Ⅱ型胶原免疫组化染色.结果 40只大鼠均纳入结果分析.大体评分及Mankin评分显示A组软骨退变明显轻于B、C组(P＜0.05);各组均发现有凋亡的软骨细胞,A组软骨细胞凋亡指数低于B、C组(P＜0.05),D组软骨细胞凋亡指数明显低丁其他3组(P＜0.05);A组关节软骨Ⅱ型胶原染色吸光度值大于B、C组(P＜0.05).结论 p38MAPK抑制剂对关节软骨有一定的保护作用,可以延缓OA进程,对OA有一定的治疗作用.
关键词： 骨性关节炎 p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂 Ⅱ型胶原 软骨细胞凋亡 -
几丁质支架对体外间质干细胞成软骨分化的影响
目的 鉴定间充质干细胞诱导分化为软骨细胞后,其在单层培养和几丁质支架上培养的差别.方法 密度梯度离心兔股骨骨髓,分离BMSCs,用TGF-β1诱导第3代的BMSCs向软骨方向分化,2周后检测Ⅱ型胶原表达情况.将分化后的软骨样细胞传代,用无TGF-β1的培养基分别进行单层培养和接种在几丁质支架上培养2周,再用免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况.结果 BMSCs经TGF-β1诱导后向软骨细胞方向分化,诱导后的细胞在无TGF-β1的培养中,采用单层培养方式的软骨细胞很快出现去分化表型,而接种在几丁质支架上的细胞仍能较好表达Ⅱ型胶原.结论 几丁质支架在延缓软骨细胞去分化和老化方面有积极作用.
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降钙素对兔膝骨关节炎发病过程中细胞因子及关节软骨细胞凋亡的试验研究
目的 探讨降钙素(CT)对兔膝骨关节炎发病过程中细胞因子及关节软骨细胞凋亡情况的影响.方法 将36只健康大耳白兔随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)和CT治疗组(C组),B、C两组采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,A组除切开皮肤和关节腔外,不做其他处理,从术后第6周开始C组每天皮下注射CT 5u/kg,A、B组给与等量生理盐水皮下注射,连续注射20 d后处死动物.观察膝骨关节炎(KOA)发病过程中关节软骨病理组织学的变化,关节液中细胞因子IL-1、TNF-α、NO的变化.关节软骨Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的变化,以及CT对上述指标的影响.结果 与A组相比,B组JP和Mankin's评分明显升高,关节软骨损伤明显加重,关节液中IL1、TNF-α、NO含量明显升高(P＜0.05),关节软骨Ⅱ型胶原含量明显降低,MMP-1活性和软骨细胞凋亡百分数明显升高(P＜0.05)；与B组相比,C组关节液中IL-1、TNF-α、NO含量明显降低(P＜0.05),关节软骨损伤减轻、Ⅱ型胶原含量明显升高,MMP-1活性和软骨细胞凋亡百分数明显降低(P＜0.05).结论 CT对KOA的治疗作用与细胞因子及细胞外基质合成与分解代谢失衡的恢复有关.
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膝关节骨性关节炎患者尿液中C2C水平检测
目的：观察并探讨尿液中Ⅱ型胶原羧基末端3/4片段（ C2C）水平与膝关节骨性关节炎（ KOA）患者病变程度的关系。方法收集90例膝关节骨性关节炎患者及20例非膝关节骨性关节炎患者清晨尿液标本5 mL及膝关节正侧位影像学资料，尿液标本置-80℃冰箱保存，影像学资料根据Kellgren-Lawrence 放射学分级标准对膝关节骨性关节炎患者的影像学表现进行分级，实验分为五组，对照组，I级组，II级组，III级组及IV级组。各组间年龄及性别构成比较没有显著性差异，无统计学意义。尿液标本收齐后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测尿液中C2C水平。结果与对照组（261.235±39.944 pg/mL）相比，膝关节骨性关节炎组C2C水平（218.341±22.270 pg/mL）明显升高，差异有统计学意义（ P＜0.01）。各组C2C水平比较：IV组（311.872±18.759 pg/mL）＞III组（273.753±18.595 pg/mL）＞II组（256.251±23.379 pg/mL）＞I组（219.009±13.431 pg/mL）或正常组（218.341±22.270 pg/mL）（P＝0.000）。 I级膝关节骨性关节炎组患者尿液C2C与对照组水平相差无统计学意义（ P＞0.05）。结论骨性关节炎患者C2C水平较正常对照组高，C2C升高水平与膝关节骨性关节炎病变程度平行，且二者呈高度正相关。
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人尿液中CTX-Ⅱ与Zn2+、Ca2+浓度对膝关节骨关节炎诊断价值的研究
目的 探讨膝关节骨关节炎(KOA)患者尿液中CTX-Ⅱ与Zn2+、Ca2+浓度与其病变程度的关系.方法 收集82例KOA组和20例对照组的尿液标本及膝关节正侧位影像学资料,采用Kellgren-Lawrence放射学分级标准对KOA组的影像学表现分级,分为Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿液中CTX-Ⅱ、ICP-AES测定Zn2、Ca2+浓度.结果 KOA组尿液中CTX-Ⅱ与Zn2+、Ca2+浓度高于对照组(P＜0.001).CTX-Ⅱ水平:Ⅳ组＞Ⅲ组＞Ⅱ组＞Ⅰ组和对照组(P =0.000).Zn2+、Ca2+浓度:Ⅳ组、Ⅲ组、Ⅱ组、Ⅰ组＞对照组(P=0.000).结论 CTX-Ⅱ升高水平与KOA的影像学分级平行,两者呈高度正相关性.Zn2+、Ca2+升高水平与KOA的影像学分级并不平行.CTX-Ⅱ可作为区分KOA严重程度的标志物,但其作为早期诊断的价值有限,但与Zn2+、Ca2+联合有望成为KOA的早期诊断指标.
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椎间盘髓核细胞中Sox9与Ⅱ型胶原基因表达的关系
目的:探讨椎间盘髓核组织中Sox9基因表达的变化及其与Ⅱ型胶原基因表达的关系.方法:将30个椎间盘组织按Thompson分期分为Ⅰ～Ⅳ期,应用RT-pCR、Western b1ot和免疫组化方法检测各期间盘组织中Sox9、Ⅱ型胶原基因的mRNA和蛋白表达;应用SPSS 10.0统计学软件,采用单因素方差分析、t检验和Pearson相关性检验分析两者的相互关系.结果:椎间盘髓核组织中Sox9 mRNA的表达量在总体上低于Ⅱ型胶原,Sox9蛋白表达位于细胞核中而Ⅱ型胶原主要位于细胞间质内,Sox9在Thompson Ⅰ期椎间盘的细胞核内表达很强而在Ⅳ期则很弱甚至缺失;从Thompson Ⅰ～Ⅳ期两种基因的mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,各分期间有显著性差异(P＜0.05).Thompson Ⅰ～Ⅳ期标本中Ⅱ型胶原与Sox9表达量的下降趋势相近.结论:Sox9和Ⅱ型胶原基因表达水平与Thompson分期密切相关,随椎间盘退变程度加重表达逐渐降低,且两者下降趋势相近.
