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牛蒡子苷元对关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原表达的影响
目的 观察牛蒡子苷元(arctigenin,ARC-G)对关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原表达的影响.方法 采用酶消化法体外分离关节软骨细胞,取第1代软骨细胞分别接种于6孔培养板和96孔培养板中,实验分为空白组、牛蒡子苷元低浓度组(低浓度组)和牛蒡子苷元高浓度组(高浓度组).各组分别给予相应的干预措施,48 h后,以SABC免疫组织化学染色法观察软骨细胞Ⅱ型胶原的表达情况,以MTT法检测细胞的增殖情况,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清Ⅱ型胶原的含量.结果 ①与空白组比较,低浓度组和高浓度组在软骨细胞数量和阳性染色强度上均有所增加,且高浓度组优于低浓度组;②与空白组比较,低浓度组和高浓度组软骨细胞OD值及Ⅱ型胶原含量均明显提高(P＜0.05),且高浓度组优于低浓度组(P＜0.05).结论 牛蒡子苷元可明显促进体外培养关节软骨细胞的增殖和Ⅱ型胶原的表达,较好地维持软骨细胞表型,从而可有效用于骨关节炎的治疗.
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抗骨增生片对兔膝骨关节炎软骨组织形态及Ⅱ型胶原、caspase-3表达的影响
目的 观察兔膝骨关节炎使用抗骨增生片后软骨组织及其细胞中Ⅱ型胶原、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3表达的变化.方法 随机将30只兔分为正常组10只(A),另20只用来造模.造模组采用膝关节腔内注射1.6％木瓜蛋白酶,造成兔膝骨关节炎模型.造模成功后,再将造模组随机分为模型组(B)、抗骨增生片组(C)(B,C,n=10),C组灌胃0.36 g/kg的抗骨增生片,每日1次;A、B组同法给予等量生理盐水.30 d后,取出兔膝关节软骨,HE染色后观察软骨组织的病理形态,软骨组织中Ⅱ型胶原、caspase-3的表达情况采用免疫组化法检测.结果 抗骨增生片组软骨组织破坏程度较模型组明显减轻;C组中Ⅱ型胶原比模型组高(P＜0.01)、caspase-3比模型组低(P＜0.01).结论 抗骨增生片能抑制兔骨关节炎软骨病理损害的进展,修复损伤软骨可能与其上调Ⅱ型胶原、下调caspase-3的表达,抑制软骨细胞过度凋亡有关.
关键词： 抗骨增生片 骨关节炎 软骨组织 Ⅱ型胶原 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3 -
复元胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响
目的 观察复元胶囊对大鼠膝骨关节炎(OA)软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响,探讨其保护关节软骨的作用机理.方法 采用Hulth法建立OA模型,随机分为6组:正常组、模型组、四环素组及复元胶囊低、中、高剂量组.各药物组分别给不同剂量药物灌胃每天1次,持续12周.免疫组化检测软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,甲苯胺蓝染色软骨蛋白多糖含量.结果 复元胶囊各组软骨Ⅱ型胶原及蛋白多糖显著高于模型组(P<0.01),而Ⅰ型胶原低于模型组(P<0.05).结论 复元胶囊能增加大鼠膝骨关节炎软骨中Ⅱ型胶原表达及蛋白多糖水平,同时降低Ⅰ型胶原表达,对维持正常胶原表型、保护关节软骨有一定的作用.
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乌梢蛇Ⅱ型胶原提取及其诱导大鼠关节炎特性的研究
提取和纯化乌梢蛇Ⅱ型胶原,观察乌梢蛇Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎的特性,为研究乌梢蛇治疗类风湿关节炎的机制提供研究方向.离心提取乌梢蛇Ⅱ型胶原,经DEAE-52纤维素交换柱纯化,斑点免疫渗滤试验和免疫印迹试验进行成分鉴定.乌梢蛇Ⅱ型胶原不完全佐剂免疫大鼠,观察大鼠关节炎发生情况、抗Ⅱ型胶原抗体、CD 4/CD8亚群、血清中TNF-α、IL-10、IL-1β、IL-4 的变化.乌梢蛇Ⅱ型胶原提纯品在SDS-PAGE凝胶电泳上呈一条区带,斑点免疫渗滤试验和免疫印迹试验为阳性反应.诱导大鼠关节炎发生率为86.67%,关节炎大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体明显增高(P＜0.01),CD4 T细胞亚群和CD4+ /CD8+增高(P＜0.05),TNF-α含量增加(P＜0.01),IL-10含量降低(P＜0.01),血清中IL-1β和IL-4含量无变化.结果显示,乌梢蛇Ⅱ型胶原能通过免疫方法可以诱导大鼠产生多关节炎,并且体内有自身免疫反应的表现.
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乌梢蛇水解液对大鼠胶原性关节炎的防治作用
本研究观察乌梢蛇水解液对大鼠胶原性关节炎(CIA)的作用.实验分预防性和治疗性疗效观察两部分,均设低剂量组(0.5 mg/kg)、中剂量组(5 mg/kg)、高剂量组(15 mg/kg)和空白对照组,预防性疗效观察于大鼠致炎前14、11、8、5和2d,给药共5次;治疗性疗效观察于大鼠致炎后第18天,将患关节炎的大鼠分组,每天给药一次,共21 d.分别于预防给药大鼠致炎后第25天和治疗给药大鼠致炎后第39天记录各组大鼠关节炎的发病率、关节炎症状指数、血清Ⅱ型胶原抗体水平和皮肤对II型胶原的迟发型超敏反应(DTH).结果表明预防给药中剂量和高剂量乌梢蛇水解液能降低大鼠CIA的发病率、改善关节炎症状(P＜0.05),治疗给药中剂量和高剂量能减轻关节炎症状(P＜0.05);低剂量无预防发病率和治疗作用.中、高剂量药物均能降低预防和治疗给药CIA的血清抗Ⅱ型胶原抗体水平和皮肤对Ⅱ型胶原的DTH.实验提示乌梢蛇水解液对大鼠CIA有预防和治疗作用.
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口服鸡Ⅱ型胶原治疗大鼠实验性类风湿性关节炎的研究
本文研究口服鸡Ⅱ型胶原(cCII)治疗大鼠类风湿性关节炎的作用.以CCII和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠,建立大鼠的类风湿性关节炎(RA)模型.用CCⅡ进行口服,观察实验组和对照组动物关节炎的发病程度.并以ELISA法对发病大鼠血清中的抗CCⅡ抗体的水平进行检测.结果表明,口服CCII可以减轻大鼠关节炎的发病程度.其中口服6μg、60μg CCⅡ的实验组大鼠关节炎指数均较对照组明显减低,且差异有显著性意义(P＜0.01;P＜0.05).而口服600μgCCII的实验组大鼠关节炎指数虽较对照组大鼠降低,但二者相比,无显著性差异(P＞0.05).ELISA检测结果显示:口服低剂量(6μg和60μg)可溶性CCⅡ对大鼠体内抗CCⅡ抗体的产生有一定的抑制作用.口服CCⅡ对关节炎大鼠的发病程度有较明显的抑制作用,为应用口服耐受治疗RA等自身免疫性疾病提供了实验基础.
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骨关节炎中Ⅱ型胶原相关分子标记物研究进展
骨关节炎(osteoarthritis, OA)是一种生物力学改建过程,主要表现为关节软骨变性、破坏、软骨下骨硬化,关节边缘和软骨下骨反应性增生、骨赘形成.可见软骨损伤是OA发病机制中的核心内容.而胶原是关节软骨中非常重要的成分,占软骨干重的60%,其中又以Ⅱ型胶原为主,胶原成分及其代谢产物的改变与OA病变密切相关.随着研究的不断深入,部分胶原相关分子可能成为OA早期诊断、疗效评价、预测疾病进展的分子标志物.
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Ⅱ型胶原水凝胶在软骨损伤修复中的研究进展
作为一类新型的天然细胞支架,Ⅱ型胶原水凝胶具有良好的生物特性和理化性质,对软骨损伤修复具有很大的研究意义和临床应用价值.本文综述了近年来国内外Ⅱ型胶原水凝胶在软骨损伤修复中的研究进展,为软骨组织工程细胞支架的选择提供参考.
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骨保护素基因敲除对老年小鼠关节软骨的影响
目的：研究骨保护素（osteoprotegerin, OPG）在老年小鼠关节软骨增龄性变化中的作用及意义。方法：取鼠龄为1年的骨保护素基因敲除（opg-knockout, Opg-KO）型小鼠和野生型（wildtype，WT）小鼠的长骨组织，分别进行X-ray、micro-CT检查，并行组织学染色观察关节软骨组织形态学的改变；行甲苯胺蓝染色，观察关节软骨蛋白聚糖的改变；行免疫组化染色，观察关节软骨Ⅱ型胶原表达情况。结果：与WT小鼠相比，Opg-KO 小鼠关节表面粗糙，边缘性骨赘增多，软骨下骨的骨密度增高，关节软骨表面扁平塌陷，软骨细胞明显减少，排列紊乱，蛋白聚糖显著丢失，Ⅱ型胶原表达明显减少。结论：Opg-KO小鼠发生了严重骨关节炎，骨保护素对于维持老年小鼠关节软骨结构的完整有重要作用。
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不同加载时间周期性张应力对大鼠颅底软骨细胞的影响
目的:构建颅底软骨细胞体外培养力学刺激模型,研究周期性张应力对颅底软骨细胞主要细胞外基质(Ⅱ型胶原)和Sox9表达的影响.方法:采用FX-5000T应力加载系统对体外培养的第2代大鼠颅底软骨细胞分别施加3、6、12、24 h的周期性张应力,加力值均为10％形变率,频率均为1 Hz.加力后即刻收集细胞,提取总RNA,实时荧光定量PCR技术检测颅底软骨细胞Ⅱ型胶原(type-Ⅱcollagen,Col-Ⅱ)和Sox9 mRNA的表达.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与对照组(加力0h)相比,加力3h组Col-Ⅱ和Sox9表达下降,且后者有显著差异(P＜0.05);加力6h组Col-Ⅱ和Sox9表达显著下降(Col-Ⅱ,P＜0.01;Sox9,P＜0.05);加力12h组Col-Ⅱ和Sox9表达较6h组有所上升,与对照组相比差异无统计学意义;加力24h组中,两者表达与对照组相比显著升高(P＜0.05).结论:周期性张应力可影响颅底软骨细胞增殖及细胞外基质合成,加力短时间基质合成抑制,增加加力时间则明显促进基质合成,且成软骨分化标志物Sox9mRNA表达水平差异先于Col-Ⅱ出现.
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生长期兔颞下颌关节盘前移位后髁突软骨胶原表达的变化
目的:建立生长期兔颞下颌关节不可复性关节盘前移位动物模型,检测髁突软骨内Ⅱ型胶原和X型胶原的表达,探讨青少年颞下颌关节盘不可复性前移位与髁突软骨内成骨的关系,及其与下颌骨发育不对称畸形之间存在相关性的机制.方法:取生长期新西兰大白兔40只,右侧颞下颌关节手术建立不可复性关节盘前移位模型,左侧行假手术作为对照.实验动物于建模后24 h、1、4、8、12周分组处死取材.通过免疫组织化学方法检测髁突软骨组织内Ⅱ型胶原和X型胶原在蛋白水平的表达,采用PASW statistics 18.0软件包对每组样本实验侧和对照侧进行配对t检验.结果:Ⅱ型胶原在盘移位后24h、1、4、8周时与对照侧均无显著差异,12周时较对照侧表达升高(P＜0.05).X型胶原在盘移位后24 h(P＜0.01)、1周(P＜0.01)、4周(P＜0.05)时较对照侧显著降低,8周、12周时实验侧与对照侧间无显著差异.结论:不可复性关节盘前移位对兔髁突软骨内成骨过程造成干扰,这种影响可能是单侧颞下颌关节盘前移位后患侧下颌支高度不足和下颌骨不对称畸形的重要原因.
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复元胶囊对晚期膝骨关节炎大鼠软骨中Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶1和3的影响
目的 观察复元胶囊对实验性大鼠晚期膝骨关节炎软骨组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-3及Ⅱ型胶原的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用机制.方法 成年雄性SD大鼠60只,随机分为六组,每组10只.除正常组外,其余各组均采用Huhh法建立晚期膝骨关节炎模型.手术后第2周开始,抗骨增生胶囊组予抗骨增生胶囊557 mg·kg-1·d-1,复元胶囊低、中、高剂量组分别给予复元胶囊371.65、743.30、2 229.90 mg·kg-1·d-1,正常组和模型组给予等体积生理盐水,每日灌胃1次,持续12周.12周后评价各组大鼠关节肿胀情况,并取大鼠胫骨平台的软骨组织.按Pelletier-JP标准评价关节软骨大体情况,并通过HE染色进行Mankin's评分.采用免疫组织化学法和Western blot法检测各组关节软骨中MMP-1、MMP-3及Ⅱ型胶原的蛋白表达量.结果 与正常组相比,模型组大鼠关节肿胀评分、Pelletier-JP标准和Mankin's评分均升高(P＜ 0.05或P＜ 0.01),而各给药组关节肿胀评分、Pelletier-JP标准和Mankin's评分均低于模型组(P＜ 0.05或P＜ 0.01).复元胶囊中、高剂量组Mankin's评分低于抗骨增生胶囊组(P＜ 0.05或P＜0.01).与正常组相比,模型组软骨组织中MMP-1、MMP-3表达量明显升高,Ⅱ型胶原表达量明显降低(P＜0.01).各给药组MMP-1、MMP-3表达量低于模型组,Ⅱ型胶原表达量高于模型组(P＜0.05或P＜0.01).复元胶囊高剂量组MMP-1、MMP-3的表达量低于抗骨增生胶囊组和复元胶囊低、中剂量组,Ⅱ型胶原表达量高于抗骨增生胶囊组和复元胶囊低、中剂量组(P＜0.05或P＜0.01).结论 复元胶囊能通过抑制MMPs的表达,减少胶原的降解,达到对晚期骨关节炎的防治作用.
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同种异体组织工程化软骨组织的生化分析
目的以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异.方法以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹部皮下.按不同时间段取材, Western-blot、MTT比色法分析测定其GAG和Ⅱ型胶原含量,并与正常关节软骨组织比较.结果新生软骨中GAG的含量比正常关节软骨显著下降(P<0.01),而II型胶原含量与正常关节软骨无显著性差异.结论胚胎来源的同种异体组织工程化软骨与正常关节软骨有着相同的生化成分,且新生软骨中II型胶原的含量与正常关节软骨接近.
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龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用
目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用.方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响.结果:在转化生长因子-β3(TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P＜0.01).结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程.
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温和灸对大鼠颈椎间盘退变组织Ⅰ型、Ⅱ型胶原表达的影响
目的:观察温和灸对大鼠颈椎间盘退变组织Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原表达的影响.方法:采用动静力失衡性颈椎间盘退变模型,运用原位杂交技术观察温和灸天柱穴、大杼穴对大鼠颈椎间盘组织Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原表达的影响,并设假手术组、芬必得组、模型对照组.结果:对大鼠颈椎间盘组织内的Ⅰ型胶原蛋白表达,假手术组与其他各组之间比较有非常显著性差异(P＜0.01);温和灸组、假手术组与模型组之间比较无显著性差异(P＞0.05).而对Ⅱ型胶原蛋白的表达,假手术组与其他各组之间比较有非常显著性差异(P＜0.01);温和灸组与芬必得组、模型组之间比较有非常显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).结论:温和灸可以促进Ⅱ型胶原的合成,降低Ⅰ型/Ⅱ型胶原比值,从而增加颈椎间盘的抗牵拉能力,维持椎间盘正常的力学特性.
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刺山柑果实精制提取物抗类风湿关节炎的实验研究
目的 评价刺山柑果实精制提取物对弗氏完全佐剂和Ⅱ型胶原引起的大鼠类风湿性关节炎的治疗效果.方法 采用弗氏完全佐剂和Ⅱ型胶原为造模剂分别建立大鼠类风湿性关节炎模型,测定刺山柑精制提取物对关节炎大鼠足趾肿胀抑制率和相关炎症因子表达的影响.结果 刺山柑精制提取物对大鼠佐剂性关节炎继发性病变具有一定的治疗作用,治疗效果均持续至实验结束,其中刺山柑高剂量的抑制率基本稳定在20％以上,对大鼠关节周围组织滑膜内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、干扰素-γ(IFN-γ)有一定下调作用.刺山柑提取物对Ⅱ型胶原诱导的大鼠类风湿关节炎足趾肿胀也具有显著抑制作用,100 mg/kg剂量组在给药后3d,开始出现一定程度的抑制足关节的肿胀,给药后14d抑制率达到40.3％ (P＜0.05).结论 刺山柑精制提取物具有抑制弗氏完全佐剂和Ⅱ型胶原引起的大鼠类风湿性关节炎的作用,能有效缓解其关节附件的肿胀,其作用机制可能是通过下调TNF-0c、IL-1、IFN-α等相关炎症因子的表达.
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氟浓度对体外培养大鼠软骨细胞糖胺多糖和Ⅱ型胶原分泌的影响
目的 探讨氟浓度对体外培养软骨细胞糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原分泌的影响.方法 取2月龄雌性SD大鼠下肢髋关节及膝关节软骨,分离、培养出软骨细胞后,接种于细胞培养瓶,经鉴定后,分为空白对照组和NaF受试组(6.25 μmol/ml、12.50μmol/ml、25.00 tmol/ml、50.00 μmol/ml和100.00 μmol/ml),孵育6d后,分别进行GAG含量测定、阿利新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色.结果 NaF受试6d后,大鼠软骨细胞培养液GAG含量各组无显著性差异(P＞0.05);阿利新蓝染色显示,大鼠软骨细胞内的糖原异染颗粒亦无明显差异;Ⅱ型胶原免疫组化染色则显示,不同剂量NaF可引起对软骨细胞外Ⅱ型胶原染色积分随剂量的升高逐渐上升(P＜0.05).结论 NaF对大鼠软骨细胞GAG分泌可能无影响,但可能影响Ⅱ型胶原的分泌.
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Ⅱ型胶原在骨关节炎软骨细胞中的表达
目的 通过观察Ⅱ型胶原mRNA在骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者关节软骨细胞与正常关节软骨细胞中的表达情况,探讨Ⅱ型胶原在骨关节炎中的作用.方法 收集髋关节原发性骨关节炎、继发性骨关节炎的关节软骨各8例,并以9例正常关节软骨作对照,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测Ⅱ型胶原mRNA在骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞中的表达情况.结果 原发性骨关节炎与继发性骨关节炎组Ⅱ型胶原mRNA的表达均明显低于正常组,与正常组相比差异均有统计学意义(P=0.014);而原发性骨关节炎组与继发性骨关节炎组间Ⅱ型胶原mRNA的表达差异没有统计学意义(P=0.716).结论 软骨细胞内Ⅱ型胶原表达的减少直接导致了Ⅱ型胶原质和量的改变,可能是骨关节炎发病的重要环节,是两类骨关节炎发病的共同途径.
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三羟基异黄酮对关节软骨细胞合成胶原和蛋白多糖的影响
目的 通过对体外培养软骨细胞的实验研究,探寻受体酪氨酸激酶抑制剂对软骨细胞在细胞分子水平的影响及其可能机制.方法 对软骨细胞进行原代及传代培养.通过对培养细胞形态学及甲苯胺蓝染色观察,选择适合传代软骨细胞,应用三羟基异黄酮干预后1、2、3、4天RT-PCR、ICC及甲苯胺蓝染色观察法比较药物干预对体外培养软骨细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原的转录和翻译水平及蛋白多糖的表达变化.结果 20 μg/mL及25μg/mL 三羟基异黄酮干预可以抑制Ⅰ型胶原表达.同时增加Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达.结论 三羟基异黄酮可以抑制脂多糖刺激诱导的软骨细胞反分化,对体外培养关节软骨细胞的正常表型具有一定的保护作用,其保护作用与三羟基异黄酮浓度呈现一定的相关性.
关键词： 蛋白多糖 Ⅰ Ⅱ型胶原 受体酪氨酸激酶抑制剂 -
低强度脉冲超声对兔膝骨关节炎软骨细胞外基质修复的影响及作用机制
目的 探讨低强度脉冲超声对兔膝骨关节炎软骨细胞外基质修复的影响及其作用机制,为临床膝骨关节炎治疗方案的制定提供理论依据.方法 选取90只成年雌性家兔,随机分为实验组和对照组,各45只.通过Hulth法建立膝骨关节炎模型,2周后实验组接受低强度脉冲超声治疗,对照组接受假低强度脉冲超声治疗.在治疗第2、4、8周两组各随机处死15只家兔,对比两组家兔的改良Mankin评分以及基质金属蛋白酶(MMPs)、蛋白多糖Ⅱ型胶原的检测结果,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的相对表达量和关节软骨中一氧化氮浓度的变化情况.结果 第2、4、8周,观察组的改良Mankin评分以及MMP-3、MMP-7、MMP-13的阳性细胞胞浆平均光密度值均低于对照组,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的阳性细胞胞浆平均光密度值均高于对照组(P值均<0.05);观察组关节软骨中一氧化氮浓度以及MMP-3、MMP-7、MMP-13的相对表达量均显著低于对照组,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的相对表达量均显著高于对照组(P值均<0.05).结论 低强度脉冲超声可抑制兔膝骨关节炎关节软骨MMPs 的表达,降低一氧化氮的含量,减少软骨细胞外基质的降解,有利于关节软骨损伤的修复.
