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体外血管钙化模型中骨钙素的分泌和X型胶原的表达
目的:研究25-羟基胆固醇对体外培养的主动脉中膜细胞钙化的促进作用,以及在此过程中骨钙素的分泌和X型胶原mRNA的表达与钙化的关系,初步探讨主动脉钙化的机制.方法:采用外殖块法分离培养家兔主动脉中膜细胞,进行von kossa染色以显示钙化,显微分光光度法检测细胞内外不溶性钙.平衡法125I放免测定培养上清骨钙素的含量.RT-PCR方法检测X型胶原mRNA的表达.结果:25-羟基胆固醇(实验组)培养的传代细胞可见多个细胞结节,且细胞结节von kossa染色阳性;而对照组无细胞结节形成,von kossa染色阴性.前者每孔不溶性钙沉积量,以及培养上清中骨钙素含量明显高于后者.且实验组X型胶原mRNA的表达为阳性,而对照组为阴性.结论:25-羟基胆固醇可促进主动脉中膜细胞发生钙化.主动脉中膜在体外钙化过程中与成骨细胞相似,骨钙素分泌增多且有X型胶原mRNA的表达,表明二者具有某些共同的发生机制.
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低强度超声波促进骨折愈合过程中I、X型胶原蛋白的基因表达
目的 研究低强度超声波刺激下骨折处I、X型胶原的基因表达规律,从分子水平探索低强度超声波促进骨折愈合的作用机制.方法 应用兔双侧桡骨骨折模型,采用左右自身对照.36只新西兰雄性大白兔,分为6组.右侧骨折处每日行超声刺激20rain,左侧不行刺激.分别于术后3、7、10、14、21、28d取骨折处骨痂及纤维组织,进行骨痂厚度的测量和组织学观察.RT-PCR方法半定量分析I、X型胶原mRNA的表达规律.结果 自术后10d开始至28d,实验侧的骨痂厚度明显高于对照侧.术后10、14、21、28d HE染色显示成软骨细胞及成骨细胞提早出现而且量多,细胞外基质合成增加.I型胶原mRNA表达于术后14、21d含量明显高于对照侧,软骨内细胞外基质蛋白合成增加,增加新骨基质的含量.X型胶原mRNA表达于术后14d明显高于对照侧,术后21d达高峰,然后下降.结论 低强度超声波作用可以增加骨折处骨痂含量,其加快骨折愈合通过刺激骨痂增生,使矿化过程提前发生所致.低强度超声波刺激可以增加I、X型胶原的mRNA含量,促使软骨内成骨过程中软骨细胞的增多和细胞外基质的钙化.
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血清COL10A1在骨关节炎中检测的意义
目的 观察并探讨血清COL10A1水平在骨关节炎软骨损伤的诊断价值以及对骨性关节炎疾病活动性严重程度的预测价值.方法 所收集89例KOA患者均为2014年9月至2016年4月在我院关节外科门诊就诊和住院患者,采集清晨空腹血5ml,依据影像学Kellgren-Lawrence (K-L)分级评分系统进行病情严重程度分级,Ⅰ级20例,Ⅱ级25例,Ⅲ级23例,Ⅳ级21例,正常对照组23例.各组年龄及性别构成比无显著性统计学差异,所有血清标本应用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测COL10A1浓度.结果 1、KOA组患者血清COL10A1(1.19(0.61-1.93)ng/ml)浓度水平较正常对照组(0.45(0.34-0.52) ng/ml)高,且差异具有显著性统计学意义(P＜0.01).2、在骨关节炎病情预测上,血清COL10A1浓度水平在OA患者K-L分级Ⅱ级组(1.98(1.59-2.12) ng/ml)和Ⅲ级组(1.84(1.43-2.02) ng/ml)高,且与Ⅰ级组和Ⅴ级组差异具有显著统计学意义(P＜0.01),其中Ⅱ级组与Ⅲ级组患者血清COL10A1浓度水平差异不具有统计学意义(P=0.149),二者无显著差异.结论 1、骨性关节炎患者血清COL10A1浓度水平较正常对照组高.2、在骨关节炎组,血清COL10A1水平随着K-L分级等级逐渐升高,在Ⅱ级组和Ⅲ级组时达到高,随后逐渐下降,因此具有结合影像学K-L分级预测评价患者病情严重程度的潜力.
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体外培养主动脉细胞钙化作用研究
目的：初步探讨主动脉钙化的机制。方法：外殖块法分离培养家兔主动脉平滑肌细胞。进行von Kossa染色以显示钙化。生化法检测细胞内外不溶性钙。放免法测定培养上清骨钙素的含量。RT-PCR方法检测X型胶原mRNA的表达。结果：25-羟基胆固醇（A组）和β-甘油磷酸盐（B组）分别培养的传代细胞均可见多个细胞结节，且细胞结节von kossa染色阳性；而对照组（C组）无细胞结节形成，von kossa染色阴性。前二者每孔不溶性钙沉积量，以及培养上清中骨钙素含量明显高于后者，且A、B两组X型胶原mRNA的表达为阳性。结论：25-羟基胆固醇、β-甘油磷酸盐均可促进主动脉中膜细胞发生钙化。主动脉中膜在钙化过程中与成骨细胞相似，骨钙素分泌增多且有X型胶原mRNA的表达。
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儿童与成人大骨节病关节软骨X型胶原表型和bFGF的表达
目的探讨儿童与成人大骨节病关节软骨中X型胶原表型和bFGF表达的分布特点.方法用单克隆和多克隆免疫组化法检测大骨节病与对照组关节软骨X型胶原表型和bFGF表达.结果(1)儿童大骨节病关节软骨深层X型胶原表型表达率(35.0%)比儿童对照组(63.0%)明显减少(P＜0.01);(2)儿童大骨节病关节软骨中层X型胶原表型表达(0.0%)较成人大骨节病组(34.0%)减弱(P＜0.01);(3)儿童大骨节病软骨表层bFGF表达率(6.0%)低于对照组(21.0%)(P＜0.01),而中、深层表达(分别为12.0%、37.0%)与对照组(无表达)相比明显增多(P＜0.01).成人大骨节病关节软骨bFGF表达阳性率(分别为47.0%、37.0%、11.0%)与对照组(分别为19.0%、15.0%、1.0%)比较明显增多;(4)成人大骨节病关节软骨bFGF阳性表达在表、中层表达明显高于儿童组(P＜0.01),深层儿童大骨节病组高于成人组(P＜0.01).结论X型胶原表型和bFGF表达在儿童与成人大骨节病关节软骨的分布不同.
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生长期兔颞下颌关节盘前移位后髁突软骨胶原表达的变化
目的:建立生长期兔颞下颌关节不可复性关节盘前移位动物模型,检测髁突软骨内Ⅱ型胶原和X型胶原的表达,探讨青少年颞下颌关节盘不可复性前移位与髁突软骨内成骨的关系,及其与下颌骨发育不对称畸形之间存在相关性的机制.方法:取生长期新西兰大白兔40只,右侧颞下颌关节手术建立不可复性关节盘前移位模型,左侧行假手术作为对照.实验动物于建模后24 h、1、4、8、12周分组处死取材.通过免疫组织化学方法检测髁突软骨组织内Ⅱ型胶原和X型胶原在蛋白水平的表达,采用PASW statistics 18.0软件包对每组样本实验侧和对照侧进行配对t检验.结果:Ⅱ型胶原在盘移位后24h、1、4、8周时与对照侧均无显著差异,12周时较对照侧表达升高(P＜0.05).X型胶原在盘移位后24 h(P＜0.01)、1周(P＜0.01)、4周(P＜0.05)时较对照侧显著降低,8周、12周时实验侧与对照侧间无显著差异.结论:不可复性关节盘前移位对兔髁突软骨内成骨过程造成干扰,这种影响可能是单侧颞下颌关节盘前移位后患侧下颌支高度不足和下颌骨不对称畸形的重要原因.
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X型胶原在膝骨关节炎软骨中的表达
目的 观察膝骨关节炎患者关节软骨中X型胶原的表达特征,探讨X型胶原在骨关节炎疾病进展中的作用.方法 取18例膝骨关节炎患者和13例正常对照者的关节软骨.以Northern杂交、RT - PCR和Western杂交,分别检测各组样品X型胶原mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 Northern杂交与RT-PCR的结果均显示膝骨关节炎的X型胶原表达有显著升高.Western杂交发现膝骨关节炎患者软骨基质中X型胶原的含量上升(P＜0.01).但分析mRNA和蛋白水平的变化趋势,未能发现它们之间存在明确的相关性(P＞0.05).结论 膝骨关节炎患者的X型胶原表达明显增加,这可能促使基质组分发生改变,从而加速了骨关节炎的进展.
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桃仁-红花药对对动静力失衡性大鼠椎间盘软骨终板退变的影响
目的 探讨桃仁-红花药对对大鼠颈椎间盘软骨终板退变的影响.方法 选取清洁级健康Wistar大鼠50只,♂,随机分为对照组、模型组、假手术组、美洛昔康组、桃仁-红花药对组,每组10只.其中模型组、美洛昔康组、桃仁-红花药对组通过手术方法建立动静力失衡性大鼠椎间盘退变模型,假手术组切开皮肤后不做进一步操作.造模12周后,对照组、模型组、假手术组每日给予生理盐水灌胃,美洛昔康组、桃仁-红花药对组每日分别给予等量美洛昔康悬浊液、桃仁-红花煎剂灌胃,连续给药30 d后处死全部大鼠,完整取出C4、C6/7椎间盘.C4/5椎间盘固定、切片,ABOG染色法观察椎间盘组织形态学变化;免疫组化法检测Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen,Col Ⅱ)、X型胶原(type X collagen,Col X)蛋白的表达情况;C6/7椎间盘提取总mRNA,实时定量PCR检测Col Ⅱ、Col X基因的表达情况.结果 与模型组比较,桃仁-红花药对组上调软骨终板细胞Col Ⅱ的mRNA及蛋白表达,下调软骨终板细胞Col X的mRNA及蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 桃仁-红花药对可以抑制动静力失衡性大鼠椎间盘退变中的软骨终板退变,进而延缓椎间盘退变.
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不对称应力对脊柱终板生长的影响
目的:研究不对称应力对脊柱终板软骨生长的影响.方法:选择未成年犬8只,随机分为实验组(n=4)、内固定对照组(n=2)和假手术对照组(n=2).实验组置入预弯的内固定使犬脊柱弯曲固定;内固定对照组置入未预弯的内固定使犬脊柱保持直的固定;假手术对照组仅行手术显露而不行内固定.4个月后取固定中点上下共6个节段的椎间盘两侧终板软骨,应用RT-PCR方法测定X型胶原.结果:实验组凹侧的X型胶原mRNA表达明显高于同组凸侧(P＜0.05),内固定对照组内、假手术对照组内两侧相比均无显著差异;X型胶原mRNA在实验组凹侧的表达明显高于内固定对照组及假手术对照组相应侧(P＜0.05),而在实验组凸侧的表达与内固定对照组及假手术对照组相应侧相比均无显著差异.结论:不对称应力可对脊柱终板的生长产生影响,凹侧软骨终板的生长受到抑制.
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颈复康颗粒对颈椎动静力失衡大鼠颈椎间盘细胞外基质胶原表达的影响
目的:探讨颈复康颗粒调节大鼠退变椎间盘组织细胞外基质中Ⅱ型胶原和X型胶原mRNA表达的作用.方法:Realtime RT-PCR法检测椎间盘组织细胞外基质中Ⅱ型胶原和X型胶原mRNA表达水平.结果:与正常对照组相比,模型组Ⅱ型胶原mRNA的表达下降,X型胶原mRNA的表达增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,颈复康颗粒和莫比可组Ⅱ型胶原mRNA的表达上调,但差异无统计学意义;X型胶原mRNA的表达下降,差异有统计学意义(P<0.01).结论:颈复康颗粒可以上调椎间盘组织内Ⅱ型胶原mRNA、下调X型胶原mRNA的基因表达.
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联合检测血清X型胶原α1链和ⅡA型前胶原氨基端肽在骨关节炎早期诊断中的意义
目的 评价联合检测血清X型胶原α1链(COL10A1)和血清ⅡA型前胶原氨基端肽(PⅡANP)在骨关节炎早期诊断中的价值.方法 所收集89例膝骨关节炎(KOA)患者均为2014年9月至2016年4月在新疆医科大学第一附属医院关节外科门诊就诊和住院患者,采集清晨空腹血5ml,依据影像学Kellgren-Lawrence (K-L)分级评分系统进行病情严重程度分级,Ⅰ级20例,Ⅱ级25例,Ⅲ级23例,Ⅳ级21例,正常对照组23例,所有血清标本应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测COL10A1和PⅡANP浓度.结果 人血清COL10A1水平在KOA组[(1.30±0.65) ng/ml]明显高于正常对照组[(0.46±0.15) ng/ml],差异有统计学意义(P=0.000),对照组血清PⅡANP水平[(23.88±4.68) ng,/ml]明显高于KOA组[(13.22 ±4.74) ng/ml],差异有统计学意义(P=0.000),血清COL10A1在KOA-Ⅱ级组[(1.84±0.44) ng/ml]和Ⅲ级组水平[(1.68±0.47) ng/ml]高,与正常对照组[(0.46±0.15) ng/ml]比较差异均有统计学意义(P=0.000),血清PⅡANP水平在KOA各亚组随着K-L分级等级依次降低,Ⅰ级组[(19.37 ±3.01) ng/ml]＞Ⅱ级组[(13.14±2.68) ng/ml]＞Ⅲ级组[(11.41 ±3.32) ng/ml]＞Ⅳ级组[(9.44±3.58) ng/ml],且与正常对照组[(23.88 ±4.68) ng/ml]比较差异均有统计学意义(P=0.001、0.000、0.000、0.000).结论 骨关节炎患者血清COL10A1水平较正常对照组高,而PⅡANP水平较正常对照组低,因此联合检测血清生物学标志物COL10A1和PⅡANP有望成为KOA早期诊断的一种有效方法.
关键词： X型胶原 Ⅱ型胶原 骨性关节炎 血清X型胶原α1链 血清ⅡA型前胶原氨基端肽 -
下肢伸直襁褓体位对髋臼软骨复合体发育影响的实验研究
目的 本实验通过建立下肢伸直襁褓体位的大鼠动物模型及对实验动物进行大体标本及病理研究观察,探讨下肢伸直襁褓体位对髋臼软骨复合体大体形态及其不同骺板区域软骨细胞成熟的影响.方法 实验组:将31只新生Wistar幼鼠用医用胶带将双小腿、双髋关节缠绕固定10 d,保持髋关节伸直内收位,模拟双下肢伸直襁褓体位.对照组:另31只新生幼鼠双下肢不予处置.母鼠喂养,笼中自由活动.10 d后处死,通过大体标本、组织学、VEGF和X型胶原免疫组化染色观察髋臼变化.结果 下肢伸直襁褓体位动物模型制作成功.大体观察:实验组髋臼变小变浅,内部软组织增生,49髋发生髋关节脱位(49/54),部分出现假臼;对照组髋臼轮廓正常,无假臼出现,2髋脱位(2/60),对照组脱位率与实验组差异有非常显著性(P<0.01).番红O-快绿染色见实验组橙红色软骨区域较对照组宽.实验组髋臼软骨复合体的髂骨、坐骨、耻骨各支肥大层VEGF和X型胶原表达较对照组低;实验组髋臼关节软骨髂骨支肥大层VEGF与X型胶原阳性表达较坐骨支、耻骨支低.结论 下肢伸直襁褓体位大鼠髋臼软骨复合体骺板肥大层软骨细胞VEGF、X型胶原的表达水平降低,显示该体位可能导致髋臼软骨复合体软骨细胞成熟障碍,干扰髋臼正常发育乃至脱位. [中国当代儿科杂志,2009,11(10):836-840]
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下颌前伸后髁突软骨成熟层内X型胶原的表达
目的:检测下颌骨前伸条件下,大鼠髁突内X型胶原的表达,从而论证髁突新骨的形成状况.方法:100只同源雌性大鼠分成5组实验组及5组对照组,实验组动物戴用统一规格的咬合前导矫正器,各实验组及相应对照组动物分别在实验的第3、7、14、21及30d处死.应用分子原位杂交及免疫组织化学技术对髁突软骨成熟层内的X型胶原mRNA及其蛋白的表达进行评价.结果:实验组,特别是21 d组动物其髁突软骨成熟层细胞内有强烈的mRNA染点:免疫荧光分析则在相应部位发现有剧烈的荧光闪点.对照组该产物表达不明显.结论:髁突软骨成熟层细胞内X型胶原表达提示功能性矫正器引发的下颌前伸能刺激髁突的新骨形成.
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不同下颌前伸力对髁突Runx2和X型胶原表达的影响
目的:探讨不同作用方式的下颌前伸力对髁突软骨内成骨的影响.方法:将28只5周龄雄性wistar大鼠随机分配到周期性、静止性、功能性下颌前伸组及阴性对照组(n=7).各组按照设定的相关参数接受下颌前伸力刺激.实验结束时取标本,免疫组织化学染色,对Runx2、X型胶原的表达进行半定量分析.结果:Runx2和X型胶原表达动态组高(与对照组比P＜0.01),静态组和功能组较低(与对照组比P＜0.01).静态组X型胶原表达高于功能组(P＜0.01),Runx2表达静态组与功能组差异无显著性(P＞0.05).结论:不同作用方式及作用时间的下颌前伸力差异性调节髁突软骨细胞Runx2及X型胶原的表达水平.
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下颌前伸对成年大鼠髁突软骨X型胶原表达的影响
目的:建立年轻成年大鼠下颌前伸动物模型,以X型胶原为检测指标,观察髁突软骨内成骨及其与下颌前伸持续时间的关系.方法: 9 周龄雌性大鼠75 只,分为3 组,其中2 组为实验组,另一组为对照组,实验组动物戴用统一规格自制的咬合前导矫治器,分别戴用12 h和24 h.3 组动物分别在实验后3、7、14、21、30 d处死后取双侧髁突组织,使用免疫组化和原位杂交方法从蛋白水平和基因水平检测髁突软骨组织切片中X型胶原的表达情况.结果:免疫组化结果显示, 24 h实验组X型胶原表达量在21 d时高,且高于其他实验组;而12 h实验组峰值出现在30 d.原位杂交结果与免疫组化结果基本吻合.结论:功能矫治下颌前伸均能诱导年轻成年大鼠髁突软骨发生改建,但与12 h间歇性加力方式相比,24 h持续加力方式作用效果明显,且见效快.
关键词： 安氏Ⅱ类错(牙合)畸形 下颌前伸 髁突软骨 功能矫治器 X型胶原 -
miR-140在不同阶段骨关节炎软骨细胞中的表达规律及功能
目的 观察人膝关节不同退变阶段骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中微小RNA-140(micro RNA-140,miR-140)表达规律及转染双链miR-140模拟物/抑制物(double strands-miR-140 mimic/inhibitor,ds-miR-140mimic/inhibitor)对OA软骨细胞功能的影响.方法 根据Kellgren and Lawrence X线分级,膝关节软骨分为正常组(O级)、中期OA组(Ⅲ级)和晚期OA组(Ⅳ级).各组收集软骨标本6～8例,体外分离及培养软骨细胞,采用第2代软骨细胞进行检测.运用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组miR-140相对表达量及Ⅱ型胶原(collagentypeⅡa,COL2A1)及Ⅹ型胶原(Collagentype Xa,COL10A1)的表达情况.向中期OA组软骨细胞转染ds-miR-140 mimic/inhibitor后,观察软骨形成因子SRY基因(SRY-related high mobility group box gene9,SOX9),COL2A1及COL10A1表达情况.结果 miR-140在OA软骨细胞中表达显著下降,中、晚期OA组miR-140和正常组相比分别减少78.9％和94.5％ (P＜0.05),晚期OA组miR-140较中期OA组减少73.9％ (P＜0.05).中、晚期OA组SOX9的mRNA较正常组分别减少34.1％和49.3％ (P＜0.05),COL2 A1的mRNA较正常组分别减少36.7％和78.7％ (P＜0.05),中、晚期OA组COL10A1的mRNA较正常组分别增加1.66倍和2.10倍(P＜0.05).向中期OA组转染ds-miR-140 mimic/inhibitor后,SOX9的mRNA分别增加1.95倍和减少59.1％,COL2A1的mR-NA分别增加1.87倍和减少68.8％ (P＜0.05),COL10A1的mRNA分别减少73.0％和增加1.96倍(P＜0.05).结论 miR-140在OA软骨细胞中表达显著下降,且随病情加重而进一步减少;转染ds-miR 140 mimic可增加SOX9和COL2 A1的表达,同时降低COL10A1的表达.
