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体外血管钙化模型中骨钙素的分泌和X型胶原的表达
目的:研究25-羟基胆固醇对体外培养的主动脉中膜细胞钙化的促进作用,以及在此过程中骨钙素的分泌和X型胶原mRNA的表达与钙化的关系,初步探讨主动脉钙化的机制.方法:采用外殖块法分离培养家兔主动脉中膜细胞,进行von kossa染色以显示钙化,显微分光光度法检测细胞内外不溶性钙.平衡法125I放免测定培养上清骨钙素的含量.RT-PCR方法检测X型胶原mRNA的表达.结果:25-羟基胆固醇(实验组)培养的传代细胞可见多个细胞结节,且细胞结节von kossa染色阳性;而对照组无细胞结节形成,von kossa染色阴性.前者每孔不溶性钙沉积量,以及培养上清中骨钙素含量明显高于后者.且实验组X型胶原mRNA的表达为阳性,而对照组为阴性.结论:25-羟基胆固醇可促进主动脉中膜细胞发生钙化.主动脉中膜在体外钙化过程中与成骨细胞相似,骨钙素分泌增多且有X型胶原mRNA的表达,表明二者具有某些共同的发生机制.
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体外培养主动脉细胞钙化作用研究
目的：初步探讨主动脉钙化的机制。方法：外殖块法分离培养家兔主动脉平滑肌细胞。进行von Kossa染色以显示钙化。生化法检测细胞内外不溶性钙。放免法测定培养上清骨钙素的含量。RT-PCR方法检测X型胶原mRNA的表达。结果：25-羟基胆固醇（A组）和β-甘油磷酸盐（B组）分别培养的传代细胞均可见多个细胞结节，且细胞结节von kossa染色阳性；而对照组（C组）无细胞结节形成，von kossa染色阴性。前二者每孔不溶性钙沉积量，以及培养上清中骨钙素含量明显高于后者，且A、B两组X型胶原mRNA的表达为阳性。结论：25-羟基胆固醇、β-甘油磷酸盐均可促进主动脉中膜细胞发生钙化。主动脉中膜在钙化过程中与成骨细胞相似，骨钙素分泌增多且有X型胶原mRNA的表达。
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25-羟基胆固醇促进培养的家兔主动脉中膜细胞体外钙化
为研究主动脉中膜细胞体外钙化情况以及25-羟基胆固醇对此过程的促进作用,采用贴块法分离培养主动脉中膜细胞,并进行von Kossa染色以显示钙化,生物化学检测细胞不溶性钙,放射免疫法测定培养上清液中骨钙素含量.发现原代细胞有两种生长表现:一种细胞平行生长,不形成结节,von Kossa染色阴性;另一种易形成结节,von Kossa染色阳性.对照组传代细胞培养28天无结节形成,von Kossa染色阴性.而实验组,即25-羟基胆固醇处理组有细胞结节形成,von Kossa染色阳性,培养上清液中骨钙素增多.由此可见体外培养的主动脉中膜细胞有两种亚型,一种为平滑肌细胞的表型;另一种为微血管周细胞型细胞,能使其细胞外基质钙化.25-羟基胆固醇可以促进这一体外钙化过程.周细胞型细胞钙化过程中骨钙素合成增多,推测骨钙素可能参与了主动脉的钙化.
