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温经通络法对胶原性关节炎大鼠血管新生干预作用的研究
目的 观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)及血管内皮细胞生长因子受体(KDR)在胶原性关节炎(CIA)大鼠血清及滑膜组织中的表达变化,及芍药甘草附子汤的干预作用.方法 建立CIA大鼠模型,分组干预后计算关节炎炎症指数(AI).ELISA法检测血清VEGF、sKDR含量,免疫组织化学法检测关节滑膜VEGF、KDR表达.结果 造模后第28天各组大鼠炎症反应明显,用药4周后炎症反应明显好转,对照组和治疗组明显好于模型组(P＜0.05),但两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).模型组病理评分较正常组显著增高(P＜0.01),各用药组光镜下病理改变较模型组减轻.血清VEGF、sKDR含量,模型组明显高于正常组(P＜0.05),用药后对照组和治疗组明显下降(P＜0.05).免疫组化结果显示,VEGF、KDR均定位于细胞浆,对照组和治疗组的阳性细胞数较模型组明显减少(P＜0.05).结论 芍药甘草附子汤对CIA大鼠有明显的治疗作用,其机制可能与抑制VEGF及其受体表达有关.
关键词： 温经通络法 胶原性关节炎 血管新生 血管内皮细胞生长因子 -
电针"足三里""三阴交"穴对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞分泌功能的影响
目的:观察电针"足三里""三阴交"对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠的治疗作用,并探讨该疗法调节CIA大鼠滑膜细胞分泌功能的部分机制.方法:36只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和电针治疗组.模型对照组和电针治疗组采用牛Ⅱ型胶原在大鼠背部正中线作多点皮内注射诱发CIA模型.电针治疗组选取"足三里""三阴交"穴进行电针刺激,频率2 Hz,强度2 mA,时间30 min,连续治疗30 d.处理前后分别观察CIA大鼠足跖肿胀度、痛阈;采用ELISA法检测大鼠膝关节滑膜细胞培养上清液中前列腺素E_2(PGE_2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平.结果:模型对照组大鼠足跖肿胀度,滑膜细胞培养上清中PGE_2浓度和TNF-α、IL-1β含量均高于正常对照组大鼠,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),痛阈低于正常对照组大鼠,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型对照组比较,电针治疗组大鼠足跖肿胀度减小,痛阈升高,关节滑膜细胞培养上清中PGE_2浓度下降,TNF-α和IL-1β含量降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:电针"足三里""三阴交"穴对胶原性关节炎大鼠具有良好的治疗作用,该作用可能与抑制关节滑膜细胞的分泌功能有关.
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防己水煎液总生物碱对Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎及其血清中炎性因子的影响
目的:基于防己传统临床用药多为水煎煮,对防己水煎液中总生物碱进行富集,研究其对牛Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型(collagen-induced arthritis,CIA)的影响,区别以往对其醇提物的研究,为进一步探索防己水溶性大极性生物碱的抗风湿作用提供依据.方法:采用732型阳离子树脂富集防己水煎液中总生物碱.通过足底、尾部、背部皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂,7d后再加强注射1次,建立CIA大鼠模型.设正常组、模型组、防己水煎液中总生物碱低、中、高剂量组(0.162,0.324,0.486 g·kg-)、雷公藤多苷组(1.5 mg·kg-1)和地塞米松组(10.8 mg·kg-1)分别ig给药,连续给药21 d.观察不同剂量对CIA大鼠关节炎指数、足跖肿胀度的影响,同时测定血清中白介素(IL)-1,IL-1β,IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以及观察踝关节组织病理变化.结果:与正常组比较,模型组关节炎指数和足跖肿胀度显著升高,血清IL-1,IL-1β,IL-6和TNF-α的水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,防己水煎液中总生物碱高、中、低剂量组能够降低关节炎指数和足跖肿胀度,明显降低血清中IL-1,IL-1β,IL-6和TNF-α的水平(P＜0.01),并且减轻滑膜组织的病理损伤.结论:防己水煎液总生物碱对于类风湿关节炎有一定的治疗作用,可明显降低血清中炎性因子水平.
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地附饮对皮质酮大鼠胶原性关节炎模型下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响
本研究以皮质酮大鼠模拟中医肾虚模型,并在此基础上以胶原性关节炎模型创制出了既具人类类风湿关节炎(RA)特点,又有下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴抑制的动物模型,符合中医RA患者大多"肝肾亏损、寒湿内侵"的病理机制,探讨了"地附饮"对HPA轴的作用机理.现报告如下.
关键词： 地附饮 皮质酮大鼠 胶原性关节炎 下丘脑-垂体-肾上腺轴 -
胶原性关节炎大鼠体征及证候特点初探
目的:初步探讨胶原性关节炎(CIA)大鼠的体征特点与证候属性.方法:对CIA免疫侧与继发侧分别进行室温(21℃)、5℃～8℃水浴、42℃～45℃水浴下的疼痛试验,关节肿胀程度测量,肛温与膝、踝关系肤温、体重检测.结果:CIA大鼠双侧持续疼痛显著(P<0.001),免疫7d后对寒、热刺激的反应不明显,踝关节宽厚度增加(P<0.001,P<0.01),膝、踝关节肤温相继增高(P<0.05,P<0.001,P<0.01),肛温、体重无异常.结论:慢性痛、踝关节肿胀、膝踝皮肤温度增高可作为CIA的主要结局指标(endpoint),CIA证候特征不明显,但具有在不同干预措施下表现为不同证候的潜质与基础.
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寒热方剂对胶原性关节炎大鼠的治疗作用及对滑膜细胞超微结构的影响
目的:从治疗作用评价、滑膜细胞超微结构观察的角度,探讨寒、热方剂清络饮、温络饮对胶原性关节炎大鼠的治疗作用、作用机理及作用异同.方法:以Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠为对象,以寒、热方剂清络饮、温络饮分别进行干预,雷公藤多苷片为治疗对照.于CIA免疫1、7、21、33d分别进行疼痛试验及关节肿胀程度、关节炎指数等体征评价,CIA免疫33d时行滑膜细胞透射电镜观察.结果:寒热两方均可明显改善CIA免疫侧、继发侧疼痛(P＜0.01)和踝关节肿胀(P＜0.01)等主要结局指标,降低关节炎指数(P＜0.01),效果速于、优于或近于雷公藤多苷片对照组.清络饮改善CIA踝关节肿胀、控制继发病理改变的效果优于温络饮.寒热两方均可减轻滑膜细胞亢进的分泌功能及其代谢活性,反映出寒热两方的部分作用机理.
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青鹏膏治疗大鼠胶原性关节炎作用及机制研究
目的:探讨青鹏膏治疗大鼠胶原性关节炎的作用及初步机制.方法:制备Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,采用足趾肿胀测量仪测定大鼠的关节肿胀指数,采用ELISA方法测定外周血IL-1β水平,采用免疫组化方法检测关节滑膜IL-1α及TNF-α的表达,并对关节滑膜的病理变化进行组织学观察.结果:青鹏膏对胶原性关节炎动物模型的足肿胀有明显的抑制作用,给药组在关节肿胀指数,关节腔IL-1α,TNF-α表达水平等方面比模型对照组有所降低.结论:青鹏膏具有改善胶原性关节炎症候的作用,该作用与其降低关节滑膜IL-1α及,TNF-α表达有关.
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川芎嗪对胶原性关节炎大鼠血清IL-1、IL-6、IL-2水平及关节浸液NO、PGE2的影响
目的 观察川芎嗪(TMP)对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及关节液中细胞因子和炎症介质的影响,并进一步探讨其对类风湿关节炎治疗的可能机制.方法 Ⅱ型胶原诱导大鼠胶原性关节炎模型,造模成功的36只大鼠随机分为模型组、地塞米松组、TMP 100 mg/kg组及TMP 50 mg/kg组,每组9只.TMP两组大鼠于造模后第7～35天灌胃给予TMP 100和50 mg/kg,每天用药1次;地塞米松组肌肉注射给予2 mg/kg,每天1次;正常组和模型组静脉注射给予2 mL/kg生理盐水,每天1次.观察CIA大鼠足爪肿胀度,用放免法和硝酸还原法检测CIA大鼠血清IL-1、IL-6和IL-2水平及关节浸液一氧化氮(NO)和前列腺素E2(prostaglandin,PGE2)含量.结果 与正常组比较,模型组足爪肿胀度明显增加,关节浸液中NO和PGE2含量明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,TMP 100 mg/kg组和地塞米松组足爪肿胀均明显抑制,大鼠血清IL-1和IL-6水平明显降低,IL-2水平明显上升,关节浸液内NO、PGE2含量下降,差异均有统计学意义(P ＜0.01);TMP 50 mg/kg组足爪肿胀明显抑制(P＜0.01),其他指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TMP 100 mg/kg对大鼠CIA有明显抑制作用,其机制可能是抑制CIA大鼠内源性细胞因子活性和炎症局部区域相关炎症介质产生,提高抑炎细胞因子含量,诱导炎性细胞因子网络趋于平衡,从而对大鼠CIA发挥治疗作用.
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VEGF 3种受体在胶原性关节炎大鼠关节的表达与软骨破坏的相关性分析
检测血管内皮生长因子特异性受体在胶原性关节炎滑膜表达,并探讨其表达与关节软骨含量的相关性.采用RT-PCR方法检测VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3mRNA表达,用GAPDH 内参照相对定量VEGFR mRNA表达丰度.发现VEGFR-1在胶原性关节炎和对照组表达无显著差异;VEGFR-2、VEGFR-3在胶原性关节炎和对照组表达有显著差异.VEGFR-2、VEGFR-3mRNA表达丰度与胶原性关节炎软骨含量呈负相关.提示VEGFR-2、VEGFR-3与类风湿关节炎软骨破坏有关,特异性阻断VEGFR-2、VEGFR-3可能改善类风湿关节炎预后.
关键词： 胶原性关节炎 血管内皮生长因子受体 软骨 -
NF-κB和AP-1在胶原性关节炎小鼠滑膜组织中的表达及活性升高
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以累及周围关节为主要表现的系统性自身免疫病.炎性细胞因子过度表达是导致RA滑膜炎症和骨质破坏的重要因素.而在炎性介质的表达调节中,核转录因子Kappa B(nuclear factor κB,NF-κB)和激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)被认为是重要的转录调控分子,它们的表达和活性增加可促进炎性细胞因子的生成[1-2].本研究观察了胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠滑膜中NF-κB和AP-1表达及活性变化,以探讨RA病变的机制.
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CⅡ变构肽对胶原性关节炎T细胞免疫的影响
目的 探索连续替换CⅡ多肽中268～270位氨基酸的变构肽对胶原性关节炎(CIA)抑制作用的可能机制.方法 CⅡ268～270变构肽90μg静脉注射,每周1次治疗CIA大鼠;设置无关肽对照组和空白对照组.ELISA方法检测大鼠血清TH1/TH2细胞因子水平及抗CⅡ抗体及其亚型.荧光实时定量RT-PCR检测调节性T细胞标记Foxp3 mRNA表达.结果 CⅡ268～270变构肽、无关肽及空白对照组血清IFN-γ水平分别为41.42±7.32、54.63±11.15和57.86±5.64pg/ml,变构肽可降低大鼠血清IFN-γ水平(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组血清IL-10水平分别为40.18±5.13、31.09±5.04和30.19±5.02 pg/ml,变构肽可以提高大鼠血清IL-10水平(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组抗CⅡIgG2a抗体滴度分别为0.5±0.21、1.1±0.27和1.3±0.29,变构肽可以显著降低抗CⅡIgG2a抗体滴度(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组抗CⅡIgG1抗体滴度分别为1.2±0.24、0.58±0.11和0.6±0.12,变构肽可以显著上调抗CⅡIgG1抗体滴度(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组Foxp3 mRNA表达丰度分别为33.62±12.12、10.05±6.08和9.73±6.03,变构肽可以显著上调大鼠Foxp3 mRNA表达丰度(P＜0.01).结论 CⅡ268～270变构肽可以调节CIA中异常的TH1/TH2细胞因子平衡,可以抑制IgG2a型抗CⅡ抗体产生,诱导Foxp3阳性T细胞产生.
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白芍总苷对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞的作用及机制
目的研究白芍总苷(TGP)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞的作用及机制.方法采用鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,胶原酶和胰蛋白酶消化法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜观察滑膜细胞超微结构的变化,MTT法检测滑膜细胞的增殖能力,滑膜细胞培养上清液中IL-1活性的测定采用小鼠胸腺细胞增殖法,TNFα和PGE2含量的测定采用放射免疫测定法.结果TGP能有效改善CIA大鼠滑膜细胞超微结构的变化,抑制其过度的增殖反应和产生IL-1,TNFα和PGE2的水平.结论TGP对CIA大鼠功能亢进的滑膜细胞具有明显的抑制作用,其作用机制可能与其抑制滑膜细胞的过度增殖和分泌能力有关.
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积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用
研究积雪草苷(asiaticoside)对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)的作用,并初步探讨其作用机制.建立CIA模型,检测小鼠足爪炎症的肿胀度,石蜡切片HE染色对关节组织进行病理检查,MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应,Western blotting法检测关节软组织中环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白的表达,EIA法测定关节软组织中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平,ELISA法检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6的水平.积雪草苷(10,20及40 mg·kg-1)灌胃给药能剂量依赖性地减轻CIA小鼠的关节炎症状,抑制CIA小鼠C II胶原诱导的淋巴细胞增殖反应,减少CIA小鼠踝关节软组织中高水平的COX-2表达及PGE2含量,降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平;同时病理检查发现,可以改善局部关节炎症状,抑制CIA小鼠滑膜细胞增生,减轻炎性细胞浸润.结果表明,积雪草苷对CIA具有抑制作用,其机制可能与抑制淋巴细胞增殖、减少COX-2表达及促进炎症因子TNF-α、IL-6释放等有关.
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肿瘤坏死因子-α对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用
目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用.方法:制备大鼠CIA模型,并分离培养正常大鼠和CIA大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS).考察TNF-α在0.02～20 μg·L-1浓度时对培养的正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)和白介素1β(IL-1β)的影响,选择TNF-α的佳刺激浓度.观察不同浓度(15.625～250 mg·L-1)的白芍总苷在TNF-α的佳刺激浓度时对CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌PGE2,cAMP和IL-1β的影响.用MTT法检测FLS的增殖反应,放射免疫测定法检测PGE2,cAMP和IL-1β的水平.结果:TNF-α在20 μg·L-1的浓度时均显著抑制正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS分泌cAMP,显著促进PGE2和IL-1β的分泌,故选20 μg·L-1为TNF-α的佳刺激浓度.TGP能显著抑制20 μg·L-1TNF-α对CIA大鼠FLS的促增殖反应,明显上调降低的cAMP水平,明显下调升高的PGE2和IL-1β水平,且具有一定的浓度依赖性.结论:TNF-α可以促进CIA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2和IL-1β.TGP则能明显逆转TNF-α对FLS的影响.
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白芍总苷对大鼠胶原性关节炎及其免疫功能的影响
目的 研究白芍总苷(TGP)对大鼠胶原性关节炎(CIA)及其免疫功能的影响.方法 采用鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,关节评分法检测关节炎发生情况,ELSIA法检测大鼠血清中抗CⅡ抗体的水平,MTT法检测T细胞和B细胞增殖反应,IL-1、IL-2活性的测定采用小鼠淋巴细胞增殖法.结果 大鼠于致炎后第14天开始出现多发性关节炎症状,体重减轻,血清中抗CⅡ抗体水平升高,TGPig给药,连续14 d,能够明显抑制CIA大鼠的AI,促进大鼠体重的恢复,降低血清中抗CⅡ抗体水平.进一步研究表明,TGP体内、外给药均能抑制CIA大鼠增高的T、B淋巴细胞增殖反应,还能显著降低刀豆蛋白A(Con A)诱导的CIA大鼠脾淋巴细胞产生IL-2的能力以及脂多糖(LPS)诱导的腹腔巨噬细胞产生IL-1的能力.结论 TGP对CIA大鼠具有治疗作用,其机制可能与其调节CIA大鼠异常的免疫功能,平衡细胞因子的产生有关.
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肌内注射rAAV2/rTNFR:Fc对大鼠胶原性类风湿关节炎模型的治疗作用
目的 观察肌肉注射2型重组腺相关病毒/肿瘤坏死因子受体:IgG1Fc融合基因(rAAV2/rTNFR:Fc)对大鼠类风湿关节炎模型的治疗作用.方法 皮内注射Ⅱ型胶原乳剂,诱发胶原性大鼠类风湿关节炎模型.将大鼠随机分为5组,每组10只,包括:正常对照组、模型对照组、载体对照组、地塞米松对照组和rAAV2/rTNFR:Fc肌肉注射给药组.观察各组大鼠的关节炎指数(AI)、关节肿胀程度、踝关节的X线变化、组织病理改变与动物血清肿瘤坏死因子(TNF)-α及其受体(TNFR)水平.结果 与模型对照和载体对照组比较,肌肉注射rAAV2/rTNFR:Fc可使关节炎症明显减轻,AI降低、关节肿胀程度减轻;X线检查显示rAAV2/rTNFR:Fc给药组关节结构清晰,无明显骨质破坏.组织病理检查结果也表明,给药组关节腔内滑膜增生和炎性细胞浸润程度减轻,增生的血管翳肉芽组织减少;此外,与模型对照组和载体对照组比较,给药组血清中TNF-α水平显著下降(P<0.05),而TNFR水平明显上升(P<0.05).结论 肌肉注射给予rAAV2/rTNFR:Fc对大鼠胶原性类风湿关节炎模型具有明显的抗炎作用.
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川芎嗪抑制Ⅱ型胶原诱发关节炎大鼠滑膜损伤作用机制的研究
目的观察川芎嗪对大鼠胶原性关节炎(CIA)炎症发展和滑膜分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法皮内注射Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA,给予不同剂量川芎嗪灌胃,以环孢霉素A(CSA)为阳性对照.检测关节炎指数积分和炎症足垫厚度,X摄片检测关节结构,透射电镜观察滑膜毛细血管内皮细胞超微结构,免疫组化观察滑膜VEGF的表达和滑膜微血管密度(MVD).结果与模型组比较,CSA和100 mg/(kg·d)川芎嗪可降低关节炎指数积分和炎症足垫厚度,减轻炎症关节结构的破坏,改善滑膜毛细血管内皮细胞超微结构,抑制滑膜表达VEGF和减少滑膜MVD.结论川芎嗪可抑制CIA大鼠关节炎症发展和关节结构的破坏,其机制与川芎嗪可抑制滑膜表达VEGF,从而抑制滑膜组织血管生成密切相关.
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Ⅱ型胶原变构肽对胶原性关节炎软骨破坏的影响
目的 研究连续替换Ⅱ型胶原(CⅡ)268-270位T细胞受体(TCR)结合氨基酸的CⅡ变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)关节软骨损伤的抑制作用.方法 使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA.将CIA大鼠分为30 μg组、5 μg组、1 μg组和空白对照组,每组8只,每次分别接受CⅡ变构肽sub268-270 30 μg、5 μg、1 μg及磷酸盐缓冲液静脉注射,每周2次.从关节炎症积分、病理学滑膜炎症积分、血管翳评分、关节软骨损伤评分和骨破坏积分评价变构肽疗效,用血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平和关节组织切片中软骨番红花红含量来评价变构肽对关节软骨损伤的抑制作用.结果 30 μg CⅡ变构肽组关节炎症积分为5.6±2.63,显著低于5 μg组为(9.67±5.61)、1 μg组为(10.02±5.06)及空白对照组为(11.8±5.34)(P《0.01).与5 μg变构肽、1 μg变构肽和PBS相比,30 μg变构肽可以显著降低CIA大鼠滑膜炎积分(P《0.01)、血管翳积分(P《0.01)、软骨损伤积分(P《0.01)和骨破坏积分(P《0.01).30 μg变构肽组血清COMP水平(μg/ml)为2.21±0.76,5 μg变构肽组为5.63±1.73,1 μg变构肽组为6.04±1.76,空白对照组为7.00±1. 46,30 μg治疗组与空白对照组比P《0.01.关节组织切片中软骨蛋白聚糖含量(A值)30 μg组为2.35±0.76,5 μg组为1.57±0.63,1 μg组为1.37±0.53,空白对照组为1.00±0.41,30 μg组与空白对照组比P《0.01.结论 30 μg CⅡ变构肽sub268-270可以有效缓解CIA,显著抑制CIA中的关节软骨破坏.
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痹痛康丸对胶原免疫性关节炎大鼠免疫功能的影响
[目的]观察痹痛康丸对胶原免疫性关节炎(collagen-Ⅱinduced arthritis,CIA)大鼠免疫功能的影响,探讨其治疗作用机制.[方法]建立Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂诱导的大鼠CIA模型,60只大鼠随机分为6组并灌服,1次／d,连续给药4周.痹痛康丸低、中、高剂量组[0.3、3、30g·(kg·d)-1],白芍总苷组0.3 g·(kg·d)-1,以上各组药物溶解于2ml生理盐水中,正常对照组及模型组灌服生理盐水2 ml/只.观察各组大鼠脾、胸腺重量以及全身免疫指标(外周血T细胞亚群)的变化.[结果]与模型组相比,3组痹痛康丸均能显著降低CIA大鼠胸腺重量指数(P＜0.05),中剂量组痹痛康丸显著降低脾脏重量指数(P＜0.05),痹痛康丸中、高剂量组显著降低CD4+/CD8+的比值(P＜0.05).[结论]痹痛康丸可以改善CIA大鼠免疫的异常状态,从而治疗CIA.
