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安脑丸对脑出血大鼠学习记忆功能及血肿周围BDNF、NGB表达的影响
目的 研究安脑丸对脑出血大鼠血肿周围脑源性神经营养因子(BDNF)、脑红蛋白(NGB)及学习记忆功能的影响.方法 将40只SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及安脑丸组,每组各10只大鼠,模型组及安脑丸组采用Rosenberg法制备脑出血模型,安脑丸组于制模后2h开始给予安脑丸灌胃,连续治疗7d后采用RT-PCR法检测血肿周围BDNF mRNA的表达水平,免疫组化法检测血肿周围NGB阳性细胞的表达水平,Morris水迷宫法检测大鼠空间学习记忆能力.结果 与模型组比较,安脑丸组大鼠血肿周围BDNF mRNA表达明显增强,NGB阳性细胞表达明显增加,而逃避潜伏期明显缩短,差异均明显(P均＜0.01).结论 安脑丸能明显改善脑出血大鼠的空间学习记忆能力,其机制可能是通过增加BDNF、NGB的表达而发挥作用的.
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NGB基因转染拮抗庆大霉素耳毒性作用的实验研究
目的 验证阳离子脂质体介导脑红蛋白(neuroglobin,NGB)基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性的保护作用.方法 将ABR反应阈均不超过40 dB SPL的120只健康花色豚鼠随机分为5组,每组24只:Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:人工外淋巴液对照组(经左耳注入人工外淋巴液);Ⅲ组:人工外淋巴液实验组(经左耳注入人工外淋巴液后肌肉注射庆大霉素);Ⅳ组:空质粒转染组(经左耳注入空质粒pEGFP-C1后肌肉注射庆大霉素);Ⅴ组:NGB基因转染组(经左耳注入pEGFP-NGB后肌肉注射庆大霉素),庆大霉素均经后腿肌肉注射120 mg·kg-1·d-1,共给药14天.停止给药后喂养14天,各组均行ABR检测,耳蜗基底膜铺片、免疫组化观察各组豚鼠耳蜗基底膜毛细胞形态学及NGB蛋白表达的变化.结果 给药后Ⅰ组ABR反应阈平均为37.22 dB SPL(左耳)和36.94 dB SPL(右耳),Ⅱ组阈值平均为37.22 dB SPL(左耳)和37.50 dB SPL(右耳),Ⅲ组阈值平均为119.44 dB SPL(左耳)和122.22 dB SPL(右耳); Ⅳ组阈值平均为119.72 dB SPL(左耳)和120.83 dB SPL(右耳) ;Ⅴ组阈值平均为83.89 dB SPL(左耳)和100.56 dB SPL(右耳).Ⅴ组ABR反应阈较Ⅰ组和Ⅱ组显著升高(P<0.05),较Ⅲ组和Ⅳ组显著降低(P<0.05).Ⅴ组中手术耳ABR反应阈较非手术耳降低(P<0.05).耳蜗基底膜铺片示Ⅰ组和Ⅱ组内外毛细胞排列整齐,无缺失,Ⅲ组和Ⅳ组内外毛细胞极少量残存,其中ABR阈值大于135 dB SPL的豚鼠耳蜗毛细胞几乎消失殆尽,Ⅴ组毛细胞部分缺失,且主要是外毛细胞;免疫组织化学染色示Ⅴ组耳蜗毛细胞NGB蛋白表达量较其余各组均显著增高(P<0.05),其余各组几乎均未见明显阳性表达.结论 本研究成功验证了阳离子脂质体介导NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性具有有效的保护作用.
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脑缺血后脑红蛋白的保护作用及信号转导机制
目的 观察脑红蛋白(Ngb)的神经保护作用并探讨其与磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Akt)信号通路的关系.方法 健康雄性SD大鼠随机分为5组(n=12):①假手术组,②缺血组,③Hemin组,④LY(LY294002)组,⑤Hemin+ LY组,应用大脑中动脉线栓法(MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血模型,评定大鼠神经功能并计算脑梗死体积,Western blot方法检测Ngb蛋白表达和PI3-K/Akt活性变化.结果 脑缺血后Ngb蛋白表达增加,Hemin可诱导Ngb高表达,磷酸化Akt (pAkt)水平亦同时升高,脑梗死体积减小,神经功能改善；LY294002特异性阻断了PI3-K/Akt信号通路的活化,加重了脑损伤,不能抑制Ngb表达.结论 细胞存活信号通路PI3-K/Akt可能介导了脑缺血后Ngb的神经保护作用.
关键词： 磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶 脑红蛋白 脑缺血 -
脑红蛋白在小儿脑挫裂伤病理过程中变化的初步研究
目的 初步探讨脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)在小儿脑挫裂伤病理生理过程中的作用.方法 采用二维凝胶电泳技术分离3例行脑室肿瘤切除患儿的正常额叶皮层组织和8例脑挫裂伤患儿额叶皮层组织总蛋白质,PDquest图像分析软件识别差异蛋白质点,电喷雾串联质谱鉴定差异蛋白；免疫组化检测差异蛋白Ngb在正常脑组织和脑挫裂伤患儿的脑组织中的表达.并采用酶联免疫法检测10例正常儿童和15例脑挫裂伤患儿血清中Ngb的表达变化.结果 建立了正常儿童和脑挫裂伤患儿脑组织的二维凝胶电泳图谱,识别了6个差异蛋白质点,并鉴定了5种差异蛋白.免疫组化结果显示,Ngb在脑挫裂伤患儿额叶皮层组织中的表达水平高于正常对照组额叶皮层组织(P＜0.05).酶联免疫法检测结果表明,脑挫裂伤后6h、12h、18h、24 h及48 h血清Ngb表达高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Ngb可能在小儿脑挫裂伤病理生理过程中发挥了重要作用.
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脑红蛋白和缺氧缺血性脑损伤
脑红蛋白(Nsb)由Moens等[1]在2000年首次报道,为在大脑中发现的一种新携氧球蛋白,是血红素蛋白家族的新成员.
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脑红蛋白的神经保护作用及可能机制
脑红蛋白是血红素蛋白家族的新成员,与氧具有高度亲和力,主要表达于代谢活跃、耗氧剧烈的脊椎动物神经细胞.在缺血缺氧、氧化应激、毒物损伤等广泛的病理状态下,脑红蛋白作为一种内源性神经保护因子,通过调节线粒体功能、协助氧的转运、清除自由基、抑制凋亡、与细胞色素C等蛋白相互作用等多种途径增强组织对缺血/缺氧性损伤的耐受,发挥了神经保护作用,是一种备受期待的神经元损伤修复介质,为脑缺血缺氧性损伤的研究提供了新思路.
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脑红蛋白在颅脑损伤中脑保护作用的研究进展
脑红蛋白(neuroglobin,NGB)是新近发现存在于人体内重要的一类携氧蛋白,各项研究表明,脑红蛋白主要在脑组织中表达,在神经系统氧的摄取、运输和利用等生理过程以及去除活性氧和一氧化氮(nitrogen oxide,NO)、抑制细胞凋亡等方面起着极其重要的作用.因此,通过分析脑红蛋白的结构和功能及其在颅脑损伤中对神经元的保护作用,可以指导临床有针对性地治疗,为颅脑损伤的诊治提供新靶点的同时也为颅脑损伤患者的康复提供了新的思路及方向.
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脑红蛋白在创伤性脑损伤中的研究进展
脑红蛋白广泛分布于脑内神经元,能可逆性地与氧结合,在缺血缺氧的状态下表达增加并发挥显著的神经保护作用.近年来研究发现创伤性脑损伤后脑组织脑红蛋白的表达反应性增高并表现出良好的神经保护作用.本文就近年来脑红蛋白在创伤性脑损伤中的研究进展作一综述.
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脑红蛋白脑保护作用的研究现状
脑红蛋白是一种新发现的主要位于神经元内、能够可逆性结合氧的球蛋白.目前多数研究表明脑红蛋白对脑缺血缺氧有保护作用.这方面的实验可以分为两大类,一类是在缺血缺氧条件下观察到在体或离体神经细胞脑红蛋白的表达升高,因此推测它起到脑保护作用;另一类是缺血缺氧条件下,人为增强或降低脑红蛋白的表达,观察到在体或离体神经细胞损伤减轻,这类实验具有较强的说服力.关于脑红蛋白的生理作用机制,目前有几个假说.一是储存氧,协助氧在细胞内向线粒体扩散;二是清除活性氧自由基和氮自由基;三是做为信号转导中的调节子.目前的研究提示第三种方式可能是它发挥生理作用的主要途径.
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大鼠癫痫持续状态后认知功能变化模式及海马脑红蛋白表达水平的实验研究
目的 观察大鼠癫痫持续状态(SE)后学习记忆功能改变情况及海马组织脑红蛋白(NGB)表达水平,探讨癫痫发作对认知功能影响的可能机制.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(n=5)、癫痫模型实验组(n=35),模型组再依据观察时间分为:0h、1h、3h、12h、24 h、10d、30 d.应用氯化锂-匹罗卡品(Li-Pilo)建立SE模型,观察致痫期间大鼠行为学变化;采用Nissl染色检测神经元损伤情况;SABC免疫组化法检测NGB表达水平.同时随机选取同期相同品系SD大鼠40只,在造模前及造模后第5d、10d、15d、25 d、35 d进行RMT-100迷宫实验,以评价大鼠SE前后学习记忆功能变化情况.结果 大鼠SE后,海马CA1、CA3区和DG区均出现不同程度神经元细胞损伤坏死,且NGB表达上调,而海马CA1和CA3区神经元存活数与NGB表达水平呈正相关(r =0.206,P=0.015;r=0.306,P=0.011).迷宫实验显示工作记忆错误(WME)和参照记忆错误(RME)次数随SE后时间延长均呈递增趋势.相关性分析证实RME次数与CA1和CA3区神经元存活数呈负相关(r=-0.579,P=0.000;r=-0.454,P=0.002),WME次数与CA1和CA3区神经元存活数也呈负相关(r=-0.470,P=0.001;r=-0.507,P=0.000).结论 SE后NGB表达上调,且与海马组织神经元存活数呈正相关,提示其可能是SE所致缺血缺氧损害的一种代偿神经保护机制.SE后可导致明显认知功能损害,其可能与SE所致海马组织神经元的病理改变相关.
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促红细胞生成素对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究
目的 探讨促红细胞生成素在脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其可能的机制.方法 采用Zea Longa改良线栓法制作局灶性大鼠脑缺血再灌注损伤模型.取健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和EPO干预组,每组15只大鼠.EPO干预组分别于缺血前2 h、缺血后6 h、缺血后24 h予以EPO 3000 IU/kg腹腔注射.缺血再灌注组、假手术组和正常组于相应时间给与等量生理盐水.再灌注72 h后进行神经功能缺损评分,检测Nissl小体、脑红蛋白(NGB)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达.结果 与缺血再灌注组比较,EPO干预组的神经功能明显改善.EPO干预组Nissl小体减少的程度较轻.EPO干预组的NGB表达明显高于缺血再灌注组(P<0.01);而EPO干预组的MCP-1表达明显低于缺血再灌注组(P<0.01),均以缺血前2 h EPO干预亚组明显.结论 EPO可能通过上调NGB和下调MCP-1表达而减轻脑缺血再灌注损伤.
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针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白表达的影响
目的 观察针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)表达的影响,探讨其脑保护作用的部分作用机制.方法 采用线栓法制备MCAO模型,将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、对照点组、穴位组4大组,每组再根据再灌注后时间分为24 h、72 h组,每组5只.完成治疗后,先行神经功能缺损评分再处死大鼠,再采用Western Blot法检测大鼠缺血侧海马Ngb的表达水平.结果 神经功能缺损评分:与假手术组比较,模型组、对照点组及穴位组神经功能缺损评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组、对照点组、穴位组三组神经功能缺损评分差异无统计学意义(P>0.05).与24 h组比较,72 h模型组神经功能缺损评分差异无统计学意义(P>0.05);72 h对照点组及穴位组神经功能缺损评分均下降,差异有统计学意义(P<0.05).Ngb:与假手术组比较,模型组Ngb的表达水平明显降低(P<0.01);与模型组比较,对照点组及穴位组Ngb的表达水平均明显升高(P<0.01);与对照点组比较,穴位组Ngb的表达水平有升高,但差异无统计学意义(P>0.05).与24 h组比较,72 h假手术组、模型组及对照点组Ngb的表达水平均有下降,但差异无统计学意义(P>0.05);72 h穴位组Ngb的表达水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 针刺能降低脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分,并可上调海马Ngb的表达水平,从而实现脑保护作用.
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脑红蛋白在内毒素脑室注射脑损伤模型中的表达变化
目的 探讨内毒素脑损伤大鼠模型的顶叶皮质、海马组织、脑脊液(CSF)和血浆中脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)的表达变化及其意义.方法 随机选用SD大鼠140只,分为1个对照组(n=20)和6个内毒素干预组(n=20).内毒素干预组向大鼠脑池内注射内毒素0.1 mg/kg体重.对照组注入等容量生理盐水.于注射内毒素后3、6、12、24、48及72 h收集血浆、CSF,并处死大鼠留取顶叶皮质和海马组织.应用酶联免疫吸附法、免疫印迹法和免疫组织化学法检测Ngb的表达变化;应用干燥法检测鼠脑含水量.结果 注射内毒素后,鼠脑含水量明显高于对照组(P<0.01),48 h达峰值.酶联免疫吸附法测量顶叶皮质、海马组织、CSF和血浆中Ngb含量,显著高于对照组(P<0.01),48h达峰值.免疫印迹法和免疫组织化学法的结果和上述结果一致.结论 在内毒素所致脑损伤中Ngb表达上调且与内毒素的注入时间相关,Ngb表达上调是机体内源性神经保护机制之一.
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颅脑损伤患者血清脑红蛋白与低氧诱导因子1α 水平的变化及临床意义
目的 观察颅脑损伤患者血清脑红蛋白(Ngb)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)水平变化并探讨其意义.方法 选取急性期非开放性颅脑损伤患者71例,入院24 h后根据格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分评价病情为轻型36例、中型19例、重型16例;血肿体积<10 ml 39例、10～40 ml 16例、>40 ml 16例.患者入院后12 h(T1)、24 h(T2)、48 h(T3)及72 h(T4)采用ELISA检测血清Ngb和HIF-1α,随访记录患者预后,比较不同病情、血肿体积及预后的患者各时间血清Ngb、HIF-1α.结果 随着时间延长,不同病情、血肿体积及预后的颅脑损伤患者血清Ngb、HIF-1α水平均先升高后降低.中型、重型颅脑损伤患者T1～T4时间血清Ngb、HIF-1α水平均高于轻型患者,且重型患者升高更明显(P<0.05).血肿体积>40 ml、10～40 ml的颅脑损伤患者T1～T4时间血清Ngb、HIF-1α水平均高于血肿体积<10 ml,且血肿体积>40 ml升高更明显(P<0.05).死亡的颅脑损伤患者T1～T4时间血清Ngb、HIF-1α水平均高于存活患者(P<0.05).结论颅脑损伤患者血清Ngb、HIF-1α水平先升高后降低,其水平变化可能与患者的病情及预后有关.
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过表达脑红蛋白抑制双转基因 AD 小鼠脑中 Aβ诱导的凋亡
目的：研究AD双转基因（APPswe／PS1dE9）小鼠侧脑室注射质粒pNGB后，过表达脑红蛋白（neu－roglobin，NGB）对Aβ诱导的AD小鼠脑中细胞凋亡的影响及其潜在机制。方法：将24只鉴定后的13月龄AD双转基因阳性小鼠（雌雄各半）随机分为对照组、侧脑室注射生理盐水＋pcDNA3．1（1 g／L ）组和侧脑室注射pcDNA3．1（1 g／L）＋pNGB组。采用免疫组化检测鼠脑Aβ1－42表达情况，TUNEL染色检测脑内细胞的凋亡情况；Western blot检测鼠脑内与凋亡密切相关的cleaved caspase－3、caspase－9以及PI3K、p－Akt、Akt的蛋白水平。结果：与对照组和注射生理盐水组比较，注射pNGB组小鼠脑内Aβ1－42的表达明显受到抑制（P＜0．01），TUNEL染色阳性细胞数也明显减少（ P＜0．01）；过表达NGB能够明显抑制脑组织内cleaved caspase－3和caspase－9的蛋白表达（P＜0．01），促进Akt磷酸化水平的增强（P＜0．01）。结论：pNGB过表达能够明显抑制Aβ的生成并抑制Aβ诱导的细胞凋亡，其机制可能与激活PI3K／Akt通路进而抑制与凋亡密切相关的cleaved caspase－3和caspase－9的表达有关。
关键词： 脑红蛋白 caspases PI3K/Akt通路 阿尔茨海默病 -
电针百会、水沟穴上调脓毒性脑病大鼠脑红蛋白的表达
目的 观察并探讨大鼠出现脓毒性脑病时脑红蛋白(Neuroglobin,Ngb)的表达及电针百会、水沟穴对脓毒性脑病大鼠Ngb表达的影响. 方法 本研究采用经CLP造模成功的脓毒症大鼠通过观察大鼠神经行为学改变制作脓毒性脑病模型.将大鼠分为假手术组、脓毒性脑病组和脓毒性脑病+电针治疗组.取大鼠穴位百会、水沟穴分别沿皮刺入2 mm并接电极,另一电极夹在大鼠右耳尖端.疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度lmA,以大鼠右耳微颤为电针刺激有效的标志,每12h治疗30 min.2个组分别持续24 h和72 h.通过对大鼠脑组织切片及冰上取材,在24 h和72 h行免疫组化检测Ngb、Western blot检测Ngb蛋白表达水平及RealTime PCR检测Ngb mRNA基因表达水平,以测定电针百会、水沟穴对脓毒性脑病大鼠Ngb表达的影响. 结果 和假手术组比较,脓毒性脑病24h组及72 h组的Ngb蛋白表达水平均明显上调(P＜0.01);电针干预脓毒性脑病24 h组和非电针干预24 h组比较,Ngb蛋白表达明显上调(P＜0.01);电针干预脓毒性脑病72 h组和非电针干预72 h组比较,Ngb蛋白表达稍有下调(P＜0.01). 结论 脓毒性脑病中Ngb表达上调,电针干预对脓毒性脑病有治疗作用,24 h为明显,显示及时电针治疗脓毒性脑病效果明显,主要是通过上调Ngb表达起作用.
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电针上调MCAO大鼠皮质缺血半暗带脑红蛋白的表达
目的:探讨电针对MCAO大鼠大脑皮质缺血神经元的保护机制.方法:通过线栓法梗塞大脑中动脉建立大鼠局灶性缺血模型,在缺血1h后给予电针0.5 h(取穴为足三里、曲池),以后1次/d.在电针1d、3 d和7d分别处死,用Nissl染色观察神经元损伤,用免疫组织化学和Western blot测定缺血半暗带脑红蛋白表达的变化.结果:电针组与非电针组和正常组比较在1d和3d两个时间段缺血半暗带脑红蛋白表达均有增高(P＜0.01),7d时差异均无显著性(P＞0.05);非电针组与正常组比较缺血半暗带脑红蛋白表达,1d、3d两个时间有显著性增高(P＜0.01),7d时差异也无显著性(P＞0.05).结论:缺血能增加急性期缺血半暗带脑红蛋白的表达,而电针对该蛋白表达的提高更有显著性,可能对缺血缺氧的神经元具有较好的保护作用.
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体外培养原代神经元损伤模型的建立及损伤后脑红蛋白的表达
目的 建立原代神经元机械性损伤的体外细胞模型并探讨神经元损伤后脑红蛋白(NGB)的表达变化.方法 取出生12h内Wistar鼠的大脑皮质,培养10～12d后,采用所设计的标准模板,直视下进行损伤,采用免疫组化方法 和图像分析技术观测损伤前、后不同时间点神经元的NGB免疫组化反应及其阳性信号的灰度值.结果 皮质神经元损伤2h后,NGB阳性信号强度即开始增加,16h后达高峰,随后逐渐下降,128h后恢复至损伤前水平.结论 皮质神经元体外损伤模型可用于在体外观察神经元受到机械性损伤后细胞内蛋白表达变化的一些分子事件,简单实用.机械性损伤可以诱导神经元NGB在损伤后一定时间段内表达上调.
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大鼠弥漫性颅脑损伤后脑红蛋白mRNA变化的实验研究
目的 研究弥漫性颅脑损伤后大鼠脑组织中脑红蛋白(NGB)mRNA的表达变化情况,初步探讨NGB与颅脑损伤的关系.方法 选择Marmarou自由落体打击装置制作弥漫性颅脑损伤模型,采用实时、定量PCR检测伤后不同时间脑组织中NGB mRNA的表达情况,并对所得数据进行统计学分析.结果 在伤后30 min,脑组织中NGB mRNA的表达出现首个高峰,此后逐渐下降,至6 h恢复至正常水平;伤后12 h再次升高,于伤后48 h达高峰,此后下降,至伤后5 d仍高于正常水平.结论 弥漫性颅脑损伤后,脑组织中NGB mRNA表达呈"双峰",提示其可能参与神经元损伤后应激及继发缺血、缺氧性脑损害的应答机制.
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脑红蛋白在缺血缺氧性脑损伤中保护机制的研究进展
脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)是继血红蛋白、肌红蛋白之后发现的第3类携氧球蛋白.脑组织在缺血、缺氧状态下会诱导脑红蛋白高度表达,以保护神经元免受缺血性损害,但具体的神经保护功能及其分子作用机制尚不明了.本文就脑红蛋白的分布、结构特征及其在缺血缺氧性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中可能的作用和保护机制作一简要综述.
