人血管内皮生长因子的克隆表达及免疫学检测工作标准品的制备
摘要： 目的:克隆表达人血管内皮生长因子165(human vascular endothelial growth factor 165,hVEGF165)基因,制备VEGF免疫学检测工作标准品.方法:用RT-PCR从肝癌组织扩增目的基因VEGF165,插入到pUCm-T质粒中并测序鉴定.构建原核表达重组质粒pET32a-hVEGF165,转化入大肠杆菌,经IPTG诱导,固化Ni2+吸收色谱纯化得到重组人VEGF165(recombinant human VEGF165,rhVEGF165).用Wstern Blot检测rhVEGF165免疫原性,并通过HUVEC增殖试验检测rhVEGF165生物学活性.按标准品的要求制备VEGF检测工作标准品,后用ELASA试剂盒标定.结果:PCR产物为600bp,测序结果表明其序列正确,人VEGF165可在大肠杆菌内可溶性表达,rhVEGF165蛋白相对分子质量为38kD,具有生物学活性.工作标准品浓度标定为5.05pmol/L.结论:成功地克隆了有生物学活性的VEGF165基因,并制备出VEGF免疫学检测工作标准品.
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CLIA法检测高龄患者梅毒特异性抗体的临床应用
梅毒血清学检查已成为临床患者手术前、输血前及各种创伤性检查前的必检常规项目,由于高龄患者易受各种内外源性因素干扰,因而对梅毒抗体检测反应性较强标本的确认及弱反应性标本鉴别尤为重要[1].本文探讨化学发光免疫分析法(CLIA)检测高龄患者梅毒特异性抗体在临床诊断中的应用价值并与梅毒酶联免疫吸咐试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)等多种检测方法进行了比较分析.
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创伤后感染致多器官功能障碍综合征患者血清β-hBD-2、OPN、pro-ADM和NPt水平的变化
目的:探讨多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)患者的炎症感染病理过程中炎性介质水平的变化.方法:血清人类β防御素-2(human β-defensin-2,β-hBD-2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和新蝶呤(neopterin,NPt)采用酶联免疫分析法(ELISA)测定,肾上腺髓质素前体(pro-adrenomedullin,pro-ADM)检测采用化学免疫发光法.结果:四项血清标志物测定结果分别显示,对照组和确诊时组β-hBD-2、OPN、pro-ADM、NPt四种血清炎症介质标志水平均显著高于正常人组(P<0.05,P<0.01),出院前组β-hBD-2、OPN水平显著高于正常人组,另两项指标均与正常人组比较无显著性差异(P均>0.05);同时确诊时组与对照组比较β-hBD-2、OPN、pro-ADM三项指标水平也显著升高(P<0.05,P<0.01),NPt水平患者组呈略高,但无统计学意义(P>0.05);出院前组β-hBD-2、OPN、pro-ADM、NPt四种血清炎症介质标志水平均显著低于确诊时组(P<0.05,P<0.01).结论:MODS患者的炎症感染病理过程中炎性介质水平显著升高,其测定对于临床抗感染治疗提供重要价值.
关键词： 多器官功能障碍综合征 人类β防御素-2 骨桥蛋白 新蝶呤 肾上腺髓质素前体 -
PTH检测在甲状旁腺疾病诊断中的意义 (附病例报告)
原发性甲状旁腺功能亢进(primary hyperparathyroidism,PHPT)是一种好发于白色人种的内分泌疾病,由于甲状旁腺腺瘤、囊肿、增生、腺癌等疾病引起的甲状旁腺激素(PTH)分泌过多,导致体内钙磷代谢紊乱,常可导致骨骼、肾脏、消化系统和神经系统的病变.发生甲状旁腺功能亢进的原因可分为三种:①甲状旁腺自身发生了病变,如过度增生、瘤性变甚至癌变,医学上称之为原发性甲状旁腺功能亢进;②由于身体存在其他病症,如长期维生素D缺乏、小肠功能吸收障碍或肾功能不全等,血钙低于正常值,需要甲状旁腺增加甲状旁腺激素的分泌来提高血钙水平,因此,可以认为是代偿性亢进,称之为继发性甲状旁腺功能亢进;③在长期继发性亢进的基础上甲状旁腺又发生了瘤性变,称之为三发性甲状旁腺功能亢进.
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骨折延迟愈合与血浆TGF-β1浓度的相关性分析
骨折延迟愈合为骨折在正常愈合所需的时间(一般为4个月内)仍未达到骨折完全愈合的标准,亦称为骨延迟连接[1].转化生长因子-β1(transforming growth factor, TGF-β1)是TGF超家族中的一个关键调控分子,不仅可直接刺激成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞,还能强化其他骨生长因子的作用[2].外周血TGF-β1水平与骨折愈合状况密切相关[3-4].本文检测骨折患者血浆TGF-β1浓度,旨在揭示其对骨折延迟愈合的预测价值.
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三碘甲腺原氨酸(T3)第三次免疫测定用国家标准品的建立
目的:建立三碘甲腺原氨酸(T3)第三次定量免疫测定用国家标准品.方法和结果:精确称取高纯T3原料,用含0.5%BSA的0.02M PBS缓冲液配制成100ng/ml溶液,经无菌过滤处理后,分装、冻干制成候选品.以T3第二次国家标准品(150550-0004)为对照品,经协作标定,候选品中T3免疫活性为50ng/支.结论:候选品各项指标均符合要求,可作为T3第三次免疫测定用国家标准品使用.本标准品的建立,为T3免疫测定用试剂盒的标准化提供定量基础.
关键词： 三碘甲腺原氨酸国家标准品 定量标记免疫分析 -
血清VEGF及TGF-β1在肝纤维化患者中的表达及其意义
目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)在肝纤维化患者中的表达及其意义.方法:选择66例肝纤维化患者为观察组,另选择100名体检健康者为正常对照组,采用免疫组织化学方法检测两组血清VEGF及TGF-β1浓度.结果:观察组血清VEGF及TGF-β1浓度为(110.87±22.64)ng/L和(15.08±3.27)μg/L,显著高于对照组(15.98±4.75)ng/L和(7.17±1.86)μg /L(t值分别为20.166、11.066、P均＜0.001);观察组S1、S2、S3、及S4期患者血清VEGF分别为(84.25±16.86)、(101.87±26.70)、(118.04±20.75)、(134.65±25.73)ng/L(F=15.689,P<0.05),TGF-β1分别为(10.87±2.64)、(13.06±2.74)、(17.87±3.28)、(22.76±4.75)μg /L(F=12.438,P<0.05);肝纤维化患者血清VEGF与TGF-β1水平呈正相关(r=0.532,P<0.05).结论:血清VEGF与TGF-β1水平与肝纤维化的发生发展密切相关,二者联检可作为诊断及判断病情的血清学指标.
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冠心病患者血脂和亚临床甲状腺功能减退的临床观察
目的:对冠心病患者血脂和亚临床甲状腺功能减退情况进行观察并作探讨.方法:应用生物化学法和化学发光免疫分析测定了156例CHD患者[其中51例稳定型心绞痛(SAP)、48例不稳定型心绞痛(UAP)和57例急性心肌梗死(AMI)患者]和60例正常对照组的血脂和血清甲状腺激素(TH),并进行了比较性分析.结果:156例CHD患者较60例正常对照组血清TC、TG、LDL-C和LP(a)水平明显增高(P<0.05~0.01),血清HDL-C无明显差异(P>0.05),而且随SAP、UAP和AMI患者血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平逐渐降低,AMI患者降低为明显,而血清LP(a)增高为明显.在TH分析中,156例CHD患者较60例正常对照组血清T3和FT3水平明显降低(P均<0.05),而血清T4、FT4和TSH水平无明显差异(P均>0.05).而且随SAP、UAP和AMI患者血清T3和FT3水平逐渐降低(P< 0.05~0.01),AMI患者降低为明显(P<0.01).结论:CHD患者血脂代谢紊乱.血脂TC、TG、LDL-C和LP(a)水平明显增高,而血清T3和FT3水平明显降低,均随着CHD的严重程度而降低,而血清LP(a)增高.AMI患者血清LP(a)水平增高为明显,而血清T3和FT3水平降低为明显.
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单克隆抗体药物抑制肿瘤血管新生机制的研究进展(文献综述)
血管新生与肿瘤的发生、生长、转移密切相关[1].在过去的十年里我们对血管新生这一复杂过程的认识有了飞速的发展,此过程包括:内皮干细胞的迁移、内皮细胞的迁移和侵入、内皮细胞的增殖、内皮细胞在管状结构中的组织、循环系统的形成、血管的成熟、血管的退化.随着对这些过程和参与这些过程的分子的认识加深,导致了许多新的血管新生抑制剂的出现和发展[1-3].二十多年来对血管新生抑制剂的研究已取得巨大进展,发现了许多血管新生抑制剂,但一些抑制剂发挥作用的机制并不清楚.
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CHD患者血清CysC、Hcy和APN水平的变化及临床意义
本文报告冠心病(CHD)患者血清胱抑素C(CysC)、同型半胱氨酸(Hcy)和脂联素(APN)水平的变化,并就临床价值作初步的探讨,现将结果报告如下.
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血清CEA、SCC、NSE联检对诊断肺癌的临床价值
本文就癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)单检与联检在肺癌诊断中的临床价值进行探讨.
