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健康男性和弱精子症患者精液精子中GP130的表达
目的观察在正常和活动力低下的人精液精子中白细胞介素-6(IL-6)及其受体(IL-6R)和GP130的表达差异.方法收集活动力正常的人精液精子和A、B级精子低于20%的弱精子症患者的精液精子,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学的方法检测IL-6及其受体和GP130的表达水平. 结果与活动力正常的精液精子比较,GP130在活动力低下患者精液精子的表达显著降低(P＜0.01),本实验未检测到IL-6和IL-6R在人精液精子的表达.结论精液精子GP130的表达减少与人精子活动力低下相关,提示GP130表达减少可能是精子活动力低下的原因之一.
关键词： 弱精子症 白细胞介素-6 GP130 逆转录-聚合酶链反应 免疫细胞化学 -
白血病抑制因子在胚胎植入过程中的调节作用
白血病抑制因子(LIF)是一种具有多种生物学效应的多功能细胞因子,通过与其受体(LIFR)和gp130结合发挥作用,联合激活下游的信号传导子与转录激活因子3(STAT3),进而启动影响细胞分裂、分化等相关基因的表达.近些年来的研究越来越显示出LIF在胚胎植入过程中有着重要的调节作用,包括在子宫内膜容受态的构建、囊胚生长发育和黏附、滋养外胚层细胞分化及入侵等植入关键环节,尤其LIF已被公认是子宫内膜容受态的标志之一.本文将结合新研究进展重点综述LIF在胚胎植入各环节中的调节作用.
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清肠化湿方对实验性结肠炎小鼠IL-6反式信号转导的影响＊
目的：观察清肠化湿方对实验性结肠炎小鼠白介素6（IL-6）反式信号转导trans-signaling的影响，初步探讨该方治疗溃疡性结肠炎（UC）作用机制是否与调控IL-6 trans-signaling有关。方法： TNBS法制备小鼠结肠炎模型，药物干预后，ELISA法检测可溶性白细胞介素6受体（sIL-6R）含量，实时荧光定量PCR法检测IL-6、糖蛋白130（gp130）mRNA相对表达水平，Western Blot法观察结肠黏膜IL-6、gp130蛋白的表达情况。结果：模型组小鼠sIL-6含量、IL-6及gp130 mRNA和蛋白表达水平较正常小鼠明显增高。清肠化湿方可以降低实验性结肠炎小鼠结肠sIL-6水平（P<0.01），降低IL-6及gp130mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）。结论：清肠化湿方对小鼠实验性结肠炎发挥良好抗炎效应，可能与调控IL-6 trans-signaling有关。
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C6胶质瘤微环境中SIL-6R/GP130与MSCs瘤向转化的相关性
目的 通过骨髓间充质干细胞(MSCs)与C6胶质瘤细胞间接共培养,探讨在C6胶质瘤微环境中SIL-6R及GP130的过度激活和表达对MSCs向肿瘤方向转化的影响.方法 用Transwell插入式培养皿结合6孔板构建间接共培养体系来模拟MSCs生长的微环境,用RT-QPCR检测细胞中GP130、STAT-3、Cyclin D1和BCL-xl mRNA的表达；相差显微镜下观察细胞形态学；ELISA法检测上清液中SIL-6R的表达；免疫荧光法检测细胞膜上GP130的表达；Western blot检测细胞中STAT-3、Cyclin D1、BCL-xl蛋白表达.结果 实验组的MSCs呈现类似胶质瘤细胞样的形态；细胞中GP130、STAT-3、Cyclin D1和BCL-xl mRNA的表达水平和上清液中SIL-6R的表达水平明显高于阴性对照组和空白组(P＜0.05)；实验组大部分细胞及阳性对照组的细胞膜上表达GP130蛋白,分别达到93％±5％和95％±5％,显著高于阴性对照组及空白组的0％(P＜0.01),细胞中STAT-3、Cyclin D1和BCL-xl的蛋白表达水平高于阴性对照组和空白组(P＜0.05).结论 MSCs的恶性转变与SIL-6R/GP130的过度表达和激活存在一定的相关性,但其在MSCs瘤向转变中的作用及机制有待进一步研究.
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大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应
IL-6受体(IL-6R)β链是分子量为130 kD的膜结合糖蛋白(gp130),它是介导IL-6生物效应的信号转导子.我们的实验已经证实了重组人IL-6(rhIL-6)可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2,rhIL-6与R2细胞表达的hIL-6R结合并与大鼠gp130缔合而转导IL-6的信号,产生其生物效应.本文在体外液体培养中试验观察到,大鼠gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后,对rhIL-6生物效应产生明显的影响.我们的研究结果表明,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL-6对R2细胞的增殖抑制效应,在适的终浓度,其阻断率可达(45±7)%.
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IL-11对中子辐射小鼠肠道IL-11受体表达的影响
目的 探讨IL-11对4.0 Gy中子辐射小鼠肠道IL-11受体表达影响.方法 136只BALB/C二级小鼠,经4.0 Gy中子全身照射,于照前3 d或照后即刻注射600 μg/kg rhIL-11,每日1次,连用3 d,并于照后6 h、1 d、2 d、5 d活杀取小肠,采用SP免疫组织化学和图像分析等技术,定量研究肠组织中IL-11、IL-11 Rα和gp130表达变化.结果 正常小鼠中,IL-11和gp130于肠绒毛上皮细胞和隐窝细胞浆呈强阳性,尤以绒毛顶端细胞为显著;IL-11 Rα于肠绒毛全层上皮细胞和隐窝细胞浆呈强阳性,其强度高于IL-11.4.0 Gy中子照后2 d内,IL-11、IL-11 Rα和gp130于肠绒毛和隐窝上皮细胞表达均明显减少;照前和照后应用IL-11,三者阳性强度均高于4.0 Gy照射组.结论 4.0 Gy中子照射后,小鼠肠道IL-11、IL-11 Rα和gp130表达减少,应用IL-11刺激肠上皮细胞IL-11受体表达上调,且该作用参与了中子辐射后肠道损伤与修复的病理生理过程.
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大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓IL-6、IL-6受体表达的关系
目的观察大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓细胞IL-6、IL-6受体以及gp130基因表达水平改变的关系.方法健康3月龄雌性SD大鼠60只,30只作为假手术对照组,30只经腹手术去卵巢.分别于去卵巢后2,4,6,8,12周取去卵巢组和对照组各6只大鼠骨髓细胞作细胞培养和提取RNA.培养的第6天分别作瑞氏-吉姆萨染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,以胞核3个或3个以上以及TRAP(+)为破骨细胞标志,计数细胞数.骨髓细胞提取总RNA进行逆转录PCR.结果术后2周去卵巢组破骨细胞形成数即多于对照组(P＜0.05);第4～6周,去卵巢组破骨细胞形成达高峰,明显多于2周(P＜0.01);去卵巢后的8周,较峰值下降,直至12周去卵巢组破骨细胞形成数仍高于对照组(P＜0.05).与破骨细胞的变化相对应,术后2周,骨髓细胞IL-6及IL-6RmRNA表达均明显增高(分别为P＜0.01,P＜0.05);第4周时,IL-6表达水平达到高峰,保持至第6周,IL-6R表达则在第6周达高;第8周,IL-6、IL-6R基因表达水平较峰值下降,但直至第12周仍高于对照组.去卵巢后全程未见gp130基因表达水平有明显变化.结论大鼠去卵巢后骨髓干细胞分化形成破骨细胞明显增加,呈时间相关动态过程,第6周达高峰,这一过程与骨髓细胞IL-6、IL-6R基因表达的动态变化一致,提示去卵巢后骨髓细胞IL-6、IL-6R基因表达水平上升增强骨髓微环境中IL-6介导的生物信号进而使骨髓源性破骨细胞形成增多是导致骨吸收亢进的重要原因.
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rhIL-11对中子辐射IEC-6细胞IL-11Rα和gp130表达的影响
目的 探讨rhIL-11对中子照射后IEC-6细胞IL-11Rα和gp130表达的影响.方法 培养的IEC-6细胞经4.0 Gy中子照射并于照前12 h与照后即刻给予100ng/ml的rhIL-11,采用流式细胞术、免疫组化、Western blot及图像分析等技术检测IEC-6细胞的凋亡和坏死率、IL-11Rα和gp130的表达.结果 中子照射后6 h,IEC-6细胞凋亡率增加(P＜0.01),应用rhIL-11可以降低细胞凋亡率(P＜0.05).IL-11Rα于正常IEC-6细胞膜和浆呈强阳性,中子照射后6 h,IL-11Rα表达明显减少(P＜0.01),24 h恢复至正常水平(P＜0.01),应用rhIL-11后IL-11Rα表达高于单纯照射组(P＜0.05).gp130于正常IEC-6细胞浆呈强阳性,中子照射后48 h内呈进行性减少(P＜0.05),应用rhIL-11后gp130表达于照射后24 h恢复正常,48 h降低但高于单纯照射组(P＜0.05).结论 IL-11对IEC-6细胞中子辐射损伤起保护作用,其机制可能是通过上调其特异性结合受体亚基IL-11Rα和信号转导亚基gp130发挥作用.
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中子辐射后骨髓造血功能损伤以及IL-11受体的表达变化
目的探讨IL-11受体在中子照射骨髓造血细胞损伤后的变化规律及其意义.方法100只雄性BALB/c小鼠经2.5和4.0 Gy中子全身照射,于照射后6 h,1、2、3、5、7、14和28 d分批活杀,应用光镜和电镜观察骨髓病理变化;流式细胞术和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞凋亡;免疫组化和图像分析定量检测IL-11Rα及gp130的表达.结果2.5 Gy中子照射后3 d内,小鼠骨髓造血细胞见凋亡与坏死,数量进行性减少;至照射5 d后逐渐恢复,28 d恢复至正常.4.0 Gy中子照射,骨髓损伤更严重,未见恢复.2.5 Gy中子照射后1 d内,IL-11Rα在造血细胞膜及胞浆略有增加,2～7 d减少,14 d后逐渐恢复;而gp130于照射后7 d内在造血细胞膜及胞浆减少,14 d后逐渐恢复.4.0 Gy照射后2 d内,IL-11Rα和gp130均进行性减少,较2.5 Gy减少更为明显.结论IL-11Rα及gp130表达在中子照射后骨髓损伤期减少,而于恢复期逐渐恢复,参与了骨髓辐射损伤后造血功能重建的病理生理过程.
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白介素-6保护小脑颗粒神经元抗谷氨酸的神经毒性作用
目的:探讨白介素-6(IL-6)对谷氨酸诱导的神经元损伤的防治作用及其作用机制.方法:用IL-6慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,然后后用谷氨酸急性刺激小脑颗粒神经元.用噻唑兰(MTT)比色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法分别观察神经元的功能和凋亡的变化;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测神经元内Ca2+浓度的动态变化和IL-6信号转导蛋白gp130 mRNA的表达.结果:IL-6(2.5、5和10 ng/ml)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,可浓度依赖性地改善谷氨酸诱导的神经元活性降低;并可明显减少谷氨酸诱导的神经元凋亡;还可显著抑制谷氨酸激发的神经元内Ca2+超载.此外,经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元表达gp130 mRNA明显低于未经IL-6预处理的神经元.结论:IL-6能保护神经元抵抗由谷氨酸诱导的兴奋毒性作用,IL-6的这种神经保护机制可能与它抑制神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能由gp130细胞内信号转导途径介导.
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gp130分子在树突状细胞上表达及其意义
目的:探讨单核细胞向树突状细胞(DC)分化成熟时,gp130分子在细胞膜上的表达及其意义.方法:人外周血分离得到的单核细胞在含有DC分化成熟所需的各种因子的培养液中分别培养4 d和7 d,然后用流式细胞术测定DC上gp130分子的表达.结果:gp130分子在单核细胞上低表达,经培养分化成熟成为DC后,DC上的gp130分子表达被上调,特别是在TNFα和抗CD40刺激型单克隆抗体存在下.结论:gp130分子表达于DC前体细胞(单核细胞)并随其分化成熟而增加.
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抗人IL-6 Rβ（gp130）单克隆抗体对IL-6信号分子调控浅析
目的：分析鼠抗人IL-6Rβ（gp130）单克隆抗体[anti-IL-6Rβ（gp130）mAb]的生物学特性及对IL-6信号分子的调节作用。方法：利用Western blot、竞争性ELISA实验、功能表位结合实验，检测anti-IL-6Rβ（gp130） mAb的亲和力、效价及与gp130抗原表位结合特异性。进而探讨anti-IL-6Rβ（gp130） mAb对U266细胞、RA患者外周血单个核细胞（PBMC）及滑膜液单个核细胞（SFMC）增殖和分化中的IL-6信号分子的调控机制。结果：Anti-IL-6Rβ（gp130）mAb对gp130具有高亲和性（如10A1细胞株的亲和力常数可达为2．62E-10），所获得的多株单抗还具有针对不同抗原结合表位的特性，可用于分析和研究IL-6信号通路及下游STAT3的磷酸化。结论：获得针对不同抗原结合表位的anti-IL-6Rβ（gp130）mAb，初步的实验结果表明此类单抗不仅具有调控IL-6信号分子和下游STAT3磷酸化的生物学功能，并为解析临床RA的发病与IL-6信号分子的关联性提供了初步的实验结果。
关键词： IL-6 GP130 抗gp130单克隆抗体 STAT3 RA -
抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能.方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株.大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应.结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖.结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段.
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IL-27在Th1型免疫发生中的作用
IL-27是近发现的一种与IL-12相关的细胞因子,它由抗原提呈细胞产生,通过广泛表达于各种免疫细胞表面的IL-27受体WSX-1/gp130发挥生物学效应.IL-27对Th1型免疫反应具有重要的调节作用.IL-27可以促进初始CD4+T细胞的增殖,也可以促进其向Th1细胞的分化及产生IFN-γ.而在高度Th1极化的情况下,IL-27的主要作用是限制Th1型免疫反应的强度和持续时间,从而保护机体免受过度的免疫反应的损伤.IL-27在抗感染免疫,抗肿瘤免疫及自身免疫性炎症等Th1型免疫主导的病理过程中起重要作用.
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急性病毒感染对小鼠心肌糖蛋白130的基因及蛋白表达的影响
目的:探讨糖蛋白130(glycoprotein 130)在病毒性心肌炎中的作用.方法:建立病毒性心肌炎小鼠模型,观察其心肌病理和血清IL-6水平;用RT-PCR方法观察小鼠心肌gp130 mRNA的表达;Western blot方法观察gp130蛋白的表达.结果:病毒组与正常对照组相比,病毒组小鼠心肌病变检出率和血清IL-6水平显著高于对照组(P<0.001);心肌gp130 mRNA表达亦见明显增高(P<0.01),其蛋白表达未见明显改变(P>0.05).结论:急性病毒感染促使小鼠心肌gp130基因表达,机制有待进一研究.
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凝血酶受体在多发性骨髓瘤细胞XG-1增殖和抗凋亡作用中的机制
目的 研究凝血酶及其受体在促进多发性骨髓瘤细胞增殖和抗凋亡作用中的机制.方法 采用免疫荧光标记、流式细胞仪检测、细胞计数和免疫印迹等方法,对多发性骨髓瘤细胞株XG-1细胞表达的凝血酶受体、凝血酶对XG-1的增殖与抗凋亡作用及细胞内JAK2-STAT3分子磷酸化进行分析.结果 凝血酶可以通过激活XG-1表面的凝血酶受体,继而激活JAK2-STAT3途径的磷酸化,促进骨髓瘤细胞的增殖与抗凋亡作用,且该作用与gp130介导的信号转导作用无关.结论 凝血酶及其受体介导的信号转导通路是多发性骨髓瘤维持增殖和抗凋亡作用的因素之一.
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依那普利对实验性心肌梗死大鼠左室gp13O基因表达的影响
目的:研究急性心肌梗死(AMI)后左室重塑(LVRM)的发生与gp130基因异常表达的关系及依那普利对gp130表达的影响.方法:AMI后24h存活的73只雄性Wistar大鼠随机分为AMI组及依那普利治疗组,AMI组又依照术后1、3、7、14、21、28 d分为6个时间点,另设假手术组及正常对照组.各8只.依那普利组于术后第2天起灌胃给药(10mg·kg-1·d-1),连续4周.行心脏标本病理分析,分别采用放射免疫法和氯氨T法测定左室非梗死区(LVNIZ)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和LVNIZ羟脯氨酸含量(HC),用RT-PCR法检测LVNIZ gp130 mRNA的表达.终获完整资料大鼠76只,于上述各组分别为9、8、8、9、9、8、9、8和8只.结果:①与正常及假手术组相比,AMI组LVRM参数:心脏重量(HW)、左室重量(LVW)、左室重量指数(LVWI)、心肌细胞横径(TDM)、HC均显著增加(P＜0.05～0.01);②AMI组LVNIZ AngⅡ明显升高,与LVRM相关性好(P＜0.01);③LVNIZ gp130 mRNA表达于AMI第1天即开始明显增加,第7天达高峰,以后有所下降,但第28天时仍明显高于对照组(P＜0.05～0.01);④相关分析显示LVNIZ gp130mRNA表达水平与LVNIZ AngⅡ、LVRM 参数间呈正相关(P＜0.05～0.01);⑤与AMI第28天组相比,依那普利组LVRM明显减轻,LVNIZAngⅡ显著下降,gp130 mRNA表达明显下调(P＜0.05～0.01).结论:大鼠AMI后LVNIZ gp130 mRNA的过度表达与AMI后LVRM的发生密切相关,依那普利改善LVRM的机制还可能与抑制gp130基因的过度表达有关.
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白介素6(IL-6)受体蛋白中核转运定位序列的研究
目的：研究gp130胞内区的假定核定位序列（nuclear localization sequence，NLS）是否具有核定位功能。方法：首先将编码 SV40大T抗原NLS（阳性对照）和 gp130胞内区假定NLS的cDNA分别插入真核表达载体 pEGFPN1，构建成表达质粒 pSV-NLS-GFP和pGP-NLS-GFP。然后将这两种表达质粒分别转染 HeLa细胞并采用 genecitin筛选稳定表达细胞株。以加强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescence protein，EGFP）在细胞内的分布情况作为观察指标确定融合蛋白表达产物在细胞内的定位。结果：稳定转染表达质粒pSV-NLS-GFP的 HeLa细胞中绿色荧光主要集中分布在细胞核内；而转染了pGP-NLS-GFP的 HeLa细胞中绿色荧光在细胞浆和细胞核内呈现出均匀分布状态。结论：gp130胞内区的假定 NLS序列不具有核定位功能。
关键词： GP130 核定位序列(NLS) 核定位 -
人gp130-IL-12Rβ2胞外段融合蛋白基因克隆及真核表达载体的构建
目的 克隆含人gp130和IL-12Rβ2胞外段的基因并构建人gp 130-IL-12Rβ2胞外段融合蛋白基因真核表达载体.方法 设计合成特异性引物,以人外周血单个核细胞(PBMC)cDNA为模板,PCR法扩增gp130胞外段基因和IL-12Rβ2胞外段基因;应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建骨架为GV140的人gp130-IL-12Rβ2胞外段融合蛋白基因真核表达载体.结果 PCR扩增得到人gp130胞外段基因,IL-12Rβ2胞外段基因和gp130-IL-12Rβ2胞外段融合蛋白基因片段,克隆得到重组体GV 140-gp 130-IL-12Rβ2,测序验证了重组体的准确性.结论 成功构建了人gp130-IL-12Rβ2胞外段融合蛋白基因真核表达载体.
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白血病抑制因子在女性输卵管的表达
白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是60年代末发现的一种多功能的细胞因子,因能抑制小鼠M1型髓样白血病细胞增殖并诱导其向正常Mφ样细胞分化而得名.研究显示,LIF在女性卵巢及卵泡液、子宫内膜及蜕膜、滋养细胞与输卵管等组织细胞均有表达,在排卵、胚泡的形成、早期发育及胚泡着床中起调节作用[1-4],人类输卵管妊娠及部分不孕症的发生可能与组织局部LIF的表达异常有关[5-7].输卵管在精子获能、卵子成熟、配子转运、受精及早期胚胎发育等过程中具重要作用.然而,女性输卵管组织LIF及其受体的研究较少,本文探讨LIF在女性输卵管组织中的表达与变化,旨在丰富人类输卵管生殖生理学的认识,并为防治人类一些原因不明的不孕症提供参考资料.
