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水杉总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察水杉总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:凝闭大鼠双侧椎动脉4～5 h后,夹闭颈总动脉30 min,再灌注90 min,造成大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察水杉总黄酮对脑组织中生化指标及脑电图的影响.结果:缺血再灌注造成脑组织严重损伤,脑组织中水,Na+, Ca2+含量及丙二醛(MDA)含量较对照组明显增高,而超氧化物歧化酶(SOD)活力较对照组降低,并伴有脑电图异常和脑组织结构病理性改变.夹闭颈总动脉前30 min ip 25～100 mg·kg-1 水杉总黄酮能降低脑组织中水,Na+,Ca2+含量及MDA含量,并提高SOD活力,对组织学检查及脑电图也有所改善.结论:水杉总黄酮对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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银杏二萜内酯类化合物拮抗PAF诱导的血小板聚集及对神经细胞的保护作用
该研究通过对银杏二萜内酯类化合物拮抗PAF诱导的血小板凝集和神经保护作用进行检测来探讨银杏内酯制剂治疗缺血性脑卒中的作用机制.实验以PAF作为血小板聚集诱导剂,将银杏二萜内酯分别加入采集的兔血中,采用比浊法检测各化合物对血小板凝集的抑制作用;在L-谷氨酸诱导的原代皮质神经细胞损伤模型上采用MTI检测细胞活率,使用荧光染料Fura-2 AM检测细胞内游离钙离子浓度,通过Hoechst 33258染色法检测银杏二萜内酯对神经细胞凋亡的抑制作用.结果发现银杏二萜内酯类化合物中抑制PAF诱导的血小板凝集活性大小依次为银杏二萜内酯K(GK)、银杏二萜内酯B(GB)、银杏二萜内酯A(GA)、银杏二萜内酯C(GC)、银杏二萜内酯M(GM)、银杏二萜内酯J(GJ)和银杏二萜内酯L(GL);其中GB和GK(1 ～ 100 μmol·L-1)能显著减轻L-谷氨酸所致的细胞损伤,表现为神经细胞活率明显提高(P＜0.05),细胞内钙离子浓度明显下降(P＜0.05)和细胞凋亡率明显减少(P＜0.05).该研究明确了银杏二萜内酯各化合物在抑制PAF诱导的血小板凝集和神经细胞保护方面的活性与作用特征.
关键词： 银杏二萜内酯类化合物 拮抗PAF受体 神经保护 凋亡 Ca2+超载 -
山莨菪碱对再灌注后肝细胞保护作用的实验研究
肝脏缺血再灌注后一般都伴随着肝窦内皮细胞和肝细胞的损伤,这是肝脏和创伤外科疾病中常见的病理过程,如处理严重的肝外伤、施行广泛的肝叶切除、肝移植以及休克、感染等[1-4].
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脑弥漫性轴索损伤轴索内钙超载及钙拮抗剂的治疗作用
目的探讨脑弥漫性轴索损伤(DAI)轴索内Ca2+超载及Ca2+拮抗剂的治疗作用.方法 SD大鼠14只,分损伤组、用药组(伤后立即静注尼莫通)、对照组.用自制头颅瞬间侧向旋转装置,制作大鼠DAI模型.伤后2～24小时取延髓组织,行Ca2+电镜细胞化学处理(草酸钾-焦锑酸钾法)和观察.结果 (1)损伤组神经轴索髓鞘板层断裂、间隙扩大,轴膜与髓鞘脱离,细胞器边聚,轴浆空泡形成,线粒体稀少.受损髓鞘内有大量细小钙颗粒,髓鞘损害程度与钙颗粒数量呈正相关;伤后晚期轴浆内可见粗大钙颗粒.神经元胞体及血管内皮细胞空泡化,也有钙颗粒沉着,内皮细胞管腔面出现微绒毛.(2)用药组轴索髓鞘损伤趋于局部,线粒体数量、形态、分布近于正常,髓鞘及轴浆钙颗粒罕见,神经元胞体及血管内皮细胞空泡变明显减轻.结论 DAI中轴索存在Ca2+超载,这是导致DAI发生发展的重要因素;Ca2+拮抗剂尼莫通可改善DAI.
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TAT-tCNTF对CD损伤细胞的作用机制研究
目的：探讨TAT-tCNTF对细胞松弛素D（CD）导致的人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）损伤的作用机制。方法：TAT-tCNTF处理经CD损伤的细胞，CCK-8法检测其对细胞活力的影响；荧光显微镜观察罗丹明-鬼笔环肽标记的F-actin的变化；荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测细胞内Fluo 4-AM标记的Ca2+浓度变化；Western blot检测F-actin蛋白水平变化。结果：10μmol·L-1 CD降低HUVECs的细胞活动度（P<0.0001），而10μg·mL-1的TAT-tCNTF明显升高HUVECs的细胞活动度（P=0.003）；荧光显微镜下观察到CD作用后的细胞F-actin断裂且分布减少，而TAT-tCNTF可改善这一现象；TAT-tCNTF可降低由CD引起的细胞内Ca2+超载；FCM显示CD组Ca2+荧光强度（MFI）较对照组增强，而（CD+TAT-tCNTF）组的MFI较CD组减弱。Western blot结果显示各组F-actin表达量无明显差异。结论：TAT-tCNTF对CD引起的细胞损伤有改善作用，其机制与维持细胞骨架结构和缓解细胞内Ca2+超载有关。
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胆红素脑病与神经细胞凋亡
胆红素脑病是新生儿黄疸的极重症表现,可留下神经系统后遗症甚至引起死亡,但胆红素神经毒性的发病机制迄今尚未完全阐明.既往研究表明,胆红素通过抑制神经元突触传递过程,蛋白激酶的磷酸化,神经递质释放影响神经元的功能.近年来随着分子生物学研究的不断深入,发现胆红素可引起细胞内Ca2+超载,影响线粒体呼吸功能,介导胆红素神经毒性,导致神经细胞凋亡.
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山楂总黄酮对血瘀合并脑缺血-再灌注小鼠的影响(一)
脑水肿程度(P<0.05),对脑神经细胞和胶质细胞损伤有明显的拮抗作用.结论:山楂总黄酮能改善小鼠血瘀性脑缺血-再灌注模型血液流变性,预防脑水肿的发生和Ca2+超载,改善脑组织的病理情况,具有保护脑缺血-再灌注损伤的作用.
关键词： 血瘀性脑缺血-再灌注小鼠模型 全血黏度 脑水肿 组织形态 Ca2+超载 -
尼莫地平对大鼠失神经骨骼肌细胞萎缩的延缓作用
目的:探讨失神经骨骼肌细胞中Ca(2+)浓度和MPTP开放率的变化及尼莫地平对它们的影响.寻找延缓失神经骨骼肌萎缩的新途径.方法:采用右下肢失神经腓肠肌动物模型,将72只Wista大鼠随机分为3组:对照组、模型组、尼莫地平组(简称治疗组).在术后2、14、28d每组取8只大鼠处死取双侧腓肠肌,测腓肠肌湿质量比,用荧光指针定量检测Ca(2+)浓度的变化,激光共聚焦显微镜观察标本细胞线粒体MPTP开放率的变化.结果:模型组术后2d ca(2+)浓度和MPTP开放率已经开始增加,随着时间延长(14d、28d),Ca(2+)浓度和MPTP开放率均持续增加(P<0.05).治疗组术后ca(2+)浓度和MPTP开放率均低于同期模型组(P<0.05),但却始终高于同期对照组的表达水平(P<0.05).Ca(2+)浓度与MPTP开放率呈正相关(r=0.841,P<0.05).结论:尼莫地平可以通过抑制Ca(2+)超栽和MPTP的开放来延缓失神经骨骼肌萎缩.
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硒碘对大鼠肝脏细胞Ca2+超载和肌动蛋白表达的影响
目的:探讨低硒、低碘对大鼠肝脏相关生化指标,细胞Ca2+超载和肌动蛋白表达的影响.方法: 给大鼠饲以半合成正常饲料、低硒饲料、低碘饲料、低硒低碘饲料制作动物模型.检测各组动物肝组织相关生化指标,细胞内Ca2+浓度和肌动蛋白的表达.结果:与对照组相比,低硒组、低硒低碘组GPX、ID-I活性显著降低;低碘组GPX、ID-I活性无显著性差异;各实验组MDA水平均显著性升高;细胞内Ca2+浓度显著性升高;肌动蛋白表达量显著降低.结论:缺硒或缺碘均可明显导致机体过氧化产物堆积,缺硒缺碘可加重单纯缺硒或单纯缺碘的损伤程度.缺硒、缺碘可明显导致肝细胞Ca2+超载和降低肌动蛋白表达,提示硒、碘缺乏可加重单纯缺硒或缺碘的作用,并可能损伤细胞骨架蛋白.
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白介素-6保护小脑颗粒神经元抗谷氨酸的神经毒性作用
目的:探讨白介素-6(IL-6)对谷氨酸诱导的神经元损伤的防治作用及其作用机制.方法:用IL-6慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,然后后用谷氨酸急性刺激小脑颗粒神经元.用噻唑兰(MTT)比色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法分别观察神经元的功能和凋亡的变化;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测神经元内Ca2+浓度的动态变化和IL-6信号转导蛋白gp130 mRNA的表达.结果:IL-6(2.5、5和10 ng/ml)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,可浓度依赖性地改善谷氨酸诱导的神经元活性降低;并可明显减少谷氨酸诱导的神经元凋亡;还可显著抑制谷氨酸激发的神经元内Ca2+超载.此外,经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元表达gp130 mRNA明显低于未经IL-6预处理的神经元.结论:IL-6能保护神经元抵抗由谷氨酸诱导的兴奋毒性作用,IL-6的这种神经保护机制可能与它抑制神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能由gp130细胞内信号转导途径介导.
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灯盏花素神经保护作用及其机制研究进展
灯盏花素是中药灯盏细辛主要的有效单体之一,属于黄酮类活性成分.研究表明,灯盏花素在脑损伤中具有很好的神经保护作用,其机制可能包括:改善能量代谢,清除自由基,抑制细胞内Ca2+超载、兴奋性氨基酸毒性、炎症反应,调节脑内血管活性物质的产生,抑制神经元凋亡等.灯盏花素具有良好的临床应用前景,该文对灯盏花素近年来神经保护作用研究进展作一综述.
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Ca2+与脑缺血神经细胞损伤
Ca2+在脑缺血神经细胞损伤的发生发展中具有重要作用,Ca2+超载是神经细胞死亡的"后共同途径".脑缺血早期应有Ca2+拮抗剂是控制Ca2+内流的主要方法.Ca2+超载的发生机制复杂,因此联合应用自由基清除剂、抗炎药物等有助于Ca2+超载的防治.
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1,2-二氯乙烷及其主要代谢产物对离体神经细胞的毒性研究
[目的] 探讨1,2-二氨乙烷(1,2-DCE)对培养神经细胞的毒性作用及致脑水肿的机制.[方法] 首先培养神经细胞,分别用1,2-DCE、2-氯乙醛、2-氯乙醇对生长良好的神经细胞进行处理,然后做相应的组织学观察和生化检测.[结果] 1,2-DCE和2-氯乙醛对神经细胞影响甚微,细胞在形态学上未见明显的变化;用2-氯乙醇处理过的神经细胞出现不同程度的变大、肿胀;Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低,高剂量组与各组相比差异有显著性(P＜0.05).[结论] 1,2-DCE的急性神经毒性主要是引起神经细胞水肿,2-氯乙醇可以引起ATP酶活性下降继而引起"Ca2+超载",可能是引起脑水肿的主要物质.
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山莨菪碱对肝脏再灌注后肝细胞内游离钙的影响
导致肝脏缺血再灌注损伤的确切机制目前仍不十分清楚.本实验应用山莨菪碱,观察肝脏缺血前及缺血再灌注后血浆内皮素1(ET-1)、透明质酸(HA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和肝细胞内游离钙([Ca2+]i)、肝组织中三磷酸腺苷(ATP)含量的变化以及肝组织病理学变化,以期探索山莨菪碱对肝细胞内[Ca2+]i含量的影响及其作用机制.1 材料和方法
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白介素-6保护小脑颗粒神经元抵抗NMDA的神经毒性作用
近来研究发现,细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)不仅是重要的免疫调节因子,而且也是重要的神经调节因子.中枢神经系统中IL-6的作用是复杂的,尤其是对脑损伤时IL-6所发挥的作用及其作用机制尚不十分清楚.为此,我们利用N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)处理小脑颗粒神经元引起急性损伤的细胞模型,探讨IL-6对神经元损伤的保护及其作用机制.取出生后8 d幼鼠的小脑,进行小脑颗粒神经元培养.将IL-6(5或10 ng/mL)加入到小脑颗粒神经元的培养液中孵育8 d,然后用NMDA(100μmol/L)刺激小脑颗粒神经元30 min以造成神经元损伤.用噻唑兰(methyl-thiazole-tetrazolium,MTT)比色法检测神经元的活性;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测神经元的凋亡;用激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察神经元内游离Ca2+浓度的动态变化.用抗gp130单克隆抗体(75 ng/mL)抑制IL-6的活性,然后观察IL-6抗NMDA神经毒性作用的变化;并利用Western blot法检测IL-6对小脑颗粒神经元表达IL-6的细胞内信号转导蛋白--信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)磷酸化水平的影响.NMDA刺激未经IL-6处理的小脑颗粒神经元,导致神经元活性降低、神经元凋亡增加和神经元内Ca2+超载.NMDA刺激经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元,其损伤程度与未经IL-6处理的神经元相比明显减轻,包括神经元活性明显增强、神经元凋亡显著减少和神经元内Ca2+超载减轻.抗gp130抗体可阻断IL-6减轻NMDA激发的神经元内Ca2+超载的作用;经IL-6慢性处理的小脑颗粒神经元,其细胞内STAT3和ERK1/2的磷酸化水平显著增加.结果表明,IL-6能保护神经元抵抗由NMDA诱导的兴奋性神经毒性,此神经保护机制与IL-6减轻神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能通过激活神经元内IL-6的信号转导路径调节细胞内的基因表达而实现.
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脑缺血与Ca2+
急性缺血性脑血管病是严重危害人类健康的疾病之一,其发病机制复杂,但细胞内Ca2+超载在缺血性脑损伤中的作用已得到证实.文章从触发细胞内Ca2+稳态失调的途径、其介导脑损伤的机制及钙通道阻滞药的应用现状对脑缺血与Ca2+的关系进行了综述.
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基于网络药理学的人参二醇对阿尔茨海默病细胞保护作用的研究
目的 运用网络药理学预测及体外验证方法,研究人参二醇(PD)对阿尔茨海默病(AD)细胞的保护作用.方法运用网络药理学技术,筛选出107 个治疗AD的方剂,筛选出现频率高的人参及其AD作用的靶点,利用分子对接技术,寻找与非受体酪氨酸激酶( FYN)对接评分高的成分.体外建立APP-N2a细胞模型,采用MTT法检测细胞存活率;LDH方法检测细胞的损伤程度;流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度变化情况;Western blot检测磷酸化FYN蛋白表达情况.结果 通过网络药理学方法筛选出人参中18个活性成分和29个AD相关靶点,分子对接结果显示,PD与FYN有较强的结合性.实验证明,PD可增加细胞的存活率,降低LDH的释放,且可明显减少细胞凋亡,减轻AD细胞内Ca2+超载,降低FYN-Y416蛋白的表达.结论通过实验验证了网络药理学的预测结果,PD对AD的保护作用可能与抑制FYN磷酸化有关.
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Wnt/Ca2+信号通路在肢体缺血/再灌注损伤机制中的研究进展
Wnt/Ca2+信号通路属于Wnt非经典通路,该通路的失调与细胞调亡、炎症反应等病理改变,以及许多疾病的发生、发展、转归有着密切联系.肢体缺血/再灌注损伤(LIRI)是临床工作中常遇到的一类难题,而Wnt/Ca2+通路可诱使细胞内Ca2+浓度升高并可活化Ca2+敏感信号成分,其介导的细胞凋亡、Ca2+超载和机体炎症等反应在LIRI中扮演重要角色.该文就Wnt/Ca2+信号通路在LIRI病机中所起的作用进行综述.
关键词： WNT/Ca2+信号通路 细胞凋亡 Ca2+超载 炎症反应 肢体缺血/再灌注损伤 病理机制 -
卡托普利对慢性房颤实验犬心房肌Ca2+调控蛋白基因表达的影响
目的:探讨卡托普利对慢性房颤(atrial fibrillation,AF)实验犬心房肌Ca2+调控蛋白基因表达的影响.方法:随机将26只健康杂种犬分为3组:对照组(6只)饲养8周,未作其他处置;起搏组(11只)及治疗组(9只)安置埋藏式高频率心脏起搏器(400 bpm),快速起搏犬右心耳8周,治疗组于起搏前3 d至起搏8周,每日给予卡托普利50 mg 2次/d.然后从右心房取材,测定心房肌细胞内Ca2+浓度,RT-PCR方法检测细胞膜L型Ca2+通道及肌浆网钙泵(SR Ca2+-ATPase)mRNA表达.结果:8周后,对照组、起搏组、治疗组心房肌细胞内Ca2+浓度(μg·ml-1)分别为:24.06±3.51、35.32±4.88、25.44±4.19,起搏组细胞内Ca2+浓度明显增加(P＜0.01);三组细胞膜L型Ca2+通道mRNA表达量分别为:0.27±0.03、0.20±0.03、0.33±0.04,起搏组mRNA表达量减少,而治疗组mRNA表达量明显增高,与对照组及起搏组比较P＜0.05～0.001;三组SR Ca2+-ATPase mRNA表达量分别为:0.21±0.01、0.24±0.07、041±0.08,治疗组mRNA表达明显上调(P＜0.001).结论:实验犬快速起搏8周后,心房肌细胞内Ca2+超负荷,细胞膜L型Ca2+通道mRNA表达明显下调,SR Ca2+-ATPase mRNA表达无明显变化;卡托普利干预治疗可使细胞膜L型Ca2+通道及SR Ca2+-ATPase mRNA表达明显上调,从而抑制细胞内Ca2+超载.
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粉防己碱对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内Ca2+超载的作用
目的:研究粉防己碱(Tet)对培养大鼠心室肌细胞缺氧和复氧损伤时细胞内Ca2+超载的作用.方法:采用荧光探针Fura-2/AM结合计算机图像处理技术测定单个心室肌细胞内Ca2+浓度.结果:对照组心室肌细胞在缺氧和复氧过程中出现2次细胞内Ca2+浓度明显上升,维拉帕米(Ver)处理组(10 μmol/L)心室肌细胞出现2次细胞内Ca2+浓度轻度上升;Tet处理组(300 μmol/L)心室肌细胞未出现细胞内Ca2+浓度上升.两处理组分别与对照组比较均有极显著性差异(P＜0.01),两处理组间比较亦有显著性差异(P＜0.05).结论:Tet对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内Ca2+超载有较强的阻抑作用.
