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ICU重症IgA肾病患者IL-4、C1GALT1及COSMC表达对疾病预后的调控作用分析
目的 探讨在重症IgA肾病患者中IL-4、C1GALT1及COSMC的mRNA表达及潜在预后因素对疾病及其预后的调控作用.方法 选取本院ICU的重症确诊IgA患者61名,同时选取年龄性别可比的体检健康者65名作为对照,并使用荧光定量PCR测定外周血的单核细胞IL-4、C1GALT1以及COSMC的mRNA表达,同时问卷收集可能影响预后的相关因素,IgA患者随访5年,以随访结束时出现终末期肾病为预后不佳进行研究分析.对相关因素对本病预后的调控作用进行分析讨论.患者均知情同意并签署知情同意书.统计分析采用卡方检验以及t检验对一般资料及两组基因表达进行比较,使用多因素Logistics回归模型进行预后因素讨论,使用SPSS17.0统计软件包进行数据分析.结果 IgA患者组IL-4mRNA的表达水平为3.67±0.34,显著高于对照组的1.62±0.16;IgA组的C1GALT1 mRNA以及COSMC mRNA表达水平分别为1.42±0.22和1.34 ±0.13,出现相应的表达降低;对照组分别为1.61 ±0.22和1.63±0.18.对ICU重症IgA肾病患者进行预后分析,单因素分析结果提示IL-4表达增加在预后不良者中的构成显著高于预后良好者,P＜0.05,肾病家族史构成比例在预后不良者中也明显较高.多因素Logistic回归结果提示年龄大于60岁、肌酐超标、高血压、肾病家族史以及IL-4 mRNA表达增加和C1GALT1 mRNA表达减低均为IgA肾病不良预后的危险因素.结论 ICU重症IgA肾病患者IL-4 mRNA表达增加,同时可见相应的C1GALT1 mRNA以及COSMC mRNA表达减低,且这三个因素与高龄、肌酐异常、高血压等因素同为重症IgA的预后不良因素.
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JAK/STAT通路调节IL-4诱导的肝星状细胞系LX-2Ⅰ型胶原基因的表达
目的 探讨JAK/STAT通路在IL-4对肝星状细胞(HSC)中Ⅰ型胶原基因表达的影响及其作用机制.方法 用RT-PCR法和ELISA法分别检测不同浓度IL-4对人肝星状细胞系LX-2中Ⅰ型胶原mRNA表达和蛋白合成的影响；用Western blot法和RT-PCR法分别观察JAK1抑制剂AG490对IL-4诱导的JAK1磷酸化以及I型胶原mRNA表达的影响；用Western blot法和RT-PCR法分别观察LX-2转染STAT6-ASON对IL-4诱导的STAT6磷酸化以及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.结果 IL-4诱导LX-2中Ⅰ型胶原mRNA表达及其蛋白的合成,呈剂量依赖性效应,且IL-4浓度为50 μg/L时,胶原mRNA和蛋白水平均开始出现显著差异(P＜0.001)；与空白对照组相比,JAK1和STAT6磷酸化水平分别约为4.8倍和4.0倍,Ⅰ型胶原mRNA表达则分别为4.0倍和5.2倍；而AG490和LX-2转染STAT6-ASON则可以分别阻断IL-4诱导的JAK1磷酸化和STAT6磷酸化以及相应的I型胶原mRNA的表达.结论 JAK/STAT信号传导通路参与调节IL-4诱导HSC中I型胶原基因表达,并在肝纤维化发生过程中发挥重要的作用.
关键词： IL-4 肝星状细胞 JAK/STAT信号传导通路 Ⅰ型胶原 -
苦参碱通过下调SOCS3表达抑制支气管哮喘大鼠炎性反应并调节Th1／Th2平衡
目的：探讨苦参碱减轻支气管哮喘大鼠炎性反应、纠正Th1／Th2失衡的作用，以及SOCS3在此过程中的表达变化。方法将大鼠分为对照组、模型组（卵清蛋白致敏法构建大鼠急性哮喘模型）和药物干预A组及B组（建模成功后，分别接受60和120 mg／kg的苦参碱治疗）。计算支气管肺泡灌洗液（ BALF）中的嗜酸粒细胞（ EOS）绝对值、EOS百分比及肺组织中的杯状细胞百分比和炎性细胞浸润积分。酶联免疫法分析BALF中的IFN-γ和IL-4水平，并计算IFN-γ／IL-4。荧光实时定量PCR （ qRT-PCR ）和Western blot 分析肺组织中细胞因子传导抑制因子3（SOCS3） mRNA与蛋白的表达。结果模型组大鼠BALF中EOS计数、EOS百分比、杯状细胞百分比、炎性细胞浸润评分和IL-4水平，肺组织中的SOCS3 mRNA及蛋白表达均较对照组显著增高（ P＜0.05）。而BALF中IFN-γ水平显著降低（P＜0.05）。低剂量和高剂量苦参碱分别显著缓解模型组的上述变化（P＜0.05）。结论苦参碱可以抑制支气管哮喘大鼠炎性反应、纠正Th1／Th2的失衡，该过程中存在SOCS3的表达变化。苦参碱可能通过降低SOCS3表达调节Th1／Th2的平衡。
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ADAM33在IL-4刺激的人气道平滑肌细胞中对NF-κB和TGF-β1表达的影响
目的 探讨解整合素-基质金属蛋白酶33(ADAM33)在白介素-4(IL-4)刺激的人气道平滑肌细胞(HASMCs)中对NF-κB和TGF-β1表达的影响,为进一步完善哮喘的发病机制提供理论基础.方法 以50μg/L的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组为对照,24h后实时荧光定量PCR法和Western blot法检测ADAM33的表达;设计并合成ADAM33-siRNA,IL-4刺激24h后瞬时转染ADAM33-siRNA,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测抑制率;并且检测TGF-β1、NF-κB mRNA和蛋白的表达情况.结果 50 μg/L的IL-4较对照组明显促进了HASMCs中ADAM33的表达(P＜0.05),在mRNA水平表达量增加约4.36倍,蛋白水平增加约3.3倍;ADAM33-siRNA-575明显抑制了ADAM33在HASMCs中的表达;干扰组、阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.602±0.024、1.01±0.176和1.239 ±0.171,NF-κB mRNA的表达量分别为0.54±0.08、1.014±0.21和1.049±0.378;TGF-β1蛋白的表达量分别为0.227±0.016、0.7 ±0.048和0.715±0.025,NF-κB蛋白的表达量分别为0.335±0.048、0.922±0.04和0.943±0.046.干扰组TGF-β1、NF-κB不论是在mRNA水平,还是在蛋白水平,均明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 ADAM33可能是IL-4调节人气道平滑肌细胞NF-κB/TGF-β1信号通路中的一个关键信号分子,有望成为防治哮喘的重要靶点.
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IL-2通过Jak3-Stat5通路促进巨噬细胞M1极化
目的 探究IL-2在调控巨噬细胞极化分型方面的作用及机制.方法 重组小鼠白介素-2(IL-2)刺激处于M0期的小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7,同时以IL-4作为对照.Real-time PCR和Western blot检测M1型和M2型标志分子的表达;流式细胞术检测M1型和M2型巨噬细胞的百分比;Western blot检测Jak3和Stat5活化水平.结果 经IL-2刺激后,处于M0的RAW 264.7细胞显著上调表达M1型标记分子,如IL-1β、IL-12、TNF-α和iNOS等;IL-2使巨噬细胞中M1型的比例由3.2％上升到24.6％,同时Jak3和Stat5分子的磷酸化水平显著提高.结论 IL-2具有促进巨噬细胞由M0向M1极化的作用,且该作用可能是通过Jak3-Stat5通路实现.
关键词： IL-2 IL-4 巨噬细胞 极化 Jak3-Stat5通路 -
老年哮喘患者外周血淋巴细胞内IFNγ与IL4的变化
目的了解老年哮喘患者在不同病期外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-4的变化.方法应用流式细胞仪,测定哮喘急性发作期、缓解期和健康老年人外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-4的百分率.结果 CD3+CD8+淋巴细胞IFN-γ表达率,急性发作期组(10.5±4.6%)低于缓解期组(17.5±3.8%,p<0.05)和对照组(18.4±5.9%,p<0.05);IL-4表达率急性发作期组(2.6±2.2%)高于缓解期组(1.3±0.9%,p<0.05)和对照组(1.5±0.8%,p<0.05);CD3+、CD8+淋巴细胞IFN-γ表达率,急性发作期组(31.4±10.3%)显著高于缓解期组(20.2±12.3%,p<0.05)和对照组(21.3±10.4%,p<0.05).结论向Th2偏移的Th1/Th2失衡,可能与老年哮喘患者病情发展有关.
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磷酸甘油醛脱氢酶在日本血吸虫感染中的功能研究
目的 研究磷酸甘油醛脱氢酶在日本血吸虫感染中的功能. 方法 荧光定量PCR方法检测磷酸甘油醛脱氢酶在不同来源童虫及日本血吸虫不同发育时期中的转录水平;克隆、表达日本血吸虫磷酸甘油醛脱氢酶,纯化后免疫小鼠,制备免疫血清;采用免疫组织化学法检测磷酸甘油醛脱氢酶在日本血吸虫的组织学定位;于日本血吸虫尾蚴攻击感染前用重组蛋白免疫小鼠,观察其免疫保护效果并探讨其机制. 结果 磷酸甘油醛脱氢酶在不同来源童虫及日本血吸虫不同发育期差异表达,以宿主组童虫和虫卵表达水平较高.磷酸甘油醛脱氢酶主要位于虫体表膜,可能与其免疫保护性效果相关.重组蛋白免疫小鼠减虫率和减卵率分别为47％o和52％. 结论 磷酸甘油醛脱氢酶在日本血吸虫生长发育中具有重要作用,可能与其生殖功能相关.
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肺结核患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡与细胞因子相关性及临床意义研究
目的 探讨肺结核患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡与血清IL-4、IL-6、TGF-β的相关性及其临床意义. 方法 分离结核病患者和健康者外周血单个核细胞,标记后用流式细胞仪测定CD4+T淋巴细胞凋亡率；采用酶联免疫吸附试验测定42例肺结核患者及28例健康人群血清IL-4、IL-6、TGF-β水平. 结果 结核病患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率(15.8820±4.6500)显著高于对照组(7.9389±4.16564)(t=7.491,P＜0.01),血清IL-4水平(0.6219±0.78565)较对照组(0.2120±0.07367)显著升高(t=2.732,P＜0.05).肺结核患者中涂阳组IL-6水平(0.0602±0.01833)较涂阴组(0.0905±0.05023)显著升高(t=-2.296,P＜0.05),TGF-β水平复治组(0.1128±0.04704)较初治组(0.0748±0.01659)显著升高(t=-3.019,P＜0.05).外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率与IL-4水平呈正相关(r=0.366,P＜0.05)；血清IL-6的含量与TGF-β的含呈正相关(r=0.829,P＜0.01). 结论 结核病患者CD4+T淋巴细胞凋亡率显著增加,可能与肺结核感染免疫有关；IL-4、IL-6和TGF-β是抗结核感染免疫的重要调节因子,其血清水平可作为监测病情活动和转归的重要指标.
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肺结核患者血清IL-4、IL-6和TGF-β测定及其临床意义
目的 探讨肺结核患者血清IL-4、IL-6、TGF-β水平及其临床意义. 方法 采用酶联免疫吸附试验测定42例肺结核患者及28例健康人血清IL-4、IL-6、TGF-β水平,并进行t检验和线性相关分析. 结果 肺结核患者血清IL-4为(0.56±0.72)pg/ml,健康对照组为(0.21±0.07)pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05)；肺结核组血清IL-6、TGF-β为(0.06±0.04)pg/ml、(0.10±0.07)pg/ml,健康对照组为(0.07±0.05)pg/ml、(0.10±0.06)pg/ml,差异均无统计学意义(P＞0.05)；复治组与初治组TGF-β含量比较差异有统计学意义(t=2.39,P＜0.05).肺结核患者血清IL-4、TGF-β的含量呈正相关(r=0.90,P＜0.05). 结论 肺结核患者血清IL-4、TGF-β含量升高,可能参与结核病的免疫过程；检测IL-4、TGF-β对肺结核的诊断有一定价值.
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囊型包虫病致过敏性休克患者IFN-γ和IL-4的表达及其意义
目的:观察囊型包虫病致过敏性休克患者血清中干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-(IL-4)的动态变化,了解其在休克发生发展过程中的作用.方法:11例包虫病致过敏性休克患者列为休克组,22例未发生过敏性休克包虫病患者列为对照组.ELISA法测定血清中IFN-γ和IL-4水平,并进行病例对照研究和Pearson相关分析.结果:休克组IFN-γ水平与术前基础值相比,囊液外溢时达低值(179.166±42.534)ng/L,之后上升,囊液外溢第7 d达到峰值(239.097±60.728)ng/L,IL-4术前基础值为(455.243±81.684)ng/L,囊液外溢第7d达到峰值(521.061±77.805)n9/L.对照组IFN-1,和IL-4分别在囊液外溢1h和囊液外溢时降至低,分别为(99.423±11.922)ng/L和(329.273±21.756 ng)/L.其余各时点与术前基础值相比均有不同程度的降低.两组比较,休克组IFN-γ和lL-4所有观察时点均高于对照组,休克组IFN-γ在囊液外溢1h和第11d及第7d均高于对照组(P<0.05),IL-4含量均高于对照组(P>0.05),各时点间IFN-γ与IL-4呈显著正相关(P<0.05).结论:在包虫病所致过敏性休克过程中,IFN-γ和IL-4具有协同作用,导致Th1/Th2平衡失调,这可能是包虫病所致过敏性休克不同于其他过敏性休克的原因.
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日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗与IL-4真核表达质粒联合免疫诱导小鼠保护性的研究
目的观察日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗与IL-4真核表达质粒联合免疫小鼠的效果. 方法将小鼠IL-4 基因PCR扩增片段克隆入真核表达载体pcDNA3以构建重组表达质粒.小鼠分为4组, 每组12只,实验组(A)每鼠肌注组织蛋白酶B DNA疫苗和IL-4表达质粒各100 μg,同时设立组织蛋白酶B DNA疫苗对照组(B)、IL-4表达质粒对照组(C)和空载体对照组(D),共免疫3次.2周后用免疫组化检测表达质粒在小鼠肌细胞的表达,3周后经皮肤攻击感染小鼠40±1条日本血吸虫尾蚴.计算减虫和减卵率,观察免疫保护性. 结果重组IL-4质粒和组织蛋白酶B DNA疫苗均在小鼠肌细胞表达.用重组IL-4质粒和组织蛋白酶B DNA疫苗联合免疫诱导小鼠产生43.20% 的减虫率和76.63% 的减卵率,与组织蛋白酶B DNA疫苗单独免疫比较差异均有显著性(P<0.001,P<0.05). 结论联合IL-4表达质粒免疫可能提高日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的抗血吸虫保护性免疫.
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rhGM-CSF和rhIL-4诱导的髓性白血病细胞刺激自体T细胞增殖与IFN-γ分泌作用
为了研究rhGM-CSF和rhIL-4诱导的髓性白血病细胞刺激自体T细胞的增殖作用和IFN-γ的分泌作用,运用rhGM-CSF和rhIL-4在体外进行CML和AML外周血MNC培养,培养的第7天运用流式细胞术测定CML和AML细胞的CD80,CD86和HLA-DR表达;以诱导的白血病细胞作为刺激细胞,自体T细胞作为反应细胞,在体外进行混合淋巴细胞培养(MLR),测定自体T细胞的增殖情况和IFN-γ的分泌情况.结果显示,rhGM-CSF和rhIL-4明显上调CML细胞HLA-DR,CD80和CD86的表达,并明显上调AML细胞的CD80与CD86表达;诱导后的白血病细胞刺激自体T细胞明显的增殖和促进IFN-γ的分泌(CML组)作用.结论:rhGM-CSF和rhIL-4诱导的CML和AML细胞可能具有向自体T淋巴细胞呈递抗原的能力.
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血浆HMGB1、IFN-γ、 IL-4和CD4+T细胞表面TLR4的表达在免疫性血小板减少症患者中的意义
目的:探讨血浆HMGB1、IFN-γ、IL-4和CD4+T细胞表面TLR4的表达对免疫性血小板减少症(ITP)的影响.方法:选取我院2014年10月至2015年10月确诊为ITP的患者25例,同时选取健康人20例为对照组;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血浆HMGB1、IFN-γ和IL-4的水平;流式细胞术检测CD4+T细胞表面TLR4的表达水平;分析不同参数之间的关系.结果:ITP组治疗前血浆HMGB1水平显著高于对照组(f=4.259,P＜0.01),治疗后降低至接近对照组(t=1.267,P＞0.05);ITP组治疗前、后血浆IFN-γ检测值与对照组差异均无统计学意义(P ＞0.05,P＞0.05);ITP组治疗前血浆IL-4水平非常显著低于对照组(t=5.708,P＜0.01),治疗后明显高于对照组(t=2.107,P=0.01);ITP组治疗前血浆IFN-γ/IL-4比值非常显著高于对照组(t=5.436,P＜0.01),治疗后显著降低且略低于对照组;ITP组治疗前后TLR4表达均非常显著低于正常对照组(P＜0.01);ITP患者HMGB1水平与CD3+的含量呈正比(r=0.824,P＜0.01),与CD4+的含量无明显关系(r=0.074,P＞0.05),与CD8+的含量呈正比(r =0.844,P＜0.01),与IL-4的含量呈正比(r =0.784,P＜0.01),与IFN-γ的含量呈反比(r=-0.814,JP＜0.01),与IFN-γ/IL-4比值呈反比(r=-0.887,P＜0.01),与TLR4表达水平呈正比(r =0.772,P＜0.01).结论:ITP患者HMGB1和TLR4的表达水平较高,临床治疗可以通过靶向控制其表达,以缓解病情并达到治疗目的.
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蛋白质芯片技术检测异基因造血干细胞移植患者血浆IL-4和IL-6含量变化及其与aGVHD关系探讨
本研究旨在通过动态观察异基因造血千细胞移植患者血浆中IL-4和IL-6含量的变化,探讨其变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生的关系.采用蛋白芯片方法时32例行异基因外周血造血干细胞移植的住院患者的外周血细胞因子IL-4和IL-6的含量进行10周的动态观察.结果发现:IL-4含量在aGVHD组患者移植后第1周迅速增加,显著高于无aGVHD组(p<0.05);而在无aGVHD组,在移植后的第7周,血浆IL-4含量大幅增加,显著高于aGVHD组(p<0.01).IL-6含量在移植前两组患者即存在显著差异(P<0.05).在移植后的第1周,aGVHD组患者血浆IL-6上升达到高水平,显著高于无aGVHD组(p<0.01),而在无aGVHD组,在移植后的第4周IL-6含量非常显著高于aGVHD组(p<0.01),在移植后的第5周,IL-6显著高于aGVHD组(p<0.05).结论:IL-4和IL-6在异基因造血干细胞移植后含量突然升高提示即将发生aGVHD;移植前高水平的IL-6可能是移植后aGVHD高发的危险因素;无aGVHD的患者,如果血浆IL-4含量增高,提示可能有相对延迟的aGVHD出现.通过对IL-4和IL-6含量的动态观察以预测aGVHD发生,这一技术可能是一个颇具前景的研究方向.
关键词： 蛋白质芯片 IL-4 IL-6 移植物抗宿主病 异基因造血干细胞移植 -
供者淋巴细胞骨髓腔内输注对移植物抗宿主病和外周血IL-4与IFN-γ水平的影响
本研究观察骨髓腔内供者淋巴细胞榆注对异基因小鼠外周造血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)和外周血IL-4和IFN-γ水平的影响.以雌性C57BL/6小鼠为受鼠,接受全身照射(TBI)预处理后,先骨髓腔移植雄性BABL/c小鼠来源的经thG-CSF动员后的外周造血干细胞,然后分别经尾静脉和骨髓腔内进行供者淋巴细胞输注(DLI),建立异基因GVHD模型,观察移植后小鼠的生存状态和GVHD发生情况;以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果显示:骨髓腔内-DLI组的受鼠GVHD发生比例和严重程度较尾静脉-DLI组明显减低(p<0.01);与尾静脉-DLI组比较,骨髓腔内-DLI组IL-4分泌增多,IFN-γ分泌减少(p<0.01).结论:与尾静脉-DLI相比,IBM-DLI有利于减少GVHD的发生.
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T辅助细胞因子在特发性泪腺炎小鼠MRL/lpr中的表达研究
目的 利用MRL/lpr小鼠建立特发性泪腺炎模型,观察其泪腺及颌下淋巴结中IL-4、IL-17、IFN-γ的表达,从而对Th细胞因子在该病中的免疫作用进行探讨.方法 观察3月龄MRL/lpr小鼠泪腺淋巴病变并以BALB/c小鼠为正常对照.分别对两组小鼠的泪腺及颌下淋巴结行IL-4、IL一17、IFN-γ免疫组化染色,计算淋巴细胞阳性表达量并对结果进行统计学分析,同时对MRL/lpr小鼠颌下淋巴结行IL-4、IL-17、IFN-Y与CD4荧光双标染色观察.结果 MRL/lpr小鼠泪腺浸润淋巴细胞中以IL-4表达为主,IL-17及IFN-γ仅少量表达,三者间差异有统计学意义(P<0.05).MRL/lpr小鼠颌下淋巴结中IL-4、IL-17阳性细胞数明显多于IFN-γ阳性细胞(P<0.05),且IL-4、IL-17、IFN-γ表达均较BALB/c小鼠明显增高(P<0.05).MRL/lpr小鼠颌下淋巴结中IL-4、IL-17、IFN-γ与CD4细胞存在共表达.结论 MRL/lpr小鼠是一种理想的特发性泪腺炎动物模型,IL-4介导的Th2免疫应答在病变中起到主导作用,IL-17与该病发生有关并可能在局部及全身发挥不同的免疫调节作用.
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体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞的比较研究
目的 利用粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、酪氨酸激酶受体3配体(Flt3L)以及不同浓度细胞因子组合在体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞,比较不同培养条件对细胞分化与成熟的影响.方法 分离BALB/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF、IL-4、Flt3L以及不同浓度细胞因子组合的培养液,培养7 d后荧光抗体标记行流式细胞术,检测DC表面CD11c、MHCⅡ、CD86分子的表达水平.平行组加入脂多糖(LPS)刺激后行流式细胞术检测.结果 Flt3L/GM-CSF/IL-4组可诱导90％骨髓细胞高表达CD11c,此时各细胞因子浓度分别为20 ng/ml、20 ng/ml、10 ng/ml;100 ng/ml Flt3L诱导骨髓细胞表达CD11c达88％.Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组诱导髓源树突状细胞表达MHCⅡ分别为35.4％和36.1％,其中各组Flt3L与GM-CSF浓度均为20 ng/ml.LPS刺激后Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组表达MHCⅡ分子水平分别为58.1％和59.6％,增幅为22.7％和23.5％.GM-CSF/Flt3L/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组树突状细胞CD86表达为7.1％与5.5％.LPS刺激后20 ng/ml Flt3L组与GM-CSF/IL-4组CD86表达增幅达7.1％与6.2％.结论 Flt3L和GM-CSF对髓源树突状细胞的分化与成熟发挥主导作用,故20 ng/ml Flt3L联合20 ng/ml GM-CSF可成为DC基础研究的优选方案.
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IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号通路调节研究
目的 研究IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号调节通路,探索DC -SIGN表达的信号调控网络.方法 以佛波脂(PMA)刺激THP-1细胞24h后加入IL-4作用48 h诱导DC-SIGN的表达,并设ERK阻断剂、NF-κB阻断剂、JAK-STAT阻断剂和MAPK阻断剂处理组.用RT-PCR检测DC-SIGN的mRNA表达,Western blot检测胞质内DC-SIGN蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面DC-SIGN的表达.另外,提取IL-4诱导0、10、20、30、60和120 min的THP-1细胞胞质和胞核蛋白,Western blot检测不同信号通路的信号蛋白及其磷酸化蛋白的变化.结果 IL-4可以大幅提高DC-SIGN在THP-1细胞上的表达,包括mRNA和胞膜蛋白水平.在mRNA、胞质和细胞表面蛋白表达3个水平上,ERK通路阻断剂阻断效果好,几乎完全阻断了IL-4的诱导效果,JAK-STAT和NF-κB通路阻断剂具有部分阻断效果,而p38通路阻断剂无阻断效果.信号蛋白检测结果显示,IL-4诱导0～120 min内,胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65、NF-κBp50、磷酸化IKB和磷酸化AKT随时间推移浓度逐渐升高,而p38MAPK及其磷酸化蛋白浓度无明显改变.胞核内胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65和NF-κBp50随时间推移浓度逐渐升高.结论 ERK、JAK-STAT和NF-κB通路参与了DC-SIGN启动子的活化,其中以ERK通路为主.
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尾静脉高压注射CⅡTA siRNA对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用
目的 将MHCⅡ类反式作用因子(CⅡTA) siRNA用于胶原诱导的小鼠关节炎模型中,观察是否具有治疗效果.方法 将雄性DBA/1小鼠随机分为胶原诱导性关节炎(CIA)模型组、CⅡTA siRNA组(siCⅡTA组)、control siRNA组(siCT组)、正常组.再次免疫后4周观察小鼠发病情况,检测小鼠足爪的肿胀度,病理切片观察炎症变化,MTT检测脾淋巴细胞对CⅡ胶原的增殖反应,实时荧光定量PCR检测小鼠脾细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平,ELISA检测小鼠血清中IFN-γ、IL-4、IL-17的含量.结果 siCⅡTA组关节炎评分、脾淋巴细胞对Ⅱ型胶原的增殖反应低于模型组和siCT组；siCⅡTA组IFN-γ、IL-17水平低于模型组和siCT组,但IL-4水平高于模型组和siCT组.结论 尾静脉高压注射CⅡTAsiRNA对CIA具有治疗作用.
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IL-2和IL-4联合诱导B细胞死亡受体CCR3的表达及其功能研究
目的研究在IL-2和IL-4作用下,趋化性细胞因子受体CCR3在人生发中心(germinal center,GC)B细胞上的表达及其功能特性.方法采用流式细胞术检测人GC B细胞上CCR3表达和在CCR3配体eotaxin作用下B细胞的凋亡,实时定量RT-PCR和Northern blot法检测GC B细胞内CCR3 mRNA的表达,淋巴细胞趋化和黏附试验检测B细胞的趋化和黏附能力.结果人GC B细胞极低表达趋化性细胞因子受体CCR3,经IL-2和IL-4作用后,GC B细胞高表达CCR3,但此时CCR3不能在其配体作用下诱导GC B细胞的趋化和黏附功能,而是诱导GC B细胞凋亡.结论IL-2和IL-4联合诱导人GC B细胞CCR3表达,CCR3可能具有死亡受体的功能.
