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胃液中α1抗胰蛋白酶检测在胃癌早期诊断中的研究进展
胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，提高早期胃癌的检出率是胃癌防治的关键。胃液因其包含胃癌组织直接分泌的蛋白质及其他生物活性分子，通过胃液中胃癌标记物检测可以获得较高的敏感性和特异性。经研究发现α1抗胰蛋白酶在胃癌发生、发展中起重要作用，通过胃液中α1抗胰蛋白酶检测用于胃癌的早期诊断成为可能。
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发色底物法在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶的活性
目的：优化发色底物法，使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶（ AAT）的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品活性的检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响；计算初速度并确定被底物饱和的大酶浓度。将AAT与胰蛋白酶孵育，剩余靶酶和底物作用产生的光密度可反映AAT的活性。通过△D与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线，测定相关样品的活性，进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0．0625 mg／ml，20 min内酶促反应处于初速度内。 AAT标准曲线范围为200～1200 IU／ml， r＞0．99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为（720．59±18．63）、（601．84±19．18）、（568．09±24．83）IU／ml。每个样品之间的RSD＜10％，加样回收率均在90％～110％。结论发色底物法经优化后，准确度和精密度大幅度提高，更适于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。
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α1抗胰蛋白酶基因多态性与肺癌易感性的研究
目的 研究高海拔地区人群中α1抗胰蛋白酶基因多态性与肺癌易感性的关系.方法 采集甘肃省兰州市人群血标本330例,包括肺癌组130例,COPD组100例,对照组100例.采用PCR-RFLP技术,筛查α1AT基因外显子V、Ⅲ及3’端突变体出现的频率,分析其与肺癌的关系.结果 检测到α1AT的Z、S基因型存在,但在3组中分布差异无统计学意义;非小细胞肺癌组发现3’端突变体(3m型基因)18例(13.8％),COPD组8例(8％),均明显高于对照组,统计学分析显示肺癌组、COPD组与对照组之间3m型基因分布差异有统计学意义(P=0.002);将肺癌组进一步分组分析发现肺癌合并COPD组3’端突变体出现率24％,远高于肺癌不合并COPD组(7.5％);3m型基因阳性患者罹患NSCLC合并COPD的OR值为3.895.结论 α1AT的Z、S基因突变型和甘肃高海拔地区人群COPD及肺癌无明确的相关性,而3’端突变体在COPD和肺癌患者中明显增多,是COPD和肺癌的易感因素.携带3’端突变体的人群患肺癌合并COPD的危险性明显增高,提示α1AT的3’端突变体和甘肃高海拔地区人群中肺癌的易感性相关.
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呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿中性粒细胞活化及蛋白酶平衡的研究
目的 探讨呼吸道合胞病毒毛细支气管炎(毛支)气道局部中性粒细胞活化及蛋白酶平衡状况.方法 收集符合毛支诊断标准的住院患儿30例,根据入院Lowell评分,≥10分为重度组(11例),<10分为轻度组(19例);20例治疗7～12 d后症状缓解采取标本作为恢复组,细菌性肺炎(肺炎)组24例,对照组15例.测定各组鼻咽吸出物中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、白细胞介素(IL)-8浓度、α1抗胰蛋白酶(α1AT)和蛋白酶抑制力.结果 毛支组中性粒细胞比例、NE、IL-8浓度(0.528、6.39×107kg/L、13.62×109kg/L)均明显高于对照组(0.074、2.53×107kg/L、2.64×109kg/L,均P<0.05)和恢复组(0.306、1.23×107kg/L、5.95×109kg/L,均P<0.05).恢复组中性粒细胞比例和IL-8浓度仍高于对照组(均P<0.05),重度毛支组该两项指标均高于轻度组(均P<0.05).毛支组α1AT表达高于恢复组(0.49比0.09,P<0.05),与对照组(0.26)比较差异无统计学意义.毛支组出现游离NE活性为6/30,与肺炎组7/24比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 呼吸道合胞病毒毛支气道局部存在大量中性粒细胞聚集活化和蛋白酶系统失衡,并可能在其发病中起重要作用.
关键词： 呼吸道合胞体病毒感染 细支气管炎 α1抗胰蛋白酶 -
α1抗胰蛋白酶Pittsburg突变:同一家系二例报告
目的 分析2例α1抗胰蛋白酶(α1-AT) Pittsburg突变患者的临床和实验室特点.方法 采用凝固法或发色底物法分别检测凝血时间及凝血因子活性;比浊法测定血小板聚集功能;采用毛细管电泳法测定血清蛋白;PCR扩增目的DNA片段并测序检测突变.结果 先证者,女,34岁,多次术后出血及黄体破裂出血;女儿,10岁,无出血表现.两例患者APTT、凝血酶时间均明显延长且正常人混和血浆1:1不能纠正,凝血因子Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ活性明显降低,蛋白C、蛋白S活性均为0,1 U/ml凝血酶诱导的血小板聚集降低,4 U/ml凝血酶诱导的血小板聚集为48％;血清α1球蛋白电泳条带异常;DNA测序结果显示两例患者的α1-AT基因(NG_008290.1)均存在g.T17132G(p.Met358Arg)杂合突变.结论 α1-AT Pittsburg突变患者表现出明显的凝血异常,临床出血表现有较大的差异性,黄体破裂出血可能是女性患者的一个明显特征.
关键词： 出血 凝血异常 α1抗胰蛋白酶 基因 Pittsburg突变 -
011 α1抗胰蛋白酶研究的新进展
自1963年首次报道血清α1抗胰蛋白酶(α1-AT)缺乏与肺气肿的关系以来,对α1-AT的结构和功能、α1-AT基因的多态性、α1-AT各种表型与肺气肿的关系及吸烟在α1-AT缺乏者肺气肿发生中的作用有了进一步认识,对α1-AT缺乏所致肺气肿的治疗也取得了相应进展,本文对此做一综述.
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α1抗胰蛋白酶在强直性脊柱炎患者滑膜组织中表达的研究
目的 观察α1抗胰蛋白酶(ATA1)在强直性脊柱炎(AS)滑膜组织中的表达分布,并探讨编码该蛋白的基因对AS的遗传效应.方法 选用8例AS,9例类风湿关节炎(RA)和9例骨关节炎患者关节滑膜样本,用蛋白免疫印迹定量分析ATA1的表达水平,用免疫组织化学法定位ATA1在滑膜组织中表达分布.分别选用32例AS、RA、骨关节炎滑液样本分析ATAl在滑液中的表达水平.选用56例AS血液样本,260例RA和160名健康者样本作对照,用水解探针法对标签单核苷酸多态性位点(SNP)(rs2753934,rs2749531和rs6575424)进行基因分型.采用单因素方差分析、LSD检验和x2检验进行统计分析.结果 与RA、骨关节炎滑膜比较,ATA1在AS滑膜中呈高表达,表达率为100％.同样,ATA1在AS滑液中表达量(1.6±0.6)也高于RA(1.4±0.5)和骨关节炎(1.2±0.5)的表达量(P＜0.05).基因分型发现ATAl SNP与AS和RA无明显关联(P＞0.05).单体型分析没有检测到与AS相关的或与RA相关的单体型.结论 ATA1在AS滑膜组织中高表达,提示ATA1及关节滑膜在AS发病过程中起重要作用.
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血必净联合抗菌药物治疗对ICU重症肺炎患者血清感染指标、急性蛋白和应激激素的影响
目的 研究血必净联合抗菌药物治疗对ICU重症肺炎患者血清感染指标[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)]、急性蛋白指标[α1抗胰蛋白酶(α1-AT)、α1酸性糖蛋白(α1-AG)、铜蓝蛋白(CER)]、应激激素指标[皮质醇(Cor)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)]的影响.方法 选择2016年4月至2017年8月在我院ICU接受治疗的120例重症肺炎患者为研究对象,按随机数字表分为研究组与对照组,每组60例.对照组采用抗菌药物治疗,研究组在此基础上加用血必净进行治疗.比较两组疗效,观察两组治疗前及治疗7d的感染、急性蛋白、应激激素等指标的变化.结果 研究组总有效率高于对照组(95.00％ vs.81.67％,P＜0.05).治疗前,两组患者血清CRP、PCT、α1-AT、α1-AG、CER、Cor、AngⅠ、AngⅡ水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);治疗7d后,研究组上述指标水平均低于对照组(P＜0.05).结论 血必净联合抗菌药物治疗ICU重症肺炎患者的效果显著,可以有效降低患者血清感染指标、急性蛋白和应激激素指标,进而抑制患者全身感染与应激状态,控制患者的病情,值得推广应用.
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低温乙醇法分离正常人血浆组分Ⅳ沉淀中α1-抗胰蛋白酶的分离纯化
目的 采用低温乙醇法分离正常人血浆组分Ⅳ沉淀(FractionⅣ,FⅣ)中提取α1-抗胰蛋白酶(α1-Antitrypsin,α1-AT),制备较高纯度的α1-AT制剂.方法 FⅣ沉淀经过滤、ConA Sepharose 4B亲和层析、DEAE Sepharose Fast Flow一步离子交换层析提纯α1-AT,采用SDS-PAGE及区带扫描法分析纯化α1-AT的纯度；紫外分光光度计测定纯化α1-AT蛋白的浓度及回收率；Western blot检测其反应原性；胰蛋白酶抑制实验(TICT)检测纯化α1-AT的活性.结果 纯化α1-AT的纯度为97.3%；纯化过程中α1-AT蛋白的平均回收率为20.4%；纯化的α1-AT能与抗人α1-AT抗体特异性结合；平均比活为0.833 PU/mg.结论从FⅣ中成功纯化获得了纯度较高、具有生物学活性的α1-AT制剂.
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α1抗胰蛋白酶缺乏症及其治疗
α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)是一种丝氨酸蛋白酶抑制蛋白,其缺乏所致的AAT缺乏症(AAT deficiency,AATD)可引起肺部和肝脏疾病.目前治疗AATD相关的肺部疾病的常用方法是静脉注射人血AAT制剂,一些治疗AATD的新方法也在不断开发.此文就AATD的治疗研究做一综述.
关键词： α1抗胰蛋白酶 α1抗胰蛋白酶缺乏症 肺气肿 治疗应用 -
优化的α1-抗胰蛋白酶生物活性测定方法的验证
目的 验证优化的α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)生物活性测定方法.方法 用发色底物法测定α1-AT活性,以牛胰蛋白酶替换冻干正常人血清来优化先前建立的方法,验证优化方法的准确性、重复性,并观察不同物质对优化方法的影响.结果 优化方法在胰蛋白酶质量浓度为0.01～0.05 g/L时线性关系良好,相关系数＞0.99.优化方法具有良好的准确性和重复性,当采用优化方法测定质量浓度为0.01、0.03、0.05 g/L胰蛋白酶时,胰蛋白酶的回收率分别为99.33％、94.44％和92.67％,变异系数分别为3.79％、1.66％和1.02％.在一定范围内,聚乙二醇、蔗糖、枸橼酸钠、人白蛋白浓度变化对优化方法测定α1-AT生物活性没有影响.结论 以牛胰蛋白酶作为参考标准品的优化α1-AT生物活性测定方法可用于α1-AT制备工艺中的常规质量控制.
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抗α1-抗胰蛋白酶多克隆抗体的制备、纯化和鉴定
目的 用α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)免疫家兔以产生多克隆抗体,并对产生的抗体进行有效地纯化和效价鉴定,建立抗α1-AT多克隆抗体的生产工艺.方法 按照常规方法免疫健康家兔进行抗α1-AT多克隆抗体的制备,用ELISA检测血清抗体效价.处死抗血清效价合格的家兔,取血、离心,获取抗血清.联合应用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法对抗血清进行纯化,纯化的多克隆抗体经15%十二烷基硫酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯度后,用ELISA测定效价.结果 ELISA检测表明,家兔产生的抗α1-AT多克隆抗体效价大于105.联合应用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法进行纯化获得了纯度高、活性好的抗α1-ATT多克隆抗体.结论 成功建立了抗α1-AT多克隆抗体的生产和纯化工艺.
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糖蛋白质组学方法研究人类免疫缺陷病毒感染相关糖蛋白
目的 研究HIV感染相关的人血浆糖蛋白质组变化,筛选新的抗病毒蛋白质或药物靶标.方法 采用亲和纯化法去除AIDS患者(n=10)和健康对照(n=20)血浆中的白蛋白和免疫球蛋白,富集低丰度蛋白质.双向凝胶电泳(2-DE)分离富集的蛋白质,糖基化试剂盒染色,构建AIDS患者血浆糖基化蛋白二维凝胶电泳图谱,ImageMaster软件分析表达差异的糖蛋白,并进行质谱鉴定.对去除高丰度蛋白质的HIV和健康对照血浆进行PNGase F酶解,使糖蛋白去糖基化,二维凝胶电泳结合ImageMaster图像分析比较酶解后两类样品的差异蛋白质.差异糖蛋白经液相色谱串联高容量离子阱质谱(HCT)分析鉴定.结果 经试剂盒处理,成功去除了血浆中高丰度的白蛋白和球蛋白,富集了低丰度蛋白质,获得HIV阳性感染者和健康对照血浆糖蛋白的二维凝胶电泳图谱,经PNGase F酶解,使糖蛋白去糖基化,经液相色谱质谱分析,鉴定了13个差异糖基化蛋白质点,包括α1-抗胰蛋白酶前体蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N1等.结论 筛选到可能与HIV感染相关的糖蛋白,如a1-抗胰蛋白酶前体蛋白等,为了解HIV感染机制及新的抗病毒药物靶标分子的筛选提供了帮助.
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小肠淋巴管扩张症1例报告并文献复习
目的 探讨小肠淋巴管扩张症的诊断方法及治疗.方法 分析 1例小肠淋巴管扩张症患儿的病史、临床和 病理检查结果,以及随访观察半年后复查的各项相关指标,同时复习相关文献.结果 小肠淋巴管扩张症确诊依据病理 检查,内镜下典型表现也可以诊断,胶囊胃镜、双气囊小肠镜、胃镜及结肠镜、腹部CT、小肠造影、粪便α1抗胰蛋白 酶清除率测定等均有诊断意义.治疗上主张控制饮食,给予低脂、高蛋白、补充中链脂肪酸的饮食.该患儿经控制饮食 治疗 6个月、1年后临床症状、体征好转,部分实验室检查指标亦好转,但随访6个月时镜下小肠改变不明显.结论 双 气囊小肠镜并病理检查是诊断小肠淋巴管扩张症的佳方法,胃镜结合结肠镜或小肠造影在一定程度上对诊断有帮助.可用低脂、高蛋白、补充中链脂肪酸的饮食疗法,其治疗是一个长期连续的过程,可能与小肠黏膜修复慢有关.
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大鼠烟雾吸入伤后肺泡内表面活性物质亚型的变化及意义
目的 探讨烟雾吸入后肺泡内表而活性物质(PS)亚型分布的变化和可能机制,以及其与PS活性抑制的关系.方法 采用大鼠烟雾吸入伤模型,分别检测了正常对照组及致伤2、6、12、24 h大鼠的动脉血气、肺水量、支气管肺泡灌洗液(BALF)表面张力特性、BALF总磷脂(TPL)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含昔及α1抗胰蛋白酶(α1-AT)活性、肺泡腔内PS亚型超微结构.结果 大鼠烟雾吸入伤后出现急性呼吸衰竭和严重肺水肿;BALF小表面张力(STmin)进行性升高;BALF中TPL、TP、Alb及α1-AT增加,且STmin与α1-AT/TP、α1-AT/Alb比值的变化相关显著;伤后早期肺泡腔内PS板层体和囊泡聚集,管髓体破坏;后期大量囊泡聚集,板层体少,管髓体几乎缺失.结论 烟雾吸入伤后肺泡腔内PS亚型分布及转化异常是引起PS活性抑制的主要原因之一,α1-AT与血浆蛋白比例失衡可能起重要作用.
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水陆二仙丹通过增加精液中PMNE抑制剂含量抑制精子氧化损伤的发生
目的：评价水陆二仙丹对男性不育患者精子氧化损伤的影响，并探讨其可能的作用途径。方法将80例不育患者采用随机双盲平行安慰剂对照的方法分为治疗组和对照组，每组各40例，两组均服用抗氧化剂，在此基础上，治疗组服用水陆二仙丹水煎剂，对照组服用安慰剂，疗程为3个月。同时收集20例健康捐精者的精液作为正常对照组。对精子基本参数（精子密度、精子活动率及正常精子形态）的变化及精液中超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）及α1抗胰蛋白酶的水平进行比较。结果①治疗前，治疗组和对照组的精子密度、精子活动率及正常精子形态均低于正常对照组（P<0.05）。治疗后，治疗组和对照组的精子基本参数（精子密度、精子活动率及正常精子形态）均显著改善（P<0.0001），且治疗组改善精子基本参数的程度显著高于对照组（P<0.0001）。②治疗前，治疗组和对照组NE及MDA的水平均明显高于正常对照组，而α1抗胰蛋白酶和SOD水平均低于正常对照组（P<0.05）。治疗后，治疗组和对照组NE和MDA的水平较治疗前均显著降低（P<0.0001），而α1抗胰蛋白酶及SOD的水平则显著升高（P<0.0001），且治疗后治疗组α1抗胰蛋白酶水平在显著高于对照组（P<0.0001），MDA的水平显著低于对照组（P<0.0001）。相关性的分析结果显示，MDA水平与NE的水平呈明显正相关（r=0.9863，P=0.0003），MDA水平与α1抗胰蛋白酶呈显著负相关（r=-0.9670，P=0.0016）。结论水陆二仙丹可能通过增加精液中NE抑制剂（α1抗胰蛋白酶）含量抑制精子氧化损伤的发生。
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α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用
目的探讨α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用.方法离体途径将α1AT基因转染人肺腺癌细胞株A549,然后接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率.结果经α1AT基因转染后的人肺腺癌细胞株在裸鼠皮下成瘤能力降低,裸鼠成瘤潜伏期延迟,大抑瘤率可达55.5%.结论高表达α1AT基因能降低A549的成瘤能力,抑制肿瘤生长.
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学龄期男孩反复出血倾向
该文报道1例α1抗胰蛋白酶Pittsburgh突变患儿.患儿男,因反复膝关节血肿就诊,凝血功能检查提示凝血活酶时间、部分凝血活酶时间均延长,1:1血浆纠正试验仅能部分纠正,凝血因子Ⅷ抑制物、抗心磷脂抗体、狼疮抗凝物为阴性,凝血酶诱导的血小板聚集试验提示血液中存在凝血酶抑制物,基因检测证实为Pittsburgh突变导致α1抗胰蛋白酶突变.该文结合文献,总结和分析了α1抗胰蛋白酶Pittsburgh突变所导致出血的临床特点、诊断和治疗.
关键词： 出血性疾病 α1抗胰蛋白酶 Pittsburgh突变 儿童 -
尿α1抗胰蛋白酶预测儿童原发性肾病综合征激素治疗的疗效
目的 检测儿童原发性肾病综合征(PNS)激素使用前尿α1抗胰蛋白酶(AAT)水平,探讨其能否作为儿童PNS激素治疗敏感性的预测指标.方法 43例PNS初治儿童,留取其激素使用前的晨起中段尿,应用ELISA法检测尿液中AAT的浓度,并经同份尿肌酐浓度校正.根据糖皮质激素治疗4周后的反应分为激素敏感(SSNS)组和激素耐药(SRNS)组,15例健康的体检儿童作为对照组(NC).分析各组间数据差异及评价AAT的预测效能.结果 对照组尿AAT检测阴性,SSNS组及SRNS组间尿AAT水平差异无统计学意义[(30.4±4.5) mg/L比(31.8±4.6) mg/L,t=-1.0,P=0.33]；而经尿肌酐校正后的尿AAT(尿AAT/Cr)在SRNS组显著高于SSNS组[0.049(0.028～ 0.073)比0.028 (0.022 ～ 0.036),Z=2.4,P=0.02].激素使用前SRNS组实验室指标中血小板计数、血白细胞计数、血清球蛋白水平、尿白细胞计数、尿红细胞计数、尿IgG水平及尿α1微球蛋白水平显著高于SSNS组(P＜0.05)；其中尿AAT/Cr(OR=6.81×1028,P=O.O05)、血清球蛋白(OR=1.69,P=0.01)及尿α1微球蛋白(OR=1.05,P=0.009)进入多因素Logistic回归模型,作为预测SRNS的独立因素.据两组尿AAT/Cr作ROC,曲线下面积(AUC)为0.72,当尿AAT/Cr截取值为0.035时,预测效能高,其灵敏度为68％,特异度为75％(Youden指数为0.43).据回归模型中尿AAT/Cr、血清球蛋白及尿α1微球蛋白联合作ROC,其AUC为0.94,灵敏度为95％,特异度为83％(Youden指数为0.78).尿AAT/Cr在不同病理类型间差异无统计学意义.结论 SSNS组及SRNS组间尿AAT水平差异无统计学意义,而SRNS患儿尿AAT/Cr显著高于SSNS患儿,其可作为PNS激素疗效预测指标；尿AAT/Cr联合血清球蛋白和尿α1微球蛋白对SRNS有更好的预测效能.
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α1抗胰蛋白酶缺乏症的研究进展
α1抗胰蛋白酶缺乏症(alpha1-antitrypsin deficiency,AATD)是一种严重的基因紊乱性疾病,主要是由于编码α1抗胰蛋白酶(alpha1-antitrypsin,AAT)的基因突变引起血浆中蛋白酶抑制剂AAT 的缺乏,从而使中性粒细胞弹性蛋白酶与蛋白酶抑制剂之间的平衡遭到破坏,中性粒细胞释放的弹性蛋白酶、组蛋白酶不断积累并降解肺组织的弹性蛋白,损伤肺泡的弹性纤维,破坏肺泡间隔,从而导致肺气肿[1].该疾病的临床表现多样,其中主要引起肺气肿、肝硬化,极少引起致死性脂膜炎和继发性脉管炎.
关键词： α1抗胰蛋白酶缺乏症 α1抗胰蛋白酶 基因型 肝硬化 肺气肿
