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凋亡调节因子Smac、Survivin在结肠腺癌中的表达及临床意义
目的:探讨第二个线粒体来源的半胱氨酸酶的激活剂(the second mitochodria-derived activator of caspase,Smac)和生存素(Survivin)在结肠腺癌中的表达及其与临床参数之间的关系.方法:采用组织芯片技术及免疫组织化学SP两步法检测59例经病理确诊的结肠腺癌组织及10例癌旁正常组织中Smac蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:(1)Smac蛋白在结肠腺癌、癌旁正常组织中的表达率分别为66.10％(39/59),100％(10/10),差异具有统计学意义(P=0.03).Survivin蛋白在结肠腺癌、癌旁正常组织中的表达率分别为69.49％(41/59),20.0％(2/10),差异具有统计学意义(P=0.01); (2)Smac蛋白和Survivin蛋白在结肠腺癌组织中的表达与患者结肠腺癌的分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05),但与患者的年龄、肿瘤的大小、浸润深度均无明显相关性(P＞0.05); (3)Smac蛋白表达阳性的39例中,Survivin蛋白阳性表达23例,占58.97％(23/39),Smac蛋白表达阴性的20例中,Survivin蛋白阳性表达18例,占90.0％(18/20),经统计学分析,在结肠腺癌中,两者的表达明显负相关(r=-0.319,P=0.014).结论:在结肠腺癌中,Smac蛋白低表达,Survivin蛋白高表达,两者明显负相关;Smac蛋白和Survivin蛋白的异常表达可能对结肠腺癌的发生发展及淋巴结转移起着至关重要的作用.
关键词： 结肠肿瘤 免疫组织化学 Smac蛋白 Survivin蛋白 组织芯片 -
凋亡相关蛋白SMAC的表达与非小细胞肺癌患者临床特征及预后的关系
目的 探讨凋亡相关蛋白第二个线粒体衍生的半胱天冬酶激活蛋白(SMAC)的表达与非小细胞肺癌临床特征及预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测67例非小细胞肺癌患者肺癌组织及癌周肺组织中SMAC蛋白的表达水平,并分析SMAC蛋白表达与非小细胞肺癌患者临床特征和预后的关系.结果 肺癌组织和癌周肺组织中SMAC蛋白的阳性表达率分别为74.6％、58.2％,差异有统计学意义(P﹤0.05);TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的非小细胞肺癌患者肺癌组织中SMAC蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者(P﹤0.05),但不同年龄、性别、吸烟史、分化程度、肿瘤直径、组织类型和肿瘤位置非小细胞肺癌患者肺癌组织中SMAC蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);SMAC低表达与SMAC高表达患者的3年生存率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 SMAC在非小细胞肺癌患者肺癌组织中的表达水平高于癌周肺组织,且与非小细胞肺癌的发展、转移有关,但与患者的预后无关.
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直肠癌组织Smac与Survivin表达及其临床意义的探讨
目的:探讨Smac和Survivin蛋白在直肠癌组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学技术检测Smac和Survivin蛋白在60例直肠癌组织、30例直肠腺瘤组织及10例癌旁正常黏膜组织中的表达.结果:Smac在直肠癌组织、直肠腺瘤及癌旁正常组织的表达率分别为71.67％(43/60)、96.67％(29/30)和100.00％(10/10),差异有统计学意义,X2=13.981,P=0.001.Survivin在直肠癌组织、直肠腺瘤及癌旁正常组织的表达率分别为90.00％(54/60)、80.00％(24/30)和20.00％(2/10),差异有统计学意义,X2=9.539,P=0.002.Smac和Survivin蛋白的表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤部位、术前CEA水平、肿瘤分化程度和远处转移无关(P值均＞0.05),但与TNM分期和淋巴结转移有关,P值均＜0.05.Smac阳性率与淋巴结转移呈负相关,r=-0.079,P＜0.05；Survivin阳性率与淋巴结转移呈正相关,r=0.236,P＜0.05.Smac和Survivin在直肠癌中的表达呈负相关,r=-0.086,P＜0.05.结论:Smac和Survivin蛋白表达与直肠癌的病理分期和淋巴结转移密切相关,Smac在直肠癌中低表达,其表达与Survivin呈负相关,两者在直肠癌细胞凋亡信号传导网络中可能发挥重要的作用.
关键词： 直肠肿瘤 Smac蛋白 Survivin蛋白 免疫组织化学 -
新型Smac模拟物Tat-Smac N7的肿瘤细胞辐射增敏作用
目的 观察Tat-Smac N7融合肽对人肺癌细胞系H460和人食管癌细胞系EC109的辐射增敏作用,探讨其辐射增敏机制.方法 取对数生长期H460和EC109细胞,分为DAPI对照组、FITC-Smac N7和FITC-Tat-Smac N7组,荧光显微镜观察两种细胞不同时间药物入核情况.取对数生长期H460和EC109细胞,分为单纯照射组、照射联合Tat-Smac N7组,单纯照射组给予0、2、4、6 Gy照射,照射联合Tat-Smac N7组中Tat-Smac N7的浓度为20 μmol/L,WST-1测定Tat-Smac N7的辐射增敏作用.取对数生长期H460和EC109细胞,分为对照组、Tat-Smac N7组、单纯照射组和照射联合Tat-Smac N7组,吸收剂量为4 Gy,Tat-Smac N7浓度为20 μmol/L,细胞流式分析仪测定细胞不同时间的细胞凋亡率.结果 Tat-Smac N7融合蛋白进入2种细胞系后2h可以有蓄积,且这种蓄积可延续到24 h,而Smac N7则不能进入细胞.Tat-Smac N7能够增强H460和EC109细胞的辐射敏感性(F=22.2、13.2,P＜0.05),照射联合Tat-Smac N7可明显增加辐射诱导的细胞凋亡率(24 h:F=9.32、5.86,P＜0.05;48 h:F =7.09、8.25,P＜0.05).Tat-Smac N7联合照射后凋亡诱导效应具有时间依赖性.结论 Tat-Smac N7融合肽可促进肿瘤细胞的辐射敏感性,作为一种新的Smac蛋白类似物,有望用于肿瘤的辐射增敏治疗.
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尼莫同对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及意义
目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后早期应用尼莫同对线粒体促凋亡蛋白Smac表达的影响,研究尼莫同对神经细胞的保护作用.方法 36只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、尼莫同治疗组.采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察尼莫同对大鼠脑缺血再灌注治疗后的神经功能症状评分,病理学HE染色观察组织形态学改变,免疫组化法检测脑组织中Smac蛋白的变化,TUNEL法原位检测凋亡细胞.结果 假手术组脑组织中Smac蛋白呈弱阳性表达,缺血再灌注组脑组织中Smac蛋白呈强阳性表达,尼莫同治疗组介于二者之间,三组两两比较有统计学意义(P<0.05);假手术组脑组织中可见个别凋亡细胞,而缺血再灌注组凋亡细胞数明显较多,尼莫同治疗组凋亡细胞数介于假手术组和缺血再灌注组之间,三组两两比较有统计学意义(P<0.05).结论 尼莫同可减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,可能通过下调线粒体内Smac蛋白的表达发挥保护神经细胞的作用.
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卵巢上皮性癌中Smac蛋白的表达及临床意义
目的：探讨研究 Smac蛋白在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织及卵巢上皮性癌中的表达及与卵巢上皮性癌临床病理特征的关系。方法随机选取吉林大学中日联谊医院2008年1月-2009年10月间手术切除的卵巢组织标本，其中正常卵巢组织20例、卵巢良性上皮性肿瘤组织20例和卵巢上皮性癌组织60例。应用免疫组织化学法对组织进行染色，以检测 Smac的表达情况。结果 Smac蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达明显低于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织（P＜0．05），并且Smac蛋白的表达随着组织病理分级的升高而逐渐减弱（P＜0．05），随着手术病理分期的升高而逐渐减弱（P＜0．05），但在不同的组织学类型中的表达无明显差异（P＞0．05）。结论 Smac的低表达可能促进卵巢癌的发生发展，可能预示着肿瘤更具有侵袭性和不良的预后。
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食管鳞状细胞癌中Survivin和Smac蛋白的表达及与临床病理的关系
目的：探讨食管鳞状细胞癌中Survivin和Smac蛋白的表达及与临床病理的关系。方法收集该院2013年5月至2014年6月行手术治疗的60例食管鳞状细胞癌患者手术存档标本，使用免疫组化法检测Survivin和Smac蛋白在癌细胞组织及正常组织中的表达，同时比较Survivin和Smac蛋白表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系，分析Survivin和Smac蛋白表达的相关性。结果食管鳞状细胞癌组织中 Survivin阳性表达率为70.0％，明显高于癌旁正常组织23.3％（ P＜0.05）；而Smac蛋白在食管鳞状细胞癌组织中阳性表达率为66.7％，低于周围正常组织88.3％（P＜0.05）。 Survivin蛋白的表达与患者TNM分期、浸润程度呈明显相关性，在Ⅲ期及深层浸润组织中阳性表达率明显高于Ⅰ期及浅层浸润组织（P＜0.05）；Smac蛋白表达与患者TNM分期呈明显相关性，其在Ⅲ期中阳性表达率明显低于Ⅰ期（P＜0.05）；在食管鳞状细胞癌中，Survivin的表达明显高于Smac蛋白表达，两者呈明显负相关性（r ＝－0.397，P＝0.009）。结论 Survivin 和 Smac蛋白的表达与食管鳞状细胞癌的发生发展具有一定相关性，可作为治疗及预后预测的重要指标。
关键词： 食管鳞状细胞癌 Survivin蛋白 Smac蛋白 -
凋亡抑制蛋白及其拮抗剂研发进展
凋亡抑制蛋白(IAPs)是一类重要的细胞内凋亡调节蛋白,与肿瘤细胞的抗凋亡能力及耐药性密切相关.线粒体释放的蛋白smac是一种抗凋亡拮抗蛋白,通过其N端四肽序列(Ala-Val-Pro-Ile,AVPI)与IAPs的杆状病毒IAP重复序列(BIRs)结合,从而释放半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases),促进细胞的凋亡.近年来以IAPs为靶点,研制有抗癌特异性的小分子IAP拮抗剂,寻找高效低毒的smac拟态物(smac-mimics)的治疗策略倍受关注.Smac-mimics的研发是近几年研究用于肿瘤治疗的一种新思路.本文主要介绍IAPs作用机制及抗凋亡拮抗剂smac-mimics研发进展.
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Livin和Smac蛋白在人大肠癌中的表达和意义
目的:研究Livin蛋白和Smac蛋白在肠癌组织及癌旁组织中表达的意义.方法:采用免疫组织化学Envision二步法检测60例肠癌组织及癌旁组织Livin和Smac蛋白的表达情况.结果:Livin蛋白在大肠癌组织中的阳性表达率80%,较癌旁组织3.3%高.Livin蛋白在癌组织过度表达与肠癌的淋巴结转移以及临床分期、组织分化程度有关.Smac蛋白在肠癌中的阳性表达率(30.0%)明显低于癌旁(96.7%),Smac表达降低或缺失与淋巴结转移及临床分期有关.经相关分析Livin和Smac蛋白的表达呈负相关.结论:Livin与smac蛋白在大肠癌的发生、发展中的作用有关.
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食管鳞癌组织中Smac、survivin的表达及其临床意义
目的 探讨Smac及survivin在食管鳞癌中的表达变化及其对食管癌预后的判断价值.方法 采用免疫组化方法 测定食管鳞癌组织及癌周正常食管组织中的Smac、survivin.结果 Smac在癌周正常食管组织中阳性表达高于在癌组织中的表达,survivin在癌周正常食管组织中阳性表达低于在癌组织中的表达;Smae在长期生存的食管癌患者中多呈高表达,survivin多呈低表达.Smac与survivin在食管鳞癌中的表达呈负相关(r=-0.288,P=0.013).结论 Smae及survivin可能是食管鳞癌细胞凋亡信号传导网络中的重要因子,是判断食管鳞癌预后的重要指标.
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刺参酸性黏多糖对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法 采用肝癌细胞悬液接种法制备荷瘤小鼠50只,随机分为阴性对照组、阳性对照组和SJAMP低、中、高剂量组各10只,分别腹腔注射生理盐水、5-氟尿嘧啶和6.25、12.5、25 mg/kg的SJAMP各0.2 mL,连续12 d.处死小鼠,剥离肿瘤称取质量,计算抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织病理改变;免疫组化法检测肿瘤组织中的促凋亡基因Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白和抑制凋亡基因Survivin、NF-κB.结果 SJAMP高剂量组抑瘤率高于中、低剂量组(P均<0.05),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).病理检查显示,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌细胞排列稀疏,核分裂减少,坏死区明显增多.与阴性对照组比较,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌组织中Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白表达升高,Survivin、NF-κB表达降低(P均<0.05).结论 中、高剂量刺参酸性黏多糖能够上调促凋亡基因、下调抑制凋亡基因的表达,从而抑制荷瘤小鼠瘤体的生长.
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凋亡调节因子Smac在结肠腺癌组织中的表达
目的 探讨Smac在结肠腺癌组织中的表达及临床意义.方法 采用组织芯片、免疫组织化学S-P法检测经病理确诊的59例结肠腺癌组织及10例相应癌旁正常组织中Smac蛋白的表达水平.结果 Smac蛋白在结肠腺癌组织、相应癌旁正常组织中的表达率分别为66.10%(39/59)、100.00%(10/10),差异有统计学意义(P<0.05);2)Smac蛋白在结肠腺癌组织中的表达与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05).结论 Smac蛋白在结肠癌组织中低表达,在结肠腺癌的发生、发展以及结肠腺癌的淋巴结转移中可能起重要的作用.
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原发性肝细胞癌组织中Livin和Smac蛋白的表达
目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)组织中Livin和Smac蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学法检测50例HCC组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中Livin和Smac蛋白的表达情况.结果:HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Livin阳性率分别为84.0%(42/50)、32.0%(8/25)和0,与非肝癌组织比较,HCC组织中Livin阳性率较高(χ2=27.840,P<0.01).HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Smac的阳性率分别48.0%(24/50)、88.0%(22/25)、100%(15/15),与非肝癌组织比较,HCC组织中Smac阳性率较低(χ2=28.373,P<0.01).Livin和Smac蛋白的表达均与HCC组织的分化程度无关(P>0.05).HCC组织中Livin和Smac蛋白的表达呈负相关(rs=-0.236,P<0.05).结论:Smac和Livin蛋白可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环.
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人工合成拟Smac融合多肽促低剂量丝裂霉素C诱导膀胱癌细胞凋亡的研究
目的:探讨人工合成拟Smac融合多肽(SmacN7)对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的促进作用.方法:运用固相多肽合成技术人工合成SmacN7细胞可穿透性融合多肽,将0.05mg/mlMMC诱导的膀胱癌T24细胞与50～500 μg/L的SmacN7融合多肽共同孵育4～48 h,采用Annexin-V荧光染色技术检测肿瘤细胞凋亡情况;应用流式细胞术和MTT比色法检测诱导后T24细胞凋亡率、增殖抑制率与SmacN7的时间和浓度的效应关系.结果:50～500 μg/L SmacN7作用4～48 h,肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变,随着SmacN7浓度的增加或药物作用时间的延长,肿瘤细胞凋亡率也增加,12 h为5.67%～56.12%,24 h为14.54%～65.24%,48 h为31.48%～87.23%,同时细胞增殖抑制率出现明显增加,药物作用12 h、24 h、48 h后,增殖抑制率分别为9.58%～63.42%、28.94%～72.3%、44.7%～87.12%.结论:SmacN7能够有效地促进低剂量MMC诱导的膀胱癌T24细胞凋亡,并具有时间和浓度依赖性,为膀胱肿瘤的生物治疗提供了新思路.
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全反式维甲酸对环孢素诱导的肾小球系膜细胞增殖与凋亡的影响及其机制
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对环孢素(CsA)诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响及机制.方法 采用不同剂量ATRA作用于不同剂量CsA诱导下的肾小球系膜细胞.采用MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测线粒体促凋亡的Smac蛋白的表达.结果 与对照组比较,CsA剂量为0.5μg/mL及以上可抑制细胞増殖,CsA剂量为1.0μg/mL及以上可诱导细胞凋亡,且Smac蛋白的表达随CsA剂量的增加而增加,具有剂量和时间依赖的特征(均为P<0.05).而与CsA组比较,CsA+ATRA处理组对细胞增殖的抑制作用更为明显,而加入ATRA可呈剂量依赖性抑制CsA诱导的肾小球系膜细胞凋亡及Smac蛋白的表达(均为P<0.05).结论 CsA可抑制肾小球系膜细胞增殖,诱导其凋亡并刺激Smac蛋白的表达.ATRA可以抑制CsA诱导的肾小球系膜细胞凋亡,且可能是通过Smac信号通路介导的.
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促凋亡蛋白Smac及其下游通路在内毒素诱导L02细胞凋亡中的作用
近年研究表明,细胞凋亡是导致肝脏损伤的一个重要细胞机制,在重型肝炎发生发展过程中发挥重要作用.在正常情况Smac位于线粒体膜问隙,在抗癌药物、化学或物理的凋亡信号、DNA损伤等作用下,可释放入胞质,与凋亡抑制蛋白(IAPs)结合并解除其对天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspases)的抑制作用,从而使Caspase9活性增强;而Caspase3可以剪切Caspase9前体(procaspase9),促使染色质固缩,DNA片段化、细胞起泡,促进细胞凋亡发生[1].本实验采用内毒素(LPS)诱导正常肝细胞凋亡,探讨其对促凋亡分子Smac从线粒体释放及对Caspase9和Caspase3活化的影响,为重型肝炎内毒素血症的防治提供新思路.
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ANTP-SmacN7融合肽对H460细胞的辐射增敏作用
背景与目的肿瘤的辐射耐受制约了放疗疗效，第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂（Second mitochondria-derived activator of caspase, Smac）蛋白类似物可明显提高辐射诱导的肿瘤细胞凋亡，有望成为新型肿瘤辐射增敏药物。本研究旨在探讨新型Smac蛋白类似物ANTP-SmacN7融合肽对肺癌细胞系H460的辐射增敏作用。方法合成ANTP-SmacN7融合肽，连接荧光素FITC以观察融合肽能否进入细胞。对数生长期H460细胞分为空白对照组、单纯照射组、ANTP-SmacN7组和照射联合ANTP-SmacN7组，单纯照射组给予0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy照射，照射联合ANTP-SmacN7组中ANTP-SmacN7的浓度为20μmol/L，WST-1测定H460细胞的增殖。流式细胞仪测定细胞处理后24 h和48 h的细胞凋亡率。Western blot实验检测caspase3和cleaved caspase3的表达水平。结果 ANTP-SmacN7融合能够顺利进入细胞，且能够增强H460细胞的辐射敏感性（F=25.1，P<0.01，增敏比为1.86），照射联合ANTP-SmacN7可明显降低H460细胞的克隆形成率（χ2=45.2,P<0.01；χ2=40.3,P<0.01），提高cleaved caspase3的表达量，促进caspase3的活化，增加辐射诱导的细胞凋亡率。结论 ANTP-SmacN7融合肽可明显提高H460细胞的辐射敏感性，作为一种新的Smac蛋白类似物有望用于肿瘤的辐射增敏治疗。
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Smac蛋白表达水平对预测直肠癌术前放化疗敏感性的临床意义
目的 探讨Smac蛋白表达水平与直肠癌术前放化疗后病理反应程度的关系,评价其表达水平对预测直肠癌术前放化疗敏感性的价值.方法 收集昆明医科大学第一附属医院2008年7月至2013年6月接受术前放化疗并行手术的直肠腺癌患者43例,免疫组织化学方法检测放化疗前活检标本及手术后切除标本中Smac蛋白的表达水平,分析其放化疗前后表达水平的变化及活检组织中Smac蛋白表达水平与术后病理反应程度的关系.结果 直肠癌术前放化疗后病理反应良好,有效率达71.1％,其中,病理完全缓解率达30.2％;放化疗前后直肠癌组织中Smac蛋白表达有差异,P＜0.01,放化疗后Smac蛋白表达明显下降;放化疗前Smac蛋白表达与术后病理反应程度存在相关性,P＜0.05,放化疗前Smac蛋白表达高者,放化疗后病理缓解程度也高;放化疗后病理反应有效者(G1+G2),生存时间更长.结论 放化疗前直肠癌活检组织中Smac蛋白表达水平可作为术前放化疗敏感性的预测因子;放化疗后术后病理组织中Smac蛋白染色得分有可能预测预后;术后病理缓解程度对预测预后有一定的价值,有待增加临床病例数进一步观察.
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Smac和Livin的表达与宫颈癌的发生发展相关性分析
目的 探讨凋亡相关蛋白Smac、Livin在宫颈癌组织中的表达及临床意义.方法 选取2014年3月至2015年3月汕头市中心医院妇产科宫颈鳞状细胞癌24例(宫颈癌组),宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ 15例(CIN Ⅰ组),CIN Ⅱ13例(CIN Ⅱ组),CIN Ⅲ13例(CIN Ⅲ组),正常宫颈组织15例作为正常对照(对照组),采用免疫组化法检测各组的Smac和Livin表达情况.结果 宫颈癌组Smac阳性比例为83.33％,明显高于对照组,差异比较有统计学意义(x2=25.658,P＜0.05);宫颈癌组、CIN Ⅱ组和CIN Ⅲ组Smac阳性比例比较差异无统计学意义(x2=2.204,P＞0.05);宫颈癌组、CIN Ⅱ组和CIN Ⅲ组Livin阳性比例分别为79.17％、76.92％和84.62％,明显高于对照组(x2值分别为19.420、17.279、14.412,均P＜0.05);CIN Ⅰ组与对照组Smac和Livin阳性比例比较差异无统计学意义(x2值分别为0.536、0.000,均P＞0.05);CIN Ⅰ组Smac和Livin阳性比例明显低于CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组(x2值分别为20.843、22.611,均P＜0.05);低分化患者Smac阳性比例为42.86％,明显低于高中分化患者(x2=11.657,P＜0.05);宫颈鳞状细胞癌中Smac和Livin的表达呈正相关(r=0.872,P＜0.05).结论 Smac和Livin在宫颈鳞状细胞癌的发生发展中起协同作用.
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Smac蛋白干扰胰腺癌Bx-PC3细胞系survivin蛋白增敏顺铂化疗
目的: 观察Smac蛋白对细胞凋亡抑制蛋白survivin的下调作用, 进一步分析Smac蛋白转染增敏survivin过表达胰腺癌Bx-PC3细胞系顺铂化疗敏感性的效应.方法: 建立稳定传代、均一表达survivin的Bx-PC3细胞系.制备Smac-GFP重组质粒, 将其转染入Bx-PC3细胞, 以Western blot法半定量测定survivin表达水平.联合10 mg/L顺铂孵育48 h和72 h, 按照MTT法测定细胞抑制率(%).结果: Bx-PC3细胞转染24 h开始出现微弱阳性转染表现(GFP绿色荧光阳性), 于48 h出现大量细胞转染, 于72 h转染水平达到峰值.Western blot检测表明, 与对照组相比, 转染组的survivin蛋白表达水平仅为对照组的28.6%(P<0.01).MTT检测发现, 随着顺铂作用时间的延长, 对照组和转染组的顺铂抑制率均升高(48 h vs 72 h, P<0.05).而且, 转染组的抑制率在两时点上均高于对照组(P<0.01).结论: Survivin蛋白在胰腺癌中具有重要的增殖调控作用, 并且与胰腺癌化疗抵抗密切相关.Smac蛋白拮抗可以在蛋白水平上下调survivin的表达, 提高胰腺癌细胞对化疗的敏感性, 这一治疗策略有望成为一种治疗胰腺癌的新型有效治疗方法.
