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Caspase-3蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白在人结直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测48例肠癌组织及配对癌旁组织中Caspase-3蛋白表达水平,并探讨其表达水平与临床病理学特征及预后的关系.结果:Caspase-3主要表达于胞浆,其在肠癌组织中的阳性表达率为27.08%,癌旁组织阳性率为58.33%,癌组织显著低于癌旁组织(P<0.05);Caspase-3阳性表达与肿瘤分期(P<0.05)和病理分级(P<0.05)有关.Caspase-3阳性患者中位无疾病进展生存时间为32.4个月,阴性患者为24.8个月(P>0.05).结论:Caspase-3蛋白在人结直肠癌组织中表达率较低,可能结直肠癌的发生发展有关.
关键词： 结直肠癌 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 免疫组织化学 临床特征 生存期 -
Aβ42介导的阿尔茨海默病对小脑AMPA受体GluR2亚基及caspase-3表达的影响
目的 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)42介导的神经毒性对小脑2-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体(AM-PAR)谷氨酸受体(GluR)2亚基及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3蛋白和基因表达的影响.方法 Aβ425μl侧脑室注射制备阿尔茨海默病(AD)动物模型,利用水迷宫实验筛选入组SD大鼠.17 d后取材,将大鼠随机分为对照组(侧脑室注射5μl生理盐水)和Aβ42组,采用免疫组化染色、Western印迹和RT-PCR方法检测小脑AMPAR的GluR2亚基及caspase-3蛋白和基因的表达.结果 Aβ42组穿越平台次数显著低于对照组(P<0.05).Aβ42组GluR2亚基表达量及基因水平明显低于对照组(P<0.05),而caspase-3表达量及基因水平明显高于对照组(P<0.05).结论 Aβ42介导的神经毒性影响小脑AMPAR的GluR2亚基及caspase-3的表达,AMPAR通过caspase-3参与AD大鼠小脑中由Aβ42介导的神经毒性作用.
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细胞凋亡抑制在子宫肌瘤发病机制中的意义
目的 通过比较子宫肌瘤组织与瘤旁正常子宫肌肉组织的细胞凋亡情况、凋亡相关蛋白的表达或活化情况,探讨子宫肌瘤的发生、发展与细胞凋亡的关系.方法 收集20例子宫肌瘤瘤体及瘤体旁正常平滑肌组织、子宫肌瘤组织为研究组,同源正常子宫平滑肌组织为对照组.采用DNA片段化分析子宫肌瘤瘤体及瘤体旁正常平滑肌组织染色体DNA,采用Western Blot分析子宫肌瘤瘤体及瘤体旁正常平滑肌组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达及Bcl-2/Bax比值,分析含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)和Caspase-9的活化情况.结果 研究组有5例出现DNA ladder条带,对照组有15例出现DNAladder条带.研究组Bcl-2表达量为(0.823 ±0.102),显著高于对照组的(0.348±0.067);研究组Bax表达量为(0.185±0.073),显著低于对照组的(0.429±0.088);研究组Bcl-2/Bax比值为(4.450±0.760),显著高于对照组的(0.810±0.370) (P ＜0.05).与对照组相比,研究组中Caspase-3及Caspase-9的活化明显较少.结论 子宫肌瘤的发生发展可能与细胞凋亡抑制有关,这一过程可能涉及凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达情况、Bcl-2/Bax比值变化以及Caspase-3及Caspase-9的活化.
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亚硒酸钠诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡
目的 探讨亚硒酸钠( Na2SeO3)对胰腺癌细胞系PANC-1生长的影响及其作用机制.方法 以PBS为对照,用2、5、10、20μmol/L Na2SeO3处理胰腺癌PANC-1细胞株,用四甲基偶氮唑盐(MTT )比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察Na2SeO3对PCNA-1细胞株生长的影响；通过ELISA法检测Caspase-3蛋白含量,Western blotting法检测细胞内及线粒体内细胞色素C( cytochrome C,Cyt C)含量.结果 与时照组相比,用不同浓度Na2SeO3作用24 h、48 h后,对PANC-1细胞抑制作用有明显差异(P＜0.05)；呈浓度时间依赖性.与PBS对照组相比,Na2SeO3作用组Caspase-3含量明显升高(P＜0.01),细胞色素C从线粒体向胞质释放明显增多,但蛋白含量无明显变化.结论 Na2SeO3抑制PANC-1细胞的生长,促进细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3的激活及细胞色素C的释放有关.
关键词： 亚硒酸钠 细胞凋亡 细胞色素 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 -
抑制miR-630表达对宫颈癌细胞紫杉醇敏感性的影响及机制
目的 观察制微小RAN-630 (miR-630)表达对宫颈癌细胞紫杉醇(PTX)敏感性的影响,并探讨其机制.方法 将宫颈癌PTX耐药细胞株HeLa-PTX分为3组,抑制组和空载组分别转染miR-630小干扰RNA质粒、对照空载质粒30 nmol/L,空白对照组不转染,48 h后收集细胞.采用MTT法检测PTX对HeLa-PTX细胞的半数抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR法检测细胞中的miR-630、凋亡蛋白酶活化因子(APAF-1) mRNA,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blotting法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Caspase1、Caspase3.结果 抑制组、空载组、空白对照组PTX IC50分别为(35.61±2.87)、(142.57±3.63)、(144.31±2.42) nmol/L,抑制组tPTX IC50低于NC组和空白对照组(P均=0.000).与空载组及空白对照组比较,抑制组miR-630表达量降低而APAF-1 mRNA表达量增加(P均=0.000).抑制组、空载组、空白对照组细胞凋亡率分别为19.60％±2.56％、10.20％±1.08％、8.00％±1.53％,抑制组细胞凋亡率高于空载组和空白对照组(P均=0.000).与空载组及空白对照组比较,抑制组PARP、Caspase1、Caspase3相对表达量增加(P均=0.000).结论 抑制miR-630表达能增强宫颈癌细胞对PTX的敏感性,这可能是通过调节细胞凋亡及APAF-1基因表达实现的.
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莪术醇与奥沙利铂联合肿瘤内注射对裸鼠胃癌移植瘤生长、瘤细胞增殖的影响及其机制
目的：观察莪术醇与奥沙利铂联合肿瘤内注射对裸鼠胃癌移植瘤生长、瘤细胞增殖的影响，并探讨其机制。方法20只裸鼠，建立胃癌移植瘤模型，将其随机分为对照组、莪术醇组、奥沙利铂组、联合组各5只，对照组肿瘤内注射生理盐水（0．05 mL／10 g），莪术醇组肿瘤内注射莪术醇（100 mg／kg），奥沙利铂组肿瘤内注射奥沙利铂（30 mg／kg），联合组肿瘤内注射莪术醇（100 mg／kg）与奥沙利铂（30 mg／kg），每4 d 1次，共4次。观察各组肿瘤生长情况，MTT法测算各组肿瘤组织中的瘤细胞存活率，荧光定量PCR检测各组肿瘤组织Bcl-2、Caspase-3 mRNA，免疫组化法检测各组肿瘤组织Bcl-2、Caspase-3蛋白。结果与对照组相比，联合组、莪术醇组、奥沙利铂组肿瘤体积小、重量低、瘤细胞存活率低、Caspase-3表达高、Bcl-2表达低，且联合组变化更明显（ P均＜0．05）。结论莪术醇联合奥沙利铂肿瘤内注射可抑制裸鼠胃癌移植瘤生长并抑制瘤细胞增殖，这可能与上调Caspase-3、下调Bcl-2表达有关。
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西格列汀对2型糖尿病小鼠胰岛β细胞自噬相关因子表达的影响
目的：观察西格列汀对2型糖尿病小鼠胰岛β细胞自噬相关因子Atg3、Atg12与Beclin1表达的影响，探讨其治疗机制。方法将30只9周龄雄性db／db小鼠随机平均分为2组，DT组灌胃给予西格列汀（80 mg／kg）， DC组给予等量饮用水，每日给药1次，治疗5周。测定血糖、血清胰岛素与组织胰岛素水平；免疫荧光技术观察胰岛形态结构；实时荧光定量PCR法分析胰岛β细胞Atg3、Atg12与Beclin1 mRNA的表达；免疫组织化学方法测定胰岛β细胞Beclin1蛋白表达；并盒分析胰岛β细胞Caspase3活性改变。结果西格列汀治疗5周后，与DC组比较， DT组小鼠血糖降低（P＜0．01），血清胰岛素及组织胰岛素水平增加（P均＜0．01）。 DC组小鼠胰岛α细胞散布于胰岛中，所占比例大；DT组小鼠胰岛β细胞居于胰岛中央部，所占比例大。与DC组相比，DT组小鼠胰岛β细胞Caspase 3活性及Atg12、Atg3、Beclin1 mRNA相对表达降低（P均＜0．01），Beclin1蛋白表达减少（P＜0．01）。结论西格列汀通过下调2型糖尿病小鼠胰岛β细胞自噬相关因子Atg12、Atg3与Beclin1的表达，抑制胰岛β细胞凋亡，改善胰岛的结构与β细胞功能。
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榄香烯乳对乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7凋亡的影响
目的 观察中成药榄香烯乳对乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7凋亡的影响.方法 榄香烯乳作用于MDA-MB-231及MCF-7细胞作为处理组,同时设立空白对照组；倒置显微镜观察细胞形态,结晶紫实验检测不同浓度榄香烯乳作用下的细胞生长速率,实时定量PCR检测MDA-MB-231细胞凋亡指标Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达.结果 与空白对照组比较,榄香烯乳达到一定浓度时,能够有效地抑制MDA-MB-231及MCF-7细胞的生长速率(P＜0.05),且呈剂量依赖性；与空白对照组比较,浓度为40 μg/mL时,细胞的形态呈现典型的凋亡改变；空白对照组MDA-MB-231细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达量(× 107拷贝量)分别为56.7±15.7、140.3±25.6、13.1±4.4,经榄香烯乳处理48 h后分别为812.2±222.6、327.8±50.1、5.7±1.5,与空白对照组比较,经榄香烯乳处理后Caspase-3、Caspase-8表达量升高(P均＜0.05),Caspase-9含量无明显变化(P＞0.05).结论 榄香烯乳可以有效抑制乳腺癌细胞生长的能力,并可诱导细胞凋亡.
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刺参酸性黏多糖对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法 采用肝癌细胞悬液接种法制备荷瘤小鼠50只,随机分为阴性对照组、阳性对照组和SJAMP低、中、高剂量组各10只,分别腹腔注射生理盐水、5-氟尿嘧啶和6.25、12.5、25 mg/kg的SJAMP各0.2 mL,连续12 d.处死小鼠,剥离肿瘤称取质量,计算抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织病理改变;免疫组化法检测肿瘤组织中的促凋亡基因Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白和抑制凋亡基因Survivin、NF-κB.结果 SJAMP高剂量组抑瘤率高于中、低剂量组(P均<0.05),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).病理检查显示,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌细胞排列稀疏,核分裂减少,坏死区明显增多.与阴性对照组比较,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌组织中Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白表达升高,Survivin、NF-κB表达降低(P均<0.05).结论 中、高剂量刺参酸性黏多糖能够上调促凋亡基因、下调抑制凋亡基因的表达,从而抑制荷瘤小鼠瘤体的生长.
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雌激素对兔缺血再灌注损伤视网膜神经节细胞凋亡的影响及其机制探讨
目的：观察雌激素对兔缺血再灌注损伤视网膜神经节细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法55只健康纯种大耳白兔随机分为假手术组（n＝5）、缺血组（n＝25）和治疗组（n＝25）。治疗组皮下注射苯甲酸雌二醇1 mg／kg，共7 d；缺血组给予等量生理盐水皮下注射。假手术组仅进行前房穿刺，缺血组与治疗组建立缺血再灌注模型。各组于再灌注后3、6、12、24、72 h，通过TUNEL法检测视网膜组织神经节细胞凋亡，免疫组化SABC法检测视网膜组织Caspase-3。结果假手术组各时间点视网膜组织均未见神经节细胞凋亡和Caspase-3阳性表达。与缺血组比较，治疗组视网膜神经节细胞凋亡阳性细胞数、Caspase-3阳性细胞数在再灌注后各时间均降低，其中12、24、72 h有统计学差异（P均＜0．01）。结论雌激素可通过降低缺血再灌注损伤时Caspas-3表达，抑制视网膜神经节细胞凋亡，实现其对视网膜缺血再灌注损伤的治疗作用。
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连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗Caspase-3表达的影响
目的：观察连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗Caspase-3表达的影响。方法30只豚鼠随机分为对照组、顺铂组和连翘酯苷组各10只。顺铂组腹腔注射顺铂8 mg/kg，1次/d，连续7 d，建立顺铂耳毒性模型；连翘酯苷组每次注射顺铂30 min前腹腔注射连翘酯苷25．0 mg/（kg· d），对照组以生理盐水代替顺铂溶液注射，均连续7 d。实验动物被处死前，检测其畸变产物耳声发射（ DPOAE）幅值变化；分别采用Western blot、RT-PCR法检测豚鼠耳蜗组织中的Caspase-3蛋白及其mRNA。结果顺铂组DPOAE幅值明显低于对照组（ P＜0．01）；相比于顺铂组，连翘酯苷组DPOAE幅值明显升高（P＜0．05）。顺铂组豚鼠耳蜗Caspase-3蛋白与mRNA表达水平均显著高于对照组（P均＜0．01）；相比于顺铂组，连翘酯苷组Caspase-3蛋白与mRNA表达水平明显降低（P均＜0．05）。结论连翘酯苷能够通过降低Caspase-3的表达防护顺铂所致的耳蜗损伤。
关键词： 顺铂 连翘酯苷 耳毒性 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 豚鼠 -
体外再灌注血在缺血/再灌注诱导人肾小管上皮细胞凋亡模型构建中的应用
目的 观察体外循环再灌注血在缺血/再灌注(I/R)诱导人肾小管上皮细胞凋亡模型构建中的应用效果.方法 按照传统的方式对细胞进行缺血处理后,根据再灌注培养基的不同将细胞分3组:空白组不含人血清的培养基,对照组含正常人血清的培养基,实验组含体外循环再灌注血清的培养基.3组细胞均置于95％ O2、5％CO2的培养箱中培养4h.免疫细胞化学SP法检测Caspase-3蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 空白组、对照组、实验组细胞Caspase-3的积分光密度(IOD)值分别为65.46±1.28、66.81±1.29、102.97±1.50,细胞凋亡率分别为27.59％±0.80％、27.29％ ±0.97％、40.03％±1.30％;对照组、空白组与实验组比较,P均＜0.05;对照组与空白组比较无统计学差异.结论 采用体外循环再灌注血建立I/R诱导人肾小管上皮细胞凋亡模型操作简便,成功率高,稳定性良好.
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miR23a促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制
目的 研究miR23a通过JNK信号通路促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制.方法 利用脂质体转染试剂Lipo2000将mi23a转染到肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR (Real-time PCR,RT-PCR)法检测阴性对照(NC)组和转染mi23a组细胞中miR23a的表达;划痕实验检测肺癌细胞株A549的迁移能力;Western blotting法检测JNK通路中p-JNK水平的变化;RT-PCR法和Western blotting检测肺癌细胞株A549转染miR23a后细胞凋亡蛋白Caspase-3的mRNA和蛋白质水平的表达.结果 Real-time PCR结果显示,转染miR23a组其miR23a表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P＜0.05),A549细胞转染miR23a后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR23a组中p-JNK和Caspase-3的水平均有明显升高(P＜0.05).结论 miR23a可通过活化JNK信号通路,进而促进肺癌A549细胞中细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达,从而抑制其肿瘤细胞的增殖和扩散能力.
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黄芩素对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用
目的:研究黄芩素对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用.方法:在培养HepG2细胞的96孔板上加入药物,使黄芩素的终浓度分别为0、20、40、80、160 μmol/L(即对照组与黄芩素①、②、③、④组).采用MTT法检测细胞的存活情况,分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8、9的活性,并检测丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果:与对照组比较,培养24、48、72 h时,黄芩素②、③、④组各时间点的吸光度降低;培养24h时,Caspase-3、8、9活性增强,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性减弱,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:黄芩素对HepG2细胞生长具有抑制作用,其机制与增强Caspase-3、8、9活性,增加MDA含量,减弱SOD、GSH-Px活性有关.
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抑制FAK的表达对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响
目的：观察在人胃癌细胞SGC-7901中抑制粘着斑激酶（ focal adhesion kinase，FAK）的表达对其凋亡的影响。方法：利用RNA干扰技术，将PGPU6/GFP/shNC（shNC）和PGPU6/GFP/FAK-299（shRNA-299）瞬时转染至SGC-7901细胞中，Real-time PCR与Western blot检测干扰效果，MTT与流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡情况，Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果：shRNA-299可以明显抑制FAK的表达水平，MTT显示与对照组相比，shRNA-299处理组SGC-7901细胞存活率明显下降到（31.5±2.3）%，并具有统计学意义（ P﹤0.05）。流式细胞仪检测细胞凋亡显示，总凋亡率与对照组相比，shRNA-299处理组SGC-7901细胞凋亡率明显增加到（17.4±1.5）%，具有统计学意义（ P﹤0.05）。Westen blot分析发现，shRNA-299处理组可以明显提高p53、Bax蛋白水平、激活的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（ cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase）-3、caspase-9、PARP蛋白水平，而Bcl-2的蛋白水平下降。结论：shRNA-299可以明确的抑制SGC-7901细胞FAK的表达水平，并激活细胞凋亡相关的蛋白，导致细胞凋亡。
关键词： 胃癌 粘着斑激酶 凋亡 RNA干扰 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶
