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半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在糖尿病心肌病大鼠心肌中的表达及葛根素的干预研究
目的 观察内质网应激(ERS)分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase 12)在糖尿病心肌病(DCM)大鼠的表达及葛根素的干预作用,探讨ERS在DCM中的作用和机制.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.40只Wistar大鼠分为正常对照组(C组)、高脂高糖组(H组)、糖尿病模型组(M组)及葛根素组80 mg·kg-1·d-1给药5周(T组),每组10只,分批处死.15、20周龄大鼠取血测空腹血糖、胰岛素及计算胰岛素抵抗指数;取心肌组织检测肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平,并行苏木精.伊红染色观察形态学变化.琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形条带,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Caspase 12 mRNA的表达.结果 H、M组的空腹血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数都显著高于C组(P均< 0.01),且M组显著高于H组(P<0.01).在葛根素给药5周后,T组空腹血糖及胰岛素抵抗指数均呈显著下降(P均<0.01).M组心肌纤维肥大、走行较为紊乱,出现核固缩、裂解及丢失现象,心肌细胞变性、坏死,横纹肌消失;T组心肌纤维轻度肥大,微血管管壁、管腔均正常.M组和T组均出现了DNA梯形条带,T组较M组条带不明显.M组Caspase 12 mRNA表达较C组、T组均显著性升高(P均<0.05).结论 DCM可能通过ERS而活化Caspase 12来触发心肌细胞凋亡.葛根素能通过减轻ERS抑制心肌细胞凋亡,对DCM心肌有保护作用.
关键词： 内质网应激 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 糖尿病性心脏病 葛根素 -
内质网应激凋亡通路中Caspase12激活介导的肝纤维化大鼠肝细胞凋亡
目的:观察内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活性变化,探讨其在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的可能作用.方法:将Wistar大鼠随机分为正常4wk组、正常8wk组、肝纤维化4wk组和肝纤维化8wk组.皮下注射40％CCl4花生油溶液诱导肝纤维化形成,剂量0.3mL/100g体质量,2次/wk.肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12基因水平的表达通过实时荧光定量PCR技术测定;GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达采用蛋白质免疫印迹法检测;肝细胞凋亡通过TUNEL法测定.结果:肝纤维化4wk组大鼠肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12 mRNA表达显著高于正常4wk组大鼠;肝纤维化8wk时,肝组织中GRP78、GRP94、Caspase12 mRNA的表达较正常8wk组显著增加.通过Western blot对各指标蛋白水平的检测发现,肝纤维化4wk时大鼠肝脏中GRP78、GRP94、Procaspasel2及活性Caspase12蛋白的表达较正常4wk组大鼠显著增加;肝纤维化8wk时,肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12、活性Caspase12蛋白的表达仍保持在高水平,但与肝纤维化4wk时比较无显著差异.细胞凋亡检测发现,与正常组大鼠比较,肝纤维化4wk及8wk组大鼠肝细胞凋亡均明显升高.结论:内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活化可能介导了肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的发生.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 内质网应激 细胞凋亡 肝纤维化 -
阿托伐他汀对大鼠冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡及caspase-12活化的影响及意义
目的 探讨阿托伐他汀对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后心肌细胞凋亡及caspase-12活化的影响及意义.方法 选择存活的60只大鼠随机分为假手术组、CME组、灌胃对照组、他汀组,每组15只;后3组经左心室注入微栓塞球构建CME模型;他汀组术前7 d给予阿托伐他汀10 mg/kg灌胃,灌胃对照组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,连续7 d.各组术后6 h分别应用心脏超声检测心功能指标;TUNEL检测心肌细胞凋亡;免疫印迹法检测活化caspase-3及caspase-12的表达.结果 与假手术组比较,CME组LVEF显著下降,左心室短轴缩短率和心排血量下降及左心室舒张末内径增加(P<0.05);与CME组比较,他汀组心功能明显改善(P<0.05).与假手术组比较,CME组心肌细胞凋亡率、活化caspase-3、caspase-12含量显著增加(P<0.05),与CME组比较,他汀组心肌细胞凋亡率、活化caspase-3、caspase-12含量显著减少(P<0.05).结论 阿托伐他汀预处理治疗,可改善心功能,其机制可能是,阻断心肌细胞凋亡caspase-12介导的内质网应激凋亡途径的激活.
关键词： 降血脂药 冠状动脉血栓形成 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 内质网 -
低血糖对急性心肌梗死后内质网应激介导心肌细胞凋亡的作用和机制研究
目的 通过体内大鼠模型观察低血糖水平对内质网应激(ERS)感受蛋白及凋亡信号分子表达的影响.方法 将Wister大鼠40只中随机选20只结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死(AMI)模型;另20只为假手术,再随机分为正常血糖假手术组(SN组)、正常血糖AMI组(MN组)、低血糖假手术组(SL组)、低血糖AMI组(ML组),每组10只.建立术前低血糖模型,术后24 h处死取材,评估大鼠心肌细胞凋亡程度、检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/BIP)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和C/EBP同源蛋白(CHOP)及Caspase-12的表达情况.结果 ML组及MN组心肌细胞凋亡指数[(29.36±2.15)％0、(20.27±2.80)％]明显高于SN组和SL组[(1.82±0.83)％、(1.97±0.96)％,P＜0.05]; MN组和ML组GRP78、PERK、CHOP及Caspase-12的表达明显高于SN组和SL组(P＜0.01);MN组与ML组PERK表达比较,无统计学差异(P＞0.05).结论 AMI前低血糖水平激活了ERS诱导的细胞凋亡通路;内质网特异性标记蛋白表达与心肌细胞凋亡变化规律一致,ERS通路可能参与了大鼠AMI后心肌细胞凋亡的调控.
关键词： 低血糖症 心肌梗死 内质网 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 -
姜黄素抑制大鼠脑缺血再灌注损伤内质网应激的研究
目的 观察生长停滞及DNA损伤诱导基因153 (GADD153)和Caspase-12在脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中的动态改变及姜黄素预处理对其影响.方法 76只健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组3只,假手术组3只.另70只采用线栓法制作脑缺血再灌注模型,且将成功制模的54只大鼠又随机分为对照组27只,姜黄素组27只;分别于脑缺血2h再灌注12、24、72 h处理观察,每个时间点9只.采用免疫组织化学染色、免疫荧光双标染色、Western blot检测脑组织GADD153和Caspase-12表达.结果 2组再灌注12 h GADD153表达增加,至72 h仍明显增高;Caspase-12表达24 h达高峰.免疫荧光双标染色显示,再灌注12h可见少量双标阳性细胞数,24 h双标阳性细胞数明显增多,72 h双标阳性细胞数减少.与对照组比较,姜黄素组再灌注24和72 hGADD153[(3.75±0.37) vs (4.68±0.56),(3.24±0.32)vs (4.92±0.83)]和Caspase-12[(3.25±0.15) vs (5.79±0.56),(3.04±0.22) vs (5.49±0.53)]表达明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论 GADD153和Caspase-12在脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织表达明显增加,姜黄素可减少两者表达,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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尤瑞克林对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12表达的影响
目的 探讨尤瑞克林(urokallikrein)对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase-12,caspase-12)表达的影响及其对糖尿病合并急性脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护机制.方法 将82只雄性SD大鼠随机分为假手术组(10只)、缺血组(36只)和尤瑞克林组(36只).以无菌链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,采用Zea-Longa法制作大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,比较各组大鼠脑缺血2 h再灌注12、24、48 h神经功能评分 、缺血半暗带细胞凋亡数目及caspase-12表达的差异.结果 与假手术组比较,缺血组和尤瑞克林组大鼠脑缺血再灌注12、24、48 h神经功能评分 、细胞凋亡数及caspase-12表达水平均升高(均P<0.05),而尤瑞克林组神经功能评分 、细胞凋亡数及caspase-12表达水平低于缺血组(均P<0.05).结论 尤瑞克林对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用可能通过下调caspase-12表达而实现.
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大鼠癫痫持续状态后肌醇酶1α介导的内质网应激相关凋亡分子在海马中的表达
目的 探讨肌醇酶1α(inositol requiring enzyme 1α,IRE 1α)介导的内质网应激相关凋亡分子在大鼠癫痫持续状态(SE)后海马神经元损伤中的作用.方法 Wistar大鼠按随机数字表随机分为对照组、SE组,SE组根据不同时间点又分为3、6、12、24、48 h组.免疫荧光法观察葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulating protein 78 kd,GRP78)及磷酸化-IRE1α(p-IRE1α)在各组大鼠海马CA3区中的表达；蛋白质印迹检测磷酸化c-Jun N端激酶(p-JNK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase 12)的表达变化；荧光TUNEL观察各组大鼠海马CA3区神经元凋亡变化.结果 免疫荧光结果显示,对照组仅见少量GRP78、p-IRE1α阳性神经元(分别为6.90％±0.96％,4.60％±1.12％),SE各亚组GRP78、p-IRE1α阳性神经元均增多,SE后12h达高峰(GRP78:87.45％±3.63％,F=356.82,P＜0.05；p-IRE1α:86.90％±3.82％,F=300.80,P＜0.05)；蛋白质印迹结果显示,与对照组相比,p-JNK、caspasel2在SE各亚组表达均增多,SE后12 h达高峰；同时TUNEL染色在SE各亚组均能检测到海马神经元凋亡,以SE后12h凋共严重,与p-IRE1α、p-JNK、caspase12表达变化一致.结论 大鼠SE后诱发了内质网应激,表现为内质网应激标志分子GRP78表达增加；IRE1α可能通过磷酸化JNK和活化caspase12参与了SE后神经元凋亡损伤.
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Caspase 12在强噪声诱导下豚鼠耳蜗细胞凋亡中的作用
目的 探讨caspase 12在强噪声诱导的豚鼠耳蜗细胞凋亡中的作用.方法 选用健康雄性白色豚鼠32只,随机数字表法分为4组,将实验组动物暴露于声压级120 dB、4 kHz窄带噪声环境4 h.分别对健康对照组及噪声刺激后第1、4、14天组豚鼠测试听性脑干反应(ABR).每组取4只豚鼠耳蜗作石蜡切片,另外4只豚鼠提取耳蜗总蛋白.通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(ternial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeing,TUNEL)检测耳蜗凋亡细胞,免疫组化及蛋白质印迹(Western blot)法检测Bip/GRP78、caspa8e 12蛋白的表达.结果 透射电镜观察到实验组第1天耳蜗外毛细胞、螺旋神经节细胞出现凋亡的特征性改变.实验组耳蜗Corti器、侧壁的血管纹和螺旋神经节存在TUNEL阳性细胞,第1天组多;对照组未见阳性细胞.免疫组化、Western blot检测实验组Bip/GRP78蛋白明显高于对照组,且在第1、4、14天都维持在比较高的水平;caspase 12蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,第1、4天达到高峰,第14天表达明显下降,但仍维持较高水平.结论 强噪声可以诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡,caspase 12活化引起内质网应激反应性凋亡通道可能是此过程的信号途径之一.
关键词： 噪声 耳蜗 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 豚鼠 -
急性心肌梗死大鼠心肌caspase-12表达变化的研究
目的 观察大鼠急性心肌梗死后不同时间点caspase-12表达的变化,探讨内质网应激途径在心肌梗死后心肌细胞凋亡中的作用.方法 80只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(n=40)和心肌梗死组(n=40),每组再进一步分为1、6、12、24h亚组(n=10).心肌梗死组结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎.分别于结扎后1、6、12、24h采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blotting检测caspase-12的表达.结果 TUNEL结果显示:假手术1、6、12、24h亚组间心肌细胞凋亡指数(AJ)(分别为1.40%±0.96%、1.47%±0.85%、1.56%±0.93%、1.72%±1.13%)无统计学差异(P＞0.05),心肌梗死后1、6、12、24h亚组AI(分别为6.20%±2.15%、10.87%±2.84%、20.82%±3.80%、45.44%±9.22%)与假手术组比较明显升高,且心肌梗死各亚组间差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示:假手术1、6、12、24h亚组caspase-12蛋白的表达(分别为0.056±0.011、0.063±0.013、0.068±0.013、0.075±0.017)无统计学差异(P＞0.05),心肌梗死后1、6、12、24h亚组caspase-12蛋白的表达(分别为0.085±0.008、0.116±0.004、0.150±0.013、0.219±0.018)与假手术组比较均明显升高,且随心肌梗死延长表达逐渐增加(P＜0.05).Caspase-12表达与细胞凋亡变化规律一致.结论 心肌梗死后凋亡细胞数和caspase-12蛋白表达逐渐增强,提示内质网通路可能参与了心肌梗死后心肌细胞凋亡的调控.
关键词： 内质网 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 细胞凋亡 心肌梗死 -
caspase-12-siRNA预处理对小鼠肺缺血再灌注损伤的影响
目的 评价caspase-12靶向小干扰RNA(caspase-12-siRNA)预处理对小鼠肺缺血再灌注损伤的影响.方法 C57BL/6J雄性小鼠40只,6～8周龄,体重16～24 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、阴性对照组(NC组)和caspase-12-siRNA预处理组(siRNA组).IR组、NC组和siRNA组采用夹闭左肺门30 min,再灌注3h的方法制备肺缺血再灌注损伤模型.造模前48 h时,NC组滴鼻法给予阴性对照siRNA 20μg,siRNA组滴鼻法给予caspase-12-siRNA 20 μg,总体积50μl.再灌注3h时,处死小鼠,取肺组织,测定肺湿重/干重比值(W/D比值)和肺水含量,光镜下观察病理学结果,计算肺泡损伤定量评估指数(QEI)和细胞凋亡指数,电镜下观察超微结构.结果 与S组比较,IR组和NC组肺W/D比值、肺含水量、肺泡损伤QEI和细胞凋亡指数均升高,siRNA组肺泡损伤QEI和细胞凋亡指数升高(P＜0.05)；与IR组和NC组比较,siRNA组肺W/D比值、肺含水量、肺泡损伤QEI和细胞凋亡指数均降低(P＜0.05),病理学损伤减轻；IR组和NC组上述各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 caspase-12-siRNA预处理可减轻小鼠肺缺血再灌注损伤.
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右美托咪定预先给药对单肺通气大鼠肺组织caspase-12表达的影响
目的 探讨右美托咪定预先给药对单肺通气大鼠肺组织caspase-12表达的影响.方法 清洁级SD雄性大鼠30只,6～8周龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=10):双肺通气组(TLV组)、单肺通气组(OLV组)和右美托咪定组(Dex组).TLV组行双肺通气2h.OLV组和Dex组均行右侧单肺通气1.5 h、双肺通气0.5 h.Dex组于单肺通气前60 min静脉输注右美托咪定3.0 μg·kg-1·h-1,60 min内输注完毕;OLV组和TLV组以等容量生理盐水替代.OLV组和Dex组于单肺通气45 min和双肺通气15 min时、TLV组于双肺通气15 min时记录气道峰压(Ppeak)和气道压(Paw).随后处死大鼠并取左肺组织,测定肺组织湿重/干重(W/D)比值,HE染色法,观察肺组织病理学结果,透射电镜观察肺组织超微结构,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法测定caspase-12 mRNA表达水平,Western blot法测定caspase-12表达水平.结果 与单肺通气45 min时比较,OLV组和Dex组双肺通气15 min时Ppeak和Paw降低(P＜0.05).与TLV组比较,OLV组和Dex组肺组织W/D比值和AI升高,caspase-12及其mRNA表达上调(P＜0.01).与OLV组比较,Dex组肺组织W/D比值和AI降低,caspase-12及其mRNA表达下调(P＜0.01).Dex组肺组织病理学损伤较OLV组减轻.结论 右美托咪定预先给药减轻单肺通气大鼠急性肺损伤的机制与下调caspase-12表达,抑制细胞凋亡有关.
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衣霉素联合奥沙利铂对人口腔癌KB细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨衣霉素(tunicamycin,TM)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人口腔癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制.方法 MTT法检测药物对KB细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对KB细胞增殖的影响;碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染流式细胞仪检测KB细胞凋亡;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性变化;Western blot检测:Caspase-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达.结果 不同浓度衣霉素和(或)奥沙利铂对人口腔癌KB细胞具有增殖抑制作用,0.125 μmol·L-1衣霉素处理人口腔癌KB细胞的24、48、72 h后细胞的存活率分别为90.37%、89.44%、88.91%.0.125 μmol·L-1衣霉素与1 μmol·L-1奥沙利铂联合使用对人口腔癌KB细胞24、48、72 h的存活率低于单用衣霉素、奥沙利铂组,分别为50.78%、37.77%、23.24%;0.25 μmol·L-1衣霉素可增强奥沙利铂抑制人口腔癌细胞KB的集落克隆形成的作用.0.5 μmol·L-1衣霉素诱导KB细胞48 h的凋亡率为8.3%.0.5 μmol·L-1衣霉素与1 μmol·L-1奥沙利铂联合刺激人口腔癌细胞KB 48 h 的凋亡率为50.3%,高于奥沙利铂本身诱导的凋亡率24.6%.衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组Caspase-3的活性及表达.结论 衣霉素具有增强L-OPH抑制人口腔癌细胞增殖的作用,并增强奥沙利铂诱导人口腔癌细胞的凋亡,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加Caspase-3的活性.
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羟基酪醇保护造影剂诱导的肾脏损伤并抑制内质网应激
目的 研究造影剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)的表达情况,探讨内质网应激在造影剂肾病发病中的作用及羟基酪醇的干预作用.方法 84只大鼠随机分为3组:对照组(n=28)、模型组(n=28)和羟基酪醇干预组(n=28).分别于造模后12 h、24 h、48 h、72 h处死部分大鼠,检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);ELISA法检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;HE染色观察肾脏病理改变;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测肾组织GRP78 mRNA及Caspase-12mRNA的表达;免疫组化和Western印迹法检测各组大鼠肾组织GRP78及Caspase-12蛋白的表达.结果 对照组大鼠肾组织无明显病理损伤,GRP78、Caspase-12在mRNA水平及蛋白水平均无明显表达.与对照组相比,模型组大鼠肾组织病理损伤明显,细胞凋亡严重,且以上指标均显著升高(P＜0.05).羟基酪醇干预组大鼠肾组织病理损伤、细胞凋亡较模型组减轻,且GRP78、Caspase-12在mRNA水平及蛋白水平表达均较模型组明显降低(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05).结论 GRP78及Caspase-12介导的内质网应激可能参与大鼠造影剂肾病的发生发展;羟基酪醇在造影剂诱导的肾脏损伤中发挥保护作用,这可能与其减轻内质网应激有关.
关键词： 造影剂 内质网应激 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 葡萄糖调节蛋白78 羟基酪醇 -
血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体与caspase-12致糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡的关系
目的 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)自身抗体(AT1receptor autoantibody,AT1-AA)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)致糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏细胞凋亡的关系.方法 建立DN大鼠模型,ELISA法测定血清AT1-AA,根据AT1-AA结果随机选择8只AT1-AA阳性和4只AT1-AA阴性DN大鼠纳入DN组(n=12),同时选择正常大鼠纳入对照组(NC组,n=6).TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;实时荧光定量PCR法测定内质网应激(ERS)标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和凋亡蛋白caspase-12 mRNA的表达;Western印迹法检测DN大鼠肾组织GRP78及caspase-12蛋白表达.结果 DN组大鼠肾脏细胞凋亡率显著高于NC组(P＜0.01),其中AT1-AA阳性DN大鼠肾脏细胞凋亡率显著高于AT1-AA阴性DN大鼠[(20.05±1.71)％比(13.24±4.93)％,P＜ 0.01].GRP78和caspase-12mRNA在DN组大鼠肾组织中的表达均显著高于NC组(均P＜ 0.01),且其表达在AT1-AA阳性DN大鼠较在AT1-AA阴性DN大鼠更为明显(均P＜ 0.05).同时,GRP78和caspase-12蛋白表达变化与其相应mRNA表达变化一致.结论 AT1-AA能诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并激活其特有的caspase-12凋亡信号通路促进肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能.
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百草枯致大鼠肺纤维化肺组织内质网相关凋亡基因Caspase-12的表达
目的 观察内质网相关凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)在百草枯诱导肺纤维化模型大鼠肺组织中的表达.方法 30只Spragne-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、14 d模型组和28 d模型组.采用百草枯灌胃法复制肺纤维化模型.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺内Caspase-12 mRNA表达,免疫组化检测其蛋白表达.HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度.结果 HE和Masson染色结果证实成功复制肺纤维化模型.模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重(P＜0.01).与对照组比较,Caspase-12表达在14 d模型组中明显升高(P＜0.01),在28 d模型组中更高(P＜0.01).结论 百草枯中毒大鼠肺内质网相关凋亡基因Caspase-12表达增高,提示内质网应激在百草枯中毒引起的肺纤维化中发挥重要作用.
关键词： 百草枯 肺纤维化 内质网应激 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 -
脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及caspase-12表达变化
目的 研究脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达变化之间的关系,探讨CSCI后脱髓鞘病变机制.方法 成年SD大鼠75只,按随机数字表法分为5组:正常组、对照组、压迫1d组、3d组、7d组,每组15只.采用自行设计制作的脊髓压迫模型,通过电镜和TUNEL染色、免疫荧光双标分别检测各组CSCI后神经纤维脱髓鞘的超微结构以及少突胶质细胞凋亡情况;运用免疫印迹技术检测与细胞凋亡有关的caspase-12表达.结果 CSCI后神经纤维出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长而逐渐加重;脊髓损伤后出现少突胶质细胞凋亡,压迫7d组与正常组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).caspase-12表达也随压迫时间延长而上调.结论 caspase-12介导了少突胶质细胞凋亡,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一.
关键词： 脊髓损伤 脱髓鞘疾病 少突神经胶质 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 细胞凋亡 -
对比剂肾病大鼠肾脏组织caspase-12表达及意义
目的 研究对比剂肾病大鼠肾脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达情况,探讨细胞凋亡和内质网应激在对比剂肾病发生发展中的作用.方法 将84只大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)和模型组(C组),各28只.C组大鼠经尾静脉先后注射吲哚美辛(INDO)、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)和760 g/L泛影葡胺建立对比剂肾病大鼠模型;B组注射等量的INDO+ L-NAME+生理盐水;A组注射等量磷酸盐缓冲液.各组分别于造模后12、24、48、72 h处死大鼠,取血和肾组织,测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),苏木精-伊红染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western-blot检测肾组织caspase-12蛋白表达,TUNEL染色检测肾脏细胞凋亡.结果 A组和B组大鼠不同时间点血BUN、Scr及caspase-12含量始终较低,肾组织无明显病理损伤和细胞凋亡,差异无统计学意义(P＞0.05);同一时间点,C组血BUN、Scr含量较B组明显升高,差异有统计学意义(F=121.40～1 596.17,q=4.66～69.99,P＜0.05).相同时间点,与B组相比,C组大鼠病理损伤较严重,肾组织中caspase-12表达明显升高,细胞凋亡明显,差异均有统计学意义(F=421.75～557.32,q=3.72～41.44,P＜0.05).结论 caspase-12途径诱导的细胞凋亡可能参与对比剂肾病的发生发展,内质网应激可能通过增加caspase-12的表达参与对比剂肾病的发生.
关键词： 对比剂肾病 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 内质网应激
