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CD138和乙酰化肝素酶在肝细胞癌中表达的组织芯片研究
目的探讨人肝细胞癌中CD138和乙酰化肝素酶的表达水平及其与肝细胞癌发生、发展、转移和复发的关系.方法运用组织芯片技术,通过免疫组织化学EnVision法研究197例肝细胞癌、癌旁肝组织及其中66例转移病灶中CD138和乙酰化肝素酶的表达水平.48例获得4～72个月随访.结果 (1)CD138的表达率在肝细胞癌和癌旁肝组织中分别为48.7%(96/197)和65.0%(128/197,P<0.05) ,在早期和中晚期肝细胞癌中分别为61.7%(29/47)和44.7%(67/150,P<0.05),在有和无转移的中晚期肝细胞癌组中分别为33.3%(22/66)和53.6%(45/84, P<0.05), 在1年之内和1年之上复发组中分别为23.3%(7/30)和61.1%(11/18, P<0.05);(2)乙酰化肝素酶的阳性表达率在肝细胞癌和癌旁肝组织中分别为35.5%(70/197)和12.7%(25/197, P<0.05),在早期和中晚期肝细胞癌中分别为29.8%(14/47)和37.3%(56/150,P>0.05),在伴随和不伴转移的肝细胞癌组织中48.5%(32/66)和28.6%(24/84,P<0.05) ,在1年之内和1年之上复发组中分别为50.0%(15/30)和44.4%(8/18,P>0.05);(3) 66例伴随转移的肝细胞癌组织中,CD138在乙酰化肝素酶阴性组中的高表达率高于阳性组(P<0.05).结论 (1)CD138在肝细胞癌组织中的低表达与其发生、发展、转移和复发密切相关,与分级、HBV感染及血清甲胎球蛋白值无关;(2)CD138蛋白低表达与乙酰化肝素酶高表达参与肝细胞癌的转移过程.
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肝素酶和碱性成纤维细胞生长因子与非小细胞肺癌转移和预后的关系
目的探讨肝素酶(heparanase)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达的临床意义及其与肺癌转移和预后的关系.方法采用免疫组织化学、原位杂交和Western blot方法,检测115例人NSCLC石蜡切片和45例新鲜肺癌及对应癌旁正常组织中肝素酶和bFGF的表达情况.采用χ2检验、t检验、生存曲线和Cox比例风险回归等方法分析肝素酶和bFGF分别表达及共表达的意义.结果免疫组织化学染色证实肝素酶(91/115)和bFGF(89/115)主要表达在癌细胞质和(或)细胞膜中,在正常肺泡上皮和支气管上皮中则呈阴性表达.Western blot也证实肝素酶在肺癌中的表达明显增高(P＝0.041).统计分析结果显示:肝素酶和bFGF的表达具有明显的一致性(P＝0.000 1),二者单独表达和共表达均与肺癌的分期、血管侵袭、淋巴结转移、微血管密度和预后有关,其中,二者共表达时与分期和微血管密度的相关性更显著;另外,bFGF还与肺癌的分化程度有关.多因素分析结果显示,肺癌的分化程度、血管浸润、淋巴结转移和bFGF 的表达可以作为判断肺癌预后的危险因素,但肝素酶不是影响预后的独立因素.结论肝素酶和bFGF均与肺癌的转移、血管生成和预后密切相关.
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RNA干扰抑制乙酰肝素酶对肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响
目的 探讨抑制乙酰肝素酶表达对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 构建靶向人乙酰肝素酶基因短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达质粒(pshRNA-Hpa),用脂质体将其转入A549细胞,建立稳定转染细胞株系,经逆转录.PCR和Western blot法检测转染效率后,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验和流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI双染法)检测其对A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.采用Western blot法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB/Akt-Ser473)的表达.结果 转染pshRNA-Hpa的A549细胞乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达明显低于未处理A549细胞,抑制率分别为54.09%和48.26%,细胞增殖速度减缓,侵袭能力降低,流式细胞术显示早期细胞凋亡率达(12.53±0.34)%,较空白对照组、空载体转染细胞组和阴性对照组明显增加(P＜0.01).同阴性对照质粒相比,转染pshRNA-Hpa的A549细胞Akt-Ser473的磷酸化水平降低52.15%.结论 靶向乙酰肝素酶重组shRNA质粒pshRNA-Hpa能有效抑制A549细胞乙酰肝素酶的表达,并可能通过下调磷酸化蛋白激酶B途径抑制细胞的增殖侵袭、促进细胞的凋亡.
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乙酰肝素酶mRNA在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征的关系.方法 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测HPA mRNA在48例NSCLC癌组织、10例癌旁正常肺组织以及10例肺良性疾病肺组织中的表达水平.结果 HPA mRNA在NSCLC组织平均表达水平(8.244±5.314)明显高于癌旁(1.043±0.478)及良性疾病肺组织(1.025±0.465)(P<0.01);在NSCLC组织中HPA的高表达与肿瘤病理类型(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)和临床分期(P<0.01)有关,而与患者的年龄、性别、吸烟情况以及分化程度无关.结论 HPA在人肺癌组织中的表达量较正常肺组织明显上调并与非小细胞肺癌的侵袭、浸润以及转移有关.
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肺癌组织中乙酰肝素酶与血管内皮生长因子-C的表达
目的探讨乙酰肝素酶(HPSE)和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肺癌发生、发展的关系.方法应用免疫组织化学SABC法对65例肺癌(其中鳞癌31例、腺癌25例、大细胞癌3例、小细胞癌6例)患者的肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白的表达进行测定,并与癌旁组织和正常肺组织对比,结合肺癌的临床病理学特征及预后进行分析.结果肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白的阳性率分别为51%(33/65)和57%(37/65),明显高于正常肺组织的5%(3/65)、6%(4/65)和癌旁组织9%(6/65)和12%(8/65)(x2=34.6,38.8和26.7,28.6;均P＜0.01);不同病理类型、分化程度的肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性率差异均无显著性(X2=0.39和0.41,0.45和0.04,均P＞0.05);Ⅲ、Ⅳ期患者肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性率均为95%(21/22),明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者的28%(12/43)和37%(16/43)(x2=26.6和20.1,P＜0.01);生存3年或以下的肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性率88%(22/25)和96%(24/25)明显高于生存3年或以上者的28%(10/36)和36%(13/36)(x2=21.5和22.2,P＜0.01).结论肺癌组织中存在HPSE和VEGF-C的高表达,可能与肺癌的发生、发展有关;HPSE和VEGF-C蛋白可作为判断肺癌生物学行为和预后的参考指标.
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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对Hep-2细胞侵袭力抑制的研究
目的 探讨乙酰肝素酶(heparitinase,HPSE)反义寡核苷酸(antisense oligodexyribonucleotides,AS-ODN)对Hep-2细胞HPSE mRNA、HPSE蛋白的表达及其侵袭力的活性抑制.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE AS-ODN,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染人喉癌Hep-2细胞进行培养,采用流式细胞分析技术和逆转录一聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测Hep-2细胞HPSE蛋白及其mRNA表达的变化;以Matrigel细胞侵袭试验分别对HPSE AS-ODN对Hep-2细胞侵袭力的抑制进行检测.结果 AS-ODN各组与正常对照组和脂质体组比较及AS-ODN各组间比较HPSE mRNA和HPSE蛋白的表达及细胞侵袭力均有明显抑制作用,差异有统计学意义(P<0.01);AS-ODN在终浓度为100、200、400 nmol/L时对Hep-2细胞侵袭力的抑制率分别为60.1%、80.8%and 94.0%.结论 HPSEASON通过下调HPSEmRNA和HPSE蛋白的表达可显著抑制Hep-2细胞的侵袭力并呈剂量依赖性.
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乙酰肝素酶与鼻咽癌侵袭、转移和血管生成的相关性
目的 观察鼻咽癌组织中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的表达情况,探索其与肿瘤侵袭、转移和新生血管生成的相关性.方法 运用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组织化学染色技术检测HPAmRNA和蛋白在50例鼻咽癌和20例鼻咽正常组织中的表达情况,并结合鼻咽癌临床病理特征,分析HPA mRNA的表达与鼻咽癌侵袭、转移和微血管密度(microvessel density,MVD)之间的关系.结果 鼻咽癌组织中HPAmRNA和蛋白的阳性表达率分别为60.0%(30/50)和56.0%(28/50),鼻咽正常组织中无HPA mRNA和蛋白阳性表达者.HPA mRNA阳性表达与鼻咽癌临床分期、淋巴结和远处转移等临床病理特征有关(P<0.05).HPA mRNA阳性表达者的MVD值(43.86±4.93)显著高于阴性者(27.41±2.67,P<0.01).结论 HPA参与鼻咽癌侵袭与转移,促进鼻咽癌的新生血管生成,有望成为鼻咽癌药物治疗的靶向因子之一.
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肝素酶基因修饰的树突状细胞疫苗对胃癌细胞的免疫效应研究
目的 研究肝素酶基因修饰的树突状细胞(DC)疫苗对胃癌细胞的免疫效应,探讨肝素酶疫苗在胃癌主动免疫治疗中的可行性.方法 将含有肝素酶全长cDNA的重组肝素酶腺病毒感染人类白细胞抗原A2(HLA-A2)阳性健康志愿者外周血单个核细胞来源的DC,制备肝素酶基因修饰的DC疫苗,刺激同一来源的淋巴细胞,使其活化为肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用标准51Cr释放试验验证其对KATO-Ⅲ和SGC-7901胃癌细胞的体外免疫效应,肝素酶特异性的CTL与不同靶细胞共孵育后干扰素(IFN)-γ的释放采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法.结果 经肝素酶重组腺病毒感染后该DC中肝素酶蛋白质的表达明显升高.肝素酶特异性的CTL在各效/靶比时对HLA-A2及肝素酶均阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞都有明显的免疫杀伤活性;相反,对肝素酶阳性但HLA-A2阴性的SGC-7901胃癌细胞不具有杀伤效应,即使在高效/靶比时,其杀伤活性亦仅为11.1%±4.6%;进一步研究发现肝素酶特异性CTL对自体淋巴细胞亦不具有免疫杀伤作用,在高效/靶比时,其杀伤活性为11.4%±7.9%.同时研究还发现,肝素酶修饰的DC刺激的效应细胞与KATO-Ⅲ共孵育后,其IFN-γ的表达明显高于空病毒修饰组以及IL-2刺激组(280 pg/ml±24pg/mlvs121 pg/ml±19 pg/ml和60pg/ml±11pg/ml,P＜0.05);而经肝素酶修饰的DC刺激的特异性效应细胞与SGC-7901或自体淋巴细胞孵育后所检测的IFN-γ在各组间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 肝素酶基因修饰的DC疫苗可以诱发特异性CTL,对HLA相匹配且肝素酶阳性的胃癌细胞具有良好的免疫杀伤活性,而对自体淋巴细胞不具有免疫杀伤作用,是一种安全有效的肿瘤免疫基因治疗的靶位.
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小干扰RNA抑制胃癌细胞肝素酶表达及侵袭的实验研究
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术封闭胃癌细胞系SGC7901肝素酶表达,观察其对肿瘤细胞侵袭能力的影响.方法 体外转录合成小干扰RNA(siRNA),经脂质体转染胃癌细胞系;结合逆转录(RT)-PCR,Western印迹检测类肝素酶mRNA及蛋白质表达;通过体外侵袭实验评价肝素酶RNAi后胃癌细胞系的侵袭能力变化.结果 肝素酶siRNA分子可以特异性地抑制SGC7901细胞肝素酶mRNA,抑制率达(70±6)%;肝素酶RNAi后SGC7901细胞的侵袭抑制率达(61±36)%.结论 靶向肝素酶基因的siRNA分子能特异性抑制其蛋白表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭能力.肝素酶是促进胃癌细胞侵袭转移的关键分子,并可为抑制胃癌侵袭转移提供新策略.
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冠心病患者血清乙酰肝素酶水平及其与冠状动脉病变的相关性
乙酰肝素酶(Heparanase,HPSE)是定位于溶酶体和高尔基体的一种内切糖苷酶,能够降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖中的硫酸乙酰肝素(Heparan Sulfat,HS)链,后者是组织细胞外基质和基底膜的重要组成部分,HPSE 通过降解 HS 链参与一系列生物学反应如炎症反应、胚胎发育、血管生成、肿瘤的侵袭和转移等[1]。研究证实,HPSE 还可以通过促进平滑肌细胞增生而参与动脉粥样硬化的形成[2]。本研究通过检测冠心病患者血清 HPSE 水平并分析其与冠状动脉病变的相关性,初步探讨其在冠心病发生中的作用及其在冠心病病情判断、预后评估中的临床意义。
关键词： 冠心病 肝素裂合酶 Gensini 评分 -
肝素裂合酶在胃癌中的表达及其生物学研究
目的 本研究通过检测肝素裂合酶在胃癌组织中的表达含量,探讨肝素裂合酶表达与胃癌发展、浸润和转移的关系,为胃癌治疗提供理论依据.方法 应用免疫组织化学法(IHC)检测了86例胃癌组织、23例癌旁组织和14例正常组织中肝素裂合酶蛋白的表达.应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)的方法 定量检测50例胃癌组织、25例癌旁组织和10倒切缘正常组织中肝素裂合酶的含量.运用统计软件SPSS 11.0对数据进行统计分析.结果 应用IHC法检测86例胃癌组织、23例癌旁组织和14例切缘正常组织中肝素裂合酶阳性表达率分别为79.1%,65.2%和42.9%,三者之间差别有统计学意义(P<0.05).应用FCM法对50例胃癌组织,25例癌旁组织和10例切缘正常组织标本中的肝素裂合酶的含量进行检测,其荧光指教(fluorescence index,FI)分别为1.86±0.44,1.22±0.45,1.00±0.21.从胃癌→癌旁→正常组织,FI值明显下降,并且三者之间差别有统计学意义(P<0.01).结论 肝素裂合醇在胃癌组织的表达明显高于癌旁组织和正常胃组织,提示肝素裂合酶可能与胃癌的发展有关;肝素裂合酶表达与浸润程度、TNM分期、淋巴结转移相关,提示肝素裂合酶高表达与胃癌的分期、浸润和转移有关.
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七氟醚对小鼠肺癌细胞HP A及Fascin表达的影响
目的：评价七氟醚对小鼠肺癌细胞乙酰肝素酶（ HPA）及Fascin表达的影响。方法小鼠Lewis肺癌细胞接种于培养板，培养24 h后，采用随机数字表法分为4组（ n＝18）：对照组（ C组）、1％七氟醚组（ Sev1组）、2％七氟醚组（ Sev2组）和3％七氟醚组（ Sev3组）。 C组不接受七氟醚处理，Sev1?3组细胞分别用1％、2％和3％七氟醚处理4 h，继续培养24 h。采用Transwell法检测侵袭细胞数，细胞划痕实验检测细胞迁移率；采用Western blot法检测HPA和Fascin表达。结果与C组比较，Sev1?3组侵袭细胞数和细胞迁移率依次降低，HPA和Fascin表达依次下调（ P ＜0．05）。结论七氟醚抑制小鼠肺癌细胞转移能力的机制与下调HPA和Fascin表达有关。
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吉西他滨联合乙酰肝素酶抑制剂对胰腺癌PANC-1细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨吉西他滨(GEM)联合乙酰肝素酶抑制剂OGT2115对胰腺癌PANC-1细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 人胰腺癌PANC-1细胞于RPMI 1640培养基中培养24 h后采用随机数字表法分为4组:对照组(C组)、GEM组、OGT2115组、GEM+OGT2115组,分别通过Transwell小室细胞侵袭活性实验和细胞划痕实验检测各组PANC-1细胞侵袭和迁移的能力,通过酶联免疫吸附试验(EHSA)法检测各组乙酰肝素酶(HPA)的活性.结果 与C组比较,GEM组、OGT2115组、GEM +OGT2115组侵袭细胞数和细胞迁移率降低(P＜0.05);与GEM组和OGT2115组比较,GEM+OGT2115组侵袭细胞数和细胞迁移率降低(P＜0.05);与C组和GEM组比较,OGT2115组HPA活性降低(P＜0.05),OGT2115+GEM组HPA活性降低(P＜0.05).结论 吉西他滨联合乙酰肝素酶抑制剂可抑制胰腺癌PANC-1细胞的侵袭和迁移,OGT2115可能通过抑制HPA的活性而增强吉西他滨抗胰腺癌PANC-1细胞侵袭和迁移的能力.
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肝素酶和碱性成纤维细胞生长因子与胃癌转移和预后的关系
目的 探讨肝素酶和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在胃癌组织中表达及其与大肠癌临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组织化学方法 检测80例胃癌石蜡切片和20例癌旁正常胃黏膜中肝素酶和bFGF的表达情况,分析两者分别表达及共表达与胃癌患者年龄、性别、分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移的关系.结果 免疫组织化学染色结果 表明:80例胃癌中有49例(61%)呈肝素酶阳性表达,52例(65%)呈bFGF阳性表达,主要表达在癌细胞质和(或)细胞膜中,在正常胃黏膜上皮则呈阴性表达,肝素酶和bFGF在胃癌中表达明显增高(P＜0.05),且两者的表达具有明显的相关性(P＜0.05).两者单独表达和共表达均与胃癌的分化程度、分期、浸润深度、淋巴结转移有关,与患者年龄、性别无关.结论 肝素酶和bFGF蛋白在胃癌组织中的表达较正常胃黏膜上皮明显上调,两者单独表达和共表达与胃癌的侵袭及转移能力密切相关.
关键词： 胃肿瘤 肝素裂合酶 成纤维细胞生长因子2 -
乙酰肝素酶:一个潜在的抗肿瘤和炎症及免疫调节研究的靶点
硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)是位于细胞表面、细胞外基质及基底膜的生物大分子物质,硫酸乙酰肝素为HSPGs带阴离子的侧链.乙酰肝素酶能特异性地水解硫酸乙酰肝素为小分子片段,从而调节细胞表面和细胞外基质与HSPGs结合的各种活性因子的生物学作用,同时还可使HSPGs上结合的负电荷减少,使基底膜上电荷屏障受损.乙酰肝素酶存在于哺乳动物的多种细胞内,尤其是免疫细胞和肿瘤细胞,故在抗肿瘤和炎症及免疫调节治疗中成为目前研究的焦点.
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乙酰肝素酶和血管内皮生长因子C mRNA的表达与肺癌侵袭和转移的分子生物学
目的 研究乙酰肝素酶(HPSE)和血管内皮生长因子(VEGF)-C mRNA的表达是否与肺癌的侵袭性生长和淋巴结转移有关.方法 应用RT-PCR技术检测HPSE和VEGF-C mRNA在65例肺癌组织中的表达,并与癌旁组织和正常肺组织对比,同时结合肺癌的临床病理学特征及预后进行分析.结果 肺癌组织中HPSE和VEGF-C mRNA的阳性表达率明显高于正常肺组织和癌旁组织(P＜0.05)；不同病理类型肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05)；不同分化程度肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05)；Ⅲ期和Ⅳ期肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)；生存3年以下的肺癌组织中HPSE和VEGF-C蛋白阳性表达率明显高于生存3年以上者(P＜0.05).结论 肺癌的发生、发展可能与HPSE促血管生成和VEGF-C促淋巴管生成的协同作用有关；HPSE和VEGF-C基因表达可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的一个参考指标.
关键词： 肺肿瘤 肝素裂合酶 血管生长因子 逆转录-聚合酶链反应 -
乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂2在恶性黑素瘤的表达
目的 探讨乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2(MMP2)和金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)蛋白在恶性黑素瘤皮损中的表达及意义.方法 选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、正常皮肤组织15例,分别采用免疫组化SP法检测皮损中乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白的表达.结果 恶性黑素瘤皮损乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义(x21=21.172,P＜0.01；x22=27.805,P＜0.01).恶性黑素瘤皮损MMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义(x21=19.817,P＜ 0.01；x22=19.866,P＜ 0.01).恶性黑素瘤皮损TIMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义(x2=19.200,P＜0.01；x22=15.000,P＜0.01).结论 乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达水平明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达水平.
关键词： 黑色素瘤 肝素裂合酶 基质金属蛋白酶2 金属蛋白酶2组织抑制剂 -
反义寡核苷酸抑制人恶性黑素瘤A375细胞乙酰肝素酶mRNA及其蛋白的表达
目的 研究乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞乙酰肝素酶mRNA及其蛋白表达的影响.方法 分空白组、无关序列(N-ODN)组和反义(ASODN)组,以脂质体包埋后分别转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化法检测乙酰肝素酶mRNA及其蛋白表达的变化.结果 转染24 h后,ASODN组A375细胞乙酰肝素酶mRNA表达较对照组、N-ODN组均显著下调(P均＜0.01);转染48 h后,与对照组、N-ODN组相比,ASODN组A375细胞的乙酰肝素酶蛋白水平均显著下降(P均＜0.01).结论 乙酰肝素酶ASODN可下调A375细胞乙酰肝素酶mRNA及其蛋白的表达.
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苦参碱抑制人恶性黑素瘤A375细胞株的侵袭
目的探讨苦参碱对恶性黑素瘤细胞A375转移能力的影响及其作用机制.方法采用MTT法和膜联蛋白-V-FITC/PI双染色法分别检测不同浓度苦参碱对A375细胞增殖和凋亡的影响,半定量RT-PCR分析经苦参碱干预后A375细胞乙酰肝素酶mRNA的表达变化,细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变,基质胶侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化.结果苦参碱浓度≥0.5 mg/mL时可抑制A375细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用呈剂量依赖性;苦参碱浓度在0.125～0.5 mg/mL时,能明显下调A375细胞乙酰肝素酶mRNA的表达,并能抑制细胞的黏附、侵袭能力(P＜0.01),其抑制效应呈剂量依赖性,在不同浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论苦参碱在体外能抑制A375细胞的黏附、侵袭能力.苦参碱抗肿瘤侵袭可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡以及下调乙酰肝素酶的表达有关.
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siRNA沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响
目的 研究siRNA干扰沉默膀胱癌肝素酶基因对124细胞增殖及MMP-2表达的影响方法体外化学合成肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA),用脂质体2000转染至T24膀胱移行细胞癌细胞内,常规分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和转染实验组进行实验,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,反转录聚合酶链法(RT-PCR)检测肝素酶基因的表达,免疫细胞化学方法检测MMP-2的表达.结果 RNA干扰沉默124膀胱移行细胞癌细胞肝素酶基因后,124细胞增殖活力下降,三个不同干扰组细胞活力分别下降了(28.55±3.66)%、(27.20±3.25)%和(37.29±4.82)%.肝素酶mRNA表达下降,膀胱移行细胞癌细胞中MMP-2(明胶酶A)的表达亦明显下降(P均<0.05).结论 RNA干扰肝素酶基因后,细胞活力及肝素酶mRNA表达水平下降并且明显抑制膀胱癌细胞中MMP-2的表达.
