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缺氧预处理对颅脑损伤周围皮质神经血管单元的影响
目的：观察缺氧预处理对颅脑损伤周围皮质神经血管单元(NVU)的影响。方法108只SD雄性大鼠随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组n=6)、颅脑损伤组(TBI组n=48)、缺氧预处理+颅脑损伤组(HPCT组n=48)。免疫组化技术检测神经元核抗原(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP),IgG法测定血-脑屏障通透性变化情况。结果 TBI组和HPCT组的GFAP在伤后3 h~14 d、IgG在伤后1 h~14 d均增加,而NeuN在两组表达分别在伤后3 h~14 d、6 h~14 d减少(均P＜0.05)。HPCT组NeuN在伤后3 h~7 d均多于TBI组,GFAP在伤后6 h~1 d多于TBI组而伤后7 d少于TBI组,IgG在伤后1 h~14 d少于TBI组(P＜0.05)。结论缺氧预处理在一定时间窗内保护神经元,调整星形胶质细胞活化,降低血-脑屏障通透性,减轻随后颅脑损伤对周围皮质NVU的损伤。
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缺氧预处理对大鼠颅脑损伤后海马神经元和行为学的影响
目的：探讨缺氧预处理对创伤性颅脑损伤大鼠海马神经元活性的影响及其机制。方法将72只SD大鼠,随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组,n=6)、创伤性颅脑损伤组(TBI组,n=30)、缺氧预处理+创伤性颅脑损伤组(HPCT组,n=30)。采用改良Freeny’s法制作TBI模型,在低压氧舱内对大鼠进行缺氧预处理。伤后3 h、12 h、1 d、7 d、14 d,对四组大鼠进行神经功能评分(NSS),采用免疫组化染色检测海马CA1区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和神经元核抗原(NeuN)的表达水平。结果与对照组比较,TBI组伤后3 h~7 d MMP-9表达增加,3 h~14 d NSS评分增加而NeuN表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05)；HPCT组12 h~7 d MMP-9表达增加,3 h~14 d NSS评分增加,12 h~14 d NeuN表达减少(P＜0.05)。与TBI组比较,HPCT组3 h~7 d MMP-9表达明显减少而NeuN表达明显增加,12 h~7 d NSS评分明显减少(P＜0.05)。结论缺氧预处理能减少TBI后海马区MMP-9的表达,减轻海马神经元的损伤程度。
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缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织MMP-9表达及含水量的影响
目的 观察缺氧预处理对颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和含水量变化.方法 SD雄性大鼠108只,随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组,n=6)、TBI组(n=48)、缺氧预处理+外损组(HPCT组,n=48).采用干湿重法测定脑组织含水量,RT-qPCR、Western blotting分别测定MMP-9 mRNA及蛋白表达水平.结果 TBI组和HPCT组MMP-9 mRNA在伤后3h、6h、12h、1d、3d明显升高(P＜0.05),MMP-9蛋白表达和脑组织含水量均在伤后3h、6h、12h、1d、3d、7d明显增加(P＜0.05).HPCT组中MMP-9 mRNA在伤后3h、6h、12h、1d、3d,MMP-9蛋白和脑组织含水量在伤后6h、12h、1d、3d、7d明显低于TBI组(P＜0.05).结论 缺氧预处理能抑制颅脑损伤脑组织MMP-9表达从而减轻脑水肿,可能是缺氧预处理对颅脑损伤大鼠发挥脑保护作用的机制之一.
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缺氧预处理对创伤性脑损伤大鼠Claudin-5表达及血-脑屏障通透性的影响
目的：探讨缺氧预处理对创伤性脑损伤大鼠脑组织紧密连接蛋白Claudin-5的表达及血-脑屏障通透性的影响。方法204只大鼠随机分为创伤性脑损伤组（T组）96例，缺氧预处理后脑损伤组（H组）96例及对照组12例。T组行自由落体撞击法建立大鼠创伤性脑损伤模型，H组给予3d缺氧预处理后，同法致脑损伤，两组大鼠于伤后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7 d、14 d断头处死。采用干湿重法测脑组织含水量；Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠挫伤区周围脑组织Claudin-5 mRNA及蛋白表达变化；IgG法检测血-脑屏障通透性变化。结果 T组和H组伤后1 h Claudin-5 mRNA及蛋白表达开始降低，8~12 h降至低点，1 d开始上升，直至伤后14 d渐趋于对照组水平；其中H组各时间点Claudin-5 mRNA及蛋白表达均高于T组。T组各时间点血-脑屏障通透性及脑组织含水量均明显高于H组（P＜0.05），且两组均高于对照组（P＜0.05）。结论缺氧预处理可在创伤性脑损伤早期上调紧密连接蛋白Claudin-5的表达，维持血-脑屏障完整性，减轻脑水肿。
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缺氧预处理对大鼠创伤性颅脑损伤后内质网应激的影响
目的 探讨缺氧预处理(HPC)对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠脑皮质促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)表达、神经细胞凋亡及神经功能的影响. 方法 健康雄性SD大鼠48只按随机数字表法分为HPC组(给予HPC模型制作)和未HPC组(不做预处理),每组24只;然后进一步分别按随机数字表法分为对照组(不做任何处理)及TBI 1 d、3d、7d亚组(给予TBI模型制作并分别于相应时间点观察、取材),每组6只.大鼠在低压氧仓中进行每天3h、连续3d训练以给予HPC,采用改良的Freeny's法制作TBI模型.对各组大鼠进行改良神经功能严重程度评分(mNSS),采用qRT-PCR及Western blotting检测挫伤区周围皮质CHOPmRNA及蛋白表达,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况,采用统计学方法分析CHOP表达水平与神经细胞凋亡指数的相关性. 结果 TBI 1 d、3d、7d亚组大鼠mNSS评分、CHOP mRNA和蛋白相对表达量、神经细胞凋亡指数均较对照组明显增高,并在3d时达到高峰,差异均有统计学意义(P＜0.05);同时HPC组中TBI1d、3d、7d亚组mNSS评分、CHOP mRNA和蛋白相对表达量、神经细胞凋亡指数均明显低于未HPC组中相应亚组,差异均有统计学意义(P＜0.05).HPC组和未HPC组中TBI 1 d、3d、7d亚组CHOP表达水平与神经细胞凋亡指数呈正相关关系(r=0.957,P=0.000;r=0.966,=0.000). 结论 HPC通过下调内质网应激途径中CHOP的表达水平以减少神经细胞凋亡,从而改善神经功能.
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缺氧预处理对创伤性脑损伤大鼠SphK-1表达及血脑屏障通透性的影响
目的 探讨缺氧预处理(HPC)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织鞘氨醇激酶-1(SphK1)表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响. 方法 204只SD大鼠采用随机数字表法分TBI组(96只)、HPC组(96只)和空白对照组(CON组)(12只),其中前2组分伤后1h、4h、8h、12h、1d、3d、7d、14d8个亚组,每亚组12只.HPC组大鼠行HPC预处理3 d(-50 kPa、3 h/d)后采用Feeney自由落体打击法建立TBI模型,TBI组仅建立TBI模型.各组大鼠于相应时间点处死后RT-PCR和Western blotting检测挫伤区周围脑组织SphK-1 mRNA和蛋白的表达,免疫组化染色IgG并评分观察BBB通透性的变化. 结果 TBI组和HPC组大鼠脑组织IgG评分、SphK-1 mRNA和蛋白的表达在TBI后1h即开始升高,1d升至高点(SphK-1蛋白表达分别为0.694±0.016、0.854±0.010),伤后14d时仍高于CON组水平;与TBI组比较,伤后各个时间点HPC组大鼠脑组织IgG评分均较低,伤后1h、4h、8h、12h、1d、3d、7d挫伤区周围脑组织SphK-1 mRNA和蛋白的表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 HPC可以上调TBI大鼠脑组织SphK-1的表达,促进鞘氨醇(Sph)向1-磷酸鞘氨醇(S1P)转化,保护BBB完整性.
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缺氧预处理对颅脑损伤大鼠抗氧化应激和神经功能的影响
目的 研究缺氧预处理对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织抗氧化应激和神经功能的影响. 方法 SD雄性大鼠48只采用随机数字表法分为假手术组、缺氧预处理组、颅脑损伤组、缺氧预处理+颅脑损伤组,每组12只.采用低压氧舱预处理3 d(-50 kPa、3 h/d)进行缺氧预处理,用改良的Feeney's自由落体法制作颅脑损伤模型,伤后24h用改良的神经功能评分(mNSS)观察大鼠神经功能;免疫组化染色神经元核抗原(NeuN)检测神经元的存活;Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测脑组织核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、线粒体硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)蛋白和mRNA的表达. 结果 与假手术组、缺氧预处理组比较,颅脑损伤组、缺氧预处理+颅脑损伤组大鼠mNSS评分增高,NeuN表达降低(0.274±0.033、0.281±0.042 vs 0.124±0.014、0.150±0.019),Nrf2、TrxR2蛋白和mRNA表达增高;与颅脑损伤组比较,缺氧预处理+颅脑损伤组大鼠mNSS评分降低,NeuN表达增高,Nrf2、TrxR2蛋白和mRNA表达增高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 缺氧预处理可增加颅脑损伤后脑组织抗氧化应激的水平,并减轻神经功能缺损.
关键词： 颅脑损伤 转录因子E2相关因子2 硫氧还蛋白还原酶2 缺氧预处理 -
缺氧预处理诱导创伤性脑损伤大鼠皮层组织HIF-1α及GLUT-1表达的影响
目的 研究缺氧预处理(HPC)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠挫伤区周围皮层脑组织缺氧诱导因子-1 α(HIF-1α)及葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)表达的影响.方法 102只SD大鼠按随机数表法分为对照组(C组∶n=6)、创伤性脑损伤组(TBI组∶n=48)、缺氧预处理后创伤性脑损伤组(HPCT组∶n=48).HPCT组大鼠先置于低压氧舱行缺氧预处理(50.47 kPa,3 h/d,3 d),而后HPCT组和TBI组采用自由落体打击法建立大鼠创伤性脑损伤模型.伤后分别于1、4、8、12h和1、3、7、14d处死大鼠留取皮层脑组织标本,并分别采用RT-PCR和Westem blotting检测挫伤周围皮层HIF-1α及GLUT-1的表达情况.结果 与对照组比较,TBI组伤后4h、8h、12h、1d及3 d HIF-1α和GLUT-1的表达均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);伤后1h、7d及14 d HIF-1α和GLUT-1的表达较对照组差异无统计学意义(P>.05).HPCT组与对照组和TBI组比较,HIF-1α和GLUT-1的表达在伤后1h即开始增加,伤后4h、8h、12h、1d、3d及7d均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);伤后14 d HIF-1α和GLUT-1的表达对照组和TBI组差异无统计学意义(PP＜.05).结论 缺氧预处理可提高创伤性脑损伤后脑组织的缺氧耐受性,并通过调整脑内葡萄糖代谢通路发挥脑保护作用,其机制可能与诱导皮层脑组织HIF-1α的表达,进而上调GLUT-1 mRNA及蛋白的表达有关.
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清热化瘀方联合缺氧预处理MSCs移植对脑缺血再灌注损伤大鼠eNOS表达的影响
目的 探讨清热化瘀方联合缺氧预处理骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 将216只雄性SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、MSCs移植对照组(N-MSCs组)、 经缺氧预处理后的MSCs移植组(HP-MSCs组)、MSCs移植联合清热化瘀方组(MSCs+QRHY组)、HP-MSCs移植联合清热化瘀方组(HP-MSCs+QRHY组),每组36只.按移植后取材时间点(7,14,28 d)各组又分3个亚组,每组12只.用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,给予清热化瘀颗粒灌胃及颈内动脉移植BMSCs.分别于术后7,14,28 d对各组大鼠进行神经功能缺损评分(NSS).RT-PCR及Western blot检测大鼠缺血半暗带区eNOS mRNA及其蛋白表达变化.结果 与模型组比较,各时间点N-MSCs组神经功能评分明显减少(P<0.05),各移植组中以HP+QRHY组神经功能改善为显著(P<0.05).假手术组eNOS mRNA及其蛋白呈现低水平表达,模型组及移植组其表达较假手术组明显增加(P<0.05);各组eNOS mRNA及其蛋白的表达均于7 d达到高峰,14,28 d表达逐渐下降;同一时间点组间比较,HP-MSCs组、MSCs+QRHY组及HP-MSCs+QRHY组的表达均明显高于N-MSCs组(P<0.05),而以HP-MSCs+QRHY组增高为明显(P<0.05).结论 HP-MSCs移植能够显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠eNOS的表达,清热化瘀方能够进一步上调其表达及改善脑缺血大鼠的神经功能,发挥其神经保护作用.
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缺氧预处理 MSCs 移植对脑缺血再灌注损伤大鼠 SDF-1/CXCR4表达的影响及清热化瘀方的干预作用
目的：观察缺氧预处理骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血再灌注损伤大鼠 SDF-1/CXCR4 mRNA 和蛋白表达的影响及清热化瘀方的干预作用。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠（MCAO）模型，将216只SD 大鼠随机分为6组：假手术组（SO）、模型组（MCAO）、 MSCs 移植对照组（N-MSCs）、经 HP 处理后的 MSCs移植组（HP-MSCs）、 MSCs 移植联合清热化瘀方组（MSCs+QRHY）、 HP-MSCs 移植联合清热化瘀方组（HP+QRHY）。每组大鼠36只，每组根据取材时间点7，14，28 d 又可分为每组3个亚组，每个亚组12只大鼠。采用 qRT-PCR 和 Western blot 观察3个时间点 SDF-1/CXCR4 mRNA 及其蛋白的表达变化，并以 TUNEL 法检测神经细胞凋亡。结果各组缺血半暗带 SDF-1/CXCR4 mRNA 及其蛋白的表达均于7d 达到高峰，14，28 d 表达逐渐下降。其中7，14 d 同一时间点组间比较， HP-MSCs 组、 MSCs+QRHY 组及 HP+QRHY 组二者的表达均明显优于 N-MSCs 组（P ＜0.01， P ＜0.05），而以 HP+QRHY 组增高为明显（P ＜0.05， P ＜0.01），28 d 后，各移植组的表达趋势趋同，但仍高于模型组（P ＜0.05）。结论缺氧预处理 MSCs 移植能够显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠 SDF-1/CXCR4的表达，清热化瘀方能够进一步上调 SDF/1CXCR4的表达，减少细胞凋亡。
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Compound C抑制腺苷酸活化蛋白激酶的磷酸化后对缺氧预处理的影响及其机制
[目的]探讨Compound C抑制腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化后对缺氧预处理的影响.[方法]筛选合适的Compound C浓度.将细胞分为Compound C组和non-Compound C组,以上两组再各自分为3个亚组:对照组(control);缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD);单纯缺氧组(OGD);噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性.ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平.Western Blot法测定各组细胞内AMPKα,磷酸化的AMPKα (P-AMPKα),过氧化物酶体增生激活受体-y共刺激因子-lα(PGC-1α)的蛋白表达水平.[结果]OGD后Compound C组(0.418±0.021)和non-Compound C组(0.640±0.028)相比,细胞活性下降更明显(P＜0.01),经预处理后细胞活性均增加(P均＜0.05),加入Compound C后,control组细胞活性下降3.5％(P=0.473),OGD组细胞活性下降34.6％(P＜ 0.01),而缺氧预处理后细胞活性下降21.1％(P＜ 0.05).OGD后Compound C组(0.042±0.001)和non-Compound C组(0.051±0.001)相比,ATP下降更明显(P＜0.05),经预处理后ATP水平分别增加了21.5％及28.0％ (P均＜0.05).Compound C 3组AMPKα蛋白的表达与non-Compound C对应的3组相比差异无统计学意义(P均＞ 0.05).OGD后,Compound C组与non-Compound C组细胞P-AMPKα蛋白的表达均明显增加(与各自的对照组比较,P均＜ 0.05).经预处理后,non-Compound C组P-AMPKα蛋白的表达较单纯OGD组增加(P＜0.05),但CompoundC组P-AMPKα蛋白的表达与单纯OGD组间的差异无统计学意义(P=0.935).CompoundC组细胞PGC-1α蛋白的表达与non-Compound C组对应的3组比较明显下降(P均＜0.05),其中control组下降了68.1％,Hyp+OGD组下降了24.7％,OGD组下降了39.6％,Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调其表达(P均＜0.05),且预处理组的上调更明显(与OGD组比较,P均＜0.05).[结论]Compound C抑制AMPK的激活后,PGC-1α的表达下调,AMPK为缺氧预处理或缺氧处理上调PGC-1α的其中一条途径,抑制其活体P-AMPKα后其他的途径仍然在缺氧预处理中发挥重要的细胞保护作用.
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基因干扰Sirtuin3后对缺氧预处理的影响
[目的]探讨基因干扰Sirtuin3 (SIRT3)后对缺氧预处理的影响.[方法]使用空白载体pGCSIL-GFP进行预实验,筛选适合的感染复数(MOI).正式实验使用pGCSIL-PUR-SIRT3转染PC12细胞.成功构建空白载体(empty vector)及SIRT3-/-稳定细胞株后,将两种细胞分别分为对照组(control);缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD)；单纯缺氧组(OGD)；MTT测定细胞活性.ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平.Western Blot法测定各组细胞内SIRT3、过氧化物酶体增生激活受体-γ的共刺激因子-1α(PGC-1α),锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的蛋白表达水平.[结果]OGD后SIRT3-/-组(0.430±0.009)与Vector组(0.562±0.140)相比,细胞活性下降更明显(P＜0.05),经预处理后SIRT3-/-组细胞活性增加,且与Vector组间差异无统计学意义(P=0.311＞0.05).OGD后SIRT3-/-组(0.334±0.006)与Vector组(0.453±0.015)相比,ATP下降更明显(P＜0.05).经预处理后SIRT3-/-组ATP水平增加,且与Vector组间差异无统计学意义(P=0.866＞0.05).SIRT3-/-3组细胞间PGC-1α及MnSOD蛋白的表达与Vector组对应的3组比较明显下降(P＜0.05),Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调(P＜0.05),且预处理组的上调更明显(与OGD组比较,P＜0.05)[结论]干扰SIRT3基因后PGC-1α及MnSOD的表达下降,SIRT3为预处理或缺氧处理上调PGC-1α及MnSOD的其中一条途径,干扰SIRT3后其他的途径仍然在预处理中发挥重要的细胞保护作用.
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缺氧预处理对离体心肌细胞膜和线粒体缝隙连接蛋白43表达的影响
目的 通过建立离体心肌细胞缺氧/复氧模型,探讨缺血预处理(IPC)对心肌细胞膜和线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,阐明IPC抗缺血再灌注损伤的机制.方法 将培养72 h的SD大鼠乳鼠原代细胞随机分为空白对照组、缺氧/复氧再灌注组(HR组)及缺氧预处理组(HPC组),使用实时荧光定量PCR检测Cx43 mRNA水平,Western blot半定量细胞膜、线粒体的Cx43及磷酸化Cx43水平.结果 HPC组的Cx43 mRNA、细胞膜和线粒体的Cx43及磷酸化Cx43均明显高于HR组(P<0.01),与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 IPC可以保持心肌细胞Cx43 mRNA和细胞膜、线粒体蛋白Cx43的表达水平,减少由缺血再灌注引起的Cx43去磷酸化,增加磷酸化Cx43的含量,从而有效地减少缺血再灌注对心肌的损伤.
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缺氧预处理对不同鼠龄大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响
目的:探讨缺氧预处理对不同鼠龄大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法:随机选取新生1天(Q1组)、新生7天(Q7组)、新生14天(Q14组)大鼠各6只,分别缺氧2小时.将各组大鼠海马在无血清培养液中,进行原代、单克隆和传代培养;单克隆培养细胞进行巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色;传三代细胞诱导分化3d后分别行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色,计数NSE阳性细胞,进行统计学分析.结果:单克隆培养的细胞均呈 Nestin 阳性,诱导分化的细胞部分呈NSE或GFAP阳性表达.Q1组、Q7组、Q14组细胞原代培养克隆球直径达为200μm所需时间分别为:7d、11d、40d;Q1组与Q14组神经干细胞分化为神经元的比例存在显著差异.结论:缺氧预处理后新生1天比14天大鼠海马神经干细胞增殖快及向神经元的分化比例高.
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缺氧-复氧对培养的大鼠心肌细胞损伤与细胞凋亡的影响
目的:探讨体外培养的大鼠心肌细胞在缺氧(缺血)和缺氧-复氧(再灌注)状态下心肌细胞损伤和细胞凋亡情况.方法:常规方式培养SD大鼠心肌细胞.给予模拟缺血(缺氧)溶液、模拟复氧(再灌注)液以及终浓度为200U/mL的超氧化无歧化酶(SOD)干预处理,制备缺氧-复氧损伤组(H/R组)、SOD+缺氧-复氧损伤组(SOD+H/R组)和缺氧预处理组(HP组)模型,未经处理的为正常对照组(control组).结果:①H/R组的细胞存活率较对照组明显降低(P＜0.01);H/R+SOD组和HP组的细胞存活率虽然较正常对照组明显降低(P＜0.05),但比H/R组为高(P＜0.05);②H/R组培养液中培养液中心肌酶活性显著高于HP组和H/R+SOD组(P＜0.01).③H/R组心肌细胞内的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量也明显增高,与HP组和H/R+SOD组的心肌细胞内MDA含量比较有显著性差异(P＜0.05);而HP组、H/R组与对照组间比较,无明显差异(P＞0.05);均提示了缺氧-复氧过程中心肌细胞损伤严重,也说明了缺氧(血)预处理或SOD均有细胞保护作用.④H/R组心肌细胞内游离钙含量增加,显著高于HP组和H/R+SOD组(P＜0.01);⑤流式细胞仪测定出H/R组心肌细胞凋亡率也明显高于HP组和H/R+SOD组(P＜0.01).心肌细胞凋亡的数量与细胞内钙的增加呈正相关(P＜0.01).⑥电镜下所见H/R组的许多细胞表现为胞浆减少,核深染、固缩状态,异染色质不均匀,部分线粒体呈空泡变性,或是肌浆网囊泡变等凋亡期或凋亡前期样改变,少数呈凋亡向坏死方面改变;而其他组则少见此些变化.结论:体外培养的心肌细胞在缺氧-复氧情况下同样可加重心肌细胞损伤,可能是通过降低细胞内钙离子浓度而起作用的.
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缺氧预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的抗凋亡保护作用
目的研究缺氧预处理对正常肝细胞株L02缺氧复氧损伤的抗凋亡细胞保护机制.方法建立缺氧预处理细胞模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组(hypoxia reoxygenation,H/R组)和缺氧预处理组(hypoxic precondition,H/P组).使用流式细胞术,检测细胞缺氧复氧处理后l、6、12、18、24 h细胞凋亡率,并分别检测各组细胞缺氧复氧处理后12 h时bcl-2、bcl-xl、bax和P53蛋白的表达量,同时通过透射电镜观察细胞超微结构变化.结果H/P组和H/R组比较,细胞凋亡率显著下降,bcl-2、bcl-xl蛋白表达显著升高,P53、bax蛋白表达量显著降低,透射电镜下可见细胞结构基本维持正常.结论缺氧预处理对缺氧复氧导致的L02肝细胞损伤有明显的保护作用.肝缺氧预处理过程中,bcl-2、bcl-xl、bax及P53蛋白参与了细胞凋亡调控作用.
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神经细胞化学缺氧预处理模型的建立
目的 建立体外培养神经细胞的化学缺氧预处理实验模型.方法 分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧组、化学缺氧预处理组.用MTT法筛选合适的化学缺氧预处理和化学缺氧浓度.然后,分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧组(250 μmol/L CoCl2,24 h)、化学缺氧预处理组(75 μmol/L CoCl2,1.5 h,常氧3 h后,250 μmol/L CoCl2,24 h).实验终点测乳酸脱氢酶释放率,并用MTT法检测细胞活力,以此来评价化学预缺氧对神经细胞化学缺氧的保护作用.结果 化学缺氧预处理组细胞较化学缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少,说明用CoCl2化学预缺氧可保护神经细胞对化学缺氧产生耐受.结论 建立了简单易行、重复性好,可进一步应用于阐明缺氧预处理保护机制的神经细胞化学缺氧预处理实验模型.
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低氧预处理对骨骼肌抗氧化能力及运动性肌肉损伤的影响
目的 了解低氧预处理对离心跑台运动所致的大鼠比目鱼肌运动性肌肉损伤发生发展的作用.方法 将96只健康、体重(197±26)g的雌性SD大鼠按体重配对原则随机分为对照组(CON)、离心跑台运动组(EE)、缺氧预处理+离心跑台运动组(HCP)3组,每组32只.HCP组大鼠进行1周的缺氧预处理.处理的方法为:氧浓度10％,每次处理30 min,间隔5 min,5次/d,连续处理7d.缺氧预处理完成后,将EE及HCP组大鼠进行一次性大强度离心跑台运动.分别于运动后即刻、24 h、48 h、72h4个时间点随机选取各组大鼠8只股静脉放血处死,收集静脉血,测定血清白细胞介素6 (IL-6)含量、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,并于比目鱼肌中段切取部分肌肉组织,制作石蜡切片,HE染色后用自动图像分析仪观察肌纤维细微结构;取部分比目鱼肌匀浆液上清液用于超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的检测.结果 EE组及HCP组大鼠运动后比目鱼肌超微结构均出现损伤,EE组损伤较HCP组严重,损伤严重时相在运动后24 h时出现.与EE组相比,HCP组血清IL-6、CK及LDH水平明显降低,比目鱼肌MDA水平明显降低,SOD活性明显升高.结论 缺氧预处理可提高大鼠骨骼肌的抗氧化能力,降低骨骼肌损伤后炎性反应,对运动性肌肉损伤有预防作用.
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缺氧预处理预防大鼠手术后疲劳综合征的研究
[目的]探讨缺氧预处理对大鼠手术后疲劳综合征模型的作用并对其作用机制进行初步的探讨.[方法]建立大鼠手术后疲劳综合征模型,观察缺氧预处理对大鼠体力活动及血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平的影响.[结果]缺氧预处理能改善模型术后大鼠的活动能力.同时,缺氧预处理组大鼠血清超氧化物歧化酶水平明显升高,丙二醛水平明显降低.[结论]缺氧预处理可提高大鼠的抗氧化能力,对手术后疲劳综合征有明显的改善作用.
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水蚤在缺氧模型中的应用价值
缺氧诱导因子(H IF)是许多生物在缺氧条件下非常重要的一个转录调节因子,在缺氧耐受性产生中扮演关键角色.有必要建立一种相关缺氧模型,用于HIF和缺氧耐受性的研究.本实验旨在探讨水蚤作为一种动物模型在缺氧处理中的应用价值,通过建立水蚤缺氧预处理模型,发现两个时段的缺氧预处理可明显增加水蚤的缺氧耐受性,而其耐受性的产生与HIF相关.通过比较基因组学分析水蚤、果蝇和人类中HIF基因的同源性,发现水蚤适合作为模式动物用于人类缺氧损伤的研究.
