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Nrf2减轻小鼠非酒精性脂肪性肝炎
目的 研究Nrf2对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及其可能机制.方法 通过蛋氨酸-胆碱缺乏饲料(MCD)饲喂小鼠获得NASH模型;随机分为对照组、模型组以及Nrf2组,Nrf2组灌胃姜黄素0.9 mL/d,对照组和模型组给予相应体积的0.9％氯化钠注射液灌胃.4周后检测肝组织中Nrf2含量,肝指数,血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶水平(AST)、葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)和胆固醇(Chol)含量;对肝脏进行油红O染色;检测肝组织中TG、Chol、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;并检测细胞色素C和ATP含量.结果 与模型组小鼠相比,Nrf2组小鼠的血清中ALT,AST和GLU含量下降(P＜0.05),肝组织中TG、Chol和MDA含量下降(P＜0.05),GSH水平、SOD活性升高(P＜0.05);同时细胞色素C漏出降低,ATP含量上升(P＜0.05).结论 Nrf2对由蛋氨酸-胆碱缺乏所引起的NASH具有一定的保护作用,其机制可能是通过减少氧化应激,提高线粒体活性实现的.
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丹酚酸A通过Nrf2/HO-1途径减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
研究丹酚酸A (SAA)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制.SD大鼠随机分组,线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,缺血1.5 h,再灌注24 h,对神经行为学缺损程度评分,TTC法测定大鼠脑梗死体积,Western blot测定脑组织胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白含量.PC12细胞系制备缺糖缺氧复糖复氧(OGD/R)模型,缺糖缺氧6h,复糖复氧24 h,MTT法检测细胞存活率,免疫荧光法测定Nrf2和HO-1表达,应用Nrf2 siRNA对SAA的作用机制进行研究.MCAO/R导致脑组织出现病理性损伤,OGD/R导致PC12细胞存活率显著降低.SAA(10和20 mg·kg-1)可使脑组织神经细胞损伤明显减轻,并且SAA (0.5和5μmol·L-1)能增加PC12细胞存活率.同时SAA能够促进脑组织及PC12胞核和胞浆中Nrf2蛋白表达,核转位率升高,HO-1蛋白表达增强.SAA具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达有关.
关键词： 丹酚酸A 脑缺血再灌注 转录因子E2相关因子2 血红素氧合酶1 -
RNA干扰沉默IQGAP1表达可提高食管鳞癌细胞KYSE150对顺铂的化疗敏感度
目的 研究具有IQ结构域的GTP激酶活化蛋白1基因(IQGAP1)对食管癌细胞KYSE 150化疗敏感度的影响及其相关作用机制.方法 构建针对IQGAP1基因的小干扰RNA(siRNA)并转染至食管鳞癌细胞株KYSE150,采用MTT法观察KYSE 150细胞对化疗药物顺铂敏感度的改变;流式细胞技术检测IQGAP1基因沉默前后顺铂对KYSE150细胞周期分布及凋亡的影响;Western blot检测细胞转染前后转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平变化.结果 转染siRNA可显著下调KYSE150细胞中的IQGAP1 mRNA和蛋白表达水平;经(1、5、10、20) μmol/L顺铂处理细胞24 h后,干扰组(IQGAP1-siRNA)的细胞生存率均较对照组发生明显下降(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示干扰组在顺铂处理后Go/G1期细胞比例和凋亡率均明显高于对照组(P＜0.05);Western blot结果显示IQGAP1基因沉默后,Nrf2和MRP1蛋白表达下调.结论 沉默IQGAP1基因可有效提高人食管鳞癌细胞株KYSE150对顺铂的化疗敏感度,该作用可能是通过下调Nrf2和MRP-1蛋白表达来实现的.
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缺氧预处理对颅脑损伤大鼠抗氧化应激和神经功能的影响
目的 研究缺氧预处理对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织抗氧化应激和神经功能的影响. 方法 SD雄性大鼠48只采用随机数字表法分为假手术组、缺氧预处理组、颅脑损伤组、缺氧预处理+颅脑损伤组,每组12只.采用低压氧舱预处理3 d(-50 kPa、3 h/d)进行缺氧预处理,用改良的Feeney's自由落体法制作颅脑损伤模型,伤后24h用改良的神经功能评分(mNSS)观察大鼠神经功能;免疫组化染色神经元核抗原(NeuN)检测神经元的存活;Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测脑组织核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、线粒体硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)蛋白和mRNA的表达. 结果 与假手术组、缺氧预处理组比较,颅脑损伤组、缺氧预处理+颅脑损伤组大鼠mNSS评分增高,NeuN表达降低(0.274±0.033、0.281±0.042 vs 0.124±0.014、0.150±0.019),Nrf2、TrxR2蛋白和mRNA表达增高;与颅脑损伤组比较,缺氧预处理+颅脑损伤组大鼠mNSS评分降低,NeuN表达增高,Nrf2、TrxR2蛋白和mRNA表达增高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 缺氧预处理可增加颅脑损伤后脑组织抗氧化应激的水平,并减轻神经功能缺损.
关键词： 颅脑损伤 转录因子E2相关因子2 硫氧还蛋白还原酶2 缺氧预处理 -
氧化/抗氧化失衡与大鼠前脑缺血后海马CA1区神经元损伤的关系
目的 探索大鼠永久性结扎双侧颈总动脉(bilateral common carotid arteries occlusion,BCCAO)后1h至21d海马CA1区神经元氧化/抗氧化平衡的变化,揭示血管性痴呆早期神经元损伤的分子机制.方法 雄性SD大鼠按完全随机分组法分为假手术组(sham)和BCCAO(1 h,1、3、7、21 d)组,采用激光共聚焦和Western blot技术检测海马CA1区氧化应激损伤的标志蛋白和抗氧化应激损伤蛋白表达的变化,采用透射电镜观察BCCAO对海马CA1区神经元、血管及星形胶质细胞超微结构的影响.结果 ①与sham组比较,BCCAO后1h,3、7、21 d氧自由基探针HEt荧光强度呈时间依赖性增强;免疫荧光双染色及Western blot检测结果显示:过氧亚硝酸自由基(ONOO-)标志蛋白3NT、膜脂质损伤标志蛋白4HNE的表达于BCCAO后7、21 d较sham组升高(P＜0.05);②抗氧化损伤的转录因子E2相关因子2(Nrf2)及其下游抗氧化产物SOD2、HO-1的表达于BCCAO后7、21 d较sham组降低(P＜0.05);③透射电镜观察结果显示:BCCAO后1h,3、21 d,海马CA1区神经元、血管及星形胶质细胞均有不同程度损伤,并且于21 d损伤严重,出现染色质边集、核膜溶解,线粒体空泡样变,内质网严重扩张,血管周围严重水肿等病理改变.结论 血管性痴呆早期海马CA1区神经元损伤呈现进行性加重,其机制可能与BCCAO后细胞内氧化/抗氧化失衡密切相关.
关键词： 血管性痴呆 海马 氧化应激 转录因子E2相关因子2
