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叶酸对胃癌细胞凋亡的影响
目的 胃癌的发生与发展中有细胞凋亡的变化,叶酸抗肿瘤的机理涉及到维持DNA甲基化水平等,其与凋亡的关系尚未明了.方法 以高低两种浓度的叶酸干预培养的人胃癌MKN-45和MKN-28细胞系72小时后,以原位DNA断端切口标记法和DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡形态学改变和DNA断裂情况.结果 未加干预者两种细胞系的凋亡指数均低于5%,不同分化细胞系间比较差异无显著性;低浓度叶酸可诱导MKN-45细胞凋亡,而高浓度者使MKN-28细胞凋亡率增加.结论 胃癌细胞自然凋亡率较低.叶酸干预可影响凋亡的发生.
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幽门螺杆菌对不同分化程度胃癌细胞环氧合酶-2 mRNA的影响
流行病学研究显示,幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌发生相关,1994年世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)将其列为人类Ⅰ类致癌原,但其确切致癌机制目前仍不十分清楚,近年来研究表明,Hp感染可增加环氧合酶-2(COX-2)表达,而COX 2在胃癌发生、发展过程中起着重要作用,可能是导致胃癌发生的机制之一[1-4].本研究拟通过cagA+和cagA -Hp培养滤液与不同分化程度胃癌细胞系MKN28(高分化癌)、MKN45(低分化癌)、BGC823(未分化癌)共培养后检测COX-2 mRNA含量,进一步了解Hp通过COX-2途径致癌中cagA的作用以及Hp促进COX-2 mRNA表达与胃癌的分化程度是否有关.
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腺病毒介导反义c-myc RNA对人胃癌细胞系作用的分子机制研究
序列特异的DNA结合蛋白c-myc在细胞的增殖与分化过程中起着十分重要的调节作用，并能诱导细胞凋亡。反义c-myc RNA，采用c-myc基因含有起始密码子的第二外显子及其两侧部分内含子序列，共1.53kb片段构建而成，具有抑制c-myc表达的作用[1]。本研究以腺病毒介导，胃癌细胞系作为靶细胞，研究反义c-myc的抑癌作用及其机制。
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Δ133p53表达状态对rmhTNF效应的影响及机制研究
背景与目的：p53异构体在胃癌发生中的作用报道较少。该研究旨在探讨p53异构体Δ133p53在重组改构人肿瘤坏死因子(recombinant mutant human tumor necrosis factor，rmhTNF)干预胃癌细胞系生物学效应中的作用，为胃癌诊断和治疗提供新的依据。方法：采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)和流式细胞术，检测不同浓度的rmhTNF单独或联合氟尿嘧啶(5-FU)应用于MKN-45(表达Δ133p53)和SGC-7901(不表达Δ133p53)细胞，观察细胞抑制率和细胞凋亡情况。通过巢式逆转录多聚酶链反应(nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction，nRT-PCR)和实时荧光定量多聚酶链反应(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR)检测Δ133p53、Gadd45α和CyclinB1 mRNA的表达变化。结果：rmhTNF单独作用于Δ133p53表达阳性的MKN-45细胞有抑制作用，浓度为50、500 IU/mL的rmhTNF作用24 h后，细胞抑制率分别为24.82%、72.33%(t=-9.558， P<0.01)，并可提高5-FU的抑制率，且具有显著的量效和时效关系，5-FU(25μg/mL)、rmhTNF(50 IU/mL)+5-FU(25μg/mL)、rmhTNF(500 IU/mL)+5-FU(25μg/mL)作用于MKN-45细胞24 h后，抑制率分别为18.20%、48.66%、59.83%(F=82.742，P<0.01)；rmhTNF(50 IU/mL)+5-FU(25μg/mL)作用于MKN-45细胞24、48、72 h后，抑制率分别为48.66%、68.20%、85.23%(F=128.583，P<0.01)。而对于Δ133p53表达阴性的SGC-7901细胞，浓度为50、500 IU/mL的rmhTNF单独抑制率为2.74%、3.25%，抑制作用不明显(t=-0.121，P>0.05)。流式细胞术显示，rmhTNF不仅单独可引起MKN-45细胞凋亡，而且可显著增强5-FU促细胞凋亡作用，rmhTNF (50 IU/mL)、rmhTNF(50 IU/mL)+5-FU(25μg/mL)、rmhTNF(500 IU/mL)+5-FU(25μg/mL)作用于MKN-45细胞24 h后，凋亡率分别为7.21%、10.13%、15.28%(F=123.931，P<0.05)。在MKN-45中，rmhTNF单独或联合5-FU可下调Δ133p53和CyclinB1基因，上调Gadd45α基因表达水平。nRT-PCR检测对照组及实验组Δ133p53基因相对表达量分别为0.886、0.499、0.330、0.161(F=240.927，P<0.01)；Real-time PCR检测实验组Gadd45α基因相对表达量分别为1.227、1.694、3.394，Cyclin B1基因相对表达量分别为1.221、0.722、0.316。Δ133p53表达水平与CyclinB1呈正相关(r=0.977，P<0.01)，与Gadd45α呈负相关(r=-0.950，P<0.01)。结论：rmhTNF对表达Δ133p53胃癌细胞展现出显著的抑制效应，并能增加传统化疗药物5-FU的疗效，其中部分效应可能是通过调节p53下游分子CyclinB1和Gadd45α表达实现的，提示Δ133p53可能是rmhTNF治疗胃癌生物学效应的关键靶点。
关键词： 重组改构人肿瘤坏死因子 5-FU 胃癌细胞系 Δ133p53 -
胃癌细胞系和胃癌组织中EphA7基因的高甲基化及其临床意义
背景与目的:启动子区CpG岛高甲基化是导致基因转录水平下调的重要表观遗传学机制,我们前期的研究发现EphA7基因在部分胃癌中表达下调.本研究探讨EphA7基因下调的机制及其临床意义.方法:检测6株胃癌细胞及62例胃癌标本中EphA7基因甲基化状态.采用同位素掺入方法对胃癌细胞系的EphA7基因表达进行半定量RT-PCR测定;利用亚硫酸氢钠处理DNA后,进行DNA测序和甲基化特异性PCR检测.结果:对胃癌细胞系亚硫酸氢钠修饰后DNA测序发现,在EphA7基因启动子区内CpG岛存在超甲基化现象,利用甲基化特异性PCR检测胃癌标本证实,在部分胃癌组织中存在高甲基化.高甲基化与胃癌细胞的分化程度有关(P=0.03).结论:高甲基化是导致该基因下调的机制之一.EphA7基因在胃癌的发生过程中可能发挥一定作用.
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海洋生物活性药物BA-TPQ和FBA-TPQ对胃癌细胞的作用
目的:观察两种海洋生物活性药物BA-TPQ和FBA-TPQ对人胃癌细胞株BGC-823的作用与机制.方法:采用四唑氮蓝(MTT) 法测定不同浓度BA-TPQ和FBA-TPQ对BGC-823细胞的生长作用,应用流式细胞术检测BA-TPQ和FBA-TPQ对 BGC-823细胞增殖和细胞周期的影响,应用蛋白质印迹法检测BA-TPQ和FBA-TPQ对BGC-823细胞信号通路的影响.结果:BA-TPQ和FBA-TPQ对BGC-823细胞有明显的体外增殖抑制作用,24 h 的半数抑制浓度(IC50)分别为0.5986和0.6217 μmol/L,且有明显的剂量依赖关系;BA-TPQ和FBA-TPQ作用BGC-823后S期细胞数增加,细胞出现明显的凋亡;BA-TPQ和FBA-TPQ体外通过下调磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)和Bcl-2蛋白的表达发挥抗肿瘤作用.结论:BA-TPQ和FBA-TPQ对人胃癌细胞株BGC-823有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期和诱导凋亡有关.
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电离辐射诱导胃癌移植瘤及胃粘膜iNOS表达与凋亡的实验研究
目的观察电离辐射诱导细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的情况,初步探讨iNOS表达在电离辐射诱导细胞凋亡中的作用.方法 21只模型鼠随机分成A组(未照射组)、B组(照射后24 h组)和C组(照射后48 h组)3组.采用TUNEL法和免疫组化法在细胞图像分析仪上检测DT 20 Gy照射后细胞凋亡及iNOS表达情况.结果 A组、B组、C组中移植瘤 AI分别为(14.39±4.53)%、(28.54±4.54)%、(16.30±4.76)%,其中B组凋亡指数显著高于A组(P<0.01);鼠胃粘膜组织中各组AI值均未见显著性差异.B组、C组的iNOS表达均显著高于A组(P<0.01).对肿瘤组织而言,照射前后AI值变化与iNOS表达变化具有趋同性.结论 (1) 电离辐射能诱导SGC-7901细胞凋亡和上调其iNOS表达.(2) 电离辐射诱导的iNOS表达可能参与了移植瘤细胞的凋亡过程.(3)电离辐射未能明显诱导裸鼠胃粘膜组织细胞凋亡,但可诱导iNOS表达上调.
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顺铂或奥沙力铂联合热疗对人胃癌细胞系BGC-823抑制作用的比较
目的:比较顺铂或奥沙力铂联合热疗对人未分化胃腺癌细胞系BGC-823增殖的抑制作用.方法:使用MTT法检测细胞增殖,确定顺铂和奥沙力铂对BGC-823抑制的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合应用,根据Veleriote法判断热、化疗联合应用后24 h或48 h的作用效果,并将顺铂和奥沙力铂联合热疗的作用进行比较. 结果:以20%～30%抑制率的药物浓度作为试验的工作浓度,确定顺铂和奥沙力铂的工作浓度分别为1μg/ml和5μg/ml.单纯43℃热疗1 h后,在24h时和48 h时对BGC-823的抑制作用无统计学意义(P＞0.05);应用顺铂1μg/ml和奥沙力铂5μg/ml后24h对BGC-823无显著的抑制作用(P＞0.05),48 h时呈现显著的抑制作用(P＜0.01).应用两药联合43℃热疗1 h,在24 h和48 h对BGC-823均有显著的抑制作用(P＜0.05),随着时间的延长,对BGC-823的抑制作用增强(P＜0.05).单药化疗在24 h或48 h时,两药的抑制作用无统计学差异(P＞0.05),顺铂联合热疗对BGC-823的抑制作用在24h和48 h时均比奥沙力铂联合热疗的抑制作用强(P＜0.05).根据Veleriote法判断:顺铂1μg/ml联合热疗在24 h和48 h时均呈明显的协同作用;奥沙力铂5μg/ml联合热疗在24 h时产生次加作用,在48 h产生协同作用. 结论:顺铂或奥沙力铂联合热疗在24 h和48 h时呈现次加或协同作用,两种药物相比,顺铂比奥沙力铂作用更强.
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rmhTNF对△133p53表达阳性胃癌细胞系MKN45的影响
[目的]利用rmhTNF-MKN45细胞模型,观察p53异构体△133p53及p53下游基因的表达.[方法]不同浓度(50、100、200、400、500IU/ml)重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)作用应用于MKN45,采用CCK-8法,观察其细胞增殖抑制率;通过巢式逆转录多聚酶链反应(nRT-PCR法)检测△133p53、p53、Gadd45α、PTEN、Mdm2、Bax和CyclinB1 mRNA的表达变化.[结果]随rmhTNF作用浓度增加和作用时间(24、48、72h)延长,MKN45细胞抑制率明显增加(F=35.683,P＜0.001;F=60.328,P＜0.001).随rmhTNF浓度增加,MKN45细胞中,p53、Gadd45α、PTEN、Bax基因表达上调,△133p53、Mdm2、CyclinB1基因表达下调.△133p53与p53、Gadd45α、PTEN、Bax表达呈负相关(r=-0.916,-0.894,-0.872,-0.971,P均＜0.01),与Mdm2、CyclinB1表达呈正相关(r=0.924,0.943,P均＜0.01).[结论]在肿瘤生长抑制效应中,△133p53异构体表现出与野生型p53拮抗作用,其机制可能与调控Gadd45α、PTEN、Mdm2、Bax、CyclinB1等下游基因表达有关.
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rmhTNF-α对胃癌细胞系MKN45的生物学效应及其机制研究
[目的]研究rmhTNF对胃癌细胞系MKN45的生物学效应及其机制.[方法]采用不同浓度(50、100、200IU/ml)重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)处理胃癌细胞MKN45,增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)观察其细胞增殖抑制率;实时荧光定量PCR (RT-PCR)法检测MKN45细胞p53异构体△133p53、STAT1及STAT3 mRNA的表达变化.[结果]CCK-8结果显示,随rmhTNF作用浓度增高(50、100、200IU/ml),MKN45细胞抑制率分别为17.133％,24.800％和31.733％,差异有统计学意义(F=16.246,P＜0.01).RT-PCR结果显示,随rmhTNF浓度增高,MKN45细胞STAT1 mRNA表达上升(F=164.290,P＜0.001),STAT3、Δ133p53 mR-NA表达下降(F=29.921,F=24.243;P均＜0.001).Pearson相关性分析结果显示,△133p53与STAT1表达呈负相关(r=-0.951,P＜0.01),与STAT3表达呈正相关(r=-0.840,P＜0.01).[结论]MKN45细胞中,△133p53是STAT1、STAT3调控肿瘤细胞的共同靶基因,STAT1、STAT3-Δ133p53-p53通路可能是rmhTNF抑制胃癌细胞MKN45的机制.
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生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义
目的：探讨多种人胃癌细胞株中及胃癌组织中生长抑制因子4（ING4）的表达及其意义。方法：体外培养3种分化不同的胃癌细胞MKN-1（高分化）、SGC-7901（中分化）、BGC-823（低分化）以及人胃黏膜细胞GES-1，收集绍兴第二医院病理科40例原发胃癌患者的石蜡标本。以RT-PCR、Western Blot法分别检测4种细胞株ING4 mRNA及其蛋白表达水平。免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中ING4蛋白表达情况。结果：SGC-7901、BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较MKN-1、GES-1组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较SGC-7901组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）， MKN-1组与GES-1组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组织中ING4表达阳性率明显低于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：ING4作为抑癌基因参与了胃癌的发生，且与胃癌分化程度有关。
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Snai2在人胃癌细胞系中的差异表达及生物学意义
目的 分析Snai2在人胃癌细胞系中的差异表达与胃癌细胞分化的关系,以探讨Snai2在肿瘤发生发展中的作用.方法 培养7株胃癌细胞系,TRlzol法抽提总RNA,逆转录后用RT-PCR和实时荧光定量PCR检测Snai2 mRNA在胃癌细胞系中的表达,提取蛋白,用Western blotting测定不同细胞系Snai2蛋白的表达.结果 Snai2 mRNA在中低分化、致瘤性强的细胞系BGC823、SGC7901、MGC803、PAMC82、MKN45内呈高表达;在高分化,致瘤性弱的细胞系内N87呈低表达,在AGS几乎不表达.结论 Snai2 mRNA的表达与胃癌细胞的分化与致瘤性强弱有关,可以作为一个判断肿瘤分化程度和预后的分子标志.
关键词： 胃肿瘤 Snai2 胃癌细胞系 逆转录一聚合酶链反应 免疫印迹 -
窄范围pH梯度干胶条可提高胃癌细胞蛋白质组表达谱分辨率
目的 探讨不同pH梯度干胶条在提高胃癌细胞蛋白质表达谱分辨率中的作用,为深入研究胃癌的蛋白质组学奠定基础.方法 提取胃低分化腺癌细胞MGC-803的蛋白质,分别采用pH 3～10和pH4～7不同pH梯度干胶条建立胃低分化腺癌细胞MGC-803蛋白质双向凝胶电泳图谱,与相对应pH区域的蛋白质斑点进行比较.结果 成功地构建出两种不同pH梯度MGC-803细胞的双向凝胶电泳图谱,经比较两种图谱蛋白质斑点结果显示,运用窄范围pH 4～7干胶条可更有效分辨出pH 3～10部分区域内聚积的蛋白质斑点.结论 采用窄范围pH的干胶条可提高双向电泳图谱分辨率,优化了胃癌细胞蛋白质组学研究的技术体系,可有效获取待测靶蛋白.
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胃癌细胞系的建立及研究
细胞培养是指从动物活体中取出组织,在模拟体内生理环境等特定条件下进行培养,使其生存、生长,用于科研的方法.Carrel 1911年首开恶性肿瘤细胞培养的先河;1952年Geoge建立宫颈癌Hela细胞株,至今一直连续传代并被广泛应用.此后,癌细胞的培养在全世界范围展开,为在体外研究肿瘤生物学特性、指导临床诊疗实践提供了有形的载体.本文就胃癌细胞系的建立及应用和细胞系在胃癌研究方面取得的一些进展,作一综述.
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抗癌药物引起胃癌细胞系BGC-823凋亡的作用观察
目的观察多种抗癌药物对体外培养胃癌细胞系BGC-823的作用及引起凋亡的机制.方法选用丝裂霉素(MMC)、卡铂、5-Fu、卡铂+5-Fu,作用于呈指数生长的BGC-823胃癌细胞系细胞,在作用24,48h时,分别观察细胞的凋亡情况,利用镜下细胞计数方法,计数细胞凋亡的百分数;并分别留取正常培养12,24h,抗癌药物作用24,48h的培养液上清,测定癌胚抗原(CEA)的含量.结果选用5-Fu、MMC、卡铂3种药物作用于体外培养胃癌细胞系MGC-823细胞,其引起凋亡的结果有较大的差异:5-Fu在48h后仅产生5%的细胞凋亡;作用24hMMC引起的凋亡数为50%,卡铂为25%,卡铂+5-Fu为30%;作用48h后MMC引起的凋亡数为98%,卡铂为80%～85%,卡铂+5-Fu为85%～90%.CEA测定结果:作用前后无明显变化.结论5-Fu对体外培养胃癌细胞系BGC-823的作用不明显;MMC、卡铂对胃癌细胞系BGC-823的作用强大,特别体现在作用48h后;卡铂与5-Fu的协同作用不明显;3种抗癌药物对胃癌细胞系BGC-823产生CEA的抑制作用不明显.
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胃癌组织中CHD1L表达及其临床意义
目的：探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因（CHD1L）在胃癌发生发展中的作用。方法采用实时定量RT-PCR和Western blot法观察3株人胃癌细胞系（AGS、N87、HGC-27）及正常胃黏膜上皮细胞中CHD1L mRNA和蛋白表达的差异；采用免疫组化法检测71例人胃癌组织及其配对癌旁组织中CHD1L蛋白表达，分析CHD1L与胃癌临床病理特征的关系。结果与正常胃黏膜上皮细胞比较，3株胃癌细胞系CHD1L mRNA和蛋白表达水平均明显上调（P＜0．05）；71例胃癌组织中CHD1L蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织（P＜0．05），CHD1L蛋白阳性表达与胃癌TNM分期、分化程度及淋巴结转移显著相关（P＜0．05），与患者性别、年龄及肿瘤大小无相关性（P＞0．05）。结论 CHD1L在胃癌的发生发展中起促进作用；CHD1L表达有助于判定胃癌恶性表型。
关键词： 胃癌细胞系 黏膜上皮细胞 染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因 -
siRNA抑制SOM基因表达的有效序列筛选
目的 研究siRNA对胃癌细胞BGC-823生长抑素(SOM)分泌的抑制效应.方法 设计2条针对SOM基因不同位点的寡核苷酸序列,应用RiboMAXT7体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823,经RT-PCR,免疫细胞化学法检测SOM Mrna和蛋白的表达水平,筛选抑制效果佳的序列.结果 转染后24 h、48 h及72 h,SOM基因的表达被抑制,抑制效率有差异.结论 体外合成siRNA可以抑制SOM基因的表达,抑制效率呈现浓度及时间依赖性.
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尿激酶型血浆纤溶酶原激活物及其受体对胃癌细胞腹膜转移生物学行为的影响
我们选择高表达尿激酶型血浆纤溶酶原激活物(uPA)和高腹膜转移潜能的胃癌细胞系MKN45作为研究对象[1],观察uPA及其受体(uPAR)对胃癌细胞腹膜转移生物学行为的影响.
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肿瘤细胞中的c-myc与p16启动子重新甲基化
目的 探讨基因启动子区重新甲基化对肿瘤细胞生长的影响,寻找肿瘤防治新靶点.方法 用S-腺苷甲硫氨酸使c-myc和P16启动子甲基化,MTT法测定肿瘤细胞生长状态;免疫荧光染色检测基因表达的变化.结果 药物处理后,c-myc表达显著降低(P<0.05),而p16表达无明显变化(P>0.05);肿瘤细胞的生长受到抑制.结论 SAM能够通过下调癌基因的表达来抑制肿瘤细胞的生长,提示其在肿瘤治疗方面的应用前景.
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ANXA2调节胃癌细胞的增殖、侵袭和转移
目的：Annexin a2(ANXA2)基因参与多种生物学活动。然而，ANXA2在胃癌中的临床意义及生物学作用仍然未明。方法：免疫组化染色的方法定量检测了胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中ANXA2蛋白的表达情况。通过实时定量PCR及免疫印迹的方法分析了四种不同分化程度的胃癌细胞系SGC-7901, MKN-45, BGC-823和AGS中ANXA2的表达情况。通过LV-ANXA2-RNAi慢病毒干扰AGS细胞ANXA2的表达。利用MTT、克隆形成实验检测细胞增殖情况。通过流式细胞术细胞凋亡、细胞周期实验分析细胞死亡情况。利用细胞划痕实验、细胞侵袭小室及transwell实验检测细胞的侵袭和转移的情况。然后，用表达谱芯片进行筛选，通过免疫印迹实验阐明沉默ANXA2基因对c-met和RAP1A表达的影响。结果：免疫组化染色实验发现相较于癌旁正常的胃黏膜组织，胃癌组织中ANXA2蛋白表达量明显增高，并且ANXA2的表达与胃癌患者的临床特性密切相关。在这四种胃癌细胞系中ANXA2均高表达，其中AGS细胞ANXA2的表达量高。选取AGS细胞作为细胞模型继续进行后续的实验。用慢病毒干扰的AGS细胞，其ANXA2基因的表达明显受到抑制。沉默ANXA2基因通过下调c-met的表达抑制了AGS胃癌细胞的增殖并促进其死亡，并通过下调RAP1A的表达抑制AGS胃癌细胞的侵袭和转移。结论：本实验研究发现ANXA2的过表达与胃癌患者的临床分期及不良生存预后相关。ANXA2的过表达与胃癌患者的临床分期及不良生存预后相关。沉默ANXA2基因可以抑制胃癌细胞的增殖、促进其死亡，并影响胃癌细胞的运动能力。
