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北京市2007年从手足口病疫情标本中分离到人肠道病毒71型
目的 对2007年5月底,在北京市大兴区发生的一起手足口病(Hand FoOt Mouth Disease,HFMD)疫情进行实验室分析鉴定.方法 采集HFMD患儿的疱疹液、咽拭子、粪便标本,采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Tran-scription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)扩增标本及病毒阳性分离物中人肠道病毒(Human Enterovirus,HEV)特异性核酸片段,比较RT-PCR方法和HEV分离的敏感性.然后利用测序方法对HEV阳性分离物进行HEV分型鉴定,确定本次疫情中HEV的型别.结果 5例HFMD患儿的10份标本中,有8份测到HEV特异核酸片段,检出阳性率为80%,高于HEV分离阳性率(30%).5例患儿和9例密切接触者的共19份标本中共分离到5株HEV,其中来自2例患儿和1例密切接触者的4株病毒为EV71型(HEV71),来自密切接触者的另外1株HEV为柯萨奇病毒A组16型.结论 北京市大兴区5月底发生的一起HFMD疫情是由HEV71型引起的.
关键词: 手足口病 人肠道病毒71型 逆转录一聚合酶链反应 -
乳腺癌微转移的检测及临床意义
目前采用直接和标记物检测法检测乳腺癌骨髓微转移;采用细胞免疫化学,荧光定量聚合酶链反应(PCR),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法检测乳腺癌外周血微转移;采用前哨淋巴结(SLN)示踪活检法检测乳腺癌前哨淋巴结微转移;这些比较先进的检测方法对于乳腺癌的临床诊断、分期、复发与预后判断,以及临床选择综合治疗方法都具有十分重要的意义.
关键词: 乳腺肿瘤 肿瘤转移 逆转录一聚合酶链反应 -
逆转录-聚合酶链反应及放射免疫法对5785例献血员丙型肝炎病毒RNA复检分析
我国职业献血员尤其是单采血浆还输红细胞的献血员(单采浆血员),丙型肝炎病毒(HCV)的感染率高达30%[1].我中心收集自1995年8月~1997年5月,市中心血站送我院经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)均为阴性的待输血及血浆标本5 785份,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)及放射免疫法(RIA)进行复检,现将检测结果报告如下.
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逆转录一聚合酶链反应快速检测血清HDV RNA
丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷性共价闭环单股负链RNA病毒,长约1 700个核苷酸,由于HDV RNAG+C 含量高易形成二级结构以及易变异等原因使逆转录一聚合酶链反应(RTPCR)成功率不高[1,2].我们根据Chao等[3]报道的HDV RNA序列建立了一种RT-PCR方法,并对43份肝炎血清进行了检测,现报道如下.
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瘢痕疙瘩组织中转醛醇酶活性的研究
转醛醇酶是磷酸戊糖途径非氧化阶段的重要关键酶.转醛醇酶活性增高与着色性干皮病发展为皮肤癌,与多发性硬化、肝硬化、恶性肿瘤的发生发展、以及与人类免疫缺陷病毒(HIV)诱导的细胞凋亡都有密切的关系[1-3].本研究通过对瘢痕疙瘩组织及正常人皮肤组织中转醛醇酶活性的比较,用逆转录一聚合酶链反应及蛋白质印迹法分析转醛醇酶基因表达和蛋白变化情况,探讨转醛醇酶与瘢痕疙瘩组织中胶原蛋白合成的关系,为阐明瘢痕疙瘩的发病机制提供理论依据.
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Alpha B-crystallin基因在胃癌组织中的表达及其意义
目的:探讨alpha B-crystallin基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌的相关性.方法:采用RT-PCR方法检测64例胃癌组织及其癌旁正常组织中alpha B-crystallin基因的表达,计算其阳性率.结果:Alpha B-crystallin基因在胃癌组织中表达的阳性率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),其浆膜外转移者的表达阳性率明显高于浆膜内者(P<0.05),较大肿瘤者的表达阳性率明显高于较小肿瘤者,有淋巴结转移者的表达阳性率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05),但与患者的性别、年龄、肿瘤的分化程度无关(P>.005).结论:Alpha B-crystallin基因的高表达可能与胃癌的发生及转移有关.
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Snai2在人胃癌细胞系中的差异表达及生物学意义
目的 分析Snai2在人胃癌细胞系中的差异表达与胃癌细胞分化的关系,以探讨Snai2在肿瘤发生发展中的作用.方法 培养7株胃癌细胞系,TRlzol法抽提总RNA,逆转录后用RT-PCR和实时荧光定量PCR检测Snai2 mRNA在胃癌细胞系中的表达,提取蛋白,用Western blotting测定不同细胞系Snai2蛋白的表达.结果 Snai2 mRNA在中低分化、致瘤性强的细胞系BGC823、SGC7901、MGC803、PAMC82、MKN45内呈高表达;在高分化,致瘤性弱的细胞系内N87呈低表达,在AGS几乎不表达.结论 Snai2 mRNA的表达与胃癌细胞的分化与致瘤性强弱有关,可以作为一个判断肿瘤分化程度和预后的分子标志.
关键词: 胃肿瘤 Snai2 胃癌细胞系 逆转录一聚合酶链反应 免疫印迹 -
血管内皮生长因子mRNA在食管癌中的表达和临床意义
目的检测和分析食管癌中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况,探讨其与食管癌的淋巴结转移、临床分期的关系.方法应用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)检测和分析36例食管癌组织和24例癌旁6 cm以上的正常食管组织中VEGFmRNA的表达情况.结果(1)VEGF189mRNA的表达与食管癌:在36例癌组织中,有22例表达VEGF189mRNA(61.1%).在24例癌旁正常组织中,有1例表达VEGF189mRNA(4.2%).(2)VEGFmRNA的表达与淋巴结转移及TNM分期:在18例有淋巴结转移的病例中VEGF189mRNA表达16例(88.9%);在18例无淋巴结转移的病例中VEGF189mRNA表达6例(33.3%).Ⅰ期中VEGF189mRNA表达3例(21.4%);Ⅱ期中VEGF189mRNA表达11例(84.6%);Ⅲ期中VEGF189mRNA表达8例(88.9%).结论VEGF189mRNA与食管癌的侵袭、转移有密切的相关性.
关键词: 食管癌 血管内皮生长因子 逆转录一聚合酶链反应 -
DNA甲基转移酶1、3b基因在膀胱癌的表达及意义
肿瘤的发生与抑癌基因的失活有关[1],目前研究结果显示,抑癌基因甲基化是其失活的重要机制之一.我们采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PcR)检测Dnmtl、3b mRNA在膀胱癌组织及正常膀胱黏膜组织中的表达,并探讨其表达的意义.
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阻断氯通道对人喉癌Hep-2细胞增殖及其RNA编辑酶1表达的影响
目的 研究氯离子通道阻断荆5-硝基-2-(3-苯丙氨基)苯甲酸(NPPB)对人喉癌细胞系Hep-2细胞增殖及其RNA编辑酶1(RNA-dependent adenosine deaminase 1,ADARI)表达的影响.方法 以HeD-2细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NPPB对Hep-2细胞增殖的影响;用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测氯通道阻断前后Hep-2细胞ADARI mRNA表达的变化.结果 NPPB浓度依赖性地抑制Hep-2细胞增殖,NPPB阻断Hep-2氯通道前后ADARl mRNA表达量存在显著性差异.结论 阻断Hep-2细胞氯通道,可抑制Hep-2细胞增殖;Hep-2细胞RNA编辑酶1的表达可能和氯通道密切相关.
关键词: 喉肿瘤 氟通道 RNA编辑酶1 逆转录一聚合酶链反应 -
A组轮状病毒一步法RT-PCR检测技术的建立和应用研究
目的设计A组轮状病毒(RV)特异性引物,应用Tth酶,建立一步法RT-PCR扩增方案,检测西安地区腹泻幼儿196份粪便标本,并与本室研制建立的反向间接血凝法(RPHA),聚丙烯酰胺凝胶电泳,市售ELISA试剂盒平行检测对比分析.方法设计并合成第九基因序列保守区互补的特异性引物,在经典法RT-PCR试验成功的基础上,建立合理的一步法RT-PCR.结果四种检测结果阳性率分别为33.16%,23.47%,21.94%和25%,X2检验表明,RT-PCR为敏感.结论反转录和PCR由Tth酶一步完成,克服了经典法中AMV、RNasin等试剂昂贵,操作繁锁等缺点,很适合临检需要.
关键词: 轮状病毒 逆转录一聚合酶链反应 反向间接血凝试验