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流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用
目的:运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用.方法:运用流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡峰及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.结果: 苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,流式细胞仪(FCM)检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.
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RNA甲基化相关蛋白Mettl-14在胃癌中的表达及对胃癌细胞功能的影响
目的 探讨RNA甲基化相关蛋白Mettl-14在胃癌样本及癌旁组织中的表达差异,并分析其对胃癌细胞系功能的调节作用.方法 用实时定量PCR方法检测83例分化程度不同胃癌及对应癌旁组织中Mettl-14 mRNA水平的表达;使用RNA干扰方法敲低Mettl-14在胃癌细胞系MGC-803中的表达,通过细胞增殖实验、细胞周期实验、划痕实验和Transwell实验检测Mettl-14敲低后对MGC-803细胞功能的影响.结果 与癌旁组织相比Mettl-14 mRNA的表达水平在胃癌组织显著降低;且Mettl-14 mRNA的低表达与肿瘤分级相关(P＜0.05);在MGC-803细胞系中敲低Mettl-14,可促进细胞增殖、细胞周期运行、细胞迁移和侵袭.结论 Mettl-14可能在胃癌发生发展中发挥抑癌基因作用,并有可能成为胃癌诊断标志物及治疗靶点.
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FTO在胃癌组织中的表达降低及其对细胞系MGC-803功能的影响
目的 探讨RNA甲基化相关蛋白FTO在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响.方法 用realtime PCR检测54例胃癌组织及对应癌旁组织中FTO的表达;用质粒(pCMV6-FIO)实现FTO在胃癌细胞系MGC-803中的过表达;通过增殖实验、划痕试验和Transwell实验,检测FTO对MGC-803细胞功能的影响.结果 FTO mRNA在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P＜0.05),且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关(P＜0.05);在MGC-803细胞系中过表达FTO,可抑制胃癌细胞增殖(P＜0.05)、抑制细胞迁移(P＜0.05)和侵袭(P＜0.05).结论 FTO在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关.
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miR-216a-5p通过抑制HMGB1降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移
目的 探讨miR-216a-5p对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制.方法 用Western blot检测胃癌和癌旁组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达,RT-qPCR检测miR-216a-5p的表达.用人工合成的miR-216a-5p模拟物和其抑制物转染胃癌细胞系MGC-803.MTT检测细胞增殖,划痕法检测细胞迁移.双荧光素酶报告实验和Western blot检测miR-216a-5p和HMGB1之间的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,HMGB1在胃癌组织中高表达,miR-216a-5p在胃癌组织中低表达(P<0.05).miR-216a-5p模拟物上调胃癌细胞miR-216a-5p的表达水平,抑制细胞的增殖和迁移;miR-216a-5p抑制物下调miR-216a-5p的表达水平,促进胃癌细胞的增殖和迁移(P<0.05).miR-216a-5p可作用于HMGB1的3′UTR并抑制其表达.结论 miR-216a-5p通过靶向抑制HMGB1的表达降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移.
关键词： 胃癌 miR-216a-5p HMGB1 MGC-803 -
奈达铂对裸鼠MGC-803胃癌移植瘤抑制作用及对p53基因表达影响
目的 奈达铂(Nedaplatin,NDP)是第2代铂类化合物,抗肿瘤的机制与顺铂(Cisplatin,DDP)相同,其肾脏和胃肠道等不良反应均小于DDP,且无需水化,使用方便.本研究探讨NDP对裸鼠MGC-803胃癌移植瘤的抑制作用及对p53基因表达的影响.方法 制备MGC-803胃癌荷瘤裸鼠模型,MGC-803人胃癌细胞株接种裸鼠约1周时间,待肿瘤生长至直径约5～9 mm随机分为空白对照组、DDP组和NDP低、中和高剂量组,每组8只.分别予以腹腔注射生理盐水、顺铂、不同剂量奈达铂(1.0、2.0和3.0 mg/kg),采用蛋白质印迹法及RT-PCR法检测瘤体中p53基因的表达.结果 空白对照组、DDP组和NDP低、中和高剂量组p53 mRNA表达量分别为0.297±0.024、0.892±0.098、0.444±0.016、0.561±0.034和0.585±0.021.空白对照组、DDP组和NDP低、中和高剂量组p53蛋白表达量分别为0.295±0.027、0.541±0.032、0.316±0.034、0.408±0.028和0.525±0.041.p53mRNA及蛋白在DDP组和NDP组相对表达量均高于空白对照组,P＜0.05.与DDP组对比,p53 mRNA在NDP组均降低,P＜0.05;p53蛋白表达在NDP低剂量组和NDP中剂量组中均降低(P＜0.05),而在NDP高剂量组中表达差异无统计学意义,P＞0.05.NDP不同浓度化疗组间比较,p53 mRNA及蛋白表达水平呈量效关系,即随着药物剂量增大,其表达量增高.结论 NDP能增加MGC-803胃癌荷瘤裸鼠肿瘤组织p53 mRNA及蛋白表达水平,但与DDP相比未见明显优势.
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葛根素对人类胃癌细胞MGC-803和AGS增殖与凋亡的影响
目的 观察葛根素对人类胃癌MGC-803和AGS细胞增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度葛根素处理MGC-803和AGS细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测葛根素对胃癌细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测细胞凋亡的情况.结果 不同浓度葛根素(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 mmol/L)处理两种胃癌细胞48 h后,抑制率随浓度增加呈上升趋势(MGC-803:1.24％、2.80％、15.10％、18.55％、59.65％；AGS:15.59％、25.31％、30.25％、36.91％、64.47％).不同浓度葛根素(0、12.0、24.0 mmol/L)处理两种胃癌细胞24 h后凋亡率随浓度增加逐渐上升(MGC-803:5.49％、9.53％、13.81％;AGS:6.23％、16.38％、25.99％).结论 葛根素对人类胃癌MGC-803和AGS细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用.
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新型蛋白酶体抑制剂YSY-01A对人胃癌MGC-803的作用及相关蛋白研究
化合物YSY-01A是一种新型蛋白酶体抑制剂,前期研究已初步证实其具有显著的抗肿瘤作用,但是该化合物对人胃癌细胞的作用及相关机制研究尚不明确.本实验旨在评价化合物YSY-01A对人胃癌细胞MGC-803的体外和体内作用,并探讨可能的分子机制.体外研究表明,化合物YSY-01A对人胃癌细胞MGC-803具有显著的增殖抑制作用;体内研究表明,化合物YSY-01A单用及与5-FU联用时均可以显著地抑制裸鼠MGC-803异种移植瘤的生长,并且化合物YSY-01A与5-FU具有协同作用.分子机制研究证实,YSY-01A可以显著地抑制TNF-α和IFN诱导的NF-κB核转位,显著地下调IKK-β、IL-1β、iNOS蛋白的表达和上调COX-2蛋白的表达.综上所述,化合物YSY-01A具有较好的抗肿瘤作用,其机制与NF-κB通路相关蛋白有关.
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中药诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡研究近况
近年来,诱导肿瘤细胞凋亡研究一直是国内外肿瘤研究的一个热点,目前的一些研究结果已经表明,许多中药或中成药的有效成分具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用.
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抗原负载的DC和CIK共培养后对MGC-803的杀伤活性
[目的]研究负载抗原后的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖活性、表型和功能的影响.[方法]分离外周血单个核细胞(PBMC),经不同细胞因子作用后定向分化成DC和CIK细胞,以胃癌细胞株MGC-803冻融物作为肿瘤抗原刺激DC后与CIK共培养,以流式细胞仪检测CIK细胞膜表面分子表达,MTT法检测共培养后CIK细胞对MGC-803杀伤活性的变化.[结果]CIK与负载MGC-803抗原的DC共培养后3d增殖活性开始显著提高,高增殖倍数可达1 179.5±1.29;CD3+ CD8+和CD3+ CD56+细胞较共培养前增多,且与负载抗原的DC共培养的CIK具有比单独培养的CIK更强的杀瘤活性.[结论]以肿瘤细胞冻融物诱导成熟的DC能进一步促进CIK增殖,提高其对胃癌细胞的杀伤活性,为指导临床应用DC和CIK联合治疗消化道肿瘤提供了实验依据.
关键词： 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 MGC-803 胃癌 抗原 -
敲低膜联蛋白A7对胃癌细胞MGC-803增殖的影响
目的：：应用RNA干扰技术，靶向敲低人胃癌MGC-803细胞膜联蛋白A7(Annexin A7，ANXA7)的表达，观察ANXA7低表达对MGC-803细胞增殖的影响。方法：实验分为3组，以靶向ANXA7的siRNA转染MGC-803细胞为siRNA干扰组，另设阴性对照组和空白对照组，以Western blot法检测转染后MGC-803细胞ANXA7的表达，应用MTT法、克隆形成实验检测ANXA7低表达对MGC-803细胞的增殖能力的影响。结果：siRNA干扰组细胞ANXA7的表达较阴性对照组和空白对照组明显降低(P＜0.05)。敲低ANXA7表达后， MGC-803细胞的增殖活性和克隆形成能力明显降低(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖。
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一株连翘内生真菌代谢粗提物对胃癌细胞株MGC-803增殖的影响
目的:评价一株连翘内生真菌代谢粗提物体外对胃癌细胞株MGC-803增殖的影响,为寻找临床胃癌治疗新药提供思路.方法:采用常规分离手段分离得到连翘内生真菌26株,应用MTT法测定其发酵代谢产物粗提物对MGC-803增殖的影响.结果:MGC-803经内生真菌FS12的发酵代谢产物粗提物FE-12作用后细胞克隆受到明显的抑制,且在时间和剂量上存在一定的依赖性.结论:连翘内生真菌FS12的发酵粗提物FE-12可抑制胃癌细胞株MGC-803增殖,为寻找临床胃癌治疗新药提供了一条新的思路.
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E2F-1基因反转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞MGC-803增殖的影响
目的:通过构建人同源基因E2F-1反转录病毒表达载体,观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖的影响.方法:应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到反转录病毒载体pLXSN中,并将经酶切和RT-PCR检测正确的重组载体转染PA317包装细胞,收集病毒上清液感染胃癌细胞MGC-803.应用 RT-PCR和Western印迹法检测MGC-803/pLXSN-E2F-1细胞中E2F-1 mRNA和蛋白的表达情况.应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况.结果:经酶切和RT-PCR检测结果显示,成功构建E2F-1反转录病毒表达载体.与MGC-803和MGC-803/pLXSN组相比, MGC-803/pLXSN-E2F-1组E2F-1 mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05).MGC-803/pLXSN-E2F-1组的克隆形成率为48%,明显低于MGC-803组的81%和MGC-803/pLXSN组的77%,差异有统计学意义(P<0.01).MGC-803/pLXSN-E2F-1组的细胞增殖率明显慢于MGC-803组和MGC-803/pLXSN组(P<0.01).结论:成功构建了E2F-1基因过表达的反转录病毒表达载体,并将其成功感染MGC-803细胞,E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖.
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重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用
目的:研究重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:采用MTT法检测重楼总苷对MGC-803细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡率,并分析E-phA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化.结果:重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长,并且呈时间-刺量依赖关系;可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达.结论:其作用机制可能与下调EphA2和survivin的表达以及促进Caspase-3的表达有关.
关键词： 重楼总皂苷 胃癌 MGC-803 细胞凋亡 EphA2 Survivin蛋白 Caspase-3蛋白 -
汉防己甲素体外辅助多柔比星杀伤胃癌细胞及机制研究
目的 探讨中药活性成分汉防己甲素是否能在体外辅助多柔比星杀伤胃癌细胞并研究其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞系MGC-803相对细胞活力.Western blot实验检测MGC-803细胞中小窝蛋白-1(caveolin-1)表达水平、蛋白激酶B(AKT)和B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)相关细胞死亡激动子(Bad)磷酸化水平、半胱天冬酶-9(caspase-9)和半胱天冬酶-3(cas-pase-3)活化水平.免疫共沉淀法检测Bad与大分子B淋巴细胞瘤蛋白(Bcl-xl)及Bcl-2相互作用.流式细胞术检测MGC-803细胞的凋亡.结果 汉防己甲素+多柔比星组MGC-803相对细胞活力(0.34±0.03)显著低于多柔比星(0.79±0.06)(P<0.05),汉防己甲素+多柔比星组MGC-803的细胞凋亡率显著高于多柔比星组[(40.32±3.51)％比(12.23±1.13)％,P<0.05].汉防己甲素+多柔比星组MGC-803细胞的caveolin-1表达水平、AKT和Bad的磷酸化水平均低于多柔比星组,而汉防己甲素+多柔比星组MGC-803细胞的Bad与Bcl-xl及Bcl-2结合水平、caspase-9和caspase-3活化水平均高于多柔比星组.汉防己甲素+多柔比星+caveolin-1质粒组MGC-803相对细胞活力显著高于汉防己甲素+多柔比星组[(0.71±0.06)比(0.34±0.03),P<0.05],而其细胞凋亡率显著低于汉防己甲素+多柔比星组[(15.94±1.22)％比(40.32±3.51)％,P<0.05].结论 汉防己甲素可能通过caveolin-1/AKT/Bad途径增强多柔比星对胃癌细胞的凋亡诱导活性.
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黄连素结合光动力学对胃癌细胞MGC-803凋亡的影响
目的:探讨黄连素结合光动力学对胃癌细胞MGC-803凋亡的影响.方法:MTT法检测黄连素、光动力学疗法(PDT)、黄连素联合PDT处理后MGC-803生长抑制率,并应用联合指数分析两药是否具有协同效应.RT-PCR验证MGC-803经黄连素、PDT、黄连素联合PDT处理后各组survivin、bcl-2、p53、bax基因的表达情况.流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况.构建胃癌动物模型,体外模拟黄连素联合PDT治疗胃癌疗效观察.结果:MTT法测各处理组细胞生长情况并计算各组细胞抑制率分别为49.63％,62.29％,84.85％;黄连素与PDT联合后有协同效应,抗肿瘤作用更为显著.RT-PCR、Western blot检测各处理组survivin、bcl-2基因蛋白水平均较对照组明显下调,p53、bax则在处理组明显上调;流式细胞术测得黄连素联合PDT组细胞明显凋亡,各早期组凋亡率分别为5.0％,20.4％,33.5％,40.9％;胃癌小鼠体外模拟黄连素联合PDT治疗,肿瘤体积明显减小.结论:黄连素能协同增强PDT促进MGC-803凋亡的作用、PDT抗肿瘤疗效,黄连素有可能成为新一代PDT增敏剂.
关键词： 黄连素 光动力学疗法(PDT) MGC-803 凋亡 -
迷迭香酸类似物-11通过抑制ERK/MAPK通路诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡
目的 对迷迭香酸类似物-11(rosmarinic acid analogue-11,RAA-11)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制进行初步探究.方法 MTT法和克隆形成法观察RAA-11对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色法观察RAA-11对人胃癌MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;流式细胞术检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞凋亡率的影响;Western blot观察RAA-11对人胃癌MGC-803细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax及通路蛋白ERK、p-ERK表达的影响.结果 MTT结果提示RAA-11可以抑制人胃癌MGC-803细胞增殖(P<0.01),且呈时间浓度依赖性;克隆形成实验结果提示,RAA-11能抑制人胃癌MGC-803细胞的集落形成能力;Hoechst 33258染色结果提示,RAA-11干预人胃癌MGC-803细胞48 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术结果提示,RAA-11对人胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用;Western blot结果显示,RAA-11上调人胃癌MGC-803细胞促凋亡相关蛋白caspase-3、Bax(P<0.01),下调抑凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平,并降低了通路蛋白ERK、p-ERK的表达水平(P<0.01).结论 RAA-11能抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖,并能够诱导凋亡,其机制可能与抑制ERK/MAPK通路有关.
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八宝丹抑制胃癌细胞增殖与诱导细胞凋亡的实验研究
目的 探讨八宝丹(BBD)对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响. 方法 体外培养胃癌细胞AGS和MGC-803,采用不同浓度的BBD(0、0.25、0.5、0.75、1mg/mL)进行干预,MTT法检测细胞活力,计算BBD对细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞生长密度;台盼蓝染色法检测细胞数量;细胞集落形成实验检测细胞集落形成能力;Hoechst染色检测细胞凋亡. 结果 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的细胞活力,抑制细胞增殖,使细胞密度下降,减少细胞数量,抑制细胞集落形成能力,诱导细胞凋亡. 结论 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的增殖及诱导细胞凋亡.
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窄范围pH梯度干胶条可提高胃癌细胞蛋白质组表达谱分辨率
目的 探讨不同pH梯度干胶条在提高胃癌细胞蛋白质表达谱分辨率中的作用,为深入研究胃癌的蛋白质组学奠定基础.方法 提取胃低分化腺癌细胞MGC-803的蛋白质,分别采用pH 3～10和pH4～7不同pH梯度干胶条建立胃低分化腺癌细胞MGC-803蛋白质双向凝胶电泳图谱,与相对应pH区域的蛋白质斑点进行比较.结果 成功地构建出两种不同pH梯度MGC-803细胞的双向凝胶电泳图谱,经比较两种图谱蛋白质斑点结果显示,运用窄范围pH 4～7干胶条可更有效分辨出pH 3～10部分区域内聚积的蛋白质斑点.结论 采用窄范围pH的干胶条可提高双向电泳图谱分辨率,优化了胃癌细胞蛋白质组学研究的技术体系,可有效获取待测靶蛋白.
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Survivin基因沉默抑制胃癌MGC-803细胞增殖并增强其对塞来昔布的敏感性
目的 研究Survivin基因沉默对人胃癌MGC-803细胞增殖和对化疗药物塞来昔布敏感性的影响.方法 设计合成Survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染入MGC-803细胞.采用RT-PCR和Western blotting检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期.通过MTT法和细胞克隆形成试验法察Survivin基因沉默后MGC-803细胞对塞来昔布的敏感性.结果 Survivin基因沉默48 h后,MGC-803细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低(P＜0.05).细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少(P＜0.05).Survivin基因沉默组细胞对塞来昔布的敏感性显著性增强(P＜0.05).结论 Survivin特异性siRNA能显著沉默MGC-803细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强MGC-803细胞对塞来昔布的敏感性.
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蛴螬提取物体外对人MGC-803胃癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用的形态学观察
目的:探讨蛴螬提取物体外对MGC-803胃癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡的形态学观察.方法:通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜技术及吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光染色方法和免疫细胞化学技术检测蛴螬提取物对MGC-803胃癌细胞诱导凋亡作用的方式.结果:(1)光镜及电镜观察结果表明,蛴螬(终浓度为4mg/ml)作用于MGC-803胃癌细胞24h后,可见胞核固缩、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化;(2)经AO/EB荧光染色观察结果表明,当终浓度为4mg/ml的蛴螬作用于MGC-803细胞24h后,其凋亡率和破膜率与自然凋亡率和破膜率相比均有显著性差异,其凋亡率为86.3%(P＜0.001),破膜率为41.9%(P＜0.001).说明蛴螬提取物确实有诱导MGC803细胞凋亡的作用,同时也有细胞毒作用,但以诱导细胞凋亡为主.(3)应用免疫细胞化学技术(S-P法)检测用药前后ki-67抗原的表达改变,探讨蛴螬提取物在体外对MGC-803胃癌细胞株的抗增殖作用.结论:蛴螬提取物在体外对人MGC-803胃癌细胞株有显著抗增殖及诱导凋亡作用.
