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Anytest-2000时间分辨荧光分析仪介绍
时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA)是一种先进的免疫检验新技术,TRFIA方法是20世纪80年代中期发展起来的一种新的荧光标记技术,它与传统的FIA、ELISA和RIA相比,具有很多优点:灵敏度高、特异性强、稳定性好、动态范围宽、试剂货架期长、无放射性危害等,迄今已被国际上公认为现代标记免疫佳方法之一.本文介绍Anytest-2000时间分辨荧光分析仪(TRF仪).
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两种方法检测乙肝血清学标志物的比较分析
目的 探讨用酶联免疫吸附实验法(ELISA)和时间分辨荧光免疫法(TRFIA)检测乙肝两对半的差异.方法 分别用ELISA法和TRFIA法对102例标本进行检测,分析两种方法的检测结果及其检出模式.研究两种方法检测乙肝表面抗原(HBsAg)的线性范围和低检测浓度.结果 两种方法检测乙肝两对半的HBsAg、表面抗体(HBsAb)和e抗原(HBeAg)无显著差异(P>0.05),e抗体(HBeAb)和核心抗体(HBcAb)有显著差异(P<0.05).2种方法检测135、13模式,其结果一致,检测其它几种常见模式及少见模式,结果有差别.两法相比,TRFIA法检测HBsAg具有相当宽的线性范围和低检测浓度.结论 TRFIA法定量检测乙肝两对半具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点,是一种理想的乙肝两对半定量检测方法.
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时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析
时间分辨荧光免疫(简称TRF)分析法是用三价稀土离子作为示物,标记蛋白质,多肽,激素,抗体,核酸探针或生物活性细胞,待反应体系发生后,用时间分辨光分析仪测定后产物中的荧光强度,以此来判断反应体系中被测物质的浓度,笔者结合患者血清学指标乙肝五项(聚合酸链反应)性,初步探讨TRF在检测乙型肝炎病毒中的临床价值,报道如下:
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ELISA与TR-FIA在测定乙肝标志物的结果分析
目的:比较两种标记分析方法在乙肝血清标志物检测的结果,为临床提供准确的诊治依据.方法:用时间分辨荧光免疫分析法(TR-FIA)对139份经酶联免疫法(ELISA)测定的血清标本作乙肝五项免疫标志物检测并分析其结果.结果:ELISA 法和TR-FIA比较,HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc的检出率非常接近,符合率分别为95.9%、90.0%、85.0%、85.7%和83.9%,两者比较无显著差异(P>0.05);9种常见血清模式的符合程度也较高(符合率在71.4%~100%之间),平均符合率85.7%,两者比较无显著差异(P>0.05);少见模式的检出率及符合程度均相差较大,在11种共32例ELISA法检查为少见模式的标本中,有12例标本TR-FIA检测为常见模式.结论:TR-FIA法与ELISA法检测结果有较高的符合程度,作为新近发展起来的一种标记分析方法,在灵敏度、线性范围、定量等方面更具优势.
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时间分辨荧光免疫分析测定六盘水地区正常人甲状腺相关激素
用放射免疫分析法(RIA)测定甲状腺相关激素的应用已经很广泛,随着生物标记技术的不断进步,免疫分析技术逐步由放射免疫分析技术向非放射免疫技术转变.时间分辨荧光免疫分析技术正是这类非放射免疫技术的一个典型代表[1],在部份地区正在取代RIA.
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如何做好时间分辨荧光免疫室内质量控制
随着高新技术的不断应用,检验医学发展越来越迅速,时间分辨免疫测定是以抗原-抗体反应与荧光物质发光和时间分辨技术结合的近代荧光光谱技术,由于其具有高特异性和高敏感性,不污染环境[1],越来越受到人们的重视,它的应用范嗣也越来越广,做好其方法学的室内质量控制(IOC)就显得非常重要.现就本实验室实践经验,总结如下几点.
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Sm3+标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立
目的 建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法.方法采用ACA抗原(心磷脂+β2 糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相抗原和钐标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-钐标记兔抗人IgM抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgM抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA 及ELISA 法检测ACA-IgM抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TRFIA检测其血清中的ACA-Ig抗体,计算临床特异度.结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低 3 种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.39%、3.26% 和3.94%,批间(n=8)精密度分别为2.92%、3.73% 和4.35%;方法的灵敏度为0.1 MPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA 与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.956;将1份 ACA-IgM抗体强阳性的血清标本从2483 MPL U/L倍比稀释至0.151 MPL U/L,ELISA方法较好的线性范围在4.85-310.4 MPL U/L,而TRFIA方法在0.151-2483 MPL U/L都有较好的线性.结论 首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgM抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用.
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两种方法定量检测HBV异常血清标志物与血清HBV DNA水平的关系
目的:对经确认的血清乙肝表面抗原(HBsAg)高值患者,测定其血清乙型肝炎病毒(HBV)-DNA结果,探讨两者间的关系,为个体化诊疗提供更好的依据。方法2013年共用时间分辨荧光免疫(TRFIA)法初步检查HBV-M标本9140例,阳性数值较高的患者175例,再采用微粒子化学发光免疫法(MEIA)进行定量复检及运用FQ-PCR进行HBV-DNA检测。统计2次定量结果及HBV-DNA检测含量分布并与HBsAg含量比对分析。结果运用TRFIA法及MEIA法检测结果之间差异不明显,定量分析结果与HBV-DNA之间,HBsAg>100且HBV-DNA>4.0的比例为58.8%,3.0~4.0比例为17.6%,<3.0为17.6%。HBsAg>100且HBV-DNA>4.0的比例为19.4%,3.0~4.0比例为6.9%,<3.0为73.6%。HBsAg>100且HBV-DNA>4.0的比例为27.2%,3.0~4.0比例为5.7%,<3.0为67.1%。结论定量方法检测HBsAg,是对FQ-PCR法的有益补充,与FQ-PCR法测定HBV-DNA含量相结合,能更全面地掌握患者乙肝病毒复制程度及病毒蛋白合成水平,能为个体化治疗提供更加科学可靠的依据。
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TRFIA和ELISA检测乙型肝炎血清学标志物的比较
目的 EUSA和TRFIA检测HBV感染者血清标志物的比较.方法 分别采用EuSA和TRnA检测56例HBV感染者首次和随访12个月后血清标志物,比较两种检测方法 的效果,以及对病情严重程度和传染性的评估.结果 首次和随访12个月后检测血清标志物阳性率TRFIA均明显高于EUSA,两者差别具有统计学意义(P<0.05).回顾性分析发现,TRFIA检测血清标志物表达量与病情严重程度和传染性呈正相关.结论 TRFIA检测HBV感染者血清标志物优于EUSA,并且可以通过血清标志物表达量的变化评估病情及传染性程度,值得临床推广.
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时间分辨荧光免疫法和电化学发光法检测AFP的比较
目的 对时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA法)国产试剂盒与电化学发光免疫分析法(ECLIA法)检测血清AFP作比较分析,了解两种方法 特点.方法 分别采用国产TRFIA法试剂盒与ECLIA法检测正常人50例、肝癌患者40例血清AFP的含量:用高、中、低3种浓度AFP标准品采用两种方法 进行批内测定,n=10,观察重复性,所得结果 计算CV值;将高值标准品血清(250 ng/ml)按1:1比例加入每份正常对照组血清中,肝癌组病人血清与生理盐水按1:1稀释后再按1:1比例加入高值标准品血清(250ng/ml).每份检测2 次(TRFIA法)取平均值,计算回收率.结果 肝癌组AFP值(TRFIA法:558±319.10ng/ml;ECLIA法:552.31±302.67g/ml)明显高于正常组(TRFAIA:6.51+5.42ng/ml;ECLIA法:6.32±5.14ng/m)(P<0.05),两种方法 结果 无显著差异(P>0.05).其相关系数为0.9150,测定结果 呈正相关.高、中、低3种浓度标准品的重复性试验TRFIA法与ECLIA批内变异系数分别低于7.9%和3.1%,后者优于前者,两种方法 略有不同.无明显差异(P>0.05).回收试验结果 ,TRFIA法回收率在92.3%~103.9%.结论 国产TRFIA法试剂盒和ECLIA法检测AFP相比较具有良好的相关性,灵敏度和稳定性也较好,可应用于临床血清AFP检测.
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TRFIA与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物的分析与比较
时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA)是一种先进的免疫检验新技术,是用镧系元素标记抗原/抗体作为抗原-抗体反应体系示踪物,通过时间延迟和波长分辨将特异性荧光和非特异性荧光分辨开来,达到"零"本底,再根据特异性荧光强度和相对荧光强度的比值来判断反应体系中分析物浓度,达到定量分析的目的[1].
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乙肝病毒标志物时间分辨荧光免疫测定与放射免疫测定的分析比较
为了探讨时间分辨免疫荧光免疫分析法(TR-FIA)测定乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物的灵敏度、特异性、符合率,寻找灵敏度、准确度高的乙肝病毒标物检测方法,收集某院门诊病人检查乙肝病毒标志物的血清标本,采用TR-FIA和放射免疫法(RIA)同时检测进行了比较.结果显示,TR-FIA法灵敏度除抗HBC为92.8%以外,其余四项均在95%以上,特异性在99%以上,准确率在98%以上.提示TR-FIA定量检测乙肝标志物,具有灵敏度高、特异性强、无放射性污染、方法简便、出报告快等特点,其灵敏度超过RIA法,是目前检测乙肝病毒标志物理想的测定方法之一.
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石房蛤毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒的研制
目的 制备石房蛤毒素(STX)的单克隆抗体,利用时间分辨荧光免疫分析技术建立石房蛤毒素超微量的检测方法.方法 利用STX-KLH偶联抗原免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选后获得稳定分泌抗STX抗体的杂交瘤细胞株,腹水诱生法制备大量单抗,采用间接竞争法建立STX-TRFIA时间分辨荧光免疫检测试剂盒,对试剂盒各项性能进行评价.结果 该试剂盒低检出浓度为1.0 ng/ml,校准曲线线性范围为2.0~512 ng/ml,线性方程Y=-0.455 7X+22.872 (|r|=0.998 3),与腹泻性贝类毒素(DSP)、神经毒性贝类毒素(NSP)、失忆性贝类毒素(ASP)均无交叉反应,平均回收率为94.66%,与进口试剂盒同时检测广州市水产品中贝类毒素的含量,其相关系数为0.9764,P<0.001.结论 试剂盒各项指标均接近进口试剂盒水平,达到检验要求,可满足实际工作需要.
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TRFIA检测HBVM与FQ-PCR检测HBVDNA水平相关性分析
目的 研究乙型肝炎病毒标志物(HBVM)定量检测结果 与乙型肝炎病毒含量(HBVDNA)含量的临床关系.方法 用时间分辨荧光免疫定量分析法(TRFIA)和荧光定量-PCR技术(FQ-PCR),分别检测260例大三阳和小三阳患者血清HBVM含量和HBVDNA.结果 HBsAg、HBeAg和HBXDNA在定量检测上有较好的一致性.结论 HBsAg和HBeAg的滴度与HB-VDN的含量存在一定的相关性,在乙肝患者传染性大小判断、治疗和预后分析等方面有临床指导意义.
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磁分离酶联免疫检测激素的方法学评价
目前在国内检测人血清内的激素可采用放射免疫(RIA)、酶免疫(EIA)和时间分辨荧光免疫等方法[1].瑞士雪兰诺诊断中心发明的磁分离酶联免疫是一种非同位素标记的酶免疫检测技术,称为磁性抗体免疫技术(MAIA).我们用磁分离酶联免疫方法测定了30份人血清标本中的六种内分泌激素(FSH、LH、PRL、P、E2、T),通过其线性特征、显色稳定性、精密度、特异性等实验结果,并与放射免疫法测定结果作比较,对该方法作出初步的评价.
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血清甲胎蛋白和游离β绒毛膜促性腺激素双标记时间分辨荧光免疫试剂盒的研制与评价
目的 研制一种用于产前筛查的母血清甲胎蛋白(AFP)和游离β绒毛膜促性腺激素(free hCG β)双标记时间分辨荧光免疫法(TrFIA)试剂盒.方法 采用AFP单克隆抗体铕(Eu3+)标记物和free hCGβ单克隆抗体钐(Sm3+)标记物作为示踪物,以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分制备增强液,应用双抗体夹心法研制出hAFP和free hCG β双标记时间分辨荧光免疫法试剂盒,并对其进行分析性能评价,平行比对试验采用线性回归分析.结果 自制试剂盒AFP和free hCG β的剂量-反应曲线线性相关系数(r)可达0.999 0以上;批内、批间CV(%)均小于10.00%;AFP和free hCG β的灵敏度分别为0.12 U/ml和0.08 ng/ml;以国家标准品为对照,AFP和free hCG β的标准品效价比在0.900~1.100间;检测AFP和free hCG β的线性范围分别为0.25 U/ml~500 U/ml和0.2 ng/ml~200 ng/ml;试剂盒在4℃保存下可至少稳定12月;与国外同类试剂比对,AFP和free hCG β的回归方程的线性相关系数(r)分别为0.973 0和0.992 7.结论 自制试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确度好、线性范围宽等优点,与国外的同类产品检测结果相关性好,能满足临床需要.
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流动注射--时间分辨荧光联用检测CEA
目的建立流动注射与时间分辨荧光分析联用技术测定血清中癌胚抗原(CEA)的免疫分析方法(FIIA).方法流动注射免疫反应柱的制备;快速流动注射分析法的探索;免疫反应佳条件的选择;标准曲线的绘制;回收试验.结果方法的检测线性范围在0~100 ng/ml,回收率为96.5%~102%.结论该文所建立的方法具有快速、准确且能定量的特点,具有较好的应用前景.
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时间分辨荧光免疫技术在HBV定量检测中的应用
目的探讨铕标记时间分辨荧光免疫技术(TR-FIA)对乙型肝炎病毒标志物(HBV M)定量检测在临床的应用价值.方法TR-FIA法、放射免疫(RIA)法及ELISA法检测并统计分析.结果TR-FIA法较RIA法灵敏度高,测量范围宽,准确度相近.结论在乙肝病毒标志物定量检测上,两种方法检测结果的临床符合性基本一致,TR-FIA较RIA测量范围宽,标记物稳定,无放射性污染,具有良好的应用价值.