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APA-BCC镇痛微囊在癌痛患者脑脊液中的生物学变化
了解海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(L-EK)分泌的变化.将APA-BCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔.7或8天时采取脑脊液,观察APA-BCC的形态、细胞活率,用放射免疫法测定脑脊液中L-EK的含量.移植7天后,患者视觉模拟疼痛评分(VAS)均值由移植前的8.8降为2.4;脑脊液中APA-BCC微囊形态无明显变化;细胞活率由平均91.2%降为89.1%;L-EK含量较移植前增加了1.65倍.将APA-BCC微囊植入癌痛病人脑脊液中能够保持细胞存活、分泌亮啡肽,并产生镇痛效应.
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内质网应激对微囊化HepG2细胞脂代谢影响及调控研究
研究内质网应激发生对微囊化细胞脂代谢调节的影响,探讨内质网应激拮抗剂对微囊化细胞生长代谢调控的可行性.采用静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测微囊化对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达影响；通过MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白蛋白含量,乙烷-丙酮法抽提测定胞内总胆固醇和甘油三酯含量,并比较拮抗剂四苯基丁酸(4-PBA)干预后相关指标变化.结果显示,微囊细胞中内质网应激标识蛋白GRP78和CHOP表达量分别为同天数下平面细胞3.6倍和1.9倍(P＜0.05),胞内总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)含量分别为平面细胞1.7倍和3.2倍(P＜0.05).内质网应激拮抗剂4-PBA在1.0 mM可显著增加微囊化细胞活性.干预后GRP78和CHOP基因表达水平降低50％和30％ (P ＜0.05),胞内CHO和TG含量降低30％和15％ (P ＜0.05),并使白蛋白水平较对照组显著提高(P＜0.05).结果提示微囊内存在内质网应激,且与微囊细胞脂代谢失调有关；内质网应激拮抗剂能缓解微囊对细胞的以上作用.
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微囊化对HepG2细胞渗透压调节基因表达影响及调控研究
探讨微囊微环境对HepG2细胞渗透压调节基因表达影响及抗渗透压物质干预效果.静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测不同培养方式下钠/肌醇转运蛋白(SMIT)和牛磺酸转运蛋白(TAUT)基因表达；通过MTT法检测细胞活性、ELISA法检测白蛋白含量,比较牛磺酸和海藻糖干预后指标变化.结果表明,不同培养方式间SMIT表达无显著差异；微囊化细胞TAUT表达增高,是平面细胞4.3倍(P＜0.01)；添加1～1.5 mM牛磺酸后,囊内细胞活性较对照组增加约15％ ～30％,白蛋白水平增加15％(P＜0.05)；海藻糖虽在0.1 mM时使囊内细胞活性增加20％ ～30％ (P ＜0.05),但对白蛋白分泌水平无显著影响.微囊内存在高渗应激因素诱导基因表达改变,牛磺酸和海藻糖能拮抗其对细胞的抑制作用.
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APA-3T3细胞微囊的深低温保存
目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法.方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊.以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA).分别将不同的冻存液加入APA-3T3中.按程序控制降温梯度,置于液氮中保存.快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性.结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P＜0.01.微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P＜0.01.②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度小,活率达(73±1.26)%,P＜0.01.微囊完好率高,为(85.1±0.82)%,P＜0.01.③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响.结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性.
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微囊化细胞冻存的研究进展
背景:细胞微囊化为细胞大规模、高活性体外培养及长期存储提供了新的途径,低温保存是目前保存细胞的重要方法,技术日新月异,复苏细胞在临床和基础研究中的应用越来越多.目的:分析近年来微囊化细胞冻存的相关研究,对微囊化细胞冻存技术的发展作一总结.方法:以"微囊,冻存"为检索词,检索中国期刊网(1979/2010)及维普数据库(1989/2010),限定文章语言种类为中文;以"Cryopreservation,Microencapsule"为检索词,检索PubMed数据库(1979/2010),限定文章语言种类为English.纳入含有微囊化细胞冻存的研究,排除其他形式细胞冻存的研究,结果以各种细胞微囊化后进行冻存处理后产生作用为指标,共检索到43篇文献.结果与结论:随着生物人工肝与以及其他细胞移植研究的深入,对微囊化细胞的需要量将显著增加,微囊化细胞的低温保存技术已成为保正其顺利应用的关键技术之一.目前,微囊化细胞的低温保存技术已经开展了不少研究,有多项研究结果表明复苏后微囊化细胞的存活率和生物学功能都能保持较好的水平,但相关机制仍未完全阐清,各种冻存方法还需要优化.
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微囊化人肾上腺嗜铬细胞瘤细胞在人工脑脊液中的生长和分泌特征
背景：微囊化细胞是目前常用的免疫隔离工具，可以解决细胞蛛网膜下腔移植存在的免疫排斥问题，然而微囊化对人嗜铬细胞瘤细胞分泌功能的影响尚不明确。
目的：观察微囊化的人嗜铬细胞瘤细胞在人工脑脊液中的生长及分泌功能。
方法：取手术切除的人嗜铬细胞瘤组织，采用连续分次胶原酶消化法分离人嗜铬细胞瘤细胞，并用人工脑脊液进行原代细胞培养。用海藻酸盐-聚赖氨酸-海藻酸盐微囊包裹原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞，用倒置相差显微镜观察人工脑脊液中的微囊化和非微囊化的人嗜铬细胞瘤细胞的形态；用CCK-8试剂盒测定人嗜铬细胞瘤细胞的增殖情况；用Elisa试剂盒检测微囊化和非微囊化的人嗜铬细胞瘤细胞分泌的去甲肾上腺素和甲硫氨酸脑啡肽浓度。
结果与结论：微囊化的人嗜铬细胞瘤细胞镜下呈悬浮、聚集生长状态，细胞突起观察不明显。与非微囊化组相比，微囊化人嗜铬细胞瘤细胞增殖较快，甲硫氨酸脑啡肽和去甲肾上腺素的分泌量较多。但不同病例来源的细胞，甲硫氨酸脑啡肽和去甲肾上腺素的分泌量差异较大。提示微囊化的人嗜铬细胞瘤细胞在人工脑脊液中具有良好的生长和分泌功能，并且不同病例来源的人嗜铬细胞瘤细胞可以相对稳定地分泌甲硫氨酸脑啡肽和去甲肾上腺素。 -
微囊化培养肝癌细胞F-肌动蛋白分布特征
自从Lim和Sun于1980年提出生物微胶囊概念以来[1],微胶囊技术在生物医学领域被广泛应用.细胞在微胶囊内呈三维立体多细胞聚集生长,这种聚集生长具有贴壁细胞无法比拟的优点,更接近在体细胞、组织的特性[2].细胞骨架与细胞运动、细胞形态和跨膜信息传递等功能密切相关[3].对于微囊化细胞,至今未见有关共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察骨架蛋白表达的研究报道,本文旨在利用CLSM技术结合荧光探针双重标记技术对微囊化肝癌细胞进行观察和分析,探讨微囊化肝癌细胞的形态及细胞骨架的空间结构.
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微囊化细胞经脾脏移植治疗糖尿病
本研究旨在探讨是否经脾脏移植微囊化胰岛素分泌细胞能够纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,从而为糖尿病的细胞治疗选择新的移植部位奠定实验基础.一、材料和方法
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微囊化对HepG2细胞氧化应激基因表达影响及调控研究
探讨微囊微环境对HepG2细胞氧化应激基因表达影响及外源性抗氧化物质干预效果.采用静电液滴法制备微囊化细胞,real-time PCR法检测不同培养方式下血红素加氧酶-1(HO-1)和谷胱甘肽转硫酶-A1(GST-A1)表达;通过MTT法检测细胞活性、ELISA法检测白蛋白含量,比较还原型谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预后指标变化.结果显示,培养第6d和第16 d时,微囊细胞中HO-1基因表达水平分别为同天数下平面细胞的4.9倍和3.1倍,GST-A1表达分别为平面细胞的11.2倍和33倍(P＜0.05);添加5～10 mmol/L NAC后,微囊化细胞活性较对照组增加40％ ～70％,白蛋白水平增加20％ ～30％(P＜0.05),而GSH在10 mmol/L时可使囊内细胞活性增加20％ ～55％,白蛋白水平增加15％ (P＜0.05).结果提示微囊内存在氧化应激因素诱导基因表达改变,NAC和GSH能缓解其对细胞的抑制作用.
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ACA微囊化细胞膜渗透性能研究
人工细胞的概念由加拿大McGill大学M.S. T.Chang教授于1957年首次提出并应用具有半渗透性薄膜的微胶囊固定活性细胞组织取得成功.由于微胶囊膜起到了类似细胞膜的作用,且固定后体系的形态和功能酷似活体细胞,所以称之为"人工细胞".目前成熟的人工细胞体系是海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸(APA)体系.而对海藻酸-壳聚糖-海藻酸(ACA)体系人工细胞的研究多以虾蟹壳聚糖为膜材料,与虾蟹壳聚糖相比,蛆壳聚糖粘度较小,分子量较低且较易溶解,更适于用作人工细胞膜材料,因此我们选用蝇蛆壳聚糖制备ACA人工细胞.
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ACA系微囊化细胞粒径的控制
人工细胞的概念由加拿大McGill大学T.M.S.Chang教授于1957年首次提出并应用具有半渗透性薄膜的微胶囊固定活体细胞或组织取得成功.由于微胶囊膜起到了类似细胞膜的作用,且固定后体系的形态和功能酷似活性细胞,所以称之为"人工细胞".目前,随着材料科学和生物技术的发展,具有生物相容性以及半渗透性薄膜的微胶囊已被广泛应用于人工细胞和器官移植,细胞培养工程,细胞和酶固定化工程,蛋白质及其它化合物的分离提纯以及药物控制释放等方面.
