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抗纤复方对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动子活性的影响
目的:探讨抗纤复方(AFC)对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动子活性的作用及其机制.方法:以含人α1(Ⅰ)前胶原基因上流2.3kb,0.8kb,476bp,173bp启动子片段为研究靶序列,以氯霉素乙酰基转移酶(CAT)为报告基因,构建基因重组质粒,转染成纤维细胞(NIH3T3),建立稳定的α1(Ⅰ)前胶原启动子转染细胞体系,用抗纤复方和(或)转移生长因子(TGFβ1)处理NIH3T3细胞,测定CAT活性.结果:(1)抗纤复方能够抑制α1(Ⅰ)前胶原启动子报导基因质粒phCAT-Cα1(Ⅰ)2.3,phCAT-Cα1(Ⅰ)0.8,phCAT-Cα1(Ⅰ)0.4的活性,不能抑制α1(Ⅰ)前胶原启动子报导基因质粒phCAT-Cα1(Ⅰ)0.1的活性;(2)TGFβ1能促进phCAT-Cα1(Ⅰ)2.3的活性,抗纤复方能拮抗TGFβ1这一促进作用.结论:抗纤复方能够作用于胶原α1(Ⅰ)基因调控片段,抑制胶原合成.
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AngⅡ、TGF-β1和FN对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞合成胶原的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子β1（TGF-β1）、洛沙坦（Losartan）、纤维粘连蛋白（FN）对培养的SHR和WKY大鼠心肌成纤维细胞（CFb）合成胶原的影响。方法 采用组织块贴壁法培养CFb，分别测定AngⅡ、TGF-β1、Losartan、FN干预下CFb的 3H-脯氨酸（ 3H-Proline）掺入量。结果 AngⅡ、TGF-β1、FN促进CFb的 3H-Proline掺入量，Losartan抑制10-7M AngⅡ诱导的CFb的 3H-Proline掺入。结论 AngⅡ、TGF-β1、FN对CFb的胶原合成有促进作用，Losartan可拮抗AngⅡ的作用。
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血管紧张素Ⅱ和转移生长因子β1在二肾一夹高血压大鼠血管重构中的作用
目的探讨二肾一夹高血压大鼠(2K1Ca-HR)血管重构中AngⅡ、TGFβ1的作用机制.方法动物分为实验组、对照组、治疗组,观察循环、组织AngⅡ含量、肠系膜阻力动脉TGFβ1表达及对enalapril的反应.结果术后2周实验组血管AngⅡ明显增高(P＜0.01)持续至12周,血浆AngⅡ也显著升高并持续至8周,但呈下降趋势,术后12周与术后2周发生显著差异(P＜0.01).实验组从2周开始出现血管重构以后进行性加重.对照组血管组织无TGFβ1表达,实验组各时相点肠系膜阻力动脉中层VSMCs TGFβ1表达阳性.enalapril-可降低循环、血管AngⅡ至对照组水平,治疗组无血管形态改变TGFβ1表达阴性.结论TGFβ1在2K1C-HR血管重构中发挥作用,其表达活化与血管组织AngⅡ的升高关系密切.enalapril具防止血管重构的血管保护作用,可能与其抑制了AngⅡ升高、TGFβ1表达有关.
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外周血淋巴细胞转化生长因子β1 mRNA表达与慢性移植物肾病的关系
目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)在慢性移植物肾病(CAN)发生发展中的作用以及免疫抑制剂对TGF-β1的影响. 方法采用实时荧光定量PCR检测15例CAN和22例非CAN患者外周血淋巴细胞TGF-β1 mRNA表达,分析CAN、免疫抑制剂和TGF-β1 mRNA表达3者之间的关系. 结果 CAN组TGf-β1 mRNA表达明显高于非CAN组,分别为0.155±0.027和0.123±0.028(P＜0.01).服用环孢素(CsA)的患者TGF-β1 mRNA表达明显高于服用他克莫司(FK506)者,CAN组分别为0.170和0.137(P＜0.01),非CAN组分别为0.135和0.106(P＜0.01).TGF-β1 mRNA表达与肾移植受者血肌酐(r2=0.77,P＜0.01)和血尿素氮(r2=0.63,P＜0.01)呈良好线性关系.结论 CsA能引起肾移植受者外周血淋巴细胞TGF-β1 mRNA高表达,后者可诱发和促进CAN的发生与发展.
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大鼠脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的改变及转移生长因子β1的表达
目的探讨大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)通透性的改变以及转移生长因子β1(TGF-β1)在脑组织中的表达.方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,通过测定脑组织中伊文氏蓝(EB)含量及免疫组化法来观察TGF-β1的表达.结果缺血2h再灌注3h,BBB通透性开始增加,24h达高峰,72h后明显减弱.同时,TGF-β1在缺血再灌注3h开始表达,24h达高峰,持续至72h 72h后逐渐减弱.结论脑缺血后BBB的破坏与TGF-β1的表达密切相关,提示TGF-β1参与了BBB内皮细胞破坏的修复过程.
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强肌健力方对肺脾两虚型COPD大鼠气道壁厚度和转移生长因子β1的影响
目的:观察肺脾两虚型COPD大鼠模型气道重塑、TGF-β1的表达,以及强肌健力方对气道壁厚度及TGF-β1表达的影响.方法:利用烟熏和气道内2次滴入脂多糖合并番泻叶冷服泻下法复制肺脾两虚型COPD大鼠模型.采用随机平行对照的实验方法,将40只SD大鼠随机分为强高组、强低组、模型组和正常组4组,每组各10只.造模结束后,取各组大鼠肺组织切片行HE染色,光镜下观察病理改变,并用测微尺测量气管壁厚度,采用荧光定量PCR法检测肺组织TGF-β1 cDNA的含量.结果:模型组基本符合人类COPD病理生理变化.模型组气道壁厚度较正常组明显增厚(P＜0.05),强高组气道壁厚度明显变薄,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),但强低组与模型组比较无明显变化(P＞0.05).模型组肺组织TGF-β1cDNA含量较正常组明显升高(P＜0.01),强高组、强低组肺组织TGF-β1cDNA含量明显降低,与模型组比较有显著性差异(P均＜0.01),但强高、强低组组间比较无显著性差异(P＞0.05).结论:慢性烟熏和气道内滴入LPS合并番泻叶冷服泻下法能构建含有气道重塑特征的肺脾两虚型COPD大鼠模型;强肌健力方能抑制肺脾两虚型COPD大鼠TGF-β1的表达,减轻气道炎症,减少气道壁厚度的增加.
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高加速度环境作用颞下颌关节软骨基质成分与相关生长因子及炎性因子的变化
背景：强大的加速性能可产生持续性高正加速度(+Gz)，使颞下颌骨关节内部受到各种方向的压力和撞击，引起微小创伤，进而引发颞下颌关节紊乱病症。目的：观察颞颌关节紊乱后软骨关节基质成分Ⅱ型胶原、多糖聚糖体、胶原酶以及胰岛素样生长因子1、转移生长因子β1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素2与白细胞介素3的变化。方法：建立不同持续性正高加速度(+Gz)环境和作用时间下的大鼠模型，分成阴性对照组，+5 G加速度组，+10 G加速度组。按不同+Gz值进行正高加速度模拟处理，离心5 min，4 d/周，每天连续离心5次，共持续3周；阴性对照组大鼠按相同时间和频次只在离心机的固定装置上固定5 min，不做持续高正加速度离心处理，每天离心前所有动物均空腹12 h。分离并体外培养各组大鼠的颞下颌软骨细胞，提取总蛋白， Western Blot检测。结果与结论：与阴性对照组比较，在持续性高加速度下，颞下颌关节软骨细胞的软骨基质成分Ⅱ型胶原、多糖聚糖体、胶原酶以及胰岛素样生长因子1、转移生长因子β1明显减少，肿瘤坏死因子α、白细胞介素2与白细胞介素3显著增高。结果说明在持续性高正加速度下，颞下颌关节软骨基质成分受到严重影响，修复能力下降，炎症反应增加。
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TGF-β1基因rs200482214位点多态性与黑龙江省汉族人群慢性牙周炎的相关性研究
目的:探讨转移生长因子β1 (transforming growth factor beta-1,TGF-β1)位点rs200482214基因多态性与黑龙江省汉族人群慢性牙周炎的易感性的相关性.方法:选取2012年3月至2013年7月在哈尔滨医科大学附属口腔医院牙周科就诊的135例轻、中、重度慢性牙周炎汉族患者(牙周炎组)和108例汉族健康对照者(健康对照组)作为研究对象,基因组DNA来自口腔颊粘膜拭子,采用多重单碱基延伸SNP分型技术(Multiplex SNaPshot technique)对所有受试者TGF-β1基因rs200482214位点进行检测,比较两组间此位点基因型分布和等位基因频率的差异.结果:(1)TGF-β1基因rs200482214位点各基因型(GG、GA、AA)分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＞0.05);(2)TGF-β1基因rs200482214位点GG、GA、AA在牙周炎组和健康对照组的分布频率分别为61.5％、30.4％、8.1％和63.0％、28.7％、8.3％,两组人群基因型分布频率差异无统计学意义(P＞0.05);等位基因G、A在牙周炎组和健康对照组分布频率分别为76.7％、23.3％和77.3％、22.7％,两组人群的等位基因分布频率差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论:TGF-β1位点rs200482214基因多态性与黑龙江省汉族人群慢性牙周炎的易感性不具有相关性.
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地氟醚预处理对心肌损伤与修复的影响
目的观察血中转移生长因子β1(TGFβ1)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶-同工酶(CK-MB)的浓度在地氟醚预处理心肺转流(CPB)前后的变化. 方法选择瓣膜置换术病人20例,随机分为地氟醚组和芬太尼组,直接动脉测压连续监测血流动力学变化;比色法测血中CK、CK-MB的浓度;ELISA测血浆中TGFβ1的变化. 结果二组病人的血流动力学变化过程基本一致;CK、CK-MB浓度于CPB后10min即显著升高(P<0.01),CPB后60min进一步上升(P<0.01),但两个时间点的组间比较均无显著差异.TGFβ1的变化过程与此不同,CPB后地氟醚组的TGFβ1值显著降低(P<0.01),再灌注60min时进一步下降(P<0.01),芬太尼组的TGFβ1于CPB后两个时间点均变化不明显.结论地氟醚预处理对心肌损伤的影响与芬太尼相似;鉴于TGFβ1主要参与受损组织的修复过程,地氟醚预处理可能不利于促进再灌注后受损组织的修复.
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高血压合并腔隙性脑梗死转移生长因子β1的变化
目的探讨转移生长因子β1(TGFβ1)在高血压合并腔隙性脑梗死中的作用.方法46例经核磁共振明确诊断为高血压合并腔隙性脑梗死的病人,用双抗体夹心(ELISA)法测定血清TGFβ1浓度,并与无腔隙性脑梗死的高血压病人及正常人进行比较. 结果高血压合并腔隙性脑梗死的病人血清TGFβ1浓度为41.3±7.4ng/ml,显著高于正常人(26.4±6.3ng/ml),但与无腔隙性脑梗死的高血压病人(40.9±7.3ng/ml)比较无显著性差异(P＞0.05).结论TGFβ1在合并腔隙性脑梗死的高血压没有进一步升高,可能反映缺血性损伤与出血性损伤在发病机制或病理变化上的差异,但不能排除TGFβ1对脑缺血性损伤的不良作用.
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充血性心力衰竭肾脏致纤维机制的研究
目的观察不同程度充血性心力衰竭时肾脏转移生长因子β1(TGF-β1)和纤维结合素(FN)的改变以及血管紧张素转换酶抑制剂福辛普利对其的影响.方法将SD大鼠通过腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘和冠状动脉结扎的方法建成不同的心力衰竭模型,并对冠状动脉结扎大鼠予福辛普利治疗.通过Doppler超声心动图比较心功能的各项参数,并采用免疫组织化学和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测肾脏TGF-β1和FN的基因和蛋白表达.结果穿刺造瘘大鼠的心功能损害较轻.而冠状动脉结扎大鼠心功能严重失代偿.福辛普利可以部分缓解冠状动脉结扎大鼠的心肌肥厚和受损的心功能.两组心力衰竭大鼠肾脏TGF-β1的基因和蛋白水平以及FN的蛋白表达明显增强(P＜0.001).福辛普利能显著改善冠状动脉结扎大鼠肾脏TGF-β1和FN表达的异常.结论充血性心力衰竭早期即出现肾脏TGF-β1和FN的表达增加,福辛普利通过下调其表达,可能会对预防和治疗肾脏病变的发生和发展有一定的帮助.
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基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨虾青素对心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
目的 观察虾青素(astaxanthin,ASTX)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)I型胶原(collegeⅠ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原(collegeⅢ,ColⅢ)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 分离新生乳鼠的CFs,TGF-β1诱导CFs,使用ASTX(0、5、10、20、40、80、160μmol·L-1)预处理CFs 24 h.采用MTT法测定不同浓度ASTX对CFs细胞活性的影响;采用DCFH-DA试剂盒检测CFs细胞内活性氧(ROS)生成;采用siRNA技术沉默Smad3基因,采用real-time PCR和Western blot检测Smad3沉默前后ColⅠ、ColⅢmRNA及ColⅠ、ColⅢ、Smad3蛋白表达水平.结果 ASTX在0～20μmol·L-1范围内不仅无明显的细胞毒性,且能够明显减少TGF-β1诱导的CFs内ROS生成(P<0.05).ASTX能够明显抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达(P<0.01),且呈浓度依赖性.此外,ASTX还可以明显下调TGF-β1诱导的CFs Smad3磷酸化(P<0.01);使用特异性siRNA对Smad3基因沉默后,ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达亦明显减少(P<0.01).结论 ASTX能够有效抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达,可能的机制是下调Smad3磷酸化.
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转移生长因子β1对体外培养破骨细胞功能影响的实验研究
目的:探讨转移生长因子β1(TGF-β1)对体外培养破骨细胞功能影响的机制.方法:酶动力学法测定培养基中酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性;共聚焦激光扫描显微镜观察体外培养破骨细胞内氢离子随TGF-β1浓度的变化情况;Leica Quantimet 500图像分析系统对骨吸收陷窝进行图像分析;扫描电镜观察骨吸收陷窝变化.结果:随着TGF-β1浓度的升高,处理组与对照组ACP和TRAP的活性分别从(1.71±0.33U)/L和(1.41±0.29)U/L降低到(1.32±0.21)U/L和(1.01±0.11)U/L(均为P＜0.01),骨吸收陷窝的数目与面积从(16.67±1.35)个/片和(582.24±178.68)μm2减少到(13.29±1.47)个/片与(442.38±148.27)μm2,处理组与对照组比较差异具有显著性(P＜0.01).破骨细胞相对荧光值无显著性差异,表明TGF-β1对体外培养破骨细胞分泌H+无明显影响.结论:TGF-β1虽然不能抑制氢离子释放,但能通过改变酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性,进而直接抑制体外培养破骨细胞的骨吸收功能.
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高低转移潜能肝癌细胞OPN、TGFβ1基因沉默位点的筛选
目的 通过对高低转移潜能肝癌细胞进行骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和转移生长因子β1 (transforming growth factor β1,TGFβ1)基因沉默的位点进行筛选,筛选佳基因沉默位点.方法 qPCR检测MHCC97-H和MHCC97-L细胞两种因子表达差异情况,对MHCC97-H TGFβ1和MHCC97-L OPN高表达组进行基因沉默,每组确定3个基因位点进行沉默,Western blotting法分析各组OPN和TGFβ1表达.qPCR定量分析各组沉默效果.结果 qPCR检测显示:与MHCC97-L细胞比较,MHCC97-H细胞中TGFβ1表达量更高,与MHCC97-H细胞比较,MHCC97-L细胞中OPN的表达量更高(P＜0.05).qPCR定量分析3个位点沉默效果显示MH-CC97-L OPN siRNA 226、MHCC97-H TGFβ1 siRNA 1382沉默效果较好(P＜0.05).MHCC97-L OPN不同位点沉默效果电泳图结果显示所有沉默组MHCC97-L细胞中OPN蛋白已降到非常低水平,而MHCC97-H TGFβ1不同位点沉默效果电泳图结果显示TGFβ1沉默效果1382位点明显.结论 不同的基因位点沉默效果存在差异,MHCC97-L OPN siRNA 226和MHCC97-H TGFβ1 siRNA 1382位点沉默效果佳.通过确定佳沉默效能的基因位点,可以达到基因佳沉默效能为后续实验提供研究基础.
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补肾法防治原发性骨质疏松症的细胞、分子作用机理研究
目的:在骨细胞及分子水平观察了补肾法防治骨质疏松作用环节.方法:以建立的成骨细胞、破骨细胞及骨髓基质细胞培养体系进行体外实验,采用MTT比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷渗入法测定成骨细胞增殖及分化;采用流式细胞仪观察成骨细胞的凋亡;采用原位分子杂交研究TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达.结果:补肾法可促进成骨细胞的增殖及分化;部分保护由肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡,使成骨细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达增强;抑制破骨细胞的骨吸收活性;降低破骨细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.结论:补肾法具有抑制骨吸收,促进骨形成的双重药效作用,其机理部分是在mRNA水平上,通过对骨细胞内的TGF-β1、MMP-9等影响骨代谢的细胞因子及蛋白酶的调控而达到的.
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按摩抑制兔钝挫伤骨骼肌瘢痕形成的机制研究
目的 观察按摩对实验兔受损股四头肌转移生长因子(TGF-β1)及Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA表达的影响,以探讨按摩抑制瘢痕形成的相关机制.方法 共选取健康成年雄性新西兰大白兔40只,采用随机数字表法将其分为正常对照组(4只)、自然恢复组(20只)及按摩组(16只).正常对照组饲养期间未给予特殊处理,采用自制打击器将自然恢复组及按摩组实验兔制成兔右后肢股四头肌损伤模型.按摩组实验兔于制模后第5天时给予按摩治疗,自然恢复组制模后未给予按摩治疗.于制模后7d、11d、15d及19d时采用实时定量RT-PCR法检测各组实验兔TGF-β1,COL-Ⅰ mRNA表达情况.结果 在制模后第7天时,发现按摩组TGF-β1、COL-ImRNA表达量与自然恢复组间差异无统计学意义(P＞0.05),在制模后第11,15及19天时,发现按摩组TGF-β1、COL-Ⅰ mRNA表达量均显著低于自然恢复组水平(P＜0.05).结论 按摩能显著降低实验兔受损股四头肌TGF-β1及COL-Ⅰ mRNA表达,有助于抑制瘢痕过度形成,从而促进受损肌组织修复.
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转移生长因子在大鼠脊髓损伤后的变化及意义
目的比较转移生长因子(TGF- β1)在脊髓损伤后与正常组的表达差异. 方法采用免疫组化染色方法(S- P法),观察TGF- β1在脊髓中的分布,以图像分析技术对损伤后的变化进行定量分析. 结果在正常脊髓中,TGF- β1阳性细胞极少(3.0±0.5个),脊髓损伤后,表达阳性细胞数增多,(3 d达24.4±0.4个,7 d达53.5±0.9个,P＜0.01),主要为小胶质细胞和巨噬细胞. 结论 TGF- β1可能在脊髓损伤后的自身修复与再生方面起重要作用.
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TGF-β1基因rs1800471位点多态性与汉族人群慢性牙周炎的相关性研究
目的:探讨转移生长因子β1(transforming growth factor beta-l,TGF-β1)rs1800471基因多态性与汉族人群慢性牙周炎的相关性.方法:选取135例慢性牙周炎患者和108例健康者作为研究对象,基因组DNA来自口腔颊黏膜拭子,采用多重单碱基延伸SNP分型技术(Multiplex SNaPshot technique)对该位点进行检测,比较两组间此位点基因型和等位基因频率的差异.结果:TGF-β1 rs1800471位点各基因型分布均符合Hardy-Weinberg 遗传平衡定律;TGF-β1 rs1800471位点基因型和等位基因分布频率有统计学意义(P＜0.05).结论:TGF-βrs1800471基因多态性与汉族人群慢性牙周炎的易感性具有相关性.
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TGF-β1对新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅳ型胶原合成的影响
目的:探讨TGF-β1对原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型与Ⅳ型胶原表达的影响.方法:取出生1-3天的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞;分别用不同浓度的TGF-β1 (10 ng/mL 、1ng/mL、0 ng/mL)干预心肌成纤维细胞,于干预后24h采用免疫细胞化学染色法检测Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原的表达.结果:1. 以胰酶与Ⅱ型胶原酶合用消化分离新生大鼠心肌成纤维细胞,可将心肌细胞和心肌成纤维细胞分离,心肌成纤维细胞抗波形蛋白(vimentin) 染色阳性,抗α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin) 染色阴性.2. 用0(对照组)、1、10 ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞24h后,免疫细胞化学染色法发现心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原的表达随着TGF-β1浓度的增加而增加.结论:TGF-β1能促进细胞外基质的合成,增强Ⅰ型和Ⅳ型胶原的表达.
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转化生长因子β1对远期移植肾功能影响的临床观察
目的 探讨肾移植受者转化生长因子β1(TGF-β1)与远期移植肾功能的关系.方法 1999年8月～2001年6月期间对肾移植术后满1年、肾功能正常的患者检测血、尿TGF-β1浓度,并对上述患者进行3年以上的前瞻性观察,对观察期内肾功不全的患者明确是否为慢性移植肾肾病(CAN).3年后共有134例患者完成了全程随访,根据术后1年时尿TGF-β1不同的浓度,比较其在3年观察期内肌酐清除率(Ccr)损失量有无差异;其中有16例诊断为CAN的患者,比较CAN患者与非CAN患者在肾移植1年时的血、尿TGF-β1等有无差异.结果 上述134例患者术后1年时尿TGF-β1浓度为:135.6～442.3 pg/mg·Cr;尿TGF-β1浓度高的患者在3年观察期内Ccr损失量明显大于尿TGF-β1浓度低的患者;非CAN与CAN患者在肾移植1年时,尿TGF-β1相对浓度分别为(182.7±40.2)和(398±33.5)pg/mg·Cr(P＜0.01),血TGF-β1浓度分别为(32.1±4.7)和(31.9±4.8)ng/ml(P＞0.05).结论 TGF-β1可能在CAN的发生过程中起着重要作用,CAN患者在肾功能异常前尿TGF-β1已显著升高,肾移植后早期检测尿TGF-β1对远期肾功能具有一定的预测作用.
