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新疆紫草提取物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)Johst.又名新疆软紫草、新藏假紫草,属紫草科Boraginaceae多年生草本植物,是《中国药典》收录的3种紫草科植物之一.紫草的有效成分主要为2大类[1,2]:一类是脂溶性很强的萘醌类色素,包括紫草素(shikonin),乙酰紫草素(acetyl shikonin),β-羟基异戊酰紫草素(β-hydroxyisovaleryl shikonin),β,β'-二甲基丙烯酰紫草素(β,β'-dimethylacryl shikonin),去氧紫草素(deoxy shikonin)等.另一类是水溶性成分,主要为多糖和酚酸类等.现代药理实验表明,它们具有多种生理活性,主要是杀菌抗病毒、抗炎、抗肿瘤、保肝以及免疫调节等作用[3-6].为阐明新疆紫草的药理活性,在以往研究的基础上,用新疆紫草的不同提取物(脂溶性提取物AEJ-Ⅰ、水溶性提取物AEJ-Ⅱ)对D-氨基半乳糖(D-GalN)所致小鼠急性肝损伤模型进行了研究,以探明其保肝作用,旨在为新疆紫草的进一步开发研究提供实验依据.
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HPLC法测定紫草中萘醌类成分
目的 建立紫草中3种萘醌类成分的HPLC测定方法.方法 采用流动相制备供试液;色谱柱为Kromasil100-5C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲酸(700∶ 300∶0.5),流速为1.0 ml ·min-,检测波长为516 nm,柱温为室温.结果 左旋紫草素、乙酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁分别在0.016～0.32、0.14～2.8、0.16 ～3.2 μg范围内具良好线性关系,平均回收率为分别为102.57％、100.16％、97.99％;6批商品紫草饮片中3种萘醌类成分的含量波动较大.结论 该方法简便易行,能同时测定紫草中3种萘醌类成分,可用于紫草的质量控制.
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中低压制备型色谱制备紫草萘醌成分的研究
目的 建立新的色谱技术,分离纯化紫草萘醌成分.方法 采用中低压制备色谱和Flash柱进行分离纯化,利用理化性质和核磁共振谱、红外、质谱等技术鉴定结构,用高效液相色谱技术分析单体的纯度.结果 分离鉴定了6个化合物.分别为去氧紫草素,紫草素,异丁酰紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素,β,β·二甲基丙烯酰紫草素,纯度分别是99.62％,99.02％,99.5％,99.31％,99.3％,99.2％.结论 首次建立中低压色谱技术,快速、准确分离紫草药材的单体成分.
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乙酰紫草素对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及上皮间充质转化的影响
目的 探讨乙酰紫草素对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 HCT116细胞经终浓度为0、3、6、12、24 μmol/L的乙酰紫草素处理后,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,Hoechst染色法检测凋亡指数,实时定量PCR法检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白及波形蛋白mRNA表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测纤维连接蛋白表达.结果 乙酰紫草素可呈剂量和时间依赖的方式提高HCT116细胞增殖抑制率;乙酰紫草素也可使HCT116细胞早、晚期凋亡率及总凋亡率,细胞凋亡指数升高;同时,乙酰紫草素可以增加E-钙黏蛋白mRNA的表达,降低N-钙黏蛋白和波形蛋白mRNA及纤维连接蛋白的表达.结论 乙酰紫草素具有抑制人结肠癌HCT116细胞增殖、诱导其凋亡及抑制EMT进程的作用.
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HPLC法同时测定解毒生肌膏中6种成分
目的 建立HPLC法同时测定解毒生肌膏(紫草、白芷、当归等)中6种成分的含有量.方法 该药物甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.5％冰醋酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温30℃;检测波长300 nm(欧前胡素、异欧前胡素)和516 nm(紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素);进样量20 μL.结果 欧前胡素、异欧前胡素、紫草素、乙酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素分别在2.74 ～ 54.80 μg/mL(r=0.999 1)、1.90～ 38.00μg/mL(r=0.999 5)、2.12～42.40 μg/mL(r=0.999 2)、8.48 ～169.60 μg/mL(r=0.999 8)、4.92 ～ 98.40 μg/mL(r=0.999 7)、4.66～93.20 μg/mL(r=0.999 1)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为99.72％ (1.15％)、97.39％(1.49％)、98.29％ (1.87％)、99.29％(1.94％)、98.51％ (1.42％)、97.21％ (1.55％).结论 该方法简便准确,专属性强,重复性好,可用于解毒生肌膏的质量控制.
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紫檀茋和乙酰紫草素抑制B16 F10细胞增殖的协同作用
目的研究紫檀茋和乙酰紫草素对B16F10细胞的增殖抑制的协同作用与相关机制。方法通过系统药理学的方法对紫檀茋和乙酰紫草素的联合作用进行预测，并对可能靶点进行筛选及分析。体外采用MTT法测定紫檀茋、乙酰紫草素及联合用药对B16F10细胞的抑制效应；形态学水平观察细胞核的凋亡情况；流式细胞技术检测细胞凋亡及周期的变化；RT-PCR法检测细胞内相关基因的表达；体内实验采用C57BL／6小鼠移植瘤方法。结果紫檀茋有14个靶点与周期相关，乙酰紫草素有12个靶点与凋亡相关，且均有靶点与p53信号通路相关。紫檀茋、乙酰紫草素及联合用药对B16F10细胞的增殖均有抑制作用，并呈浓度剂量依赖性，并具有显著协同效果；联合给药组细胞凋亡率高，且周期阻滞在G1期；单一给药组的p53、Bax及p21基因的表达随给药时间的延长而增加，而Bcl-2、CDK2、Cyclin E基因的表达随给药时间而减少，联合给药组p53，Bax和Bcl-2的变化差异较单独给药组显著；体内抑瘤实验给药组均有不同程度的抑瘤效果，以联合给药组抑瘤率大。结论紫檀茋和乙酰紫草素对B16F10细胞的增殖有一定协同抑制作用，认为二者协同激活p53信号通路，诱导周期阻滞和凋亡而发挥药效。
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HPLC法同时测定紫草凡士林中5种萘醌类化合物的含量
目的:建立同时测定紫草凡士林中紫草素、乙酰紫草素、乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰紫草素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.2％甲酸溶液(48∶32∶20,V/V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为24℃,检测波长为516nm.结果:紫草素、乙酰紫草素、乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰紫草素的质量浓度分别在7.12～71.20μg/ml(r=0.999 4)、11.92～119.20 μg/ml(r=0.999 6)、4.07～40.70 μg/ml(r=0.999 7)、3.65～36.50 μg/ml(r=0.999 6)、5.11～51.10 μg/ml(r=0.999 5)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为100.82％、101.49％、97.99％、100.29％、101.74％,RSD分别为3.03％、1.25％、1.75％、2.25％、2.31％(n均为6).结论:该方法简单易行、结果准确、重复性好,适用于紫草凡士林的质量控制.
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RP-HPLC法同时测定新疆紫草中紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素的含量
目的:建立同时测定新疆紫草中紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素含量的方法.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil100-5 C18,流动相为乙腈-0. 1％甲酸溶液(80:20,V/V),流速为1. 0 mL/min,检测波长为516 nm,柱温为25℃, 进样量为10μL.结果:紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素检测质量浓度线性范围分别为0. 404~10. 100 μg/mL (r=0. 9998)、5. 350~107. 000 μg/mL(r=0. 9996)、2. 035~40. 700 μg/mL(r=0. 9998);定量限分别为0. 40、2. 91、1. 34 μg/mL,检测限分别为0. 12、0. 87、0. 40 μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2. 0％(n=6);加样回收率分别为99. 12％～104. 18％(RSD=1. 85％, n=6)、96. 51％~100. 21 ％(RSD=1. 43％, n=6)、98. 11％~102. 51 ％(RSD=1. 42％, n=6).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于新疆紫草中紫草素、乙酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素含量的同时测定.
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乙酰紫草素注射液对S180荷瘤小鼠抑瘤作用研究
目的:观察乙酰紫草素注射液对小鼠移植性肉瘤 S180 的抑瘤作用.方法:采用小鼠S180 肉瘤模型进行体内抑瘤实验.观察荷瘤动物的生长情况,测量各实验组小鼠肿瘤体积及瘤质量变化,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率 .治疗结束后取各鼠肿瘤组织及重要器官H E染色 , 光学显微镜下观察.结果:乙酰紫草素注射液的抑瘤率分别为25.28%、39.55%、56.00%.0.5、1、2mg/kg可使肿瘤细胞大量变性坏死,各实验组小鼠重要器官未见明显异常 .结论:乙酰紫草素注射液对S180荷瘤小鼠生长具有抑制作用.
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乙酰紫草素对小鼠肝癌移植性肿瘤的抑制作用初步研究
目的:观察乙酰紫草素对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用.方法:采用小鼠肝癌H22模型进行体内抑瘤实验.观察荷瘤动物的生长情况,测量各实验组肿瘤体积及瘤质量变化,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率.结果:乙酰紫草素低、中、高三个剂量组的抑瘤率分别为23.39%、26.61%、37.90%(P<0.05).各实验组小鼠免疫器官未见明显抑制.结论:乙酰紫草素对小鼠肝癌H22具有一定的抑制作用.
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用均匀设计法优选紫草素的提取工艺
紫草是常用的消热凉血中药之一,主要含紫草素和乙酰紫草素等,可用于治疗色素性紫癜和过敏性紫癜,外用治疗烧烫伤.经典的提取方法是用95%的乙醇浸泡,不仅成本高,生产周期也较长.
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HPLC测定滇紫草及其两个近缘种中乙酰紫草素的含量
目的 建立滇紫草、密花滇紫草和昆明滇紫草中乙酰紫草素的含量测定方法.方法 采用HPLC法测定滇紫草、密花滇紫草和昆明滇紫草中乙酰紫草素的含量.结果 乙酰紫草素在0.0952～1.9030 μg范围内呈良好的线性关系.精密度、稳定性、重复性和加样回收率均达到要求.结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于滇紫草及其两个近缘种中乙酰紫草素含量的测定.
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紫草的临床新用
紫草为多年生草本植物紫草Lishopermum eryhrorhizonSieh etzucc的根.其味甘,性寒,归肝经,功能凉血活血,解毒透疹.适用于麻疹或温热病发斑疹.近年来文献有所报道.紫草含紫草素(shikoin),乙酰紫草素(Acety-Ishikonin),B、B′-二甲基丙烯酰紫草素(B、B′-Dimethylacrylshikonin等.具有新的临床用法,疗效显著,现叙述如下.
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紫草的临床新用
紫草为多年生草本植物紫草Lishospermumerythrorhizon Sieh.etZucc的根.其味甘,性寒,归心、肝经;功能凉血活血,解毒透疹.适用于麻疹或温热病发斑疹.近年来文献有所道,紫草含紫草素(Shikoin),乙酰紫草素(Acetyl-Shikonin),B,B'一二甲基丙烯酰紫草素(B,B'一Dimethylacrylshikonin)等.具有新的临床用法,疗效显著,现总结如下.1 治疗肝炎病毒张有明所道以紫草为主药治疗甲肝80例[1].紫草有凉血活血、清热解毒、凉而不滞、活血而不散的特点.故重用紫草加入茵陈蒿汤治疗肝病毒所致的湿热内蕴,热毒郁结,肝功异常,谷丙转氨酶高达1000u.组方:紫草、板蓝根、茵陈各30g,垂盆草15g,大黄、桅子、山楂各10g.每日1剂,分早晚服.治疗7d为1疗程,共服1～4疗程,共治愈78例,总有效率97.5%.
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紫草素及其衍生物抗肿瘤作用的研究进展
紫草是常用的传统中药材:研究表明紫草具有抗生育、抗病原微生物、抗炎及抗过敏、解热、抗肿瘤、保肝、止血、降血糖、镇静和影响免疫功能等作用[1].紫草素(shikonin)是从天然紫草中提取的萘醌类(naphthoquinone)化合物,具有广谱的生物学和药理学活性[2].紫草主要的抗癌有效成分为萘醌类色素化合物,即紫草素及其衍生物,尤其以乙酰紫草素和β,β-二甲基丙烯紫草素为主要抗癌成分[3].紫草素及其衍生物对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用,并且呈时间和剂量的依赖性.
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HPLC 法测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草3种萘醌类色素的含量
目的：建立测定大鼠血浆及粪便中新疆紫草3种萘醌类成分含量的高效液相色谱法（HPLC 法）。方法采用 COSMOIL C18-AR-Ⅱ（4．6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，流动相 A 乙腈（A）-0．15％甲酸（B）（v／v）溶液，进行洗脱，流速1．0 mL／min，检测波长275 nm ，柱温25℃，检测时间35 min。结果血浆中左旋紫草素在0．40～6．40μg、乙酰紫草素在25．0～600．0μg、β，β′-二甲基丙烯酰紫草素在25．0～600．0μg 范围内均与峰面积呈线性关系，左旋紫草素回收率为97．78％～100．1％、乙酰紫草素为100．1％～100．2％、β-β′-二甲基丙烯酰紫草素为97．78％～100．1％，日间、日内 RSD 均＜1．5％。粪便中各组分在10～400μg／mL 范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率分别为（78．2±2．5）％、（82．0±2．9）％和（79．5±3．5）％。0～12、12～24、24～48 h 粪便中左旋紫草素绝对回收量分别为23．61、38．28、4．13 mg；乙酰紫草素分别为7．20、70．78、11．53 mg；β-β′二甲基丙烯酰紫草素分别为46．32、60．15、16．88 mg。结论HPLC 法准确可靠，重复性好，适用于测定血浆及粪便中新疆紫草萘醌类成分含量。
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新疆紫草HPLC特征图谱和紫草类药材6种萘醌类成分含量测定
目的:采用高效液相色谱法建立新疆紫草药材的特征图谱,并同时测定5种紫草类药材(软紫草属新疆紫草、内蒙紫草、滇紫草属长花滇紫草、滇紫草属滇紫草、硬紫草属硬紫草)6个主要羟基萘醌色素类成分的含量,比较不同基原紫草的化学成分差异.方法:以紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素为对照品,采用YMC Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05％甲酸水溶液(70∶30)为流动相,流速1 mL·min-1,检测波长275 nm,柱温30℃;采用CHEMPATTERN化学计量学软件对结果进行处理分析.结果:建立新疆紫草特征图谱,标定10个特征峰,30 min内紫草的主要色谱峰能够达到完全分离,对5种紫草类药材6个特征峰成分进行含量测定.紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素质量浓度分别在2.13～1 065 μg·mL-1 (r=0.999 3,n=6)、2.01～1 004μg·mL-1(r=0.999 8,n=6)、2.05～1 026 μg·mL-1(r=0.999 7,n=6)、1.92～960μg·mL-1 (r=0.999 9,n=6)、2.00～1 001 μg·mL-1(r=0.999 8,n=6)和1.87～937μg· mL-1(r=0.999 9,n=6)范围内线性关系良好,方法的平均回收率(n=6)分别为97.6％(RSD=1.9％)、96.6％(RSD=2.2％)、97.9％(RSD=1.1％)、98.4％(RSD=1.2％)、96.2％(RSD=1.1％)和97.3％(RSD=1.7％);19批新疆紫草中上述6个羟基萘醌类成分含量分别为0.01％～0.37％、0.02％～2.42％、0.02％～1.42％、0.02％～0.98％、0.05％～1.66％和0.09％～3.15％,2批内蒙紫草中均未检出β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁.结论:所建立新疆紫草特征图谱专属性强,结合6个主要羟基萘醌类成分含量测定能够区分各基原紫草,有助于全面评价紫草的质量,为规范紫草药材的使用提供科学依据.
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紫草提取物有效成分测定及对骨骼肌自由基代谢和抗疲劳能力影响的实验研究
目的:通过建立小鼠游泳和大鼠跑台2个训练实验模型,研究紫草提取物对骨骼肌自由基代谢的影响以及抗疲劳作用;并测定紫草提取物中的有效成分.方法:选取雄性小鼠和大鼠各24只,将小鼠随机分为游泳训练组(a组)、游泳力竭组(b组)和游泳加药组(c组),每组各8只;将大鼠随机分为跑台训练组(A组)、跑台力竭组(B组)、跑台加药组(C组),每组各8只.小鼠和大鼠按照不同的训练模型分另进行游泳和跑台训练,在训练方案的后1天,a、A组动物不进行训练,在安静状态下处死制备待测样本,并通过试剂盒测定骨骼肌超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、巯基(-SH)、丙二醛(MDA)指标;b、B、c、C组动物进行一次力竭运动,力竭后即刻处死并进行样本处理和上述指标测定.结果:训练对照组(b、B组)动物在游泳和跑台力竭运动后,骨骼肌组织抗氧化酶活性显著下降(P＜0.05),自由基代谢产物MDA含量显著升高(P＜0.05);补充紫草提取物组(c、C组)动物在力竭运动后,与训练对照组动物(b、B)相比,骨骼肌组织抗氧化酶活性显著升高(P＜0.05),自由基代谢产物MDA含量显著降低(P＜0.05),运动至力竭的时间明显延长(P＜0.05).结论:外源性补充紫草提取物可以改善骨骼肌组织自由基清除和代谢水平,延缓运动疲劳的产生.
