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穿山龙总皂苷对CIA大鼠滑膜血管内皮生长因子及其受体Flk-1的影响
目的:研究穿山龙总皂苷(TSRDN)对CIA大鼠滑膜血管新生的影响及其作用机制.方法:建立CIA大鼠模型,造模后给予TSRDN、雷公藤和薯蓣皂苷元灌胃,并采用免疫组化检测滑膜组织MVD、VEGF及Flk-1表达.结果:CIA模型组大鼠滑膜新生血管增多,MVD、VEGF及Flk-1表达升高(P＜0.01),给药后大鼠滑膜新生血管数量减少,MVD、VEGF和Flk-1表达降低(P＜0.01).结论:穿山龙总皂苷可能通过抑制VEGF和Flk-1的表达来发挥抗血管新生作用.
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穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠血清生物标志物的影响
目的:应用分光光度法和柱前衍生高效液相色谱法,测定穿山龙总皂苷(total saponins from rhizoma dioscorea nipponica,TSRDN)对痛风性关节炎大鼠血清中尿酸、肌酐、乳酸、甘氨酸和色氨酸含量的影响.方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、TSRDN高剂量组(160 mg· kg-1)、中剂量组(80 mg·kg-1)、低剂量组(40 mg·kg-1),以及阳性药秋水仙碱组(0.3 mg·kg-1).连续灌胃(ig)给予TSRDN 7 d.d3 ig给予1h后,膝关节上方髌上韧带进针,注射0.2 mL浓度为25 mg· mL-尿酸钠晶体混悬液到关节腔,造成实验性痛风性关节炎模型.甘氨酸和色氨酸的含量测定以2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorebenzene,DNFB)为衍生试剂,采用Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇∶乙腈(4∶6)为流动相A,0.03 mol·L-醋酸铵缓冲液(pH=6.8)作为流动相B,梯度洗脱,柱温30℃,流速1 mL· min-,检测波长360 nm;尿酸、肌酐和乳酸的含量采用紫外分光光度法检测.结果:在痛风性关节炎模型组,甘氨酸与色氨酸含量显著降低;尿酸、肌酐和乳酸含量显著升高.TSRDN给药组与模型组相比,甘氨酸和色氨酸含量显著升高;尿酸、肌酐和乳酸含量显著降低.结论:穿山龙总皂苷可能通过调控血清中尿酸、肌酐、乳酸、甘氨酸和色氨酸的含量发挥治疗痛风性关节炎的作用.
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穿山龙总皂苷对胶原诱导关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子、血管生成素-2及受体Tie-2表达的影响
目的 观察穿山龙总皂苷对胶原诱导关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子、血管生成素2及其受体Tie-2的影响,探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎的抗血管新生机制.方法 建立胶原诱导关节炎大鼠模型,动物随机分为空白对照组、胶原诱导关节炎模型组、穿山龙总皂苷组、雷公藤多苷组(作为阳性对照组)和薯蓣皂苷元组,采用实时荧光定量PCR方法检测大鼠膝关节滑膜血管内皮生长因子mRNA的表达情况,采用免疫组织化学方法检测大鼠膝关节滑膜血管生成素-2及其受体Tie-2蛋白的表达.结果 胶原诱导关节炎模型组大鼠滑膜血管内皮生长因子mRNA、血管生成素-2及Tie-2蛋白表达明显高于空白对照组(P＜0.01),经穿山龙总皂苷、雷公藤和薯蓣皂苷元治疗后血管内皮生长因子mRNA和血管生成素-2表达均低于胶原诱导关节炎模型组(P＜0.01)；而Tie-2表达呈降低趋势,差异无统计学意义.穿山龙总皂苷组血管内皮生长因子mRNA表达比雷公藤组和薯蓣皂苷元组血管内皮生长因子mRNA明显降低(P＜0.01).结论 穿山龙总皂苷可能通过降低滑膜血管内皮生长因子mRNA、血管生成素-2及Tie-2的表达,抑制滑膜血管新生,从而对类风湿关节炎发挥治疗作用.
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穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠尿液中生物标志物的影响
[目的]应用高效液相-紫外检测法(HPLC)和紫外分光光度法测定穿山龙总皂苷(RDN)对痛风性关节炎大鼠尿液中鸟苷、尿酸、肌酐含量的影响.[方法]60只雄性Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、穿山龙总皂苷高剂量组(160 mg/kg)、中剂量组(80 mg/kg)、低剂量组(40 mg/kg),和阳性药秋水仙碱组(0.3 mg/kg).连续灌胃穿山龙总皂苷7 d.第3天灌胃1 h后,膝关节上方髌上韧带进针,注射0.2 mL浓度为25 g/L尿酸钠晶体混悬液到关节腔,造成实验性痛风性关节炎模型.采用苏木精-伊红(HE)和伊红染色观察关节滑膜组织病理学变化.鸟苷的测定采用Diamonsil C18(5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇为流动相A,0.03 mol/L醋酸铵缓冲液(pH=4.65)作为流动相B,梯度洗脱,柱温25℃,流速为1 mL/min,检测波长254 nm;尿酸和肌酐的含量测定采紫外分光光度法检测.[结果]痛风性关节炎模型组尿液中鸟苷和肌酐含量显著降低;尿酸含量显著升高.穿山龙给药组与模型组相比,鸟苷、尿酸和肌酐含量显著升高.[结论]鸟苷、肌酐与尿酸均为痛风性关节炎发生发展的重要生物标志物,穿山龙总皂苷可通过调节其含量变化对痛风性关节炎起潜在治疗作用.
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穿山龙总皂苷对小鼠的急性毒性实验
目的:观察穿山龙总皂苷对小鼠的急性毒性作用.方法:采用灌胃和皮下注射的方法,一次性给药后连续观察7天,检测药物对小鼠的急性毒性作用.结果:未测得小鼠灌胃给予穿山龙总皂苷的半数致死量(Median lethal dose,LD50),灌胃给药小鼠的大耐受剂量(Maximum tolerated dose,MTD)为0.42g/kg/d,大耐受量倍数为1355倍.小鼠皮下注射穿山龙总皂苷的LD50为0.17g/kg.结论:穿山龙总皂苷口服给药较为安全.
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穿山龙总皂苷对佐剂性关节炎大鼠免疫调节作用的实验研究
目的:研究穿山龙总皂苷对佐剂性关节炎大鼠(AA)的免疫调节作用.方法:将大鼠随机分为对照组、阳性药物组和实验组.连续灌胃给药8天,停药后处死大鼠,计算胸腺指数、脾指数,观察血清和关节液IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平,观察ConA诱导的脾细胞增殖反应.结果:不同剂量穿山龙总皂苷治疗能使AA大鼠降低的胸腺指数基本恢复到正常,也能使AA大鼠明显增大的脾指数显著降低.高、中、低剂量组给药大鼠的血清、关节液内炎性细胞因子IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平较AA模型组明显降低(P＜0.01),ConA诱导的脾细胞增殖反应明显提高.结论:穿山龙总皂苷有良好的抗炎及免疫调节作用,其机理部分可能与调节机能依赖性的双向免疫及抑制炎性细胞因子产生有关.
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穿山龙总皂苷对慢性迁延期哮喘小鼠白介素-17A表达的影响
目的:研究穿山龙总皂苷对抑制慢性迁延期哮喘小鼠气道壁及支气管平滑肌增生,抑制肺泡灌洗液、肺组织匀浆中白介素-17A的表达的影响.方法:清洁级BALB/c小鼠70只随机分为空白对照组、模型对照组、穿山龙总皂苷高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组(醋酸泼尼松组)、穿山龙总皂苷+醋酸泼尼松组.卵蛋白(OVA)致敏激发小鼠制作哮喘小鼠模型,在实验第18 ～55天,空白对照组、模型对照组以生理盐水灌胃,治疗组穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别每天灌胃给予穿山龙总皂苷80、40、20 mg/kg,阳性对照组给醋酸泼尼松混悬液10 mg/kg,穿山龙总皂苷+醋酸泼尼松组给穿山龙总皂苷40 mg/kg和醋酸泼尼松5 mg/kg.实验结束后HE染色观察哮喘小鼠肺组织病理形态变化,测定气道平滑肌面积和气道内壁面积,ELISA法测定肺泡灌洗液和肺组织匀浆中白介素-17A水平.结果:穿山龙总皂苷能抑制慢性迁延期哮喘小鼠气道壁及支气管平滑肌的增生,抑制其肺泡灌洗液和肺匀浆中白介素-17A表达的水平.与空白对照组比较,模型对照组小鼠气道平滑肌、气道内壁增厚(P＜0.01),肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-17A明显升高(P＜0.01);与模型对照组比较,气道平滑肌、气道内壁增厚缓解(P＜0.01),低、高、中剂量组IL-17A水平降低(P＜0.01);穿山龙治疗组间比较,中、高剂量组比低剂量组对气道平滑肌、气道内壁增厚改善效果明显(P均＜0.05),中剂量组对小鼠IL-17A表达的影响更为显著(P＜0.01);与阳性对照组比较,穿山龙总皂苷+醋酸泼尼松组对小鼠IL-17A表达影响更为显著(P＜0.01).结论:穿山龙总皂苷能够抑制慢性迁延期哮喘小鼠气道壁及支气管平滑肌的增生,抑制其肺泡灌洗液、肺组织匀浆中白介素-17A的表达,控制哮喘的发生、发展.
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穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜组织NF-κB p65活性及STAT3表达的影响
目的 通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织核转录因子κB (NF-κB)及信号转导子和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制.方法 将造模成功的60只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组,另设正常对照组,每组12只.造模成功后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d.应用TransAMTM NF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性.应用免疫组织化学染色的方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜细胞核蛋白提取物中NF-κB p65的DNA结合活性和滑膜组织中STAT3蛋白的表达显著增高,有统计学意义(P＜0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组的NF-κB p65的DNA结合活性和STAT3蛋白的表达均显著降低,有统计学意义(P＜0.01);各治疗组之间两两比较均无统计学意义(P＞0.05).结论 穿山龙总皂苷可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和JAK-STAT信号转导通路中重要底物STAT3蛋白的表达,起到抑制类风湿性关节炎血管新生的作用.
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穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠肝脏组织β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性的影响
目的：探讨穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠肝脏组织β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性的影响。方法：取60只清洁级 Wistar 大鼠随机分为正常组、模型组、穿山龙总皂苷高、中、低剂量组和阳性药吲哚美辛组。穿山龙总皂苷和吲哚美辛于造模前3天开始连续给药，每24h 一次。正常组和模型组同时灌胃生理盐水。从给药第3天开始，灌胃给药1h 后，腹腔注射10％水合氯醛麻醉后双侧膝关节注射 MSU 混悬液造模。共计连续给药7天，造模5天。采用β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性检测试剂盒检测肝组织中的β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性。结果：与正常组相比，模型组肝组织中β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性显著提高（P ＜0．05， P ＜0．01）；与模型组相比，穿山龙总皂苷高、中剂量组肝组织β半乳糖苷酶活性显著降低（P ＜0．01， P ＜0．05）；与模型组相比，穿山龙总皂苷高、低剂量组肝组织β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性显著降低（P ＜0．01，P ＜0．05）；与模型组相比，吲哚美辛组肝组织β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性亦显著降低（P ＜0．01，P ＜0．01）。结论：穿山龙总皂苷可通过对β半乳糖苷酶和β-N -乙酰氨基葡萄糖酶活性的调节，即溶酶体酶的调节作用达到治疗痛风性关节炎的目的。
关键词： 穿山龙总皂苷 痛风性关节炎 β半乳糖苷酶 β-N -乙酰氨基葡萄糖酶 -
穿山龙总皂苷含药血清对小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-6产生影响的实验研究
目的:用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对小鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL-6的影响,探讨其可能的作用机制.方法:用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清(分别在培养系中加入20%,10%,5%含药血清)对LPS诱导的脾淋巴细胞增殖的影响;用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总皂苷含药血清对LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IL-6的影响.结果:20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的脾淋巴细胞增殖,20%穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IL-6.结论:穿山龙总皂苷含药血清可抑制LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-6的产生,可能是其免疫抑制作用的机制之一.
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穿山龙总皂苷对臭氧诱导的小鼠气道高反应性和IL－17A表达的影响
穿山龙总皂苷是中药穿山龙的提取物,可抑制哮喘动物的气道炎症,但其是否对气道高反应性有影响未见报道.本研究为观察穿山龙总皂苷对气道高反应性动物模型的疗效,并初步探讨其机制,采用臭氧为诱导因素,分别建立急性、亚急性气道高反应性模型小鼠,通过肺功能仪检测气道阻力的变化,肺泡灌洗液中炎症细胞总数和分类计数在光学显微镜下检测.并采用ELISA法测定肺泡灌洗液和肺组织匀浆液中IL－17A水平,结果显示小鼠在臭氧应激下诱导发生气道高反应性和IL－17A表达上升等哮喘典型特征的变化,而雾化吸入穿山龙总皂苷(20、40、80 mg／kg)后能不同程度地有效降低急性以及亚急性气道高反应模型的气道阻力及IL－17A的水平.穿山龙总皂苷具有作为一种治疗气道高反应性药物的潜在价值,可能为支气管哮喘的治疗提供新的手段.
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复方蛇龙胶囊的拆方研究
目的 探寻复方蛇龙胶囊的有效物质基础.方法 将MPC5细胞分为空白对照组,模型组,白花蛇舌草多糖系列浓度组,穿山龙总皂苷系列浓度组,鬼箭羽总黄酮系列浓度组,白花蛇舌草多糖加穿山龙总皂苷系列浓度组,白花蛇舌草多糖加鬼箭羽总黄酮系列浓度组,穿山龙总皂苷加鬼箭羽总黄酮系列浓度组,复方蛇龙全方系列浓度组及单味穿山龙总皂苷与全方系列浓度对比组.采用CCK-8检测细胞活力来探寻发挥药效的物质基础.结果 与空白对照组相比,模型组细胞活力明显下降(P＜0.01);与模型组相比,单味穿山龙总皂苷系列浓度组,含有1μg/ml的白花蛇舌草总多糖和穿山龙总皂苷组及含有1μg/ml的穿山龙总皂苷组和鬼箭羽总黄酮组以及含全方100ng/ml组细胞活力增加(P＜0.05),其他各组与模型组未见明显差异(P＞0.05).结论 复方蛇龙胶囊对MPC5确有保护作用,且单味穿山龙总皂苷与全方疗效相当.
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穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜组织AP-1表达的影响
目的 观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节滑膜组织激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)mRNA表达水平及活性的影响,旨在探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿性关节炎的作用机制.方法 将造模成功的36只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组,另设正常对照组,每组12只.造模成功以后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d.应用原位杂交方法检测滑膜组织中AP-1的两个亚单位c-fos和c-jun的mRNA表达水平;凝胶电泳迁移率实验检测滑膜组织核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性.结果 与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜组织中c-fos和c-jun的mRNA表达水平以及滑膜细胞核蛋白提取物中AP-1的DNA结合活性均显著增高(P＜0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组的c-fos和c-jun的mRNA表达水平以及滑膜细胞核蛋白提取物中AP-1的DNA结合活性均显著降低(P＜0.01).结论 穿山龙总皂苷可能通过抑制转录因子AP-1来调控血管新生相关基因的表达,抑制血管新生来起到治疗RA的作用.
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穿山龙总皂苷对胶原性关节炎大鼠炎性细胞因子的影响
目的 观察穿山龙总皂苷(total saponin from Rhizoma Dioscorea nipponica,TSRDN)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen -induced arthritis,CIA)大鼠血清中炎性细胞因子的影响,初步探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)可能的作用机制.方法 建立CIA大鼠模型.于初次免疫后第14天,将造模成功的大鼠随机分为CIA模型组,穿山龙总皂苷高、中、低剂量组,雷公藤组.其中穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别经胃灌服100 mg·kg-1·d-1,50 mg·kg-1·d-1、25 mg·kg-1·d-1剂量的穿山龙总皂苷,雷公藤组灌服12 mg·kg-1·d-1剂量的雷公藤多苷,正常对照组、CIA模型组灌服等体积溶媒.用药后21 d,记录各组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数；测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平；观察关节滑膜病理变化.结果 经穿山龙总皂苷灌胃治疗21 d后,与模型组相比,治疗组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数有降低趋势(P＞0.05),大鼠滑膜增生减轻,炎细胞浸润减少,软骨及骨组织侵蚀破坏减轻,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低(P＜0.01).结论 穿山龙总皂苷能明显降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-Iβ和IL-6水平,减轻滑膜组织的病理损伤,表明其对治疗类风湿关节炎有一定作用.
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穿山龙总皂苷对大鼠T淋巴细胞功能影响的血清药理学研究
目的 用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对大鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL-2的影响,探讨其可能的作用机理.方法 用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清(分别在培养系中加入20%,10%,5%含药血清)对Con A诱导脾淋巴细胞增殖的影响;用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总苷含药血清对Con A诱导脾淋巴细胞分泌IL-2影响.结果 20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞增殖(P＜0.01, P＜0.05),20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL-2(P＜0.01,P＜0.05).结论 穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖及IL-2的产生.
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穿山龙总皂苷对大鼠滑膜细胞株VEGF 与 AP-1的影响
目的：观察含穿山龙总皂苷血清对大鼠滑膜细胞株 RSC-364血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA 和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响,探讨其抑制血管新生的作用机制。方法制备含穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)血清。将培养好的大鼠滑膜细胞株 RSC-364分为空白对照组、模型对照组、含雷公藤多苷血清组和含穿山龙总皂苷血清组,培养1 h,除空白对照组外,其余各组加入 IL-17和 TNF-α(均为10μg·L-1)共同孵育24 h。采用实时荧光定量 PCR方法检测各组细胞 VEGF mRNA 表达,凝胶电泳迁移率实验法(EMSA)检测各组细胞核蛋白提取物 AP-1的 DNA 结合活性。结果与空白对照组比较,模型对照组 VEGF mRNA 表达水平及 AP-1 DNA 结合活性显著增高(P<0.05,P<0.01)；与模型对照组比较,含雷公藤多苷血清组、含穿山龙总皂苷血清组 VEGF mRNA 表达水平及 AP-1 DNA 结合活性均降低(P<0.05),且两组间比较,差异无统计学意义。结论含穿山龙总皂苷血清可以抑制 VEGF mRNA 表达水平及 AP-1 DNA 结合活性,其机制可能是通过抑制转录因子 AP-1来调控血管新生关键因子 VEGF 产生,进而抑制血管新生。
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穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠关节炎滑膜IL-1β及其信号转导通路的影响
目的:考察穿山龙总皂苷(total saponins from rhizoma Dioscoreae nipponicae,RDN)对痛风性关节炎大鼠关节炎滑膜IL-1β及其介导的信号转导通路的影响.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为四组,分别为正常组、模型组、穿山龙总皂苷低(40mg/kg)、高剂量组(160mg/kg),连续灌胃穿山龙总皂苷5天.第3d灌胃穿山龙总皂苷1h后,膝关节上方髌上韧带进针,注射0.2ml浓度为25mg/ml的微晶尿酸钠结晶混悬液到关节腔,造成实验性痛风性关节炎模型.采用HE和伊红染色观察关节滑膜组织病理学变化,免疫组化法检测穿山龙总皂苷对大鼠膝关节滑膜组织中IL-1β、SDF-1、CXCR4、PI3K、PKC和NF-κB表达的影响.结果:与正常组比较,模型组大鼠膝关节滑膜组织中IL-1β、SDF-1、CXCR4、PBK、PKC和NF-κB表达水平显著升高(0.087±0.021,0.064±0.017,0.146±0.042,0.139±0.057,0.088±0.021,0.079±0.018),穿山龙总皂苷低剂量组能显著降低CXCR4表达水平(0.081±0.006).穿山龙总皂苷高剂量组能显著降低IL广1β、CXCR4、PBK、PKC和NF-κB表达水平(0.035±0.007,0.104±0.011,0.077±0.017,0.039±0.011,0.030±0.009).结论:穿山龙总皂苷可抑制IL-1β及其介导的信号转导通路;穿山龙总皂苷具有治疗痛风性关节炎(Gouty Arthritis,GA)的潜在价值.
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穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 NF-κB p65活性、STAT3及VEGF mRNA表达的影响
目的 观察穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364NF-κB p65活性、STAT3表达及VEGF mRNA表达水平的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生的作用机制.方法 制备穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)含药血清；取大鼠滑膜细胞株RSC-364经IL-17(10μg/L)和TNF-α(10 μg/L)、穿山龙总皂苷含药血清、雷公藤多甙片含药血清单独或联合应用孵育,孵育24 h,提取各组细胞核蛋白用于TransAMTM NF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性；提取各组细胞总蛋白后应用Western blot方法 观察STAT3蛋白的表达；采用实时荧光定量PCR方法 检测各组细胞VEGF mRNA的表达情况.结果 IL-17+TNF-α诱导的细胞模型组中NF-κB p65的DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGFmRNA表达水平均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.01,P＜ 0.05)；与细胞模型组相比,雷公藤含药血清组、穿山龙总皂苷含药血清组的NF-κB p65 DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达水平均显著降低(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),且2组之间比较无显著性差异(P＞0.05).结论 本研究证实穿山龙总皂苷含药血清可以抑制NF-κB p65的DNA结合活性及STAT3蛋白的表达,考虑穿山龙总皂苷通过上述信号转导途径来调控血管新生关键因子VEGF的产生,进而抑制RA血管新生.
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穿山龙总皂苷对哮喘小鼠气道重塑及MMP-9、TIMP-1表达的影响
目的 研究穿山龙总皂苷对哮喘小鼠气道重塑和MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响,并探讨其中作用机制.方法 将60只清洁级BALB/c小鼠随机分为6组(n=10):A组(空白组),B组(哮喘模型组),C组[阳性对照组(醋酸泼尼松组)],D组(低剂量组),E组(中剂量组),F组(高剂量组).卵白蛋白(OVA)致敏激发小鼠制作哮喘气道重塑模型,在实验第18-55天,空白组、模型组以生理盐水灌胃,阳性对照组给醋酸泼尼松混悬液10 mg/kg,药物组分别给予穿山龙总皂苷20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg治疗.用HE染色法观察各组小鼠肺组织病理形态变化;用蛋白免疫印记法(Western Blot)测定各组MMP-9、TIMP-1蛋白表达.结果 穿山龙总皂苷能够改善哮喘小鼠气道壁及上皮结构,减少黏膜下及管壁周围炎性细胞浸润;与空白对照组比较,小鼠哮喘模型组MMP-9表达明显升高(P＜0.05),TIMP-1表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,各治疗组MMP-9表达明显降低(P＜0.05),TIMP-1表达明显升高(P＜0.05);MMP-9在各穿山龙总皂苷组表达强于阳性对照组,TIMP-1在各穿山龙总皂苷组表达弱于阳性对照组.结论 穿山龙总皂苷能够改善哮喘小鼠气道结构,并可通过抑制MMP-9、增加TIMP-1蛋白的表达从而减轻小鼠哮喘气道重塑状态.
