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HPLC波长切换法同时测定安神解虑颗粒中4种成分
目的 建立HPLC法同时测定安神解虑颗粒中紫丁香苷、栀子苷、刺五加苷E、迷迭香酸4种有效成分.方法 安神解虑颗粒75％甲醇提取液的分析采用Welch XtimateTM C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长分别为265 nm (0～ 25 min),238 nm(25～35 min),220 nm (35～58 min)和330nm (58～88min).结果 紫丁香苷、栀子苷、刺五加苷E、迷迭香酸的进样量分别在0.022 8 ～0.285 μg(r=0.999 5)、0.564～7.050μg(r=0.999 7)、0.074 ～0.925 μg(r=0.999 1)、0.053 ～0.663 μg(r=0.999 2)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.6％、97.4％、97.9％、97.3％,RSD分别为0.7％、0.8％、0.9％、1.1％.结论 本方法简便、准确、重复性好,可为安神解虑颗粒的质量标准研究提供参考.
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刺五加苷E对穹窿-海马伞损伤大鼠学习记忆能力及海马神经元可塑性的影响
目的 探索刺五加苷E对穹窿-海马伞损伤大鼠学习记忆能力及海马神经元可塑性的影响.方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、假手术组及刺五加苷E低、中、高剂量组(100、200、500 mg/kg),每组20只.第7、21天分别测定寻找平台潜伏期和错误次数后,RT-PCR、ELISA检测锥体细胞凋亡率、c-fos基因表达、Na+-K+-ATP酶活性.结果 与模型组比较,刺五加苷E组寻找平台潜伏期、错误次数显著减少(P＜0.05),Na+-K+-ATP酶活性、正常锥体细胞数量显著增加(P＜0.05),锥体细胞密集度和排列方式、神经纤维缠结、胶质细胞增生、核固缩明显改善(P＜0.05),第7天c-fos相对灰度值显著增加(P＜0.05),第21天恰好相反(P＜0.05).结论 刺五加苷E可剂量依赖性地改善穹窿-海马伞损伤大鼠学习记忆能力,其机制可能与增强Na+-K+-ATP酶活性、调控c-fos基因表达、阻止海马神经元损伤并促进其可塑性有关.
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刺五加注射液在正常大鼠与脑缺血-再灌注损伤疾病大鼠体内药动学比较
目的 比较刺五加注射液(紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶等)在正常大鼠与脑缺血-再灌注损伤大鼠体内药代动力学行为.方法 采用longa法建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤疾病模型,采用液相色谱-串联四级杆质谱法测定不同时间点大鼠血浆中紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶的含有量,用药代动力学软件DAS 2.0非房室模型计算药动学参数并用统计软件SPSS 17.0对主要药动学参数进行比较.结果 与正常大鼠体内药动学相比较,脑缺血-再灌注损伤对刺五加注射液中紫丁香苷产生蓄积,对异嗪皮啶的消除发生改变,对刺五加苷E无影响.结论 初步推测脑缺血-再灌注损伤大鼠体内,紫丁香苷及异嗪皮啶与血浆蛋白结合能力发生改变,有待进一步研究.
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红毛五加皮的HPLC指纹图谱研究
目的 建立红毛五加皮的HPLC指纹图谱.方法 Welchrom C18色谱柱,乙腈-0.3%磷酸二氢钠水溶液梯度洗脱系统(加磷酸调节pH值约为3.5),检测波长207 nm;柱温35℃.结果 对47批红毛五加皮指纹图谱进行评价,确定了17个共有峰,指认了第8、9、13号色谱峰分别对应为绿原酸、刺五加苷B和刺五加苷E,其中刺五加苷E为第一大色谱峰.从峰面积比较,林窗样品总峰面积大于林下样品;两年生茎皮中刺五加苷E峰面积远大于一年生样品.结论 本研究可为红毛五加皮质量控制提供参考.日照有利于红毛五加皮中成分的积累,刺五加苷E在茎皮生长的第二年积累迅速.
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刺五加苷 E对小鼠学习及记忆能力的影响
目的：探讨刺五加苷E对对氯苯丙氨酸（PCPA ）造模小鼠学习记忆行为以及对海马内单胺类神经递质5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NA）的影响。方法 Balb／c小鼠随机分为空白组，模型组，阳性药组，刺五加苷E（ELE）高、中、低剂量组。以PCPA腹腔注射建立小鼠损伤模型，给药14 d后Morris水迷宫实验测试小鼠的学习记忆能力，Elisa试剂盒测定小鼠海马组织中5-HT、5-HIAA、DA、NA的含量。结果行为学结果显示，模型组小鼠穿越平台次数较空白组明显降低（P＜0.01），ELE高、中剂量组可明显增加小鼠穿越平台次数（P＜0.01），模型组小鼠5-HT、5-HIAA较空白组显著降低（P＜0.01），NA也显著降低（P＜0.05）。ELE各剂量组5-HT、5-HIAA 含量较模型组显著升高（P＜0.01或 P＜0.05），ELE高、中剂量可明显改善DA、NA的含量，且与模型组相比，差异显著（P＜0.01或 P＜0.05）。结论 ELE提高PCPA造模小鼠学习记忆能力可能与其改善海马组织中5-HT、5-HIAA、DA和NA的含量有关。
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HPLC-MS/MS法测定超声提取刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶的含量
目的:建立一个高效液相-质谱联用(HPLC-MS/MS)测定刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶含量的方法.方法:建立HPLC-MS/MS方法,进行色谱和质谱方法的考察,得到优的分析条件,即流动相为乙腈-0.05％的甲酸溶液(20∶80,V/V),流速为0.5 ml/min.采用电喷雾离子源(ESI)进行电离,多离子反应监测(MRM)模式进行信号采集,采用外标法进行定量;采用HPLC-MS/MS方法同时测定刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶的含量.结果:刺五加苷B、刺五加苷E和异嗪皮啶分别在0.7～30000 ng/ml、0.4～ 10 000 ng/ml和0.3 ～ 16 000 ng/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r＞0.9997),检出限(LOD)分别为0.17 ng/ml、0.12 ng/ml和0.09 ng/ml,定量限(LOQ)分别为0.7 ng/ml、0.4 ng/ml和0.3 ng/ml,不同浓度下的平均加标回收率为98.10％、98.19％和98.21％;在优提取条件下刺五加果实中刺五加苷B的含量为(1.935 0±0.001 5)mg/g,刺五加苷E的含量为(0.273 0±0.003 5)mg/g,异嗪皮啶的含量为(0.013 0±0.001 2)mg/g.结论:HPLC-MS/MS法灵敏度高、选择性好、分析时间短,可对刺五加果实中刺五加苷B、刺五加苷E和异嗪皮啶进行准确的定量分析.
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大孔树脂分离纯化刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的工艺研究
目的 研究大孔树脂分离纯化刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的工艺.方法 比较了4种不同类型的大孔树脂对刺五加中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的吸附解吸性能,确定适宜的树脂类型和佳纯化工艺条件.结果 AB-8型大孔树脂对紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的吸附性能及解吸效果较好.佳工艺条件为上样浓度:0.5 g·mL-1,吸附流速:2 BV·h-1,上样量:5 BV,洗脱剂:30％的乙醇,用量:11 BV,洗脱流速:1 BV·h-1.纯化后的终产品中紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶的含量分别为3.13％,1.82％和0.42％.结论 AB-8型大孔树脂用于同时富集紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶效果佳,是一种理想的分离纯化介质.
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不同性别类型刺五加根茎和茎有效成分季节积累规律的研究
目的 评价不同性别类型刺五加根茎和茎有效成分季节积累规律,从而确定出优质药材性别类型和佳采收期.方法 采用RP - HPLC色谱法检测刺五加苷B、绿原酸及刺五加苷E和异嗪皮啶含量.结果 不同性别类型刺五加的有效成分含量季节积累规律相似.长花丝刺五加中刺五加苷B、刺五加苷E和绿原酸含量大于短花丝刺五加,特别在花期前(7月中旬)表现更加明显.异嗪皮啶的含量相反,短花丝类型高于长花丝类型.结论 长花丝刺五加优于短花丝刺五加,春季和秋季活性成分含量较高.
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体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究
目的 探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系.方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响.结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织.2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量.MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基.结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度.
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高效液相色谱法测定刺五加粉中刺五加苷B和苷E的含量
目的:建立刺五加及其制剂中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量.结果:在同一色谱条件下,刺五加苷B在1.472 8～7.364 0 μg范围内线性关系良好,回收率100.7%,RSD为2.6%;刺五加苷E在1.305 6～11.750 4 μg范围内线性关系良好,回收率为101.9%,RSD为2.0%.结论:该分析方法简便易行,重现性好.
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刺五加苷B、苷E在体外大鼠肠道菌群中的代谢
目的 观察体外大鼠肠道菌群对刺五加苷B、苷E的代谢.方法 收集大鼠新鲜粪便在厌氧培养基37℃培养24h,分别加入刺五加苷B、刺五加苷E,培养后加甲醇提取离心,取上清液采用HPLC及UPLC/MS方法对代谢成分进行分离和定性分析.结果 刺五加苷B、苷E在大鼠粪便孵育液中代谢,24h后样本中能检测出较高浓度代谢物.在离体条件下,刺五加苷B、苷E可以被大鼠的肠道菌群代谢,经过UPLC/MS的检测,刺五加苷B代谢物的分子离子峰[M+H]+为193.108,推测为刺五加苷B的苷元再脱一分子水；刺五加苷E代谢物的分子离子峰[M+H]+为417.17,推测为刺五加苷B的苷元.结论 刺五加苷B、苷E可以被大鼠肠道菌群代谢.
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高效液相色谱波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ
目的建立HPLC波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的方法.方法 采用Waters Nova-pak C18色谱柱,以乙腈(A)-0.2％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min-1.结果梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在4.53～90.60 μg·mL-1、6.18～123.60 μg·mL-1、3.92～78.40 μg·mL-1、7.51～150.20μg·mL-1、7.14～142.80 μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999、0.9998、1.000、0.9996、0.9999;平均加样回收率及相应的RSD分别为98.5％(1.2％)、98.9％(0.77％)、99.1％(0.90％)、97.5％(1.8％)、97.1％(0.84％).结论本方法快速、准确度高、专属性好,可用于微达康膏的质量控制.
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HPLC法测定刺五加不同部位刺五加苷B、E含量
目的:建立HPLC法同时测定刺五加苷B和刺五加苷E含量的方法,并对刺五加不同部位的刺五加苷B和刺五加苷E进行含量测定,为合理开发、利用刺五加资源提供理论依据.方法:采用Nucleosil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～8 min:12%B;8～20 min:12%B→18%B;20～25 min:18%B;25 min:12%B),流速0.8 mL·min-1,检测波长210 nm.结果:刺五加苷B在茎干中含量高,叶中低;刺五加苷E在根中含量高,花中含量低.除叶以外,其他各部位中刺五加苷E的含量均低于刺五加苷B.结论:本方法简便,重复性好,可作为刺五加药材的质量控制方法,也为合理利用刺五加这一资源提供依据.
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RP-HPLC法研究刺五加注射液中刺五加苷E、刺五加苷B在大鼠体内的药代动力学和组织分布特性
目的:建立大鼠血浆中刺五加苷E和刺五加苷B的RP-HPLC分析方法,并对这2种成分在大鼠体内过程特性进行分析研究.方法:用乙腈沉淀生物样品中的蛋白质,同时又将生物样品中的刺五加苷B和苷E提取出来,然后用固相萃取法分离提取物,用60%甲醇将刺五加苷B和苷E从固相萃取小柱洗脱下来,用高效液相色谱法提取出来测定,色谱柱为Kromasil ODS(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃,水-乙腈梯度流动相(0→15 min,90:10→80:20;15→25 min,80:20→50:50),流速0.8 mL·min-1,一次进样,分别在220 nm和206 nm波长下检测刺五加苷E和苷B.结果:Wister大鼠一次股静脉给药后血药浓度时间曲线呈三室模型,刺五加苷E和苷B的消除半衰期t1/2分别为4.66和2.49 h.在主要组织中的分布特点是:刺五加苷E在血液、肾脏、心脏、肝脏和脾脏中都有分布,刺五加苷B在血液、肾脏、心脏、肝脏中都有分布,在脾脏中没有分布,刺五加苷E和苷B主要由肝、肾代谢、排泄.结论:本法可用于刺五加苷E和刺五加苷B体内过程的研究.样品直接用固相萃取小柱处理,可消除内源性成分干扰.
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RP-HPLC法测定野生刺五加果实中6种成分的含量
目的:建立测定刺五加果实中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷E、异嗪皮啶和槲皮素-3-鼠李糖苷含量的RP-HPLC方法.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C1s(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.3％磷酸水溶液为流动相,流速1.0 mL·min-,梯度洗脱,检测波长300 nm,柱温30℃.结果:原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷E、异嗪皮啶和槲皮素-3-鼠李糖苷质量浓度分别在4.92～36.9、19.224～144.18、18.454 ～ 138.405、8.416～63.12、3.286 ～ 24.645、2.522～18.915 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,其线性回归方程分别为C=0.055 2A-0.057 9(r =0.999 9),C=0.0799A +0.014 6(r =0.999 7),C =0.012 7A-0.131 4(r =0.999 6),C =0.057 7A +0.086 6(r =0.999 8),C =0.012 0A-0.020 8(r =0.999 9),C=0.014 2A +0.065 1(r=0.999 9);加样回收率(n=6)分别为100.4％、99.8％、100.9％、101.2％、99.4％和99.7％.6个成分的含量测定结果分别为0.501 ～0.510、2.511～2.522、2.310～2.325、1.331～1.340、0.371～0.382和0.260～0.272mg·g-1.结论:经方法学验证,该法可作为刺五加果实质量控制的方法.
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HPLC多波长法测定刺五加颗粒中5个化合物的含量
目的:建立HPLC多波长法测定刺五加颗粒中5个化合物(原儿茶酸、刺五加苷B、绿原酸、刺五加苷E和异嗪皮啶)的含量.方法:采用Agilent Zorbax SB-C1s(4.6 mm ×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.5％醋酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0 ～ 10 min,10％A;10～20 min,10％A→13.5％A;20 ～ 70 min,13.5％ A→15.5％A),流速0.6 mL·min-1,检测波长为270 nm(0～51 min,测定原儿茶酸、刺五加苷B、绿原酸和刺五加苷E)、345 nm(51～70 min,测定异嗪皮啶),柱温24℃.结果:原儿茶酸、刺五加苷B、绿原酸、刺五加苷E和异嗪皮啶浓度分别在0.935～187 μg· mL-1(r=1.0000)、1.52 ～303μg·mL-1(r=1.0000)、2.74 ～547 μg· mL-1(r=1.0000)、3.62～723μg· mL-1(r=1.0000)、0.510 ～102 μg· mL-1(r =1.0000)范围内呈良好线性关系；高、中、低浓度的平均回收率(n=3)分别为97.8％ ～ 102.6％、98.0％ ～ 103.5％、96.8％ ～ 104.8％,RSD分别为0.8％ ～4.0％、1.3％～4.0％、0.9％ ～4.0％.结论:该方法可用于刺五加颗粒的质量控制.
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红毛五加皮中刺五加苷E鉴别与测定及质量标准研究
目的:建立红毛五加皮中刺五加苷E的定性鉴别和含量测定方法,建立红毛五加皮的质量标准.方法:照2010年版中国药典方法检查红毛五加皮中总灰分和酸不溶性灰分,测定其浸出物含量.采用TLC法鉴别刺五加苷E,薄层色谱使用硅胶G薄层板,以三氯甲烷-甲醇-水(6∶3∶1)的下层溶液为展开剂,10％硫酸乙醇溶液为显色剂；采用HPLC法测定刺五加苷E的含量,色谱柱为Welchrom C18(250mm × 4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.05％磷酸(13∶ 87),流速1 mL·min-1,检测波长207 nm,柱温35℃.结果:红毛五加皮中总灰分平均为6.69％,酸不溶性灰分平均为0.71％,浸出物平均含量为15.25％,刺五加苷E薄层斑点清晰,特征明显.刺五加苷E的线性范围为0.02696～1.0784 μg(r=1.000),平均加样回收率(n=6)为97.2％(RSD=1.7％).结论:本文建立的薄层鉴别方法特征明晰,液相色谱方法分离良好,经方法学验证,可用于红毛五加皮药材的质量检测.
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HPLC法同时测定刺五加浸膏中3种有效成分的含量
目的:测定刺五加浸膏中紫丁香苷、刺五加苷E和异秦皮啶3种有效成分的含量.方法:采用高效液相色谱法,在C18柱上以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;柱温30℃;检测波长:220 nm.结果:被测的3个成分在各自浓度范围内线性关系良好,平均回收率为97.8%～99.0%,RSD为1.8%～2.6%.结论:所建立的方法简便、准确,可用于刺五加浸膏的质量控制.
