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琐琐葡萄多糖对阿尔茨海默病细胞模型APP表达的影响
目的:观察琐琐葡萄多糖(polysaccharide from Vitis viniferal,VTP)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞β-淀粉样前体蛋白(beta-amyloid precursor protein,APP)基因表达的影响,探讨VTP在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机制中的作用.方法:体外培养PC12细胞,分为对照组,AD模型组(20μmol·L-1 Aβ25.35作用24 h),VTP低、中、高剂量组质量浓度分别为20,40,80 mg·L-1.VTP作用24 h后,检测细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和细胞超微结构,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测APP mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组细胞活性及SOD活力降低(P＜0.01),MDA含量及APP mRNA表达增高(P＜0.01),细胞超微结构明显异常;与模型组比较,给药组细胞活性及SOD活力增强(P＜0.05),MDA含量及APP mRNA表达下降(P＜0.01),减轻神经细胞损伤.结论:VTP对Aβ25-35诱导的氧化损伤有保护作用,通过抗氧化和调节APP mRNA表达,抑制Aβ形成,保护神经细胞,起到防治AD的作用.
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海马注射β-淀粉样蛋白对APP mRNA的影响及加减地黄饮子的干预作用
目的:探讨SD大鼠海马立体定向注射Aβ1-40后APP mRNA表达的变化及加减地黄饮子对其干预作用.方法:选用100只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组、模型对照组、盐酸多奈哌齐对照组、加减地黄饮子组共5组,每组20只.通过海马立体定向注射Aβ1-40诱导老年性痴呆动物模型.药物干预4w,第5周处死大鼠,应用实时定量PCR法检测海马组织APP mRNA表达.结果:模型组APP mRNA 2-△△Ct值显著高于假手术组,表明模型组APP mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和加减地黄饮子组APP mRNA 2-△△Ct值显著降低,表明APP mRNA表达下调.结论:大鼠大脑海马注射Aβ1-40后海马组织APP mRNA表达水平明显增高,加减地黄饮子提取物可以抑制海马组织APP mRNA的表达,从而发挥抗老年性痴呆的作用.
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补肾益智方对Alzheimer病模型大鼠脑内β-淀粉样前体蛋白的影响
目的:观察补肾益智方对Alzheimer病(AD)模型大鼠脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)的影响.方法:以D-半乳糖致亚急性衰老合并Meynert核损毁作为AD大鼠模型,用免疫组织化学检测及体视学分析方法观察大鼠脑内β-APP的变化.结果:补肾益智方能显著降低AD模型大鼠脑内顶叶皮质、海马CA1区、齿状回β-APP免疫阳性神经元的细胞数、积分光密度值(P＜0.05,P＜0.01).结论:补肾益智方能减少或抑制β-APP的过度产生,这可能是其减少β淀粉样蛋白(β-AP)沉积,改善AD模型大鼠学习记忆的作用机制之一.
关键词： Alzheimer病 补肾益智方 β-淀粉样前体蛋白 -
BACE1及其相关蛋白在动脉粥样硬化性血管病中的表达
目的 观察动脉粥样硬化模型大鼠血管组织中淀粉样前体蛋白β-位分解酶1 (β-site APP-cleaving enzyme 1,BACEl)、β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的表达,以探讨其在动脉粥样硬化疾病中的可能作用.方法 12只雄性SD大鼠随机分为2组,正常组(n=6)给予普通鼠饲料喂养,模型组(n=6)给予高脂高胆固醇饲料造模.3个月后腹主动脉取血测定两组大鼠血脂含量;HE染色观察胸主动脉血管壁形态学变化;免疫组织化学法观察大鼠胸主动脉壁组织中的BACE1、Aβ表达差异;RT-PCR法检测颈总动脉壁组织中BACE1、APP的mRNA表达.结果 模型组和对照组相比,各血清学指标均明显升高(P＜ 0.05或P＜0.01);模型组动脉粥样硬化病变更为显著,动脉壁内BACE1、Aβ蛋白表达增加;与对照组相比,模型组BACE1、APP mRNA表达均升高[(1.009±0.16) VS (2.443±0.34),P＜ 0.01;(1.030±0.32) VS(1.818±0.21),P＜ 0.05].结论 BACE1及其相关蛋白在动脉粥样硬化大鼠血管组织表达均增高,其可能参与了动脉粥样硬化病的发病过程.
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扩散峰度成像动态定量检测兔轻度脑外伤模型早期变化及其与β-淀粉样前体蛋白阳性表达的相关性
目的 观察兔轻度脑外伤(mTBI)模型损伤早期扩散峰度成像(DKI)测量值动态变化,分析其与β-淀粉样前体蛋白(β-APP)阳性表达的相关性.方法 将15只兔随机分为损伤组(12只,按建模后损伤时间分为伤后6h、24 h、48 h、72 h亚组,每亚组3只)及对照组(建模前,3只),进行MR检查并测量平均扩散峰度(MK)、轴向扩散峰度(K)与径向扩散峰度(K⊥)值.之后处死动物,取脑行HE、β-APP染色观察.采用多个独立样本秩和检验比较DKI指标在建模前后各时间点间的总体变化,以两独立样本秩和检验比较建模前与建模后各时问点的差异;采用单因素方差分析比较β-APP染色阳性轴突数在各时间点之间的变化,以Spearman相关分析观察其与DKI测量值的相关性.结果 各测量脑区MK、K及K(⊥)值随时间变化趋势不同.建模后β-APP阳性轴突数总体呈增加后减少又增加趋势.皮层下白质、中脑、桥脑及延髓MK值与β-APP阳性轴突数呈正相关,脑干区K及K(⊥)值多与β-APP阳性轴突数呈正相关.结论 DKI技术可早期定量评估mTBI脑组织微结构损伤;DKI测量值多与β-APP阳性表达呈正相关.
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EAE大鼠不同时间β-淀粉样前体蛋白与Nogo蛋白受体表达的相关性
目的 探讨β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及Nogo蛋白受体(NgR)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠病程中的表达变化及相互关系.方法 建立EAE动物模型,于致敏第8天、致敏第21天、致敏第35天利用免疫组织化学方法观察脑组织中β-APP及NgR表达,并进行相关性分析.结果 EAE致敏第8天、第21天及第35天组及空白对照组脑组织中β-APP表达灰度值分别为67.94±7.23、29.86±4.02、74.94±8.16和117.25±10.11,四组间比较差异有统计学意义(F=76.1,P＜0.05),各实验组β-APP表达灰度值均低于对照组(均P＜0.05),致敏第21天组低于致敏第8天组(P=0.008),致敏第35天组高于致敏第21天组(P=0.005),与致敏第8天组差异无统计学意义(P=0.379);相应时间点脑组织中NgR表达灰度值分别为90.28±8.74、76.75±6.59、77.64±9.58及45.33±5.26,四组间比较差异有统计学意义(F=11.56,P＜0.05),各实验组NgR表达灰度值均高于对照组(均P＜0.05),致敏第35天组低于致敏第8天组(P=0.049),致敏第8天组、致敏第35天组与致敏第21天组比较差异均无统计学意义(P=0.055,P=0.975).β-APP及NgR表达水平呈负相关(r=-0.207,P＜0.05).结论 轴索损伤可能在EAE早期即已出现,并呈动态变化.β-APP与NgR表达在EAE的病理进展过程中呈负相关.
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辛伐他汀对高胆固醇血症大鼠APP、BACE蛋白表达的影响
目的 探讨辛伐他汀对高胆同醇血症大鼠β-淀粉样前体蛋白(APP)、β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响,为阿尔茨海默病(AD)的预防与治疗提供理论依据.方法 32只大鼠(3月龄)随机分为普通饲料喂养组(n=16)和高胆固醇饲料喂养组(n=16).将高脂饲料喂养鼠随机分为高脂饲料安慰剂组(n=8)、高脂饲料药物组(n=8),并开始灌胃给药,高脂饲料药物组给予辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃,高脂饲料安慰剂组给同体积安慰剂(蒸馏水)灌胃,灌胃期间继续喂高脂饲料.普通饲料喂养组随机分为普通饲料安慰剂组(n=8)和普通饲料药物组(n=8),分别给予同体积安慰剂(蒸馏水)和辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃,灌胃期间继续喂普通饲料.8周后APP、BACE蛋白的表达.结果 高脂饲料药物组大鼠前额皮层、海马区APP、BACE的蛋白表达较高脂饲料安慰剂组减少(P＜0.05),高脂饲料药物组与普通饲料安慰剂组、普通饲料药物组之间无显著性差异(P＞0.05).结论 辛伐他汀可能会影响高胆固醇血症大鼠前额皮层、海马区APP、BACE的蛋白表达,从而对Aβ1-42的生成代谢产生影响.
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不同氧浓度复苏对创伤性轴索损伤合并低氧血症后大鼠脑组织的影响
目的 在创伤性轴索损伤(traumatic axonal injury,TAI)合并低氧血症性二次脑损伤(secondary brain injury,SBI)大鼠模型基础上进一步探讨不同氧浓度复苏对大鼠脑组织病理学的影响.方法 应用自制TAI致伤装置,大鼠伤后给予10％浓度氧吸入30min制成低氧血症性SBI模型,随后给予大鼠不同氧浓度混合气体1h,复苏后不同时间点(24h、1周)进行免疫组化染色.结果 脑干ROI的β-APP免疫组化染色显示,24h时TAI合并缺氧组的阳性染色明显强于各复苏组,50％氧浓度时的阳性染色弱;各组阳性染色随时间而减弱,1周时各组阳性染色明显弱于24h,此时TAI合并缺氧组的阳性染色仍明显强于各复苏组,50％氧浓度时的阳性染色弱.染色阳性的神经轴索半定量分析显示,24h时TAI合并缺氧组明显高于各复苏组,50％氧浓度时的值低;各组数值随时间而降低,1周时各组值明显低于24h,此时TAI合并缺氧组的值仍高于各复苏组,50％氧浓度的值仍为低.结论 给氧治疗可以显著减低轴索损伤,起到神经保护作用;对于当前的TAI合并缺氧动物模型的佳复苏氧浓度为50％.
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同型半胱氨酸对大鼠学习记忆及海马APP代谢影响
目的 探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马β-淀粉样前体蛋白(APP)代谢影响及叶酸干预作用.方法 将40只Wistar大鼠随机分为对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只,在大鼠饮水中添加蛋氨酸(1.0g/kg)制作HHcy模型,叶酸低、高剂量干预组大鼠同时分别给予叶酸0.7和3.4mg/kg灌胃,持续8周.在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸浓度,采用Morris水迷宫试验检查大鼠学习记忆能力,观察大鼠海马区APP表达水平.结果 与对照组比较,HHcy组逃避潜伏期[(29.34±4.69)s]延长,穿过平台次数[(1.36±0.98)次]减少,停留时间[(1.36±0.98)s]缩短,差异均有统计学意义(P＜0.05)；与HHcy组比较,高剂量叶酸组学习记忆能力明显改善；与对照组比较,HHcy组γ-分泌酶PS1基因的在mRNA表达水平(1.43±0.10)明显升高(P＜0.01),与HHcy组比较,叶酸干预组明显降低；与对照组比较,HHcy组皮质和海马Aβ水平明显升高,与HHcy组比较,叶酸干预组皮质和海马Aβ水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Hhcy可导致大鼠学习记忆能力下降,大鼠海马APP蛋白代谢改变和Aβ产生增多,叶酸对HHcy具有拮抗作用.
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阿尔茨海默病老年斑研究进展
老年斑是阿尔茨海默病的特征性病变，老年斑的主要组成成分为β-淀粉样蛋白，Aβ的形成须经过β-APP基因→APPmRNA→β-APP形成→Aβ→Aβ沉积这些环节，基因突变和能量代谢异常等可作用于不同环节导致Aβ形成和沉积。老年斑量的多少与痴呆程度呈正相关，阻断老年斑的形成和减少老年斑数量的措施可为阿尔茨海默病的治疗提供新的思路。
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去痴灵对AD模型小鼠脑内β-淀粉样前体蛋白和脑啡肽酶基因表达的影响
目的 探讨去痴灵对老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)小鼠学习记忆及脑内β-淀粉样前体蛋白(amyloid beta-protein precursor,APP)和脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)基因表达的影响.方法 选用昆明种小鼠,腹腔注射D-半乳糖和灌胃三氯化铝制备AD模型小鼠,第51天开始,治疗组分别灌胃低、中、高剂量(10、20、40 g·kg-1·d-1)的去痴灵,以石杉碱甲作为阳性对照药,连续40 d.通过Morris水迷宫和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定去痴灵对AD小鼠学习记忆和脑内APP和NEP mRNA含量的影响.结果 低、中、高剂量的去痴灵均能改善AD小鼠的学习记忆能力,下调APP基因表达,高剂量去痴灵能上调NEP基因的表达.结论 去痴灵能改善AD小鼠学习记忆能力,降低APP基因表达及增加NEP基因表达.
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呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响
目的 探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响.方法 22月龄SD大鼠采用海人酸破坏脑基底核法造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型.造模后的大鼠随机分为痴呆模型组、呆聪液(低、中、高剂量)组,同时设正常对照组,每组10只.呆聪液低、中、高剂量组每日呆聪液灌胃(低5 g/kg、中10 g/kg、高20 g/kg),痴呆模型组和正常对照组每天用生理盐水(10 ml/kg)灌胃,共1个月.通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应观察呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响.结果 老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降,脑内β-APP基因表达增强.呆聪液高、中、低剂量组能明显提高学习记忆能力,降低脑内β-APP mRNA含量,并有一定的量效关系,与痴呆模型组比较差异有显著性(P＜0.05).结论 呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能,下调β-APP基因的表达.
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维生素E抑制痴呆模型大鼠海马结构淀粉样前体蛋白表达的实验研究
目的观察VE对AD大鼠海马β-APP表达的影响.方法使用三氯化铝诱导建立AD模型大鼠.用VE(10mg/d/只)对AD模型大鼠进行灌胃治疗3月.采用行为测试,光镜免疫细胞化学ABC法,观测大鼠海马结构淀粉样前体蛋白反应阳性神经元的数目和β-淀粉样前体蛋白表达的变化.结果VE组大鼠受电击次数和潜伏期较对照组明显减少和延长(P＜0.05);VE组大鼠海马结构齿状回和CA1区淀粉样蛋白反应阳性神经元的数目较对照组均有明显减少(P＜0.05),β-淀粉样前体蛋白呈弱阳性表达.结论VE可以改善AD模型大鼠的学习记忆,降低海马结构β-淀粉样前体蛋白过度表达.
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不同电针刺激对SAMP8小鼠学习记忆能力及大脑皮层 APP、ApoE mRNA表达的影响
目的：探讨脉冲电针和音乐电针治疗阿尔茨海默病（ AD）的可能作用机制，并比较两种电针的疗效差异。方法：将SAMP8小鼠随机分为模型组、脉冲电针组和音乐电针组， SAMR1小鼠作为正常组。两电针组均给予电针百会穴、印堂穴20 min后，点刺水沟穴。治疗结束后，以Morris水迷宫测定小鼠学习记忆能力，实时荧光定量PCR法测定小鼠大脑皮层中APP、ApoE mRNA表达量。结果：与模型组比较，音乐电针组、脉冲电针组逃避潜伏期分别在第4天、第5天明显下降（P＜0．05），目标象限游泳时间均增加（P＜0．05）；脉冲电针组、音乐电针组大脑皮层APP mRNA表达量均显著下降（P＜0．05）。结论：脉冲电针和音乐电针均可改善SAPM8小鼠学习记忆能力；脉冲电针和音乐电针可能通过下调APP mRNA表达发挥抗痴呆作用。
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地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预
目的 探讨地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的β-淀粉样前体蛋白(APP) mRNA的表达及地黄饮子对其的干预作用.方法 运用中药脑脊液药理学方法把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低,中,高剂量组6组,分别加入正常培养液,正常脑脊液及含药脑脊液,应用实时定量PCR法检测受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达(用2-△△Ct表示,Ct为阈循环值,△△Ct= △Ct各干预组-△Ct空白组,△Ct= Ct APP-Ct GAPDH).结果 地黄饮子能明显降低PC12细胞受β-淀粉样蛋白刺激时APP的过度反应,降低APP mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 地黄饮子脑脊液可以抑制β-淀粉样蛋白损伤对PC12细胞的损伤.
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川芎嗪对AD模型小鼠脑内APP和NEP表达的影响
目的:探讨川芎嗪(TMP)对AD模型小鼠学习记忆及脑内β淀粉样前体蛋白(APP)和脑啡肽酶(NEP)表达的影响.方法:腹腔注射D-半乳糖和灌胃三氯化铝制备AD模型小鼠.Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;免疫组化法检测脑内APP和NEP蛋白的表达.结果:低、高剂量TMP组均能改善AD小鼠的学习记忆能力(P＜0.01),下调小鼠海马APP蛋白表达(P＜0.01),上调NEP蛋白的表达(P＜0.01).低、高剂量TMP组相比无明显差异.结论:TMP可改善AD小鼠学习记忆能力,可能与降低APP及增加NEP蛋白表达有关.
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β-淀粉样前体蛋白转基因小鼠发育过程中海马 CAI区神经细胞凋亡变化
目的:探讨瑞典家系β-淀粉样前体蛋白(APPSWE)转基因小鼠发育过程中海马 Cal 区神经细胞凋亡规律.方法:取不同发育时间(P0、P7、P14、P30、P90、P180)APPSWE 转基因模型鼠与同时间点对照鼠,Nissl 染色观察海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法观察海马细胞内 Caspase-3 表达变化,RT-PCR 检测 Caspase-3 mRNA 表达变化.结果:随着小鼠的生长发育,P14 时间点以后,模型组 Cal 区神经元 Caspase-3 阳性细胞密度比对照组高;RT-PCR 检测结果与Caspase-3 免疫组织化学结果基本一致.结论:APPSWE 转基因小鼠发育中的海马神经细胞过度凋亡可能与阿尔茨海默病的发生、发展具有联系.
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淀粉样前体蛋白在痴呆模型大鼠背海马结构内的表达
研究用AlCl3灌胃,建立鼠老年性痴呆模型.用免疫细胞化学ABC法,观察了淀粉样前体蛋白在背海马结构的表达.结果显示在痴呆模型鼠背海马结构双侧各部均可见较强的淀粉样前体蛋白表达,且与对照组间有显著性差异.光镜结果,阳性反应产物主要位于神经元核周质和突起及其分支.细胞大小不等,多数淀粉样前体蛋白样免疫反应阳性神经元胞体为梭形和锥形.背海马结构内淀粉样前体蛋白样免疫反应神经元主要分布在CA1、CA2、CA3和CA4区的锥体细胞层、光辉细胞层及齿状回多形细胞层,其中在CA1和CA3区淀粉样前体蛋白样免疫反应神经元数量多.说明海马CA1、CA3区淀粉样前体蛋白表达的改变与老年性痴呆的发生有密切关系;同时也提示铝的毒性作用可改变淀粉样前体蛋白在脑内的表达水平.
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铝盐致大鼠学习记忆功能障碍的β-APP、SS作用机制研究
目的 观察β淀粉样前体蛋白（APP）、生长抑素（SS）在铝盐致大鼠学习记忆功能障碍模型脑内海马区表达的改变，并探讨其作用机制。方法 采用免疫组织化学方法检测β-APP、SS在大鼠脑内海马区的表达，HE染色观察实验组与对照组海马区锥体细胞层神经元形态结构。结果 实验组大鼠学习记忆功能较对照组明显降低(P<0.01)；实验组海马区β-APP表达较对照组明显增加(P<0.01)；SS免疫反应性神经元数目却显著减少(P<0.01)；β-APP阳性度与SS阳性度之间存在等级负相关(P<0.05)，实验组与对照组海马区神经元形态结构均基本正常，数目无明显差异。结论 铝盐致大鼠学习记忆障碍的病理机制可能与脑内β-APP、SS 表达的改变相关。
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甲硫哒嗪损伤大鼠学习记忆伴随脑β-淀粉样蛋白的升高
目的 观察甲硫哒嗪损伤大鼠学习记忆是否伴随脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein, Aβ)水平的升高,探讨甲硫哒嗪引起认知功能受损的机制.方法 20只大鼠随机分为对照组和甲硫哒嗪组,连续2 wk分别腹腔注射生理盐水和治疗剂量的甲硫哒嗪(10 mg·kg-1).用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,用放射免疫分析法测脑组织Aβ含量,用免疫组织化学染色检测β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein, APP)表达,用RT-PCR方法测定脑中3种APP、α及β-分泌酶mRNA表达.结果 甲硫哒嗪组大鼠学习记忆能力下降,脑组织Aβ含量升高( P＜0.05),是对照组的1.3倍;脑皮质和海马区APP蛋白表达增高( P＜0.05);除APP 695、α-分泌酶mRNA表达变化无统计学意义外,脑组织APP 751和APP 770 mRNA表达升高( P＜0.05),相对表达量之和是对照组的2.5倍;β-分泌酶mRNA表达升高( P＜0.05),是对照组的2.6倍.结论 脑内Aβ水平的增加,可能是甲硫哒嗪引起认知功能损害的原因之一.
