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姜黄素对大鼠腹膜纤维化的作用及其对BMP-7、TGF-β1表达的影响
目的 探讨姜黄素对腹膜纤维化大鼠腹膜的作用及对腹膜骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 将36只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、姜黄素组各12只.28 d后,通过腹膜平衡试验及HE染色、Masson染色对大鼠腹膜进行组织结构和功能检测.利用免疫组化对BMP-7和TGF-β1在腹膜的表达进行检测.结果 与对照组和姜黄素组相比,模型组大鼠超滤量和初始腹膜透析液葡萄糖浓度(D0)与透析液葡萄糖浓度(D1)比值(D1/D0)明显减少,而透析液尿素浓度与血浆尿素浓度比值(Durea/Purea)明显增加(P<0.05).模型组的腹膜组织厚度较对照组和姜黄素组明显增加(P<0.05).免疫组化可见与对照组相比,模型组TGF-β1,表达明显增加(P<0.05);而姜黄素组较模型组TGF-β1表达明显减少(P<0.05).BMP-7在对照组中高度表达,而在模型组中表达明显减少(P<0.05),姜黄素组BMP-7表达较模型组明显增加(P<0.05).结论 姜黄素对腹膜纤维化有明显疗效,其机制可能是通过上调BMP-7的表达,拮抗TGF-β1的作用,从而抑制腹膜纤维化.
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参芎注射液对腹膜纤维化的抑制作用
目的 探讨参芎注射液改善腹膜纤维化的作用机制.方法 将32只SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组(A组)、模型组(B组)、低剂量组(C组,参芎注射液15 ml/kg)和高剂量组(D组,参芎注射液30 ml/kg),每组8只.于实验第28天处死动物取腹膜组织待检.留取腹膜组织做HE及Masson染色,RT-PCR间接免疫荧光法检测细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的表达.结果 与A组相比,B组的壁层腹膜厚度明显增加;与B组相比,C组和D组的腹膜厚度明显减轻.B组腹膜组织TGF-β1表达明显上调,C组和D组腹膜组织TGF-β1表达明显减低.结论 参芎注射液可通过抑制腹膜纤维化大鼠腹膜组织的TGF-β1表达而发挥显著的抑制纤维化的作用.
关键词： 参芎注射液 腹膜纤维化 细胞转化生长因子β1 -
长链非编码RNA在腹膜纤维化中的表达谱变化
目的 应用高通量长链非编码RNA (lncRNA)芯片检测小鼠腹膜纤维化组织与正常小鼠腹膜组织中lncRNAs表达的差异,探讨lncRNAs与腹膜纤维化的关系.方法 将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、4周模型组、6周模型组;模型组给予腹腔灌注4.5％腹膜透析液(广州百特公司).分别于实验4周和6周后提取小鼠脏层腹膜组织的RNA,进行差异lncRNAs的筛选,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法验证差异表达的lncRNAs.结果 芯片结果显示2倍以上变化且差异有统计学意义的lncRNAs共有857条.其中,随着纤维化时间的延长,呈显著上调的有186条;显著下调的有231条(P＜0.05).结论 在小鼠腹膜纤维化组织中lncRNAs的表达谱发生了动态变化,且差异显著,提示lncRNAs可能参与了腹膜纤维化发生发展的基因调控.
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参芎注射液对腹膜纤维化大鼠腹膜组织CTGF表达的影响
目的 探讨参芎注射液对腹膜纤维化大鼠腹膜组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响.方法 用4.25％腹膜透析液+脂多糖建立大鼠腹膜纤维化模型.实验分正常对照组(A)、模型组(B)、低剂量参芎注射液治疗组(C)、高剂量参芎注射液治疗组(D).实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chainreaction,RT-PCR)检测CTGF mRNA的表达,间接免疫荧光及免疫印迹法检测蛋白的表达水平.结果 与A组相比,B、C、D组的CTGF mRNA和蛋白的表达水平明显上调;与B组相比,C、D明显减轻(P＜0.05).结论 参芎注射液可能通过抑制腹膜纤维化大鼠腹膜组织的CTGF表达而发挥一定的抗纤维化作用.
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百令胶囊对腹膜透析患者腹透液中间皮细胞转化生长因子β1水平的影响
目的：：观察百令胶囊对腹膜透析患者腹透液中间皮细胞转化生长因子β1(TGF-β1)水平的影响。方法：40例行腹膜透析的患者随机分为对照组和试验组各20例,两组均应用1.5%腹膜透析液,6000 ml·d-1,试验组再加用百令胶囊2.5g,po,tid,共观察6个月。1个月时评估两组透析充分性[指标：尿素清除指数(Kt/V)及内生肌酐清除率(Ccr)],比较两组患者1,3,6个月时肾功能及腹透液中TGF-β1水平变化。结果：透析1个月时,两组Kt/V及Ccr比较无差异,血肌酐均明显降低(P<0.05),3,6个月两组血肌酐水平无明显波动。对照组1,3,6个月TGF-β1水平逐渐升高(P<0.05),试验组TGF-β1水平无明显变化(P>0.05),且明显低于对照组(P<0.05)。结论：口服百令胶囊可降低患者腹透液中TGF-β1水平,从而抑制腹膜纤维化的发展。
关键词： 百令胶囊 腹膜透析 间皮细胞转化生长因子β1 腹膜纤维化 -
苦参碱对实验性大鼠腹膜纤维化的影响
目的:探讨苦参碱对腹膜透析大鼠腹膜纤维化的影响和可能的机制.方法:采用高糖透析液+脂多糖复制腹膜纤维化模型.将大鼠随机分为对照组、模型组、苦参碱低剂量组和苦参碱高剂量组.治疗组在造模同时每日腹腔内注射不同剂量的苦参碱.35 d后处死各组大鼠,行2 h腹膜平衡试验,测量超滤量,检测腹膜功能;留取腹膜组织行病理切片做HE及Masson染色观察腹膜组织学改变;用RT-PCR法测定腹膜血管内皮生长因子(VEGF)和纤维连接蛋白(FN)表达率.结果:苦参碱治疗组的腹膜厚度和血管增生程度比模型组明显减轻,VEGF和FN的合成水平也明显下降.结论:苦参碱可以有效的防治腹膜纤维化的进程.
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参芎注射液对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化中凋亡因子的影响
目的:探讨参芎注射液对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化影响及其作用机制.方法:4.25%高糖腹膜透析液和脂多糖(LPS)腹腔注射建立大鼠腹膜纤维化模型.32只SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组(N):大鼠不做任何处理;模型组(M):每日1次腹腔注射15 ml腹透液;参芎低剂量组(D):每日1次腹腔注射15 ml腹透液+参芎注射液15 ml/kg;参芎高剂量组(G):每日1次腹腔注射15 ml腹透液+参芎注射液30 ml/kg.除正常组外,其余各组大鼠在第1,3,5,7天按0.6 mg/kg腹腔注射LPS.实验第28天处死动物采取腹膜组织和血液标本待检.腹膜组织标本行HE及Masson染色;间接免疫荧光检测腹膜组织Bcl-2、Bax蛋白表达水平;TUNEL法检测腹膜组织细胞凋亡小体,计算凋亡指数(AI).结果:病理形态学观察,模型组大鼠腹膜层明显增厚,纤维素及胶原沉积增多.治疗组腹膜层、纤维索及胶原沉积较模型组少,高剂量治疗组程度更轻;间接免疫荧光染色显示,Bax和Bcl-2蛋白在正常组几乎无表达.Bax在参芎高剂量组、低剂量组、模型组表达逐渐增强,模型组表达强.而Bcl-2在高剂量组、低剂量组、模型组表达逐渐减弱,高剂量组表达弱;TUNEL法示模型组腹膜组织的AI明显高于正常组、高剂量组和低剂量组;低剂量组AI要高于高剂量组.结论:参芎注射液具有明显的下调Bax基因和上调Bcl-2基因表达,减少腹膜组织凋亡小体的形成,减少纤维组织在腹膜下沉积,参芎注射液可能通过调节Bax/Bcl-2,抑制腹膜间皮细胞的凋亡发挥抗纤维化作用.
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己酮可可碱对腹膜纤维化形成的干预作用
目的 探讨己酮可可碱(PTX)对SD大鼠腹膜纤维化病变的影响和可能的机制.方法 将大鼠随机分成3组:对照组,模型组和治疗组(PTX组).用4.25%含糖腹膜透析液+脂多糖腹腔注射制作腹膜纤维化模型,即模型组;PTX组同时每日给予PTX 6 mg/kg腹腔注射.5周后行2 h腹膜平衡试验测定腹膜功能,留取血液及腹膜透析液用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)浓度,并留取壁层腹膜组织做苏木精-伊红、Masson染色,RT-PCR检测肠系膜组织VEGF mRNA表达水平.结果 ①模型组及PTX组的壁层腹膜较对照组增厚,而PTX组较模型组明显减轻;②模型组及PTX组大鼠超滤量及2 h透析液葡萄糖浓度/0 h透析液葡萄糖浓度(D2/D0)比值均较对照组减少(均P<0.05),其中模型组较PTX组明显减少;与对照组比较,模型组及PTX组大鼠透析液尿素浓度/血浆尿素浓度(Durea/Purea)比值有明显增加(均P<0.05),其中模型组较PTX组增加明显;③PTX组腹透液及血清中VEGF浓度,肠系膜组织VEGF mRNA表达较模型组明显下降(均P<0.05).结论 己酮可可碱能有效地预防腹膜纤维化,其机制可能与调节VEGF的表达有关.
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丹参酮ⅡA磺酸钠对腹膜透析大鼠氧化应激状态影响观察
目的:探讨在腹膜透析液中添加丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠腹膜的局部保护作用及对其全身氧化应激状态的影响.方法:将40只SD雄性大鼠(180～200g)随机分为四组,每组10只.A组为正常对照组,每日腹腔注射生理盐水20mL;B组为腹膜透析液组,每日腹腔注射4.25％腹膜透析液20mL;C、D组为丹参酮ⅡA磺酸钠低、高浓度组,每日分别腹腔注射含丹参酮ⅡA磺酸钠50mg·L-1和100mg·L1的4.25％腹膜透析液20mL,于实验第30天于腹腔注射药液2h后杀检动物,取腹主动脉血2mL和透出液1mL,测定并比较四组大鼠血清及透出液的晚期糖基化终产物(AGEs)水平和氧化应激指标:谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及总超氧化物岐化酶(T-SOD)活性.结果:与A组正常对照组比较,B组腹膜透析液组大鼠血清及透出液GSH、T-SOD水平显著降低(P＜0.05),MDA、AGEs水平显著升高(P＜0.05).与B组腹膜透析液组比较,透析液添加丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组(C组、D组)大鼠血清及透出液GSH、T-SOD水平显著升高(P＜0.05),MDA、AGEs水平显著降低(P＜0.05).使用丹参酮ⅡA磺酸钠组大鼠血清及透出液GSH、T-SOD水平与丹参酮ⅡA磺酸钠浓度呈正相关,MDA、AGEs水平与丹参酮ⅡA磺酸钠浓度呈负相关.结论:高浓度葡萄糖透析液可引发透析大鼠腹腔局部及全身高氧化应激状态,并可能导致透析大鼠腹膜纤维化.在透析液中加入丹参酮ⅡA磺酸钠对体外腹膜透析液中糖基化终产物的形成和腹膜纤维化有明显抑制作用,且丹参酮ⅡA磺酸钠的此种抑制作用呈现剂量依赖性,提示丹参酮ⅡA磺酸钠具有潜在的延缓腹膜透析伴发性腹膜纤维化的作用.
关键词： 腹膜透析 丹参酮ⅡA磺酸钠(丹参酮ⅡA) 氧化应激 晚期糖基化终产物 腹膜纤维化 -
川芎嗪注射液改善腹膜超滤功能及腹膜纤维化的疗效观察
目的:观察川芎嗪注射液改善腹透患者超滤功能及腹膜纤维化的临床效果,并探讨不同给药方式对改善程度的影响.方法:采用随机分组对照的方法将60例腹透患者分为常规对照组(A组)、静脉注射组(B组)、腹腔给药组(C组),各20例,观察3组Kt/V,Ccr、超滤量、溶质转运参数等指标的变化.结果:B组与C组超滤量治疗前后组内比较及各组治疗后两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).3组尿量治疗前后组内比较及组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).B组与C组Kt/V、Ccr/Pcr治疗前后组内比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而A组治疗前后比较,差异无统计学意义(P＞0.05).3组血压及生化指标治疗前后组内比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:川芎嗪注射液进行腹腔给药,可在不增加患者水负荷的基础上,增加超滤量,提高透析充分性,有效缓解患者腹膜纤维化程度.
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化痰祛瘀法对腹膜纤维化大鼠腹膜致密层厚度及SMA、E-cadherin蛋白表达的影响
腹膜纤维化导致腹膜超滤衰竭是腹膜透析患者退出的主要原因.既往研究表明,SMA蛋白能增加E- cadherin蛋白的表达,防止纤维化的进展.我们通过实验观察到化痰祛瘀中药能减轻腹膜纤维化大鼠腹膜致密层厚度,可能与SMA的上调及E- cadherin蛋白的抑制有关,现介绍如下.1 实验材料1.1 动物 2级SD雄性大鼠,体重180 - 200g,由广州中医药大学医学实验动物中心提供,许可证号:scxk(粤)2008.
关键词： 腹膜透析 腹膜纤维化 化痰祛瘀法 E - cadherin蛋白 实验研究 -
葡萄糖透析液与腹膜纤维化研究进展
使用葡萄糖透析液进行腹膜透析透是治疗终末期肾脏病的有效措施之一.但近年来大量临床研究发现,透析液中葡萄糖对腹膜的结构和功能有重要影响,导致腹膜纤维化,超滤失败,终放弃腹膜透析.了解透析液中葡萄糖对腹膜的影响及潜在的治疗策略具有十分重要的意义.
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腹腔给药在腹膜纤维化防治中的应用
腹膜透析是一种供终末期肾病患者选择的肾脏替代疗法,但长期腹膜透析会导致腹膜纤维化,终迫使患者退出腹透治疗.腹膜纤维化的药物预防和治疗是延长腹膜透析周期的关键.相比口服,腹腔给药使药物直接接触腹膜组织,或将取得更好的效果.本文就腹膜纤维化的形成、机制及药物干预进行综述,重点介绍腹腔给药在腹膜纤维化中的应用,并就此提出几点展望.
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16年腹膜透析的基础和临床研究回顾
总结16年以来中南大学湘雅二医院肾内科腹膜透析的基础与临床研究的经验与成果.在国内率先成功构建了腹膜透析及腹膜纤维化动物模型,分离、鉴定了腹膜间皮细胞;利用细胞、分子生物学方法,系统研究了腹膜透析液的生物相容性、腹膜间皮细胞透析损伤的分子机制与防治措施,观察了促纤维化细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)及过氧化物酶体增生物激活受体-γ(PPAR-γ)等在腹膜纤维化发病机制中的重要作用,并初步阐明了它们的基因表达调控机制.首次在腹膜透析研究领域中利用纳米载体介导TGF-β1-shRNA与pCTGF-shRNA质粒在腹膜细胞与组织中的表达.在临床研究方面,研究了腹膜透析置管定位新方法、腹膜透析溶质转运特点及其机制、腹膜透析治疗模式及其他并发症的防治.
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不同腹膜纤维化大鼠模型之比较
目的:采用几种不同方法构建腹膜透析腹膜纤维化大鼠模型,为腹膜透析腹膜纤维化的防治提供可研究的动物模型.方法:34只SD雄性大鼠(200～250g),随机分为5组,分别是空白对照组(n=7,未予任何处理)、生理盐水组(n=7,每日腹腔内直接注射0.9%生理盐水20ml)、高糖组(n=7,每日腹腔内直接注射4.25%含糖透析液即PDF 20ml)、高糖+脂多糖(LPS)组(n=6,每日腹腔内直接注射4.25% PDF 20ml,并在第8,10,12天加入LPS 75μg)、高糖+红霉素组(n=7,每日腹腔内直接注射4.25% PDF 20ml,并在第7,14,21,28天加入乳糖酸红霉素6.25万U),观察5周.分别于第0,7,14,21,28,35天清晨,空腹状态时测量大鼠体重.5周后行2h腹膜平衡试验(PET),处死大鼠,准确测量超滤量,检测腹膜功能;观察腹膜厚度、血管数及其他组织学改变;用免疫组织化学法测定腹膜组织及肠管腹腔侧组织纤维连接蛋白(FN)表达率.结果:高糖组、高糖+脂多糖组和高糖+红霉素组皆可见腹膜间皮细胞脱落,间皮下基质及肠外纵肌层明显增厚,可见大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,且有纤维素样物质沉积等现象,尤以高糖+红霉素组明显;与空白对照组及生理盐水组分别比较,高糖、高糖+脂多糖及高糖+红霉素组大鼠超滤量及2h透出液葡萄糖浓度/0h透析液葡萄糖浓度(D2/D0)比值均有明显减少(P<0.05),而透析液尿素浓度/血浆尿素浓度(D/Purea)比值、大鼠腹膜组织及肠管腹腔侧组织FN表达率均有明显增加(P<0.05);与高糖组比较,高糖+红霉素组D/Purea比值、大鼠腹膜组织及肠管腹腔侧组织FN表达率均有明显增加(P<0.05);与高糖组比较,高糖+脂多糖组D/Purea比值及肠管腹腔侧组织FN表达率皆明显增加(P<0.05);而在大鼠每周体重变化、透出液中白细胞计数、超滤量、D2/D0比值等方面,高糖、高糖+红霉素和高糖+脂多糖组之间的差异无统计学意义(P>0.05).结论:采用高糖、高糖+脂多糖和高糖+红霉素刺激均能充分复制腹膜透析腹膜纤维化特征,而以高糖+红霉素效果为佳.
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丝切蛋白在肾脏疾病中的作用
丝切蛋白是一类普遍存在于真核细胞内的肌动蛋白结合蛋白,通过其对肌动蛋白动力学的调控参与机体的生长发育、维持内环境稳态,并且在许多疾病的发生和发展中起重要作用.近年来,丝切蛋白对多种肾脏固有细胞表型特征、基因转录、凋亡及肾组织炎症反应的调控作用受到广泛关注.丝切蛋白在微小病变、局灶节段性肾小球硬化、膜性肾病、IgA肾病等引起蛋白尿的多种足细胞病理变化中均起调节作用,可能成为诊断肾小球足细胞损伤的一个指标.同时,丝切蛋白对维持近端肾小管上皮细胞的极性和功能起关键性的作用,并参与调控肾脏缺血/再灌注损伤、糖尿病肾病、高血压肾病等多种肾脏疾病中肾组织的炎症反应.另外,丝切蛋白在肿瘤细胞及多种组织上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)中的重要调节作用,提示丝切蛋白可能参与调控腹膜透析相关EMT及纤维化.丝切蛋白可能为肾脏疾病的诊断和治疗的新靶点.
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转化生长因子β与腹膜纤维化:基因治疗的靶点
转化生长因子β(TGF-β)是一大类多功能调节细胞生长、分化的细胞因子,它参与了机体许多生理和病理过程,现在越来越多的证据表明,TGF-β可能是肝纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化的重要细胞介质.本文重点讨论TGF-β的结构与功能、TGF-β与腹膜纤维化的关系,TGF-β在腹膜纤维化治疗中的潜在价值.
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从痰瘀互结论腹膜纤维化的病因病机
腹膜透析是终末期肾脏病的主要替代治疗方法之一,自20世纪80年代以来,腹膜透析治疗的患者呈快速增长趋势.目前,全球维持性腹膜透析治疗患者约为12万,占透析总人数的14％[1],但腹膜透析相关性腹膜纤维化使超滤失败高于血透,同时,也是导致腹膜透析超滤功能丧失和患者退出腹膜透析的首要原因,阻碍了腹膜透析的发展.中医药在防治腹膜透析腹膜纤维化方面显示了广阔的应用前景,积极探索中医药防治腹膜透析相关性腹膜纤维化有效干预方法及可能作用机制已成为近几年研究的热点.笔者结合临床实践和中医学理论,试探讨腹膜纤维化的病因病机,以冀进一步防治腹膜纤维化提供理论依据.
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升清降浊胶囊对高糖诱导腹膜纤维化大鼠HMGB1和TGF-β1的影响
目的:观察升清降浊胶囊对高糖诱早的腹膜纤维化大鼠分泌高迁移率族蛋白1 (HMGB1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:将SD雄性大鼠40只随机分成4组:空白组、模型组、低剂量组、高剂量组各10只.空白组与模型组予5mL生理盐水灌胃,低剂量组予升清降浊胶囊50mg/ (kg·d)、高剂量组予升清降浊胶囊100mg/ (kg·d),由生理盐水稀释至5mL后灌胃,每天1次,共4周.分别于实验第3、7、14、28天时大鼠尾静脉取血检测HMGB1和TGF-β1,第28天处死各组大鼠,留取壁层腹膜组织做HE及Masson染色,测量腹膜厚度.结果:模型组HMGB1及TGF-β1的含量、腹膜致密层厚度均高于空白组(P＜005);中药低剂量组HMGB1及TGF-β1含量、腹膜致密层厚度均低于模型组(P＜0.05);中药高剂量组HMGB1及TGF-β1舍量、腹膜致密层厚度降低更明显,与低剂量组比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:升清降浊胶囊可以降低HMGB1、TGF-β1含量,降低腹膜致密层厚度,且随着剂量增加效果更明显,提示升清降浊胶囊对延缓腹膜纤维化有一定意义.
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白细胞介素6通过STAT3诱导腹膜间皮细胞上皮间质转分化
目的 探讨信号传导与转录激活基因3(STAT3)对白细胞介素6(IL-6)诱导人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮间质转分化(EMT)的作用.方法 体外培养HPMC并分组:(1)50 μg/L IL-6刺激HPMC不同时间,按刺激时间24、48、72 h分组;(2)不同浓度IL-6刺激HPMC 24 h,按IL-6浓度50、100μg/L分组;(3)应用慢病毒介导的RNA干扰技术建立稳定沉默STAT3基因的HPMC,分成空白对照组、IL-6组、空载体组、空载体+IL-6组、慢病毒感染组、慢病毒感染+IL-6组,其中IL-6刺激均以50μg/L终浓度刺激24 h.实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达;Western印迹检测上述分子的蛋白表达及通路蛋白Janus激酶2(JAK2)、STAT3磷酸化水平;细胞免疫荧光观察E-cadherin、α-SMA的表达和分布.结果 与对照组比较,不同IL-6浓度组和不同作用时间组细胞E-cadherin蛋白和mRNA表达均下降(均P＜0.05),α-SMA、VEGF的蛋白和mRNA表达均升高(均P＜0.05),通路蛋白磷酸化(p)-JAK2/JAK2比值和p-STAT3/STAT3比值均升高(均P＜0.05),且均呈剂量和时间依赖性.沉默STAT3基因后,与空载体+IL-6组比较,慢病毒感染+lL-6组α-SMA、VEGF蛋白表达均下降(均P＜0.05),E-cadherin蛋白表达上升(P＜0.05). 结论 IL-6通过激活STAT3通路而刺激HPMC分泌VEGF并诱导EMT的发生.沉默STAT3基因可抑制人腹膜间皮细胞EMT的发生.
