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硫化氢对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响
目的:观察硫化氢(H2S)对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响. 方法:SD大鼠随机分为四组(对照组、单独H2S组、模型组及治疗组).第28天行腹膜平衡试验;取壁层腹膜组织观察腹膜结构变化,检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达情况.检测大鼠腹膜间皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、α-SMA、E-钙黏素(E-cadherin)和TGF-β1 mRNA表达情况. 结果:与对照组相比,模型组腹膜增厚伴血管增生、炎症细胞浸润增加,且间皮下α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著增加(P＜0.05);与模型组相比,治疗组腹膜形态明显改善,α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著减少(P＜0.05).与对照组相比,模型组超滤量显著减少,腹膜通透性显著升高,治疗组大鼠腹膜转运功能显著改善(P＜0.05).2.5％葡萄糖透析液刺激腹膜间皮细胞12h使肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA表达显著增加、上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著减少,同时MCP-1、IL-6、ICAM-1和TGF-β1 mRNA表达显著增加(P＜0.01);透析液中加入100 μmol/L、300 μmol/L NarHS可显著抑制上述炎症因子及纤维化因子表达(P＜0.01). 结论:在腹膜透析液中加入外源性H2S可显著改善腹膜结构及功能损伤,并可部分逆转腹膜间皮细胞转分化,进而减少炎症因子和纤维化因子合成.
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法舒地尔对高糖培养人腹膜间皮细胞RhoA/Rock1、ROS、GSH-Px及TGF-β1表达的影响
目的:探讨法舒地尔(FAS)对高糖培养的人腹膜间皮细胞(HMrSV) RhoA/Rock1、活性氧(ROS)、GSH-Px及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响. 方法:将人腹膜间皮细胞株HMrSV分为对照组(葡萄糖浓度为0)、高糖组(葡萄糖浓度分别为1.5％、2.5％和4.25％)和FSA干预组(2.5％葡萄糖+FAS 12.5、25和50μmol/L).检测方法:Q-PCR法和Western印迹法检测RhoA和Rock1的表达;化学荧光法检测ROS的含量;EL1SA法检测GSH-Px和TGF-β1的含量. 结果:与对照组相比,高糖组可呈浓度依赖方式上调RhoA、Rock1、ROS及TGF-β1的表达,下调GSH-Px的表达;与2.5％高塘组相比,FAS干预可明显下调RhoA、Rock1、ROS及TGF-β1的表达,上调GSH-Px的表达. 结论:FAS可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的人腹膜间皮细胞发生氧化应激反应.
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新多聚糖碳酸氢盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞凋亡及纤维化相关因子的影响
目的:比较新研制的多聚糖碳酸氢盐腹膜透析液(PDF)与常用乳酸盐PDF对人腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡及间质纤维化相关因子的影响. 方法:体外培养HPMC细胞,使用新型PDF与不同葡萄糖浓度的传统乳酸盐PDF(1.5％、2.5％、4.25％)处理细胞,通过实时荧光定量PCR法检测细胞凋亡因子Bax、胱天蛋白酶3(Caspase-3)及Bcl-2、转化生长因子β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)的mRNA表达量,ELISA法测定细胞分泌TGF-β1量,免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Bax、Caspase-3、抑制凋亡蛋白Bcl-2和FN的表达量. 结果:不同PDF刺激HPMC细胞一定时间后,1.5％、2.5％、4.25％传统PDF中葡萄糖浓度越高,Bax、Caspase-3、TGF-β1和FN增高越明显,抑制凋亡因子Bcl-2下降越显著,而新型PDF影响较小.含2.5％、4.25％葡萄糖的PDF刺激后,纤维化相关因子TGF-β1、FN明显高于阴性对照组和新型PDF组(均P＜0.05). 结论:新型多聚糖碳酸氢盐PDF对腹膜间皮细胞凋亡信号活化低于传统乳酸盐PDF,其腹膜间皮细胞纤维化程度低,有很好的临床应用前景.
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血管紧张素Ⅱ对大鼠腹膜间皮细胞表达纤维连接蛋白的影响及其作用机制
目的:观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)纤维连接蛋白(FN)表达的影响,以及有丝分裂原活化蛋白激酶通路(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在Ang Ⅱ诱导FN表达中所起的作用. 方法:酶消化法于大鼠大网膜中分离间皮细胞,以Ang Ⅱ刺激后,分别应用real time-PCR及Western印迹法检测FN的表达情况.应用Western印迹法观察Ang Ⅱ(1μmol/L)对MAPK通路的主要信号传导蛋白ERK1/2、p38MAPK和JNK活化的影响,并分别应用ERK1/2、p38MAPK和JNK的抑制剂以及Ang Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1)阻断剂进行干预,Western印迹法观察上述抑制剂对Ang Ⅱ诱导FN表达的影响. 结果:Ang Ⅱ促进RPMCs表达FN,活化ERK1/2和p38MAPK信号传导通路,而不影响JNK通路的活化.ERK1/2通路抑制剂PD98059及AT1受体阻断剂(losartan)可明显抑制Ang Ⅱ诱导的FN表达增加,而p38 MAPK和JNK抑制剂对FN的表达无影响. 结论:Ang Ⅱ促进RPMCs合成FN增多.AT1受体和ERK1/2通路介导了Ang Ⅱ诱导RPMCs表达FN.
关键词： 血管紧张素Ⅱ 间皮细胞 有丝分裂原活化的蛋白激酶 腹膜纤维化 -
环氧化酶-2抑制剂对人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1表达的影响
目的:研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂对人腹膜间皮细胞(HPMC)转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用COX-2抑制剂干预高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下的HPMC.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1 mRNA的表达.采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平.结果:HPMC在高糖和LPS的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P＜0.01),COX-2抑制剂干预组(20nmol/L,40nmol/L,60nmol/L)明显下调TGF-β1的表达(P＜0.05).结论:COX-2抑制剂能够明显抑制在高糖和LPS的刺激下的HPMCTGF-β1的基因表达,为临床用COX-2抑制剂防治腹膜透析患者的腹膜纤维化提供实验和理论依据.
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过氧化物增生体激活受体-γ激动剂抑制腹膜间皮细胞转化生长因子-β1的表达
腹膜纤维化是长期腹膜透析患者严重的并发症之一.研究表明转化生长因子β1 (TGF-β1)高表达与腹膜纤维化密切相关[1].TGF-β1表达的下调在预防或延缓腹膜纤维化的过程中可能有潜在的治疗作用.近发现过氧化物增生体激活受体(PPAR)亚型PPAR-γ在大鼠和兔新鲜分离的肾小球及培养的系膜细胞存在功能性表达[2].Troglitazone和Rosiglitazone是PPAR-γ的配体.Ma等[3 ]报道在5/6肾脏切除模型,Troglitazone能显著降低蛋白尿,血清肌酐和肾小球硬化.这些作用可能与降低TGF-β1的表达有关.本文研究Troglitazone和Rosiglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β1表达和分泌的影响.
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MicroRNA:潜在的腹膜纤维化诊断标记物及治疗靶点
腹膜透析(PD)是终末期肾脏病(ESRD)患者的主要治疗方式之一,但长期PD容易出现多种并发症,其中腹膜纤维化(PF)是患者终止PD的主要原因.腹膜间皮细胞转分化(EMT)是PF的初始环节,近期研究表明microRNA介导了EMT,本文将针对microRNA在PF中的作用及展望进行综述.
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包裹性腹膜硬化症的发病机制及防治
包裹性腹膜硬化症（ EPS）是由于腹膜广泛增厚黏连导致持续或反复出现肠梗阻的一组临床综合征。EPS是长期腹膜透析（ PD）患者中一种少见但严重的并发症。腹膜炎症、新生血管形成及纤维化是形成EPS的关键步骤，腹膜纤维化和黏连是EPS的核心。目前EPS的发病机制尚未完全明确，仍然缺乏理想的治疗手段。本文将对EPS发病机制及防治研究进展做一综述。
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腹膜透析与腹膜纤维化
近年来,腹膜透析因其对患者残存肾功能的独特保护优势已成为终末期肾病的重要替代治疗之一.由于腹膜透析液的生物不相容性,腹膜透析相关腹膜纤维化的发生大大制约了腹膜透析的发展,但其有效的防治方法仍然在探索中.
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腹膜上皮-间皮细胞转分化与腹膜纤维化
腹膜透析(PD)治疗终末期肾脏疾病(ESRD)已有30余年,现代PD史的前20年主要致力于PD管道的设计、手术技术及腹膜炎的预防,近10年则主要研究PD液的生物相容性,以减少其对腹膜形态及功能的影响.
关键词： 腹膜透析 腹膜上皮-间皮细胞转分化 腹膜纤维化 -
丹参酮ⅡA对腹膜透析大鼠模型伴发腹膜纤维化的预防干预作用
目的:探讨丹参酮ⅡA对腹膜透析动物模型发生腹膜纤维化的影响.方法:将40只大鼠随机分为对照组、4-25%腹膜透析液(peritoneal dialysis fluid,PDF)组、低剂量丹参酮ⅡA(丹参酮ⅡA终浓度为50 mg·L-1)组、高剂量丹参酮ⅡA(丹参酮ⅡA终浓度为100 mg·L-1)组4组(每组各10例)进行干预.8周后处死大鼠,并将其腹膜组织样本收集后进行观察分析.运用免疫组织化学检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在壁层腹膜中的表达.同时通过逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法对大网膜上TGF-β1和CTGF mRNA及蛋白的表达进行检测.结果:丹参酮ⅡA明显抑制了含4-25%葡萄糖的PDF引起的腹膜致密层的增厚和胶原沉积,减少了壁层腹膜和网膜中剂量依赖性的TGF-β1和CTGF的表达.结论:丹参酮ⅡA能减轻腹膜透析大鼠伴发的腹膜纤维化改变.
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黄芪甲苷调控Akt信号通路阻抑人腹膜间皮细胞间充质转化的实验研究
目的 观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对TGF-β1诱导人腹膜间皮细胞HMrSV5 EMT及β-catenin的影响,探讨Akt信号通路的作用及AS-Ⅳ干预机制.方法 采用TGF-β1诱导建立HMrSV5 EMT模型,Western blot检测不同浓度TGF-β1对EMT标记蛋白、β-catenin及Akt信号蛋白的影响;予不同浓度AS-Ⅳ干预HMrSV5 EMT模型,Real-time PCR检测EMT相关基因及β-catenin mRNA水平,Western blot检测Akt信号蛋白表达;与Akt通路抑制剂MK2206、雷帕霉素及激动剂Insulin作对照,观察AS-Ⅳ干预HMrSV5 EMT指标及β-catenin蛋白的变化.结果 ①TGF-β1诱导HMrSV5细胞发生EMT、上调β-cate-nin水平,激活Akt信号通路;②AS-Ⅳ能不同程度改善TGF-β1诱导的HMrSV5 EMT、降解β-catenin,并在一定程度上抑制Akt信号通路活化;③Akt通路参与调控HMrSV5 EMT及β-catenin,其抑制剂MK2206、雷帕霉素的调控作用与AS-Ⅳ类似;④Akt通路激动剂Insulin明显减弱AS-Ⅳ对EMT及β-catenin的抑制效果.结论 TGF-β1可诱导HMrSV5 EMT,上调β-catenin,AS-Ⅳ可能通过抑制Akt信号通路活化,阻抑HMrSV5 EMT,降解β-catenin.
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丹参酮ⅡA磺酸钠注射液改善脂多糖-高糖腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞损伤的实验研究
目的 评估丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)减轻脂多糖-高糖腹膜透析液(LPS-PDS)诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)损伤以及抑制腹膜纤维化的作用.方法 HPMCs 来自腹腔外科手术患者腹膜细胞的原代培养.以 LPS-PDS 诱导的HPMCs损伤为模型,通过观察 STS对 HPMCs增殖活性、转化生长因子-β(TGF-β1)分泌、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP1)等的影响,阐明 STS对 HPMCs的保护作用及抗腹膜纤维化的机理.结果 LPS-PDS可造成 HPMCs损伤,表现为活性下降,STS可明显减轻LPS-PDS对 HPMCs的毒性,改善其造成的细胞活性下降,减轻LPS-PDS诱导的TGF-β1、TIMP1 mRNA上调和MMP-9 mRNA表达下降.结论 STS可以减轻LPS-PDS诱导的 HPMCs损伤,可能是通过调节TGF-β1、TIMP1、MMP-9等蛋白的表达,发挥保护腹膜细胞和拮抗腹膜纤维化的作用.
关键词： 腹膜透析 人腹膜间皮细胞 原代培养 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液 腹膜纤维化 -
黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响
目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d；模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d；黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变；快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达；Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达；RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显；②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达；③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.
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丹参酮IIA对腹膜透析液诱导的大鼠腹膜组织学变化及CTGF表达的影响
目的 了解丹参酮IIA对腹腔注射4.25%腹膜透析液(PDS)大鼠腹膜组织学变化以及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 50只SD雄性大鼠随机分为5组:对照组,每日腹腔注射生理盐水20mL;PDS组,每日腹腔注射4.25% PDS 20mL;丹参酮低、中、高浓度组,每日分别腹腔注射含丹参酮IIA浓度为50mg/L、100mg/L、200mg/L的4.25%PDS20mL.于实验第30天,取壁层腹膜行光镜检查,并用免疫组织化学的方法 检测壁层腹膜CTGF的表达情况.结果 HE、Masson染色显示,在PDS干预下,腹膜显著增厚,胶原沉积显著增多(P<0.01).与PDS组比较,丹参酮组腹膜明显变薄,胶原沉积明显减少(P<0.01).在PDS干预下腹膜CTGF表达较对照组显著增加(P<0.01),丹参酮组CTGF表达与PDS组比较有显著下降(P<0.01).结论 丹参酮II A具有抑制葡萄糖PDS导致的实验大鼠腹膜纤维化及CTGF表达增加的作用.
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黄芪甲苷抑制高糖腹透液诱导 HMrSV5氧化应激与EMT 的实验研究
目的：观察黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞 HMrSV5氧化应激及 EMT 的影响,探讨 ROS 在 EMT 中的作用及 AS-Ⅳ干预机制。方法采用葡萄糖腹透液诱导建立 HMrSV5氧化应激模型,相差显微镜观察细胞形态变化,MTT 检测 AS-Ⅳ及葡萄糖腹透液对细胞活力的影响；予40μg/mL AS-Ⅳ干预 HMrSV5氧化应激,DHE 荧光探针检测药物作用前后 ROS 生成水平变化,Western blot 检测 EMT 相关蛋白变化；与 ROS 清除剂 NAC 作对照,观察 AS-Ⅳ干预 HMrSV5氧化应激 EMT 指标及 Smads 蛋白的变化。结果①40、50μg/mL AS-Ⅳ干预后细胞活力稍有上升(P <0.05)；随腹透液作用时间的延长及葡萄糖浓度提高,细胞活力明显抑制,以4.25%高糖腹透液干预48 h 明显(P <0.05),细胞拉伸变长；②40μg/mL AS-Ⅳ作用细胞能抑制形态改变,降低模型组 ROS 的生成(P <0.05),上调 E-cadherin、ZO-1表达,下调α-SMA 表达,并抑制 Smad2/3磷酸化；③5 mmol/L NAC 产生类似调控作用。结论高糖腹透液可抑制 PMCs 细胞活性,增加 ROS 生成,导致 PMCs EMT,其分子机制可能与 ROS 参与调控的 Smads 通路激活有关,而 AS-Ⅳ可能通过减少 ROS生成,抑制 Smad2/3磷酸化,阻抑 PMCs EMT。
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甘草酸二胺对腹膜透析大鼠腹膜功能及转化生长因子-β1的影响
目的 探讨甘草酸二胺对腹膜透析大鼠腹膜功能及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响.方法 将SD大鼠随机分成空白对照组、生理盐水组、模型组、己酮可可碱治疗组、甘草酸二胺治疗组,每组10只.空白对照组未进行任何处理,生理盐水组每日腹腔注射0.9％ NaCl溶液20 ml.模型组、己酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组使用腹膜纤维化模型大鼠,其中己酮可可碱治疗组每日腹腔注射6 mg/kg己酮可可碱,甘草酸二胺治疗组每日腹腔注射10 mg/kg甘草酸二胺.实验进行30天后行标准腹膜平衡试验测定腹膜功能,ELISA法检测血浆及腹膜透析液上清中TGF-β1含量.结果 己酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组腹膜功能受损程度显著低于模型组(P＜0.05).己酮可可碱治疗组和甘草酸二胺治疗组膜透析液上清中TGF-β1含量显著低于模型组(P＜0.05).结论 甘草酸二胺减轻腹膜损伤的功能可能与其下调TGF-β1的表达水平相关.
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腹膜透析相关性腹膜纤维化的机制
腹膜透析是终末期肾病的一种有效的替代治疗.腹膜透析中多种因素可引起腹膜上皮细胞-间充质转变(EMT)和腹膜炎症,进而导致腹膜结掏和功能的改变,终引起腹膜纤维化.研究表明多种分子机制参与腹膜纤维化过程,其中转化生长因子-β(TGF-β)发挥着重要的作用,TGF-β可以通过Smad依赖和Smad非依赖通路参与多种促纤维化事件,其中包括EMT.本文将针对近年来一些关于腹膜纤维化进展的分子机制进行总结.
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丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转分化及致纤维化因子表达的影响
目的 腹膜纤维化是长期腹膜透析( peritoneal dialysis,PD)的常见并发症,也是透析不充分和退出PD的主要原因,研究表明丹参酮ⅡA能改善各种组织中的纤维化.文中研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对在高糖腹膜透析液( peritoneal dialysis fluid,PDF)诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维化及其相关因子表达的影响. 方法 选择非尿毒症、非糖尿病择期手术患者的大网膜作为HPMCs的来源,将培养的细胞随机分成4组:对照组、PDF组、丹参酮1组(含丹参酮ⅡA浓度为50 μmol/L的PDF组)、丹参酮2组(含丹参酮ⅡA浓度为100μmol/L的PDF组),同步培养72h后,应用间接免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达,实时荧光定量PCR检测E-cadherin、o-SMA、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原酶(Collagen Ⅰ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、smad2、smad7 mRNA表达. 结果 免疫荧光法发现,丹参酮ⅡA能显著抑制高糖诱导的E-cadherin低表达和α-SMA高表达.Real-time-PCR发现,添加丹参酮ⅡA的PDF组α-SMA、FN、Collagen Ⅰ、TGF-β1、smad2 mRNA表达与PDF组比较显著下调(P＜0.05)；E-cadherin、smad7 mRNA表达显著上调(P＜0.05). 结论 在PDF中添加丹参酮ⅡA可显著减轻PDF导致的HPMCs转分化,从而抑制纤维化相关因子的表达.
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缬沙坦对维持性腹膜透析患者腹膜功能保护的研究
目的 探讨血管紧张素受体拮抗剂(ARB)缬沙坦在维持性腹膜透析(MPD)患者中的作用.方法 将80例腹膜透析患者分为缬沙坦组和对照组,各40例.缬沙坦组给予口服缬沙坦80 mg/d;对照组均未使用ARB药物和血管紧张素转换酶抑制剂类药物.观察两组治疗前和治疗12个月后腹膜平衡实验(PET)、残余肾功能(RRF)、24h尿量、日超滤量的变化、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF-β)等变化.结果 缬沙坦组治疗后的PET、RRF、24 h尿量、日超滤量较对照组高(均P＜0.05),VEGF、TGF-β较对照组低(均P＜0.05).结论 维持性腹膜透析患者使用ARB可降低残余肾功能下降的速度,抑制腹膜纤维化的发生和发展,在抗腹膜硬化和保护腹膜功能上起到积极的作用.
关键词： 腹膜透析 肾素-血管紧张素系统 腹膜纤维化
